KR101301546B1 - 무가당 발효를 이용한 식물혼합발효액(산야초 dln-28)의 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 생약원료와 유산균, 효모 및 고초균의 복합균주를 이용하여 항염효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조 방법 및 상기 방법으로 제조된 기능성 발효 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)은 항염 효과가 우수하여 염증성 질환을 예방하기 위한 건강식품 등에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

무가당 발효를 이용한 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)의 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물{Functional fermentation composition having anti-inflammatory effect of fermented mixed plants(wild plant DLN-28) using sugar-free fermentation}
본 발명은 무가당 발효를 이용한 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)의 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 생약원료와 유산균, 효모 및 고초균의 복합균주를 이용하여 무가당 발효를 통한 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조 방법, 상기 방법으로 제조된 기능성 발효 조성물 및 상기 기능성 발효 조성물을 이용하여 제조된 가공 식품에 관한 것이다.
염증은 세균 감염과 같은 병원체의 침입이나 물리적 또는 화학적으로 손상된 생체 조직 부위에 나타나는 국소적인 반응으로, 손상부위를 재생하려는 생체 기전이다. 자극이 가해지면 국소적으로 혈관 활성 물질이 유리되어 혈관 투과성이 증대되면서 염증반응이 유발되고, 초기 염증반응 시에는 일산화질소(NO)와 사이토카인(cytokine)이 생산되어 생체 방어에 중요한 역할을 하지만, 지속적인 염증 반응은 점막 손상을 유발하고 부종을 가져오는 등 오히려 염증을 심화시키는 것으로 알려졌다.
비만세포(mast cell)는 주로 알레르기 반응 또는 각종 염증성 반응에 관여하는 세포로, 자극이 가해지면 비만세포에서는 인터루킨(IL, interleukin)-8, 인터루킨-13, 종양괴사인자-알파(TNF-α; tumor necrosis factor-α), 과립구대식세포콜로니자극인자(GM-CSF; granulocyte macrophage colony stimulating factor), 인터페론-감마(IFN-γ; interferon-γ) 및 백혈병억제인자(LIF; leukemia inhibitory factor) 등의 사이토카인이 분비되거나 각각의 mRNA 발현이 증가된다. 이들 사이토카인은 면역글로불린 E(IgE) 항체생성 및 면역 반응 등을 조절할 뿐만 아니라 조혈작용, 조직반응 및 혈관반응 등을 통해 염증 반응의 발생에 중요한 역할을 한다. 비만세포에서 분비되는 여러 사이토카인 중에서 인터루킨-1, 인터루킨-6 및 종양괴사인자-알파는 염증 반응에 있어서 특히 중요한 사이토카인들이다.
인터루킨-6 및 종양괴사인자-알파의 발현은 전사인자 NF-κB의 활성에 의존한다. 적어도 다섯 개의 다른 유전자, NFκB1(p105/50), NFκB2(p100/52), RelA(p65), RelB 및 c-Rel이 NF-κB 패밀리에 속한다. 일반적으로 NF-κB는 다이머(dimer)로 이루어져 있는데 이 다이머는 NFκB1(p50)과 RelA(p65) 또는 NFκB1(p50)과 NFκB2(p52)로 구성된다. NF-κB는 내인성 억제인자 IκB와 결합하여 세포질에 존재하다가 특정 신호에 의해 IκB 키나아제(IKK)가 활성화되어 IκB를 인산화시킨 후 분해시키면, NF-κB가 활성화되어 핵 내로 이동하여 종양괴사인자-알파나 인터루킨-6와 같은 유전자의 프로모터에 존재하는 특이한 DNA 서열에 결합함으로써 각 유전자들의 전사를 활성화시킨다.
항염증제 및 진통제는 흔히 화학적으로 관련이 없는 다른 군들의 화합물들이나, 특정 치료작용 및 부작용을 공유한다. 천연 및 합성 코르티코스테로이드 제제는 혈압 상승, 염 및 물의 정체, 신장 손상, 칼륨 및 칼슘 분비의 증가를 비롯한 수많은 부작용을 일으킨다. 스테로이드계 물질의 부작용을 극복하기 위해 비스테로이드계 항염증성 작용물질(NSAID)들이 개발되어 왔다. 이들 중 가장 광범위하게 사용되는 것이 살리실산염이다. 아세틸살리실산 또는 아스피린은 가장 널리 사용되는 진통-해열 및 항염증성 물질이다. 하지만 다량 투여시 부작용을 나타낸다고 보고되어 있다. 예를 들면, 호흡촉진현상, 순환계 붕괴, 상복부 통증, 구토, 위장출혈, 간손상, 혈소판 저해 등 다양한 부작용이 알려져 있다. 따라서 많은 종류의 항염증성 물질이 사용되고 있음에도 불구하고, 부작용이 없고 우수한 항염 효능을 보유한 물질의 필요성이 여전히 요구되고 있다.
국내에서 자생하고 있는 식물자원 중에서 식, 약용식물은 약 120과 350속으로 이 중에서 산채류는 320여 종으로 지역적으로도 전국에 걸쳐 고루 분포하고 있다. 녹황색 채소류를 비롯한 각종 산야초류들은 각종 비타민류, 무기물류, 색소류 및 각종 특수성분 등의 중요한 영양소를 풍부하게 함유하고 있어 건강의 유지, 개선 및 질병예방에 크게 기여하고 있다. 그러나 대부분의 식물자원은 다량의 수분을 함유하고 있어 저장성이 취약하기 때문에 저장성과 기능성 향상을 위한 식품가공이 필요하다.
발효식품은 식품 저장성이 우수하여 보존성과 위생상 안전성이 확보되는 경제적인 식품이다. 식품을 발효함으로써 고분자 물질이 저분자 물질로 분해되어 소화 흡수율을 높이고, 새로운 풍미 생성으로 기호성이 증대될 뿐만아니라 생리활성을 갖는 성분이 생성되어, 최근에는 발효식품에서 3차 기능 효과가 있는 유용한 물질 탐색 및 발효대사의 연구가 활발하게 진행되고 있다.
한편, 한국등록특허 제1126164호에는 '온올금으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물'이 개시되어 있고, 한국등록특허 제0886873호에는 '유산균에 발효된 기능성 산야초 추출액의 제조방법'이 개시되어 있으나, 본 발명의 무가당 발효를 이용한 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)의 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물에 대해서는 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 설탕을 이용하는 기존의 산야초 발효와는 달리 본 발명에서는 산야초 발효시 설탕을 첨가하지 않고 발효함으로써 산야초 발효액 내의 설탕 섭취로 인한 문제점을 해결하여 몸에 이로운 건강식품으로서 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다. 또한, 장기 복용시 부작용의 우려가 있는 종래 비스테로이드성 소염진통제와 달리, 자연에서 채취된 생약을 이용하여 약리적으로 안정하고 저용량으로 항염증작용 및 소염진통작용 등의 통증억제 효능이 탁월한 생약 조성물을 제공하는 데 있다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 생약원료와 유산균, 효모 및 고초균의 복합균주를 이용하여 무가당 발효를 통한 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물을 이용하여 제조된 가공 식품을 제공한다.
본 발명의 생약원료와 유산균, 효모 및 고초균의 복합균주를 이용하여 제조된 기능성 발효 조성물은 설탕을 첨가하지 않고 발효하기 때문에 발효 조성물 내에 포함된 설탕으로 인한 건강상의 문제점을 해결할 수 있고, 식물로부터 얻어진 물질을 함유하기 때문에 부작용을 일으키지 않고, 상기 생약원료의 영양성분과 천연 항생물질이 발효 조성물 내에 풍부하게 함유되어 있으며, 항염증 효과도 우수하므로 본 발명의 기능성 발효 조성물은 염증성 질환을 예방하기 위한 건강식품 등에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 THP-1 세포에서 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)의 항염증 실험으로, NF-κB 리포터 어세이 결과이다. Cell only, 무처리 대조군; LPS, 리포폴리사카라이드, 염증반응 유도 물질; Polymyxin B, 항생제; DLN-28, 식물혼합발효액.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
(1) 대추(Zizyphus jujuba Millvar . inermis Rehder), 칡(Pueraria thunbergiana), 감초(Glycyrrhiza uralensis), 두충나무(Eucommia ulmoides Oliv .), 계피(Cinnamonum zeylanicum Beryn), 모과나무(Chaenomeles sinensis Koebhne), 뽕나무(Morus), 헛개나무(Hovenia dulcis Thunb), 약모밀(Houttuynia cordata), 삼백초(Saururus chinensis ( Lour .) Baill), 쇠무릎(Achyranthes japonica), 백하수오(Pleuropterus multiflorus TURCZ .), 흰민들레(Taraxacum coreanum), 가시오갈피(Acanthopanax senticosus), 음나무(Kalopanax pictus ( Thunb .) Nakai), 황기(Astragalus membranaceus Bunge), 겨우살이(Viscum album var . coloratum), 참당귀(Angelica gigas Nakai), 산초(Zanthoxylum piperitum DC), 둥굴레(Polygonatum odoratum var . pluriflorum), 소나무(Pinus densiflora), 진피(Citri Unshiu Pericarpium), 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorus), 왕느릅나무(Ulmus macrocarpa Hance), 쇠비름(Portulaca oleracea L.), 구기자나무(Lycium chinense) 및 생강(Zingiber officinale)의 생약원료를 배합하여 배합물을 제조하는 단계;
(2) 상기 생약원료의 배합물을 유산균, 효모 및 고초균의 복합균주와 혼합하여 7-15일 동안 30-40℃에서 발효하여 발효액을 제조하는 단계; 및
(3) 상기 발효액을 60-110℃에서 10-60분 동안 살균하여 발효액 내 균주들의 활성을 억제시키는 단계;를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 기능성 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 (1)단계의 생약원료는 상기 생약원료 외에 코코넛(Cocos nucifera) 혹은 대추야자(Phoenix dactylifera)를 추가로 배합하여 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 기능성 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 (1)단계의 생약원료의 배합비는 바람직하게는, 배합물 100 중량부 기준으로, 대추(열매) 14~17 중량부, 칡(뿌리) 6~7 중량부, 감초(뿌리) 9~11 중량부, 두충나무(나무껍질) 3~5 중량부, 계피(어린가지) 3~5 중량부, 모과나무(열매) 3~5 중량부, 뽕나무(잎) 3~5 중량부, 헛개나무(줄기) 3~5 중량부, 약모밀(전초) 2~4 중량부, 삼백초(전초) 2~4 중량부, 쇠무릎(뿌리) 2~4 중량부, 백하수오(덩이뿌리) 2~4 중량부, 흰민들레(전초) 2~4 중량부, 가시오갈피(줄기껍질) 2~4 중량부, 음나무(어린잎 및 나무껍질) 2~4 중량부, 황기(뿌리) 2~4 중량부, 겨우살이(잎, 줄기 및 가지) 2~4 중량부, 참당귀(뿌리) 2~4 중량부, 산초(껍질) 2~4 중량부, 둥굴레(뿌리) 2~4 중량부, 소나무(잎) 2~4 중량부, 진피(열매껍질) 2~4 중량부, 오갈피나무(가지껍질) 2~4 중량부, 왕느릅나무(나무껍질) 2~4 중량부, 쇠비름(잎, 줄기 및 전초) 2~4 중량부, 구기자나무(열매) 0.5~1.5 중량부 및 생강(뿌리) 0.5~1.5 중량부일 수 있고, 더욱 바람직하게는 배합물 100 중량부 기준으로, 대추 15.5 중량부, 칡 6.4 중량부, 감초 9.9 중량부, 두충나무 4.1 중량부, 계피 4.1 중량부, 모과나무 4.1 중량부, 뽕나무 4.1 중량부, 헛개나무 4.1 중량부, 약모밀 2.7 중량부, 삼백초 2.7 중량부, 쇠무릎 2.7 중량부, 백하수오 2.7 중량부, 흰민들레 2.7 중량부, 가시오갈피 2.7 중량부, 음나무 2.7 중량부, 황기 2.7 중량부, 겨우살이 2.7 중량부, 참당귀 2.7 중량부, 산초 2.7 중량부, 둥굴레 2.7 중량부, 소나무 2.7 중량부, 진피 2.7 중량부, 오갈피나무 2.7 중량부, 왕느릅나무 2.7 중량부, 쇠비름 2.7 중량부, 구기자나무 0.9 중량부 및 생강 0.9 중량부일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 코코넛 혹은 대추야자가 생약원료에 추가되는 경우에는, 상기 (1)단계의 생약원료의 배합비는 바람직하게는, 배합물 100 중량부 기준으로, 대추(열매) 10~12 중량부, 감초(뿌리) 5~6 중량부, 코코넛 혹은 대추야자 8~10 중량부이며, 나머지 생약원료의 배합비는 코코넛 혹은 대추야자 추가되기 전의 배합비와 동일하다.
또한, 본 발명의 기능성 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 (2)단계의 유산균은 락토바실러스 애시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 루코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 루코노스톡 젤리둠(Leuconostoc gelidum), 루코노스톡 메센테로이즈(Leuconostoc mesenteroides) 및 루코노스톡 파라메센테로이즈(Leuconostoc paramesenteroides)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 균주일 수 있고, 바람직하게는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 기능성 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 (2)단계의 효모균은 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 사카로아미세스 엘리소이더스(Saccharomyces ellipsoidus) 또는 이들의 조합일 수 있고, 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 기능성 발효 조성물의 제조방법에 있어서, 상기 (2)단계의 고초균(바실러스)은 통상의 바실러스균 발효에 사용될 수 있는 임의의 고초균이 사용될 수 있으며, 한 종류의 고초균 또는 복합 고초균이 사용될 수 있다. 바람직하게는, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 서브틸리스 스피지제니(Bacillus subtilis spizizenii), 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium), 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus) 또는 이들의 조합일 수 있고, 더욱 바람직하게는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 기능성 발효 조성물을 이용하여 제조된 가공 식품을 제공한다. 상기 가공 식품의 종류로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 재료 및 시약 준비
약초상에서 조달된 건조 상태의 생약원료 ; 대추(Zizyphus jujuba Millvar . inermis Rehder), 칡(Pueraria thunbergiana), 감초(Glycyrrhiza uralensis), 두충나무(Eucommia ulmoides Oliv .), 계피(Cinnamonum zeylanicum Beryn), 모과나무(Chaenomeles sinensis Koebhne), 뽕나무(Morus), 헛개나무(Hovenia dulcis Thunb), 약모밀(Houttuynia cordata), 삼백초(Saururus chinensis ( Lour .) Baill), 쇠무릎(Achyranthes japonica), 백하수오(Pleuropterus multiflorus TURCZ .), 흰민들레(Taraxacum coreanum), 가시오갈피(Acanthopanax senticosus), 음나무(Kalopanax pictus ( Thunb .) Nakai), 황기(Astragalus membranaceus Bunge), 겨우살이(Viscum album var . coloratum), 참당귀(Angelica gigas Nakai), 산초(Zanthoxylum piperitum DC), 둥굴레(Polygonatum odoratum var . pluriflorum), 소나무(Pinus densiflora), 진피(Citri Unshiu Pericarpium), 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorus), 왕느릅나무(Ulmus macrocarpa Hance), 쇠비름(Portulaca oleracea L.), 구기자나무(Lycium chinense) 및 생강(Zingiber officinale)을 세척하고 건조시킨 후 분쇄하였다.
분쇄된 상기 생약원료는 배합물 100 중량부 기준으로, 대추 15.5 중량부, 칡 6.4 중량부, 감초 9.9 중량부, 두충나무 4.1 중량부, 계피 4.1 중량부, 모과나무 4.1 중량부, 뽕나무 4.1 중량부, 헛개나무 4.1 중량부, 약모밀 2.7 중량부, 삼백초 2.7 중량부, 쇠무릎 2.7 중량부, 백하수오 2.7 중량부, 흰민들레 2.7 중량부, 가시오갈피 2.7 중량부, 음나무 2.7 중량부, 황기 2.7 중량부, 겨우살이 2.7 중량부, 참당귀 2.7 중량부, 산초 2.7 중량부, 둥굴레 2.7 중량부, 소나무 2.7 중량부, 진피 2.7 중량부, 오갈피나무 2.7 중량부, 왕느릅나무 2.7 중량부, 쇠비름 2.7 중량부, 구기자나무 0.9 중량부 및 생강 0.9 중량부의 비율로 배합하여 배합물을 제조하였다.
실시예 2. 개별 종배양
2-1. 락토바실러스 플란타룸의 종배양
한국생명공학연구원 생명자원센터(KCTC, Korean Collection for Type Culture)로부터 구입한 유산균 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum , KCTC 3104)을 적당량 취하여 상업적으로 제조하여 판매하고 있는 MRS 고체배지(소고기추출물(Beef Extract) 10g, 효모추출물(Yeast Extract) 5g, 덱스트로스(Dextrose) 20g, 소르비탄 모노올레이트(Sorbitan Monooleate) 1g, 암모늄 시트레이트(Ammonium Citrate) 2g, 아세트산 나트륨(Sodium Acetate) 5g, 황산망간(MnSO4·H2O) 0.05g, 인산나트륨(Na2HPO4) 2g 및 한천 15g; 물 1ℓ당 첨가량)에 도말하여 38℃에서 1일 정도 배양한 다음, 단일 콜로니(colony)를 취하여 한천을 제외한 동일한 구성의 MRS 액체배지 300㎖에 접종하고, 이를 38℃에서 2일 배양한 후 종균으로 사용하였다. 균수는 9.84×108cfu/㎖였다.
2-2. 사카로마이세스 세레비지애의 종배양
한국생명공학연구원 생명자원센터로부터 구입한 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae, KCTC7904)를 포도당(glucose) 10g, 효모추출물(yeast extracts) 3g, 펩톤(peptone) 5g, 엿기름추출물(malt extracts) 3g 및 한천 15g(물 1ℓ당 첨가량)으로 구성된 고체배지에 도말하여 28℃에서 1일 배양한 후 단일 콜로니를 선발하였고, 이를 한천을 제외한 동일한 구성의 액체배지 300㎖에 접종하여 28℃에서 1일간 현탁 배양하여 종균으로 사용하였다. 균수는 5.7×108 cfu/㎖였다.
2-3. 바실러스 서브틸리스의 종배양
한국생명공학연구원 생명자원센터로부터 구입한 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis, KCTC 3239)를 소고기추출물 3g, 펩톤 5g 및 한천 15g(물 1ℓ당 첨가량)으로 구성된 고체배지에 도말하여 30℃에서 1일 배양한 후 단일 콜로니를 선발하였고, 이를 한천을 제외한 동일한 구성의 액체배지 300㎖에 접종하여 30℃에서 1일간 현탁 배양하여 종균으로 사용하였다. 균수는 3.2×108 cfu/㎖였다.
실시예 3. 복합균주 미생물 본배양
복합미생물의 대량 배양액은 상기 실시예 2에서 제조된 각 균주배양액을 종균으로 사용하여 제조하였다. 복합미생물을 대량으로 배양하기 위하여 10ℓ의 증류수에 60g의 식용당밀을 충분히 녹이고 여기에 상기 실시예 2-1, 2-2 및 2-3의 종균 배양액을 각각 200㎖씩 첨가하였다. 이어서 증류수를 첨가하여 최종 20ℓ가 되도록 하고, 이 미생물 혼합액을 35℃에서 10일간 배양하였다. 배양된 복합균주 배양액의 산도는 pH 3-4였으며, 락토바실러스 플란타룸의 균수는 1.5×108 cfu/㎖, 사카로마이세스 세레비지애의 균수는 2.5×106 cfu/㎖, 바실러스 서브틸리스의 균수는 1.3×105 cfu/㎖였다.
실시예 4. 복합균주를 이용한 식물혼합발효액의 제조
스테인레스 발효조에 실시예 1의 상기 생약원료의 배합물과 실시예 3의 복합균주 배양액을 1:2의 중량 비율로 혼합하여 온도 37-40℃로 7-15일 정도 배양시켜 식물혼합발효액을 제조한 후, 최종적으로 60-110℃로 10-60분간 살균하였다. 이 식물혼합발효액을 산야초 DLN-28로 명명하였다.
실시예 5. 인간 THP1 세포에서 NF -κB의 활성 분석시험
전사인자 중 하나인 NF-κB는 자극에 의해 활성화되면, 염증반응과 면역반응을 조절하고 다양한 유전자들의 전사를 조절하는 중요한 인자이다. 이에 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)의 항염 효과를 확인해보기 위해, NF-κB 리포터 어세이를 수행하여 NF-κB의 활성 정도를 분석하였다.
단핵구(monocyte) 세포주인 THP1 세포에 NF-κB 리포터 시스템(reporter system)이 들어가 있는 THP1-XBlue 세포를 배양하여 사용하였으며, 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)은 0.22㎛ 필터를 이용하여 여과한 후 실험에 사용하였다. 96 웰 플레이트에 강력한 면역반응 유발인자인 리포폴리사카라이드(LPS, lipopolysaccharide)를 100㎎/㎖로 단독 처리한 양성 대조군, LPS와 2㎎/㎖ 폴리믹신 B(polymixin B)를 함께 처리한 대조군, LPS에 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125 및 1.5625%의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)(1/2씩 희석하여 총 6군)을 함께 처리한 실험군 및 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 단독 처리군을 준비하였다. 그 후에 웰 당 1x105개의 세포수가 되도록 세포를 넣어주고 재혼탁하여 37℃ 온도와 5% 이산화탄소 조건의 세포배양기에서 16시간 동안 배양한 후, 원심분리를 하여 세포를 침전시켰다. 상층액 40㎕를 새로운 플레이트에 옮겨담고, 200㎕의 Quanti-blue(InvivoGen, 미국)를 넣고 37℃ 배양기에 35분간 반응시킨 후, UV/Vis 분광 광도계(Simazu, 일본)를 이용하여 655nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과 도 1과 같이 세포만 배양한 배지에서는 NF-κB의 활성이 확인되지 않았고, 세포에 LPS만 단독 처리한 배지에서는 NF-κB의 높은 활성 수준을 확인하였다. 또한 본 발명의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)을 LPS와 함께 처리해준 실험군에서는 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)의 첨가량 의존적으로 NF-κB의 활성이 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 12.5%의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)을 첨가한 실험군부터는 NF-κB가 거의 활성화되지 않음을 알 수 있었다.
실시예 6: 관능검사
상기 실시예 4의 방법으로 제조된 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)의 관능검사 결과는 하기 표 1과 같다. 30대의 남녀 직장인 30명을 대상으로 5점 평점법에 의해 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)에 대한 색, 향, 맛 및 기호도를 테스트하였는데, 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 20 g에 물 100 mL를 넣고 희석한 것을 가지고 관능검사에 사용하였다: 1: 나쁘다, 2: 조금 나쁘다, 3: 보통이다, 4: 조금 좋다, 5: 좋다.
관능검사
색 향 맛 전체적인 기호도
실시예 4 4.12 4.13 4.42 4.35
상기 표 2에서 알 수 있는 바와 같이, 색, 향 및 맛에 대한 기호도에서 본 발명의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)이 4점 이상의 높은 점수를 나타내었고, 전체적인 기호도에서도 4.35의 높은 점수를 얻어 산야초 특유의 쓴맛이 감소하여 전체적인 기호도가 높음을 확인할 수 있었다.
제제예 1: 식품의 제조
1-1. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
1-2. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
1-3. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
1-4. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
1-5. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)을 하기의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부), 종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부), 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28)(3 중량부), 영지(0.5 중량부), 지황(0.5 중량부)
제제예 2: 음료의 제조
2-1. 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
2-2. 야채 주스의 제조
본 발명의 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
2-3. 과일 주스의 제조
본 발명의 실시예 4의 식물혼합발효액(산야초 DLN-28) 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims (6)

  1. (1) 대추(Zizyphus jujuba Millvar . inermis Rehder), 칡(Pueraria thunbergiana), 감초(Glycyrrhiza uralensis), 두충나무(Eucommia ulmoides Oliv.), 계피(Cinnamonum zeylanicum Beryn), 모과나무(Chaenomeles sinensis Koebhne), 뽕나무(Morus), 헛개나무(Hovenia dulcis Thunb), 약모밀(Houttuynia cordata), 삼백초(Saururus chinensis (Lour.) Baill), 쇠무릎(Achyranthes japonica), 백하수오(Pleuropterus multiflorus TURCZ.), 흰민들레(Taraxacum coreanum), 가시오갈피(Acanthopanax senticosus), 음나무(Kalopanax pictus ( Thunb .) Nakai), 황기(Astragalus membranaceus Bunge), 겨우살이(Viscum album var . coloratum), 참당귀(Angelica gigas Nakai), 산초(Zanthoxylum piperitum DC), 둥굴레(Polygonatum odoratum var . pluriflorum), 소나무(Pinus densiflora), 진피(Citri Unshiu Pericarpium), 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorus), 왕느릅나무(Ulmus macrocarpa Hance), 쇠비름(Portulaca oleracea L.), 구기자나무(Lycium chinense) 및 생강(Zingiber officinale)의 생약원료를 배합하여 배합물을 제조하는 단계;
    (2) 상기 생약원료의 배합물을 유산균, 효모 및 고초균의 복합균주와 7-15일 동안 30-40℃에서 발효하여 발효액을 제조하는 단계; 및
    (3) 상기 발효액을 60-110℃에서 10-60분 동안 살균하여 발효액 내 균주들의 활성을 억제시키는 단계;를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 무가당 발효를 이용한 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 (1)단계의 생약원료는 코코넛(Cocos nucifera) 혹은 대추야자(Phoenix dactylifera)를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 (1)단계의 배합물은 배합물 100 중량부 기준으로, 대추(Zizyphus jujuba Millvar . inermis Rehder) 14~17 중량부, 칡(Pueraria thunbergiana) 6~7 중량부, 감초(Glycyrrhiza uralensis) 9~11 중량부, 두충나무(Eucommia ulmoides Oliv .) 3~5 중량부, 계피(Cinnamonum zeylanicum Beryn) 3~5 중량부, 모과나무(Chaenomeles sinensis Koebhne) 3~5 중량부, 뽕나무(Morus) 3~5 중량부, 헛개나무(Hovenia dulcis Thunb) 3~5 중량부, 약모밀(Houttuynia cordata) 2~4 중량부, 삼백초(Saururus chinensis ( Lour .) Baill) 2~4 중량부, 쇠무릎(Achyranthes japonica) 2~4 중량부, 백하수오(Pleuropterus multiflorus TURCZ .) 2~4 중량부, 흰민들레(Taraxacum coreanum) 2~4 중량부, 가시오갈피(Acanthopanax senticosus) 2~4 중량부, 음나무(Kalopanax pictus ( Thunb .) Nakai) 2~4 중량부, 황기(Astragalus membranaceus Bunge) 2~4 중량부, 겨우살이(Viscum album var . coloratum) 2~4 중량부, 참당귀(Angelica gigas Nakai) 2~4 중량부, 산초(Zanthoxylum piperitum DC) 2~4 중량부, 둥굴레(Polygonatum odoratum var . pluriflorum) 2~4 중량부, 소나무(Pinus densiflora) 2~4 중량부, 진피(Citri Unshiu Pericarpium) 2~4 중량부, 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorus) 2~4 중량부, 왕느릅나무(Ulmus macrocarpa Hance) 2~4 중량부, 쇠비름(Portulaca oleracea L.) 2~4 중량부, 구기자나무(Lycium chinense) 0.5~1.5 중량부 및 생강(Zingiber officinale) 0.5~1.5 중량부를 배합한 것을 특징으로 하는 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 (2)단계의 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 효모균은 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 고초균은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)인 것을 특징으로 하는 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물의 제조방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 무가당 발효를 이용한 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물.
  6. 제5항의 항염 효과를 갖는 기능성 발효 조성물을 이용하여 제조된 가공 식품.
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