CN114028460B - 一种青梅酒在降血糖方面的应用、其降血糖活性物质的提取方法及其检测方法 - Google Patents

一种青梅酒在降血糖方面的应用、其降血糖活性物质的提取方法及其检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种青梅酒在降血糖方面的应用、其降血糖活性物质的提取方法及其检测方法，所述青梅酒能够用于降血糖。通过本发明所述方法对青梅酒中的活性成份进行提取，并对活性物质进行检测，进而发现青梅酒中活性成份能够起到降血糖的效果。

Description

一种青梅酒在降血糖方面的应用、其降血糖活性物质的提取 方法及其检测方法
技术领域
本发明涉及化合物提纯技术领域，具体涉及一种青梅酒在降血糖方面的应用、其降血糖活性物质的提取方法及其检测方法。
背景技术
青梅，又称果梅、酸梅，为蔷薇科植物，原产于中国，是我国亚热带特产水果，在我国广东、福建和浙江等省都有大量种植，后传人日本及东南亚地区，目前主要的产梅地是中国和日本。据报道，青梅具有抑菌、抗肿瘤、驱虫、解毒、抗氧化、抗疲劳、抗过敏等生理功能,具有良好的保健作用和药用价值，在医药和食品领域都得到了广泛的应用。据《本草纲目》中记载：“梅花开于冬而熟于夏，得木之全气，味最酸，有下气、安神、止渴止咳、止痛、止伤寒烦溃，冷热泻痢、消肿解毒之功效，可治32种疾病”。因此以青梅为原料酿制的果酒，不仅富含十余种氨基酸、维生素、矿物质元素等营养成分，还具有很高的药用和保健功能。
虽然青梅酒具有多种功效，但对其功效的研究仍然非常有限，并且如何能够有效提取青梅酒中的活性成分 ，如何对活性成分 进行检测，目前并没有相关报道。
发明内容
针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种青梅酒在降血糖方面的应用，以解决现有技术没有提取青梅酒种活性成分 的方法以及对活性成分 进行检测方法的问题。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种青梅酒在降血糖方面的应用，所述青梅酒能够用于降血糖。
本发明还提供一种青梅酒降血糖活性物质的提取方法，如本发明所述青梅酒中活性物质的提取方法，包括如下步骤：取青梅酒样品，用有机溶剂进行至少三次萃取，每次萃取后取有机相进行下次萃取，重复至少三次后加入无水硫酸钠进行干燥后减压浓缩，得到青梅酒的提取物。
本发明还提供一种青梅酒降血糖活性物质的检测方法，用于检测本发明所述方法提取的青梅酒提取物，包括如下步骤：
(1)培育脂肪细胞；
(2)用葡萄糖浓度为1800mg/L的培养基将(1)培育的脂肪细胞清洗一次后，分别加入含有不同青梅酒提取物的培养基中进行培养，对照组分别用DMSO以及胰岛素替换青梅酒提取物；其中，青梅酒提取物的浓度为40μg/mL；
(3)培育24h后吸取细胞培养基，用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法测定培养液中葡萄糖的浓度；同时在细胞剩余培养基中加入MTS，在37℃孵育2小时后，通过分光光度计对其进行检测得到492nm吸光度值，以判断化合物对脂肪细胞是否有毒性。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
通过本发明所述方法对青梅酒中的活性成分 进行提取，并对活性物质进行检测，进而发现青梅酒中活性成分 能够起到降血糖的效果。
附图说明
图1为实施例提取流程图。
图2为实施例1的GC-MS谱图图。
具体实施方式
下面将结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
一、青梅酒在降血糖方面的应用
通过研究发现，本发明所述五粮液青梅酒具有降血糖的作用。
二、青梅酒降血糖活性物质的提取方法
实施例1
取4升青梅酒，有机溶剂进行提取：石油醚萃取三次，每次有机溶剂用量为2.5升，三次萃取后的萃取液经无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到青梅酒的提取物：青梅酒-石油醚。
采用实施例1的方法，见图1，用极性由小到大的有机溶剂分别对青梅酒进行萃取，分别采用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇对青梅酒进行萃取，得到青梅酒提取物：青梅酒-二氯甲烷，青梅酒-乙酸乙酯，青梅酒-正丁醇。
三、青梅酒降血糖活性物质的检测方法
1)测试背景
胰岛素作用于外周组织(如脂肪组织、骨骼肌等)，激活其细胞内信号转导通路，进而启动葡萄糖吸收，这一系列反应在机体调节葡萄糖水平的过程中起关键作用。不同的胰岛素刺激浓度与胰岛素刺激导致脂肪组织/骨骼肌对葡萄糖的摄取量在有效范围内成线性关系。通过检测细胞对葡萄糖的摄取量多少，判断化合物的潜在降血糖活性。
2)样品准备
Figure BDA0003405260990000021
Figure BDA0003405260990000031
3)实验方法
a.细胞诱导分化：
将3T3-L1细胞诱导分化成脂肪细胞后，将细胞消化并接种到96孔板中，培养过夜。
b.细胞孵育：
用低糖培养基(葡萄糖浓度为1800mg/L)将细胞清洗一次后，分别加入含不同药物的 200μl低糖培养基。对照组分别用DMSO、小檗碱以及100nM的胰岛素(Insulin)孵育，待测样品组用40μg/ml终浓度孵育。每个样品设3个重复孔。
c.葡萄糖浓度检测：
孵育24小时后吸取10μl细胞培养基，用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法测定培养液中葡萄糖的浓度。同时在细胞剩余培养基中加20μl MTS，在37℃孵育2小时后，测492nm吸光度值，以判断化合物对脂肪细胞是否有毒性。
d.数据计算：
Figure BDA0003405260990000032
葡萄糖消耗率(％)＝[(初始葡萄糖浓度-实验孔葡萄糖浓度)/初始葡萄糖浓度]×100％。
e.初筛结果:
实施例和对比例 终浓度 葡萄糖消耗率(％)
对比例1(DMSO对照) 14.66±1.40
对比例2(insulin) 0.1μM 42.41±1.39
对比例3(小檗碱) 10μM 31.78±1.83
实施例1 40μg/ml 23.07±1.22
实施例2 40μg/ml 15.73±2.37
实施例3 40μg/ml 15.01±1.59
实施例4 40μg/ml 15.89±2.29
d.结论：
利用脂肪细胞摄取葡萄糖模型对青梅酒四种提取组分的促葡萄糖摄取活性进行检测。初筛结果显示，样品青梅酒-石油醚在40μg/ml浓度下作用24小时后，对脂肪细胞摄取葡萄糖活性有明显的促进作用，而其余样品的促葡萄糖摄取活性明显不如青梅酒-石油醚。
3、活性组分的主要化学成分分析
利用GC-MS对青梅酒-石油醚的主要化学成分进行定性和相对含量的分析。
气相色谱条件：仪器为美国Agilent Technologies公司GC-MS 6890N-5973N；色谱柱： OV1701石英毛细管柱(60m×0.25mm×0.5μm)；进样口：250℃；分流比：50：1；流速：1.0mL/min；程序升温：45℃保留1min，1℃/min升温至100℃保留10min，2℃/min升温至 220℃保留10min。
质谱条件：离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；电子能量：70.1eV；溶剂延迟5min。
见图2，质谱图利用NIST标准谱库进行检索。
结果分析：柠檬酸三乙酯(68.691％)、丁二酸二乙酯(8.590％)、DL-苹果酸二乙酯(2.514％)、松油醇(2.475％)、苯乙醇(2.506％)、2-羟基-苯丙酸乙酯(1.433％)、2- 乙基-5-丙基噻吩(1.124％)。
通过本发明所述方法对青梅酒中的活性成分 进行提取，并对活性物质进行检测，进而发现青梅酒中活性成分 能够起到降血糖的效果。
最后需要说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制技术方案，本领域的普通技术人员应当理解，那些对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (2)

1.一种青梅酒降血糖活性物质的提取方法，其特征在于，所述青梅酒是以青梅为原料酿制的果酒，取青梅酒样品，用有机溶剂进行至少三次萃取，每次萃取后取有机相进行下次萃取，重复至少三次后加入无水硫酸钠进行干燥后减压浓缩，得到青梅酒的提取物；所述有机溶剂为石油醚；每次萃取时，所述青梅酒样品和有机溶剂的体积比为1.6:1。
2.一种如权利要求1所述的青梅酒降血糖活性物质在制备降血糖药物中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
（1）培育脂肪细胞；
（2）用葡萄糖浓度为1800mg/L的培养基将（1）培育的脂肪细胞清洗一次后，分别加入含有不同青梅酒降血糖活性物质的培养基中进行培养，对照组分别用DMSO以及胰岛素替换青梅酒降血糖活性物质；其中，青梅酒降血糖活性物质的浓度为40μg/mL；
（3）培育24h后吸取细胞培养基，用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法测定培养液中葡萄糖的浓度；同时在细胞剩余培养基中加入MTS，在37℃孵育2小时后，通过分光光度计对其进行检测得到492nm吸光度值，以判断对脂肪细胞是否有毒性。
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