CN114053289B

CN114053289B - 瑞德西韦在制备预防和治疗神经系统退行性疾病药物中的应用

Info

Publication number: CN114053289B
Application number: CN202010781665.6A
Authority: CN
Inventors: 崔庆华; 袁增强; 李硕硕
Original assignee: Beijing Jianmu Technology Co ltd
Current assignee: Beijing Jianmu Technology Co ltd
Priority date: 2020-08-06
Filing date: 2020-08-06
Publication date: 2023-06-27
Anticipated expiration: 2040-08-06
Also published as: CN114053289A

Abstract

本发明公开了瑞德西韦(Remdesivir)在预防和治疗神经系统退行性疾病尤其是阿尔兹海默症(Alzheimer disease，AD)药物中的应用。本发明证实了瑞德西韦作为预防和治疗神经系统退行性疾病药物的重大潜力，首次公开了瑞德西韦对阿尔兹海默症的良好疗效，为神经系统退行性疾病阿尔兹海默症治预防和疗提供了有效的新型潜在备选药物，扩展了瑞德西韦的适应证，极大的提高了瑞德西韦的应用潜力及市场前景。

Description

瑞德西韦在制备预防和治疗神经系统退行性疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及瑞德西韦在制备预防和治疗神经系统退行性疾病尤其是阿尔兹海默症药物中的应用。

背景技术

Remdesivir(RDV，GS-5734)是吉利德科学公司(GILD)开发的一款通过抑制病毒核酸合成起作用的核苷类似物抗病毒药。

专利WO2009132123A1中首次提出瑞德西韦(Remdesivir)化合物结构的通式，用于治疗丙型肝炎病毒感染、登革热等黄病毒科病毒感染疾病。专利WO2012012776A1提出瑞德西韦治疗副黏病毒科病毒感染的疾病的作用。在后续专利中还提出RDV可作为抗丝状病毒、抗沙粒病毒及抗冠状病毒药物。根据文献信息，瑞德西韦预防和治疗神经系统退行性疾病作用目前未有国内外文献公开。

阿尔茨海默病(AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征。AD脑的主要神经病理学特征是弥漫性和神经营养性的细胞外淀粉样斑块(通常被营养不良性神经突所包围)和细胞内神经原纤维缠结。这些病理变化经常伴有反应性小胶质细胞增生和神经元，白质和突触的丧失。这些神经病理学改变的病因机制仍不清楚，但可能是由环境和遗传因素共同引起的。

世界人口正在进入老龄化阶段。全球目前至少有5000万阿尔茨海默病患者，到2050年，这个数字预计将达到1.5亿左右。以认知，功能和行为逐渐恶化为特征的AD给社会带来了沉重负担。仅在美国，阿尔茨海默氏病每年估计的医疗保健费用为1,720亿美元。全球每年用于AD费用超6040亿美元，AD费用已经超过了心脏病、癌症和中风的费用，给各国带来了沉重的经济负担。在中国，AD也已成为严重的公共卫生问题之一。我国65岁以上老人中阿尔茨海默病患病率为5.9％，目前约有700万左右的患者，每年平均还有30万中国老年人加入这个行列。

阿尔兹海默症等神经系统退行性疾病给全球带来了沉重负担，新的预防及治疗药物将对全球患者的治疗具有重大积极意义，其中的商业潜力也十分巨大。

发明内容

本发明目的在于提供瑞德西韦药物一类新的适应症。瑞德西韦作为预防和治疗阿尔兹海默症的药物能有效抑制β-淀粉样蛋白在脑组织中的沉淀聚集，为阿尔兹海默症的预防和治疗提供了一种新的备选药物。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明首先提供了瑞德西韦在制备预防和治疗神经系统退行性疾病药物中的应用，所述瑞德西韦对阿尔兹海默症起到预防和治疗的作用。所述瑞德西韦对β-淀粉样蛋白在脑组织中的沉积起到抑制作用。

本发明中预防和治疗除针对阿尔兹海默症外，还包括其他β-淀粉样蛋白沉积导致的疾病。因此，除对阿尔兹海默症的预防及治疗作用外，瑞德西韦作为抑制β-淀粉样蛋白沉积治疗其他疾病的应用也在本发明的保护范围之内。

进一步地，所述药物包含瑞德西韦，所述瑞德西韦以游离形式或药学上可接受的化合物的形式存在。

在本发明的上述应用中，所述药物含有有效剂量的瑞德西韦。有效剂量为单位给药剂量形式(如一片、一针、一丸或一剂的药物中的含量)或治疗的患者的单位剂量(如单位体重剂量)。在本发明中，药物治疗对象范围为哺乳动物类，包括人、犬科、啮齿类动物等。不同动物有效剂量换算可根据本领域实验动物与人的等效剂量换算关系(通常可参见FDA、SFDA等药品管理机构的指导意见，也可参见“黄继汉等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算。中国临床药理学与治疗学，2004Sep；9(9)：1069-1072”)，即可从实验动物的剂量推导出人的单位体重剂量。例如，对于常用的实验动物小鼠而言，根据上述文献，其与成人的换算关系约为12:1。

在本发明中，7月龄的AD模型小鼠B6-Tg(APP/PS1)中，明显治疗AD的有效剂量(以含量计)为2.5～80mg/kg，优选为10～20mg/kg。

优选的，根据小鼠与成人有效剂量换算关系，将成人体重标准设置为60kg，则成人有效剂量为每天12.5～400mg，优选为50mg～100mg。

优选的，所述药物还包含其他神经系统退行性疾病药物。

优选的，所述药物还含有药学上可接受的载体。

本发明所述的载体为药学上可以接受的载体，其指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质。它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组分能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。

优选的，所述载体包括但不限于：稀释剂、缓冲剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、包囊剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、喷雾剂、透皮吸收剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂或吸附载体。

上述药物可以按照需要制作成医学上任何可用的剂型，优选的，所述药物的剂型适于口服或注射；优选的，所述剂型包括口服液、注射液、片剂、胶囊等。

有益效果：

本发明证实了瑞德西韦作为预防和治疗阿尔兹海默症药物的重大潜力，首次公开了瑞德西韦对抑制β-淀粉样蛋白沉积的良好疗效，为神经系统退行性疾病的预防和治疗提供了有效的新型潜在备选药物，扩展了瑞德西韦的适应证，极大的提高了瑞德西韦的应用潜力及市场前景。

附图说明

图1 AD模型小鼠脑组织中出现β-淀粉样蛋白沉积。

图2 小鼠脑组织Aβ免疫组化图。

图3 Aβ免疫组化图统计结果，即组织切片上每1mm²面积上β-淀粉样蛋白沉积斑块个数。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试剂可以商业购买得到。

实施例1 AD模型小鼠脑组织中出现β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein，Aβ)在细胞基质沉淀聚积

一、实验材料

1.瑞德西韦：购买于上海陶素生化科技有限公司，避光、密封、干燥4℃保存。药物溶解于5％DMSO+45％PEG300+5％Tween 80+ddH₂O。

2.实验动物：AD模型小鼠B6-Tg(APP/PS1)，7月龄，SPF级，雄性，由北京华阜康动物实验有限公司提供。

3.免疫组化试剂盒：

ABC-HRP Kit,Peroxidase(Mouse IgG)，货号PK-4002。

4.其他试剂：Aβ抗体(803001，biolegend)、DMSO(D2560,Sigma,Germany)、PEG300(CAS2532-68-3,TOKYO CHEMICAL INDUSTRY,JAPAN),Tween 80(9005-65-6,GFCOCHEMICAL,HONGKONG)

二、实验步骤

处死AD模型小鼠后对脑片进行Aβ免疫组化染色，染色后的样品使用Nano zoomer进行图像采集，最后根据图像采集结果进行数据分析。

三、实验方法

1.小鼠脑组织取样：麻醉小鼠进行小鼠心脏灌流后，处死小鼠打开颅骨取脑组织。

2.组织固定脱水：将取出的新鲜组织放入4％PFA(多聚甲醛)固定过夜。固定好的组织进行脱水，分别在10％、20％、30％蔗糖中梯度脱水，每个梯度处理24小时。

3.脱水后的组织使用OCT(4583,Sakura Finetek,Torrance,CA,USA)在-20℃速冻包埋，包埋好的组织进行冰冻切片，切片厚度为40μm。

4.免疫组化染色：按试剂盒说明书具体步骤进行，简述如下：用PBS洗涤三次每次5min，加入0.3％H₂O₂(PBS配制)室温孵20min，去除内源性过氧化物酶。PBS洗涤3次，每次5min。加入封闭液(1％山羊血清，1％BSA，0.3％Triton X-100)封闭1h后，用PBS洗涤3次，每次5min。将切片放入湿盒中加入稀释好的一抗，于室温孵育2h之后4℃孵育过夜。次日，回收一抗切片用PBS洗涤三次，每次5min。加入ABC试剂盒的二抗，室温孵育1h。将ABC试剂盒的A液和B液稀释混合室温放置30min形成生物素亲和素复合体，之后加到孵育完二抗的组织切片上室温孵育1h。PBS洗涤3次，每次5min。DAB显色约5min。根据染色程度判定中止时间后，PBS洗涤，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，数字切片扫描仪采集图像。

5.数据处理：利用Nano zoomer采集的图像进行数据采集。

6.计算方法：利用image Pro plus进行图像分析。对图像上Abeta斑块密度进行统计，结果以每平方毫米斑块数呈现，每只小鼠各脑区统计2-3个视野，每组统计3只小鼠。

四、实验结果与结论

如图1所示，选择脑前额皮层(PFC)与海马体(HP)处切片进行Aβ免疫组化，与野生型小鼠(WT)相比，AD小鼠脑组织中出现β-淀粉样蛋白沉积。

实施例2瑞德西韦可减少β-淀粉样蛋白在脑部沉积，减少Aβ斑块

一、实验材料

同实施例1。

二、实验分组

空白对照组，瑞德西韦组(5mg/kg，po)，瑞德西韦组(10mg/kg，po)，瑞德西韦组(20mg/kg，po)，瑞德西韦组(50mg/kg，po)。

三、实验步骤

选择体重相近、雄性的B6-Tg(APP/PS1)AD模型小鼠，随机分组，每组3只(n＝3)，称重后给药，给药每天一次，连续口服灌胃给药3次。

给药结束后第3天称量体重，处死AD模型小鼠后对脑片进行Aβ免疫组化染色，染色后的样品使用Nano zoomer进行图像采集，最后根据图像采集结果进行数据分析，统计组织切片中每1mm²面积上β-淀粉样蛋白沉积斑块个数，以此评价瑞德西韦对Aβ斑块沉积的抑制作用强度。

四、实验方法

同实施例1。

五、实验结果与结论

选择脑前额皮层(PFC)与海马体(HP)处切片进行Aβ免疫组化，图2为AD小鼠的口服不同剂量瑞德西韦后的脑组织β-淀粉样蛋白免疫组化染色图，图3为图2的统计结果，统计每1mm²面积上β-淀粉样蛋白沉积斑块个数。

由图可知，瑞德西韦对神经系统退行性疾病病理有明显的改善作用。在AD模型中，口服瑞德西韦(10mg/kg,po)，瑞德西韦(20mg/kg,po)均对脑内Aβ斑块沉积具有显著抑制作用。

表1为瑞德西韦对β-淀粉样蛋白沉积抑制作用的药效统计表，与对照组相比，Aβ斑块沉积差异具有统计学意义(NS：无统计学差异，*p<0.5，**p<0.01，***p<0.001。并且从表中数据可知，瑞德西韦在10mg/kg/d～20mg/kg/d剂量时具有最好的治疗效果，但不排除剂量<10mg/kg/d剂量(如：2.5～10mg/kg)对斑块沉积的抑制作用，也不排除>50mg/kg/d的剂量如51～80mg/kg对Aβ斑块沉积具有抑制作用。

表1瑞德西韦对β-淀粉样蛋白沉积抑制作用的药效统计表

剂量	药效
		5mg/kg	NS
10mg/kg	**
		20mg/kg	**
50mg/kg	*

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.瑞德西韦在制备预防和治疗阿尔兹海默症药物中的应用，其特征在于，所述药物通过抑制β-淀粉样蛋白在脑组织中的沉积起作用。

2.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于，所述药物为口服或注射给药剂型，所述口服给药剂型包括散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、乳剂或混悬剂。

3.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于，所述药物还包含其他辅料。

4.根据权利要求 3 所述的应用，其特征在于，所述药物还含有药学上可接受的载体，所述载体为稀释剂、缓冲剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂。