CN114098069A - 乳酸菌组合发酵物及其制备方法 - Google Patents

乳酸菌组合发酵物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种乳酸菌组合发酵物的制备方法，属于食品发酵技术领域，该制备方法包括使用活化后的嗜热链球菌发酵铁皮石斛叶、蛹虫草、竹荪和茯苓得到第一发酵产物的步骤，活化后的复合乳酸菌发酵柚子和桑葚得到第二发酵产物的步骤，以及第一发酵产物和第二发酵产物混合发酵的步骤。本发明提供的乳酸菌组合发酵物的制备方法能够提升发酵产物中活性物质的产量，使其更容易被人体吸收，达到增强机体免疫力的效果，具有微酸甜的果味，符合大部分消费者的口味，适于长期饮用。

Description

乳酸菌组合发酵物及其制备方法
技术领域
本发明属于食品发酵技术领域，具体涉及一种乳酸菌组合发酵物及其制备方法。
背景技术
现代人生活节奏快饮食结构不合理，常会使用过量的碳水化合物、油脂和蛋白质，但纤维摄入不足，这种长期不合理的饮食，加之暴饮暴食、熬夜和缺乏运动的生活习惯，导致很多现代人的免疫力低下。为了提高机体的免疫力，人们常会服用一些中药类保健品，如西洋参口服液、蜂王浆口服液、灵芝孢子粉等。除了上述的这类单功效组分的产品，能够增强机体免疫力的复合中药类保健品也有较多种类。如申请号为201710661522.X的中国发明专利公开了一种用于提高免疫力的保健食品，由原料食用真菌多糖100～300份、金银花提取物1500～3500份、鱼腥草提取物280～480份、蒲公英提取物500～700份、人参提取物500～1000份和富硒食用菌粉60～90份组成，能够有效增强免疫力，并对癌症具有预防作用。再如申请号为201210306102.7的中国发明专利，公开了一种用于提高免疫力的保健品，由按重量份计的下述各原料组成：黄芪7份，茵陈13份，山楂3份，大枣4份，甘草1.5份，菊花4份，熟地黄5份，何首乌5份，该保健品打破了调节免疫力从补充体内营养要素入手的固有模式，通过调节人体微循环，恢复肝、肾等脏器的功能，起到调节免疫力的作用，从根本上解决了免疫低下的问题。再如申请号为201110412897.5的中国发明专利，公开了一种具有提高免疫力的保健品该保健品由下列重量份数的原料药制成：铁皮石斛1～3份、西洋参2～6份、枸杞6～18份。经药理实验表明该保健品对免疫系统具有明显的促进作用，在非特异性免疫实验中，能够显著提高免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬指数，增加免疫器官系数；在特异性免疫实验中，能提高淋巴细胞转化率，并且还能够增加免疫抑制小鼠血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM水平，能够辅助用于调理免疫缺陷性疾病和免疫功能低下，抵抗能力低等疾病。
目前市面上的这类增强免疫力的保健品普遍存在如下问题：第一，部分组分非药食同源物质，不适于在没有医师的指导下长期服用；第二，药味突出，对于不喜欢中药的人群而言很难坚持服用。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种具有果香且适于长期服用能够有效增强机体免疫力的乳酸菌组合发酵物及其制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：乳酸菌组合发酵物的制备方法，包括使用活化后的嗜热链球菌发酵铁皮石斛叶、蛹虫草、竹荪和茯苓得到第一发酵产物的步骤，活化后的复合乳酸菌发酵柚子和桑葚得到第二发酵产物的步骤，以及第一发酵产物和第二发酵产物混合发酵的步骤。
上述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌混合，得到复合乳酸菌；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
S3、复合草本粉中加水灭菌后接入活化后的嗜热链球菌，40-45℃下发酵7-15天，得到第一发酵产物；
S4、柚子和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆；果浆经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌，28-35℃下发酵7-15天，得到第二发酵产物；
S5、将第一发酵产物和第二发酵产物混合，20-25℃下发酵120-150天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物。
本发明的有益效果在于：本发明提供的乳酸菌组合发酵物的制备方法采用不同的乳酸菌对草本组分和水果组分进行分批发酵，再进行混合发酵，通过对菌种的特定选择以及发酵方法的优化，能够提升发酵产物中多糖、黄酮、氨基酸、多酚等活性物质的产量，使其更容易被人体吸收，达到增强机体免疫力的效果；同时加入桑葚和柚子制成的发酵产物，使得草本成分的草味、苦涩味被中和，成品具有微酸甜的果味，符合大部分消费者的口味；且所用组分均为药食同源食品，自然安全，所得成品适于长期饮用。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
本发明最关键的构思在于：采用不同的乳酸菌分别对草本组分和水果组分进行发酵，提升活性物质含量。
本发明提供一种乳酸菌组合发酵物的制备方法，包括使用活化后的嗜热链球菌发酵铁皮石斛叶、蛹虫草、竹荪和茯苓得到第一发酵产物的步骤，活化后的复合乳酸菌发酵柚子和桑葚得到第二发酵产物的步骤，以及第一发酵产物和第二发酵产物混合发酵的步骤。
进一步地，上述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌混合，得到复合乳酸菌；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
S3、复合草本粉中加水灭菌后接入活化后的嗜热链球菌，40-45℃下发酵7-15天，得到第一发酵产物；
S4、柚子和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆；果浆经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌，28-35℃下发酵7-15天，得到第二发酵产物；
S5、将第一发酵产物和第二发酵产物混合，20-25℃下发酵120-150天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明提供的乳酸菌组合发酵物的制备方法，通过采用不同的菌种对不同的发酵物分别发酵，再进行较长周期的混合发酵，能够将发酵底物中的营养物质细化并充分释放，易于人体吸收；发酵底物中的竹荪具有宁神健体，补气益阴，益气补脑，润肺止咳，清热利湿的功效；蛹虫草具有抗癌，降血糖的功效；铁皮石斛叶具有治疗胃病、咳嗽的功效；茯苓具有渗湿利水、健脾和胃、宁心安神的功效，四者通过合理的配伍和采用本发明发酵工艺，使得服用后能够达到提高机体免疫力的效果；本发明使用的发酵底物均为药食同源食品，适于长期服用，且通过细化底物的组成，加入了柚子和桑葚，使得所得成品具有微酸甜的果味，适合大部分人群口味，克服了传统中药口服液味苦重的问题。
进一步地，所述复合乳酸菌包括双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌。
进一步地，所述活化后的复合乳酸菌包括菌数比为40％：20％-30％：30％-40％的双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌。
进一步地，所述复合乳酸菌包括40％的双歧杆菌、25％唾液乳杆菌和35％的乳酸片球菌。
由上述描述可知，实验发现乳酸菌菌种的组成和比例会显著影响发酵产物的组成，经优化后确认上述配比为最优选择。
进一步地，第一发酵产物和第二发酵产物的质量比为1:1.8-2.2。
由上述描述可知，第一发酵产物和第二发酵产物的组成对成品口味口感影响显著，过多的第一发酵产物会存在草药味，过多的第二发酵产物一方面会影响活性物质的组成，另一方面会有发涩的口感。
进一步地，S2中复合草本粉的粒径为40-80目。
由上述描述可知，过大的颗粒不利于乳酸菌发酵，会延长发酵周期，过小的颗粒与水混合后会形成泥状物，物之间没有间隙影响产期不利于发酵的进行。
进一步地，S3中复合草本粉和水的质量比为1:1-1.5。
进一步地，S3中嗜热链球菌的接种量为2-2.5％，S4中复合菌中的接种量为1.5-2％。
进一步地，冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4。
由上述描述可知，铁皮石斛叶、蛹虫草、竹荪和茯苓的配比，会影响所得组合发酵物中活性成分的组成，经过不断优化上述配比更有利于提供人体所需氨基酸，有利于提升机体免疫力。
上述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，还包括S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩2-5倍后进行灌装和灭菌处理。
由上述描述可知，通过S6的处理，可得到适于直接饮用的乳酸菌组合发酵物(乳酸菌组合发酵物饮品)。
一种由上述的乳酸菌组合发酵物的制备方法制备得到的乳酸菌发酵组合物。
由上述描述可知，乳酸菌发酵组合物口味微酸，无草味、无苦涩味，含有丰富的氨基酸、多糖、多酚和黄酮等活性物质，长期饮用有利于提升机体免疫力。
实施例1：
乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌的菌粉、唾液乳杆菌的菌粉、乳酸片球菌的菌粉和嗜热链球菌的菌粉分别活化并于28℃下扩大培养约60h至对数生长期，记数；
然后将双歧杆菌菌液、唾液乳杆菌菌液和乳酸片球菌菌液混合得到总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的复合乳酸菌(菌液)和总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的嗜热链球菌；
活化后的复合乳酸菌中双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌的菌数比为40％：25％：35％；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
复合草本粉的粒径范围为40-80目；冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4；
S3、复合草本粉中加水灭菌后接入活化后的嗜热链球菌，45±1℃下发酵7天，得到第一发酵产物；复合草本粉和水的质量比为1:1；
S4、柚子(不去皮)和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆；果浆经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌，32±1℃下发酵7天，得到第二发酵产物；柚子和桑葚的质量比为3:1；
S5、质量比为1:1.8的第一发酵产物和第二发酵产物混合，23±1℃下发酵120天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物；
S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩4倍后进行灌装和灭菌处理，得到得到乳酸菌组合发酵物饮品。
实施例2：
乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌的菌粉、唾液乳杆菌的菌粉、乳酸片球菌的菌粉和嗜热链球菌的菌粉分别活化并于28℃下扩大培养约60h至对数生长期，记数；
然后将双歧杆菌菌液、唾液乳杆菌菌液和乳酸片球菌菌液混合得到总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的复合乳酸菌(菌液)和总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的嗜热链球菌；
活化后的复合乳酸菌中双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌的菌数比为40％：20％：40％；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
复合草本粉的粒径范围为40-80目；冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4；
S3、复合草本粉中加水灭菌后接入活化后的嗜热链球菌，40±1℃下发酵10天，得到第一发酵产物；复合草本粉和水的质量比为1:1.2；
S4、柚子(不去皮)和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆；果浆经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌，28±1℃下发酵10天，得到第二发酵产物；柚子和桑葚的质量比为2.4:1；
S5、质量比为1:2.2的第一发酵产物和第二发酵产物混合，21±1℃下发酵150天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物；
S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩2倍后进行灌装和灭菌处理，得到得到乳酸菌组合发酵物饮品。
实施例3：
乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌的菌粉、唾液乳杆菌的菌粉、乳酸片球菌的菌粉和嗜热链球菌的菌粉分别活化并于28℃下扩大培养约60h至对数生长期，记数；
然后将双歧杆菌菌液、唾液乳杆菌菌液和乳酸片球菌菌液混合得到总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的复合乳酸菌(菌液)和总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的嗜热链球菌；
活化后的复合乳酸菌中双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌的菌数比为40％：30％：30％；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
复合草本粉的粒径范围为40-80目；冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4；
S3、复合草本粉中加水灭菌后接入活化后的嗜热链球菌，42±1℃下发酵15天，得到第一发酵产物；复合草本粉和水的质量比为1:1(1.2 1.5)；
S4、柚子(不去皮)和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆；果浆经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌，34±1℃下发酵15天，得到第二发酵产物；柚子和桑葚的质量比为2.8:1；
S5、质量比为1:2的第一发酵产物和第二发酵产物混合，24±1℃下发酵130天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物；
S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩5倍后进行灌装和灭菌处理，得到得到乳酸菌组合发酵物饮品。
对比例1：
乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌的菌粉、唾液乳杆菌的菌粉、乳酸片球菌的菌粉和嗜热链球菌的菌粉分别活化并于28℃下扩大培养约60h至对数生长期，记数；
然后将双歧杆菌菌液、唾液乳杆菌菌液和乳酸片球菌菌液混合得到总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的复合乳酸菌(菌液)和总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的嗜热链球菌；
活化后的复合乳酸菌中双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌的菌数比为40％：25％：35％；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
复合草本粉的粒径范围为40-80目；冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4；
S3、复合草本粉中加水，得到草本浆料，复合草本粉和水的质量比为1:1；
S4、柚子(不去皮)和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆，柚子和桑葚的质量比为3:1；
S5、将果浆与草本浆料混合经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌和活化后的嗜热链球菌，于32±1℃下发酵7天；再于23±1℃下发酵120天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物；
S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩4倍后进行灌装和灭菌处理，得到得到乳酸菌组合发酵物饮品。
对比例2：
乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌的菌粉、唾液乳杆菌的菌粉、乳酸片球菌的菌粉和嗜热链球菌的菌粉分别活化并于28℃下扩大培养约60h至对数生长期，记数；
然后将双歧杆菌菌液、唾液乳杆菌菌液和乳酸片球菌菌液混合得到总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的复合乳酸菌(菌液)和总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的嗜热链球菌；
活化后的复合乳酸菌中双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌的菌数比为40％：25％：35％；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
复合草本粉的粒径范围为40-80目；冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4；
S3、复合草本粉中加水，得到草本浆料，复合草本粉和水的质量比为1:1；
S4、柚子(不去皮)和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆，柚子和桑葚的质量比为3:1；
S5、将果浆与草本浆料混合经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌和活化后的嗜热链球菌，于45±1℃下发酵7天；再于23±1℃下发酵120天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物；
S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩4倍后进行灌装和灭菌处理，得到得到乳酸菌组合发酵物饮品。
对比例3：
乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌的菌粉、唾液乳杆菌的菌粉、乳酸片球菌的菌粉分别活化并于28℃下扩大培养约60h至对数生长期，记数；混合得到总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的复合乳酸菌(菌液)；
活化后的复合乳酸菌中双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌的菌数比为40％：25％：35％；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
复合草本粉的粒径范围为40-80目；冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4；
S3、复合草本粉中加水灭菌后接入活化后的复合乳酸菌，32±1℃下发酵7天，得到第一发酵产物；复合草本粉和水的质量比为1:1；
S4、柚子(不去皮)和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆；果浆经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌，32±1℃下发酵7天，得到第二发酵产物；柚子和桑葚的质量比为3:1；
S5、质量比为1:1.8的第一发酵产物和第二发酵产物混合，23±1℃下发酵120天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物；
S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩4倍后进行灌装和灭菌处理，得到得到乳酸菌组合发酵物饮品。
对比例4：
乳酸菌组合发酵物的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌的菌粉、唾液乳杆菌的菌粉、乳酸片球菌的菌粉和嗜热链球菌的菌粉分别活化并于28℃下扩大培养约60h至对数生长期，记数；
然后将双歧杆菌菌液、唾液乳杆菌菌液和乳酸片球菌菌液混合得到总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的复合乳酸菌(菌液)和总菌浓度大于等于5×106CFU/mL的活化后的嗜热链球菌；
活化后的复合乳酸菌中双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌的菌数比为33.3％：33.3％：33.3％；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
复合草本粉的粒径范围为40-80目；冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4；
S3、复合草本粉中加水灭菌后接入活化后的嗜热链球菌，45±1℃下发酵7天，得到第一发酵产物；复合草本粉和水的质量比为1:1；
S4、柚子(不去皮)和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆；果浆经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌，32±1℃下发酵7天，得到第二发酵产物；柚子和桑葚的质量比为3:1；
S5、质量比为1:1.8的第一发酵产物和第二发酵产物混合，23±1℃下发酵120天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物；
S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩4倍后进行灌装和灭菌处理，得到得到乳酸菌组合发酵物饮品。
测试例1：
对实施例1-3和对比例1-4所得乳酸菌组合发酵物饮品进行风味测评(0-10，数值越大，味道越明显)。包括腥味、霉土味、青草味、酸味、花香味、甜香感、果香感的评价，结果见表1所示。
表1
腥味 霉土味 青草味 酸味 花香味 甜香感 果香感
实施例1 0 0 0 6 0 3 7
实施例2 0 0 0 6 0 3 7
实施例3 0 0 0 7 0 3 7
对比例1 0 0 0 7 0 3 7
对比例2 0 0 0 8 0 2 6
对比例3 0 0 0 8 0 2 6
对比例4 0 0 0 7 0 2 6
测试例2：
对实施例1和对比例1-4所得乳酸菌组合发酵物饮品中的黄酮类成分进行测试(高效液相色谱法)，黄酮类成分色谱峰单位质量峰面积的结果见表2所示(n＝3)。
对实施例1和对比例1-4所得乳酸菌组合发酵物饮品中的多糖含量(紫外-可见分光光度法，488nm)，多糖的质量分数的结果见表3所示(n＝3)。
对实施例1和对比例1-4所得乳酸菌组合发酵物饮品中的天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸含量(日立氨基酸自动分析仪L-8900)进行测试，结果见表4所示(n＝3)。
对实施例1和对比例1-4所得乳酸菌组合发酵物饮品中的花青素含量进行测试，结果见表5所示(n＝3)。
表2
实施例1 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4
色谱峰 1833.5 1622.1 1517.3 1241.7 1397.2
表3
实施例1 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4
多糖(％) 38.77 32.58 30.79 26.01 33.13
表4
天门冬氨酸(mg/g) 谷氨酸(mg/g) 丝氨酸(mg/g)
实施例1 10.27 4.34 2.17
对比例1 8.85 3.56 1.95
对比例2 7.26 3.01 1.59
对比例3 6.84 2.87 1.63
对比例4 8.72 3.62 1.98
表5
实施例1 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4
花青素(mg/kg) 383.5 302.17 278.77 335.74 374.18
测试例3：
利用环磷酰胺(80mg·kg-1，ip)制造免疫低下昆明种小鼠模型10只，5只胃灌实施例1的酵素液(10mL/kg)作为试验组，剩余5只胃灌同等量的生理盐水作为对照组，同时以5只正常免疫状态的小鼠每天灌胃等量生理盐水作为空白组，胃灌21天时进行采样。所有实验小鼠按照实验动物管理条例中的规定进行饲喂和管理。对小鼠的脾脏、胸腺和身体质量进行称重，对单核－巨噬细胞功能进行检测，结果见表6所示。
表6
脾脏/体重比 胸腺/体重比 碳廓清吞噬指数α
空白组 42.37±1.89<sup>a</sup> 18.73±1.77<sup>a</sup> 3.87±0.06<sup>a</sup>
对照组 41.98±2.17<sup>a</sup> 19.01±2.14<sup>a</sup> 3.33±0.21<sup>b</sup>
试验组 42.25±2.38<sup>a</sup> 18.98±2.45<sup>a</sup> 3.98±0.11<sup>a</sup>
注：同一列数字上标字母不同表示差异显著，字母相同表示无统计学差异。
可以看出，本发明提供的乳酸菌组合发酵物饮品无毒副作用，且能够显著提高小鼠的免疫力。
综上所述，本发明提供的乳酸菌组合发酵物的制备方法，能够制备得到无草药味，味道微甜酸具有果香味的乳酸菌组合发酵物，适合大部分人群口味，克服了传统具有中药成分口服液味苦重的问题；同时，通过采用不同的菌种对不同的发酵物分别发酵，提升了乳酸菌组合发酵物中多糖、黄酮、天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸以及花青素等物质的含量，长期服用无毒副作用且有助于提高免疫力。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，包括使用活化后的嗜热链球菌发酵铁皮石斛叶、蛹虫草、竹荪和茯苓得到第一发酵产物的步骤，活化后的复合乳酸菌发酵柚子和桑葚得到第二发酵产物的步骤，以及第一发酵产物和第二发酵产物混合发酵的步骤。
2.根据权利要求1所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，所述复合乳酸菌包括双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌。
3.根据权利要求2所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，所述活化后的复合乳酸菌包括菌数比为40％：20％-30％：30％-40％的双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌。
4.根据权利要求1所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1、将双歧杆菌、唾液乳杆菌和乳酸片球菌混合，得到复合乳酸菌；
S2、将铁皮石斛叶、蛹虫草冻干后与竹荪和茯苓混合粉碎，得复合草本粉；
S3、复合草本粉中加水灭菌后接入活化后的嗜热链球菌，40-45℃下发酵7-15天，得到第一发酵产物；
S4、柚子和桑葚洗净后拭干表面水分，混合后打浆得到果浆；果浆经高温瞬时杀菌后接入活化后的复合乳酸菌，28-35℃下发酵7-15天，得到第二发酵产物；
S5、将第一发酵产物和第二发酵产物混合，20-25℃下发酵120-150天，灭菌后得到乳酸菌组合发酵物。
5.根据权利要求4所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，S2中复合草本粉的粒径为40-80目。
6.根据权利要求4所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，S3中复合草本粉和水的质量比为1:1-1.5。
7.根据权利要求4所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，S3中嗜热链球菌的接种量为2-2.5％，S4中复合菌中的接种量为1.5-2％。
8.根据权利要求4所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，冻干后的铁皮石斛叶、冻干后的蛹虫草、干燥的竹荪和干燥的茯苓的质量比为1:1:2:4。
9.根据权利要求4所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法，其特征在于，还包括S6、去除乳酸菌组合发酵物中的可见不溶物，利用低温真空浓缩2-5倍后进行灌装和灭菌处理。
10.一种由权利要求1-9任一项所述的乳酸菌组合发酵物的制备方法制备得到的乳酸菌发酵组合物。
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