CN104352539B - 土牛膝提取物的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药技术领域，特别涉及土牛膝提取物的提取方法。该提取方法获得的土牛膝提取物，可以用于制备治疗酒精性肝炎药物。本发明提供的土牛膝提取物能够有效治疗酒精性肝炎。

Description

土牛膝提取物的提取方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种土牛膝提取物的提取方法。
背景技术
酒精性肝炎是由于长期大量饮酒导致的肝脏疾病，严重酗酒时可诱发广泛性肝细胞坏死甚至肝衰竭。该病是我国的常见肝脏疾病之一。严重危害人民的身体健康。酒精性肝炎也是酒精性肝病的一个临床分型，是短期内肝细胞大量坏死引起的一组临床病理综合征，可发生在有或无肝硬化的基础上，主要表现为血清ALT、AST 升高和血清总胆红素明显增高，可伴有发热、外周血中性粒细胞升高。重症酒精性肝炎是指酒精性肝炎患者出现肝衰竭的表现，如凝血机制障碍、黄疸、肝性脑病、急性肾衰竭、上消化道出血等，常伴有内毒素血症。
酒精性肝炎最主要的临床表现是迅速出现黄疸，其他的症状和体征包括发热、腹水、近端肌肉松弛等，重症酒精性肝炎患者可出现肝性脑病。通常，酒精性肝炎患者的肝脏增大、肝脏触痛阳性。实验室研究显示，酒精性肝炎患者特征性表现为：AST 常>2倍正常值上限，但很少>300U/ml。而血清ALT 较低，AST/ALT 通常>2，但此特征不具特异性及灵敏性。同时外周血白细胞、中性粒细胞计数、血清总胆红素和国际标准化比值 (Intemationalnormalized ratio．INR) 升高。血清肌酐水平升高，预示预后不良，因为这常常预示着肝肾综合征的发生乃至死亡的临近。
目前治疗酒精性肝炎的药物主要有糖皮质激素、己酮可可碱及其他药物等，其中糖皮质激素通过部分抑制转录因子如AP-1和NF-KB 的活性，来终止炎症过程，可改善重症酒精性肝炎。但糖皮质激素治疗酒精性肝炎尚存争议，而对于急性重型酒精性肝炎患者，使用糖皮质激素会有较高的死亡率。而己酮可可碱是磷酸二酯酶的抑制剂，具有多种效应，包括调节TNF的转录、降低酒精性肝炎患者短期病死率。但有多重不良反应，其中以消化道症状如腹泻、呕吐、上腹部疼痛最先出现，其他不良反应症状包括头疼、皮肤红疹、自发性细菌性腹膜炎、尿道感染等。其他药物治疗主要是直接补充细胞膜的成分包括外源性补充多烯磷脂酰胆碱、促进内源性磷脂酰胆碱(S-腺苷蛋氨酸) 和谷胱甘肽生成等。这类药物还是细胞膜信使(如磷酸肌醇) 的重要成分，且具有抗氧化作用。甘草酸制剂可抑制CS 降解酶，使内源性CS 增加，具有抗炎、抗毒、抗过敏的作用。奶蓟中提取的活性成分水飞蓟素具有较强的抗氧化、抗纤维化的作用。但上述药物均不能从根本上治愈酒精性肝炎。因此研究开发低毒、安全、有效的酒精性肝炎治疗药物意义重大。
土牛膝为苋科植物粗毛牛膝Achyranthes aspera L.的干燥根及根茎。土牛膝临床运用历史悠久，其味微苦酸，性寒，无毒；归肝、肾经，具有活血祛瘀；泻火解毒；利尿通淋的功能。主要用于闭经；跌打损伤；风湿关节痛；痢疾；白喉；咽喉肿痛；疮痈；淋证；水肿等。但用土牛膝或土牛膝提取物制备治疗酒精性肝炎的药物尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种土牛膝提取物的提取方法。该提取方法获得的土牛膝提取物，可以用于制备治疗酒精性肝炎药物。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种土牛膝提取物的提取方法，包括如下步骤：
步骤1：取土牛膝，加乙醇和乙醚的混合溶液回流提取，回收乙醇和乙醚，过滤，得到药渣；
步骤2：取所述药渣加水提取，过滤后收集滤液，经第一浓缩至相对密度为1.12～1.15，获得第一浸膏；
步骤3：取所述第一浸膏与氯仿和正丁醇的混合溶液经Sevage法脱蛋白，收集水层，经第二浓缩至相对密度为1.20～1.23，即得；
Sevage 法：利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与Sevage试剂[氯仿∶正丁醇＝5∶1(V/V)] 按照体积比为1∶1 混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与Sevage 试剂交界处。此法的优点是条件温和，不会引起多糖的变性。
本发明中，所述土牛膝为苋科植物粗毛牛膝Achyranthes aspera L.的干燥根及根茎。
本发明步骤1中，以g/mL 计，所述乙醇和乙醚的混合溶液中乙醇和乙醚的体积比为1∶9；所述土牛膝和混合溶液体积比为1∶10～30。
本发明步骤2 中，以g/mL 计，所述药渣与水的质量体积比为1∶10～40。所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体积比为5∶1；所述第一浸膏与所述混合溶液的体积比为1∶1。
本发明步骤3 中，所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体积比为5∶1；所述第一浸膏与所述混合溶液的体积比为1∶1。
本发明中，所述第一浓缩或第二浓缩为在70～80℃，真空度为0.04～0.06MPa 的条件下浓缩。
本发明还提供了上述提取方法获得的土牛膝提取物。
本发明还提供了上述提取方法获得的土牛膝提取物在制备治疗酒精性肝炎中的应用。
本发明提供了一种土牛膝提取物的提取方法。该提取方法获得的土牛膝提取物可以用于制备治疗酒精性肝炎药物。本发明提供的土牛膝提取物具有治疗酒精性肝炎的作用。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明提供的土牛膝提取物的提取方法中，所用原料及试剂均可由市场购得。
实施例1：
取土牛膝药材100g，粉碎后加15倍量乙醇和乙醚的混合溶液回流提取（乙醇和乙醚的体积比为1∶9）30分钟，回收乙醇和乙醚，过滤，得到药渣，药渣加10倍水提取，煎煮30分钟，过滤后收集滤液，在温度为80℃，真空度为0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度1.15(80℃)，加入同体积的氯仿和正丁醇的混合溶液（氯仿和正丁醇的体积比为5∶1），除去中间白色絮状沉淀，取水层在温度为80℃，真空度为0.06MPa的条件下浓缩至相对密度为1.23(80℃)，获得土牛膝提取物21g。
实施例2：
取土牛膝药材100g，粉碎后加10倍量乙醇和乙醚的混合溶液回流提取（乙醇和乙醚的体积比为1:9）40分钟，回收乙醇和乙醚，过滤，得到药渣，药渣加20倍水提取，煎煮20分钟，过滤后收集滤液，在温度为70℃，真空度为0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度1.12(80℃)，加入同体积的氯仿和正丁醇的混合溶液（氯仿和正丁醇的体积比为5∶1），除去中间白色絮状沉淀，取水层在温度为80℃，真空度为0.06MPa的条件下浓缩至相对密度为1.20(80℃)，获得土牛膝提取物23g。
实施例3：
取土牛膝药材100g，粉碎后加30倍量乙醇和乙醚的混合溶液回流提取（乙醇和乙醚的体积比为1:9）20分钟，回收乙醇和乙醚，过滤，得到药渣，药渣加40倍水提取，煎煮40分钟，过滤后收集滤液，在温度为80℃，真空度为0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度1.13(80℃)，加入同体积的氯仿和正丁醇的混合溶液（氯仿和正丁醇的体积比为5∶1），除去中间白色絮状沉淀，取水层在温度为80℃，真空度为0.04MPa的条件下浓缩至相对密度为1.22(80℃ )，获得土牛膝提取物19g。
临床试验：
一、一般资料
84 例，诊断参照中华医学会肝病学分会2003年修订的酒精性肝炎诊断标准，其中男76例，女8例；年龄35～65岁，平均 52.8 岁；饮酒史均超过5年，最多日饮酒量为高度白酒0.75 kg；其中腹胀者53例，呕吐者31例，食欲不振者 32例，往来寒热者 29例，黄疸者 18例。将患者随机分为治疗组与对照组，2 组患者性别、饮酒史、日饮酒量及临床表现等资料经统计学处理，均无显著性差异( P＞0.05) ，具有可比性。
二、治疗方法
常规戒酒，营养支持。饮食以清淡新鲜，提供高蛋白低脂，易消化吸收，补充维生素B、维生素 C、维生素K 及叶酸，并注意高热量饮食。在此基础上，对照组给予硫普罗宁0.3 g加入5%萄糖或生理盐水250 mL静脉滴注，每日1次。治疗组给予实施例1制备的土牛膝提取物15 g口服，分2 次早晚分服。治疗2 周为1 个疗程，根据病情可治疗1～2个疗程。
三、疗效评价
显效: 临床症状、体征消失，肝功能基本正常;
有效: 临床症状、体征明显好转，肝功能恢复正常或较治疗前异常值下降 50%以上;
无效: 临床症状、体征无明显缓解，肝功能无明显改变甚至加重。
四、临床效果
治疗组显效率明显优于对照组( P＜0.01) ，具体结果见表 1。
表1 治疗组和对照组疗效比较
组别 总数 显效 有效 无效 显效率 总有效率
治疗组 42例 35例 6例 1例 83.3%① 97.6%
对照组 42例 23例 15例 4例 54.8% 90.5%
注: ①与对照组比较，P ＜0.01。
提示本发明中的土牛膝提取物对酒精性肝炎具有显著的治疗效果。
此外，患者服药前后肾功能、血尿常规均在正常范围内，且未见明显的不良反应，提示该药临床应用安全性高。

Claims (8)

1.一种土牛膝提取物的提取方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：
步骤1：取土牛膝，加乙醇和乙醚的混合溶液回流提取，回收乙醇和乙醚，过滤，得到药渣；所述混合溶液中乙醇和乙醚的体积比为1∶9；
步骤2：取所述药渣加水提取，过滤后收集滤液，经第一浓缩至相对密度为1.12～1.15，获得第一浸膏；
步骤3：取所述第一浸膏与氯仿和正丁醇的混合溶液经Sevage法脱蛋白，收集水层，经第二浓缩至相对密度为1.20～1.23，即得。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤1中，所述土牛膝和所述混合溶液体积比为1∶10～30。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤2中，以g/mL计，所述药渣与水的质量体积比为1∶10～40。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤3中，所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体积比为5∶1。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤3中，所述第一浸膏与所述混合溶液的体积比为1∶1。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述第一浓缩或第二浓缩为在70～80℃，真空度为0.04～0.06MPa的条件下浓缩。
7.根据权利要求1至6中任一项的方法制得的土牛膝提取物。
8.根据权利要求1所述的土牛膝提取物在制备治疗酒精性肝炎药物中的应用。
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