CN114025705A - 结缔组织体及其制造方法 - Google Patents

Abstract

根据本公开的一个方式的由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成的结缔组织体(30)在上述结缔组织体(30)的表面具备比其内侧形成得致密的致密表面层(32)。

Description

结缔组织体及其制造方法

技术领域

本发明涉及由源自生物体的组织形成的结缔组织体及其制造方法。

背景技术

作为生物体所具备的自我防卫功能，在异物侵入到生物体的皮下时，皮下所存在的成纤维细胞会聚集在周围，按照将异物包入的方式产生胶原蛋白。该现象通常被称为胶囊化反应。近年来对于使失去的组织或器官人工复苏的再生医疗进行了积极研究，对于胶囊化反应在再生医疗中的应用进行了研究。

例如，专利文献1中公开了下述方案：通过将具备彼此对置的二个组织形成面的结缔组织体形成基材配置在生物体内等，在该二面之间的组织形成空间中利用通过胶囊化反应生成的胶原蛋白等形成结缔组织体。

更详细地示出了下述方案：结缔组织体形成基材具备筒状基材、以及插入到筒状基材内部的芯材，在其间的组织形成空间中形成管状的结缔组织体。设想了管状的结缔组织体在人工血管等中进行使用。另外还示出了，通过使用具备彼此对置的2张板状基材的结缔组织形成基材，可形成膜状的结缔组织体。进一步还示出了下述方案：设想其在心脏瓣膜等中的应用，形成具有2个以上的瓣膜叶的人工瓣膜。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2016/076416号

非专利文献

非专利文献1：Journal of Biomedical Materials Research Part B2011:99B:420-430.

发明内容

发明所要解决的课题

但是，由专利文献1所公开的方法形成的结缔组织体中，表面的强度不充分，例如在非专利文献1中报道了，在用于人工血管、人工瓣膜等生物体内的组织中时，血液会渗入到结缔组织体的内部，由此具有容易形成血栓等问题。因此，需要进行在表面涂布抗血栓性物质等的处理。

另外，将所形成的结缔组织体用于与体液、消化液、排出液等体内的液体成分接触的人工食道、人工淋巴管、人工横隔膜、人工尿管、人工尿道等生物体内的组织中时，具有由于水分渗入到组织内而使组织膨胀、变得脆弱等问题。此外，厚的结缔组织体整体的强度不充分，不能起到作为人工肌腱、人工韧带等运动器官等的组织的功能。在组织体的内部内包有支架等人工结构体的情况下，具有在组织中发生偏移等组织形状不稳定等的问题。

本发明是鉴于上述问题而完成的，其课题在于提高通过胶囊化反应得到的结缔组织体的表面的强度，例如提高人工血管、人工瓣膜、以及人工食道、人工淋巴管、人工横隔膜、人工尿管、人工尿道、或者结缔组织体整体的强度，即使在用于人工肌腱、人工韧带等生物体内的组织中时，也可防止血液、体液渗入到结缔组织体的内部而形成血栓、防止膨胀。此外，其课题还在于使内包在组织体中的人工结构体稳定，即使在用于例如人工气管、支架移植物、覆膜支架等中时，也可防止内包的人工结构体在组织体的内部发生偏移。

用于解决课题的手段

本发明人进行了深入研究，结果发现，通过在结缔组织体的表面形成组织致密的致密表面层，能够解决上述课题，从而完成了以下的本发明。

[1]一种结缔组织体，其是由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成的结缔组织体，其中，

该结缔组织体具备致密表面层，该致密表面层是构成结缔组织体的任一表面的表面层的组织比该表面层以外的部分形成得致密的表面层。

[2]如上述[1]中所述的结缔组织体，其中，上述胶原蛋白包含纤维状胶原蛋白。

[3]如上述[2]中所述的结缔组织体，其中，上述纤维状胶原蛋白在上述致密表面层的表面为扁平状且为平滑的。

[4]如上述[2]或[3]中所述的结缔组织体，其中，上述纤维状胶原蛋白在上述致密表面层的表面以外的部分以交叉的方式配置成网眼状。

[5]如上述[1]～[4]中任一项所述的结缔组织体，其中，沿着厚度方向计算出的上述表面层的组织致密度相对于上述表面层以外的部分的组织致密度之比为1.1以上。

[6]如上述[1]～[5]中任一项所述的结缔组织体，其中，在内部埋入有异种部件。

[7]如上述[6]中所述的结缔组织体，其中，在上述异种部件的周围形成上述致密表面层。

[8]如上述[1]～[7]中任一项所述的结缔组织体，其中，上述结缔组织体通过胶囊化反应而形成。

[9]一种结缔组织体的制造方法，其是由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成的结缔组织体的制造方法，其中，该方法具备下述工序：

将具有组织形成面且上述组织形成面的至少一部分由高分子材料构成的结缔组织体形成基材配置在生物体内的工序；

由生物体外从生物体内的配置有上述结缔组织体形成基材的空间中经皮且经管地抽出空气的工序；

在上述组织形成面上形成结缔组织体的工序；

将形成有上述结缔组织体的结缔组织体形成基材从生物体内取出的工序；以及

由上述结缔组织体形成基材剥离上述结缔组织体的工序。

[10]一种结缔组织体，其使用具备将生物体组织材料所在的环境与用于形成结缔组织体的空间隔开的组织形成面的组织体形成基材、且该组织体形成基材具备连通上述空间与上述环境并使结缔组织侵入到上述空间中的孔，该结缔组织体是将上述组织体形成基材配置在人体以外的生物体内的上述环境中并由上述生物体外从配置有上述组织体形成基材的空间中抽出空气而形成的结缔组织体，其中，

上述组织形成面由高分子材料或金属材料构成；

上述结缔组织体由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成，被用于生物体内的组织中；

上述结缔组织体中，构成与上述组织形成面相接的表面的表面层整体为组织比该表面层以外的部分形成得致密的致密表面层，

上述致密表面层中，沿着厚度方向计算出的上述表面层的组织致密度相对于上述表面层以外的部分的组织致密度之比为1.1以上。

[11]一种结缔组织体的制造方法，其是由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成、被用于生物体内的组织中的结缔组织体的制造方法，该方法具备下述工序：

将具有组织形成面且上述组织形成面的至少一部分由高分子材料构成的结缔组织体形成基材配置在人体以外的生物体内的工序；

由上述生物体外从上述生物体内的配置有上述结缔组织体形成基材的空间中经皮且经管地抽出空气的工序；

在上述组织形成面上形成结缔组织体的工序；

将形成有上述结缔组织体的结缔组织体形成基材从上述生物体内取出的工序；以及

由上述结缔组织体形成基材剥离上述结缔组织体的工序。

[12]如[11]中所述的结缔组织体的制造方法，其中，上述结缔组织体通过胶囊化反应形成。

[13]一种结缔组织体，其是再生医疗用的结缔组织体，其具备：

具备源自生物体的第1纤维状胶原蛋白的表面层；以及

具备源自生物体的第2纤维状胶原蛋白的非表面层部分，

上述表面层的上述第1纤维状胶原蛋白具有第1微观结构和第1致密度，

上述非表面层部分的上述第2纤维状胶原蛋白具有与上述第1微观结构不同的第2微观结构、以及比上述第1致密度小的第2致密度，

上述表面层和上述非表面层部分形成由于上述第1纤维状胶原蛋白的上述第1致密度与上述第2纤维状胶原蛋白的上述第2致密度的差异、以及上述第1纤维状胶原蛋白的上述第1微观结构与上述第2纤维状胶原蛋白的上述第2微观结构的差异所致的壁背离结构。

[14]如[13]中所述的结缔组织体，其中，上述表面层和上述非表面层部分形成仅由于上述第1致密度与上述第2致密度的差异、以及上述第1微观结构与上述第2微观结构的差异所致的层边界。

[15]如[13]中所述的结缔组织体，其中，

上述第1微观结构和上述第1致密度对上述表面层赋予第1血液不易渗入性，

上述第2微观结构和上述第2致密度对上述非表面层部分赋予第2血液不易渗入性，

上述表面层的上述第1血液不易渗入性比上述非表面层部分的上述第2血液不易渗入性高。

发明的效果

根据本发明，提供一种结缔组织体，其强度得到提高，即使用于例如人工血管、人工瓣膜等生物体内的组织中，也能够防止血液渗入到内部而形成血栓。

另外，在人工结构体等异种部件内包在结缔组织体中的情况下，能够使异种部件稳定，防止其在内部发生偏移。

附图说明

图1示出表示结缔组织体的一个实施方式的示意性截面图。

图2示出表示结缔组织体的一个实施方式的示意性截面图。

图3示出表示结缔组织体的一个实施方式的示意性截面图。

图4示出表示结缔组织体的一个实施方式的示意性截面图。

图5示出表示结缔组织体的一个实施方式的示意性截面图。

图6示出表示结缔组织体形成基材的一个实施方式的立体图。

图7示出表示结缔组织体形成基材的一个实施方式的立体图。

图8示出表示结缔组织体形成基材的一个实施方式的立体图。

图9示出表示芯材的一个实施方式的立体图。

图10示出表示结缔组织体形成基材的一个实施方式的立体图。

图11示出表示结缔组织体形成基材的一个实施方式的立体图。

图12示出表示结缔组织体形成基材的一个实施方式的立体图。

图13为表示将结缔组织体形成基材配置在生物体内的工序的一个实施方式的立体图。

图14示出表示结缔组织体的一个实施方式的立体图。

图15为将实施例1的结缔组织体的截面放大拍摄的照片。

图16为将实施例1的结缔组织体的截面染色后放大拍摄的照片。

图17为将实施例1的结缔组织体的截面染色后拍摄的照片，是将结缔组织体的内周面附近的部分放大的照片。

图18是将实施例1的结缔组织体的截面染色后拍摄的照片，是将结缔组织体的厚度方向的中央部分放大的照片。

图19是将实施例1的构成致密表面层的表面的结缔组织体的内周面放大拍摄的照片。

图20是将实施例1的结缔组织体的致密表面层的内部放大拍摄的照片。

图21是将实施例1的结缔组织体的致密表面层以外的部分放大拍摄的照片。

图22示出实施例1的归一化处理后的亮度分布数据。

图23示出实施例1中的浸渍在狗的全血中时的结缔组织体。

图24为示出实施例1具有壁背离结构的照片。

图25为对比较例1的结缔组织体的截面染色后放大拍摄的照片。

图26示出比较例1中的结缔组织体。

图27示出比较例1中的浸渍在狗的全血中时的结缔组织体。

具体实施方式

[结缔组织体]

本发明的结缔组织体由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成。本发明的结缔组织体通常通过胶囊化反应形成。胶囊化反应是通过将异物(后述的结缔组织体形成基材)配置在生物体的皮下等生物体组织材料所在的环境下而使成纤维细胞等生物体组织材料聚集在异物的周围并产生胶原蛋白以包入异物的反应。

结缔组织体含有由胶囊化反应产生的胶原蛋白作为主成分。另外，结缔组织体也可以包含成纤维细胞等其他生物体组织材料。此外，在结缔组织体中，胶原蛋白的一部分或全部构成纤维状胶原蛋白。

需要说明的是，本说明书中的“生物体组织材料”是对于形成所期望的源自生物体的组织所必需的物质，例如可以举出成纤维细胞、平滑肌细胞、内皮细胞、干细胞、ES细胞、iPS细胞等动物细胞、各种蛋白质类(胶原蛋白、弹性蛋白)、透明质酸等糖类以及细胞生长因子、细胞因子等生物体内所存在的各种生理活性物质。该“生物体组织材料”包括源自人、狗、牛、猪、山羊、绵羊等哺乳类动物、鸟类、鱼类、其它动物的材料、或者与此等同的人工材料。生物体组织材料优选源自它们之中的哺乳类动物。另外，“源自生物体的组织”是指由上述生物体组织材料形成的组织。

本发明的结缔组织体中，构成结缔组织体的任一表面的表面层具备组织比该表面层以外的部分形成得致密的致密表面层。组织致密是指结缔组织体中的胶原蛋白致密。比表面层以外的部分致密的致密表面层设置在结缔组织体的表面的至少一部分即可。由致密表面层构成的结缔组织体的表面(例如在后述的管状结构中为内周面)具有高强度。并且成为致密性高、平滑且具有高强度的面，由此使血液不容易渗入、不容易形成血栓。此外，所得到的结缔组织体中也不存在血液凝固块等。

需要说明的是，术语“表面层”并不限于构成结缔组织体的外侧的表面(外表面)的层，即使为结缔组织体的内部，构成与在结缔组织体的内部存在的异种部件等其他部件的交界面的层也包括在内。另外，在内部具有空洞的情况下，与该空洞的交界面也被包括在表面层中。

即，如下文所述，在异种部件被埋入内部的情况下，在与异种部件的交界面处可以具有致密表面层。此外，在内部具有中空部的情况下，在与该中空部的交界面(例如在管状结构中为内周面)处可以具有致密表面层。

本发明的结缔组织体优选沿着其厚度方向具有致密表面层、以及比致密表面层稀疏的表面层以外的部分。通过具有与致密表面层相比为稀疏的部分，厚度增加，容易进行处理，进而能够提高柔软性以使其容易追从组织整体的弯曲等。另外，本发明的结缔组织体还优选沿着厚度方向在两表面具有致密表面层，在这2个致密表面层之间具有比致密表面层稀疏的部分。需要说明的是，关于厚度方向，例如在管状结构中是指与其径向一致的方向。需要说明的是，形成有致密表面层的两表面均可以为结缔组织体的外表面，也均可以为与空洞和异种材料中的任一者的交界面，还可以一个表面为外表面、另一表面为上述交界面。

结缔组织体的表面层是否为致密表面层可以如下进行确认：将结缔组织体切片成厚度较薄的切片状，进行马森三色染色，对于该染色后的结缔组织体以一定的照度照射照明，通过所得到的图像中的亮度值来进行确认。

结缔组织体进行马森三色染色时，胶原蛋白被染色成蓝色，组织致密的部分染色深。因此，在以一定照度的照明照射后的切片状的结缔组织体中，组织致密的部分的亮度值相对低于其他区域，可将亮度值相对较低的区域识别为致密性高的部分。

即，将本发明的结缔组织体进行马森三色染色并摄影时，该摄影图像中，致密性高的表面层的亮度值比表面层以外的其他部分低，因此，由此可确认具有致密表面层。

本发明中，也可以利用在马森三色染色图像中致密组织的亮度值降低的情况来计算出结缔组织体的表面层的致密度。

此处，通过马森三色染色图像求出的致密度可以由表示组织本身(即胶原蛋白)的致密度的组织致密度来进行定义。结缔组织体中，通常在以较薄的厚度进行切片并对其截面进行观察时，可见到毛细血管结构、空隙(即不存在组织的部分)，组织致密度是通过图像处理而进行除去这样的空隙部分的处理后计算出的致密度。

本发明中，可以将结缔组织体沿厚度方向以厚度较薄的切片状进行切片，进行马森三色染色，对所得到的切断截面进行观察，计算出表面层的组织致密度。具体地说，可以沿着结缔组织体的厚度方向计算出表面层的组织致密度相对于表面层以外的部分的组织致密度之比(下文中也称为“组织致密度比”)，由此也可求出结缔组织体的表面层的致密度。

此处，本发明的表面层的致密度高于该表面层以外的部分。因此，表面层的组织致密度比大于1即可，优选为1.1以上、更优选为1.2以上。组织致密度比的上限没有特别限定，例如为3、现实来说为2.5。

本发明中，组织致密度比为1.1以上时，表面层中的胶原蛋白、特别是纤维状胶原蛋白致密地存在，因此强度提高。因此在生物体内可有益地使用。另外，血液不容易渗入，由此不容易形成血栓。

需要说明的是，本发明中，可以两表面的表面层的组织致密度比为上述范围内，但也可以一个表面的表面层的组织致密度比为上述范围内。

本发明的致密表面层中，如上所述，组织致密度高于其他部分，由此具有壁背离结构。需要说明的是，壁背离结构是指例如在利用镊子夹住并剥离致密表面层的端部时，可以与致密表面层以外的部分以层状进行剥离的结构。

关于致密表面层，与除此以外的部分相比，浸渍在水中时的含水率降低。具体地说，设通过剥离而分离的致密表面层和此外的层的重量均为B(g)、设在25℃下分别进行了12小时真空干燥的致密表面层或此外的部分的重量为A(g)时，由(B-A)/A×100表示的致密表面层的含水率优选小于60％、进一步优选小于55％。另一方面，对于此外的部分同样地测定出的含水率优选为60％以上、进一步优选为70％以上。由含水率低这一点也可明确，致密表面层的组织致密，因此能够防止血液的渗入，不容易产生血栓形成等不良状况。关于含水率，可以求出致密表面层以及此外的部分各自的任意多处(例如10点)的含水率，计算出平均值。

如上所述，本发明的结缔组织体具有纤维状胶原蛋白，纤维状胶原蛋白在由上述致密表面层构成的表面(例如管状结构的内周面)中优选为扁平状且为平滑的。致密表面层中，其表面平滑地配置有扁平状的纤维状胶原蛋白，并且组织致密，由此可推定，血液不容易渗入到结缔组织体中。

另一方面，关于纤维状胶原蛋白，在结缔组织体的由致密表面层构成的表面(例如管状结构的内周面)以外的部分，纤维状胶原蛋白在致密表面层以及致密表面层以外的稀疏部分者两方以交叉的方式配置成网眼状。更具体地说，优选纤维状胶原蛋白的束沿单方向取向而形成层，并且纤维状胶原蛋白的束按照与该层的胶原蛋白的束交叉的方式沿着另一单方向取向而形成另一层，这些层被层积成网眼状而形成层积结构。另外，该层积结构优选为多层层叠。

另外，关于结缔组织体的由致密表面层构成的表面(例如管状结构的内周面)以外的部分的纤维状胶原蛋白的束，可以具有在致密表面层更粗、在致密表面层以外的部分比致密表面层更细的结构。

本发明的结缔组织体中，通过与人胶原蛋白同样地具有网眼状结构，容易适用于对人体所失去的组织或器官进行人工复苏的再生医疗中。

此处，关于纤维状胶原蛋白的束沿单方向进行取向，只要纤维状胶原蛋白按照沿大致单方向流动的方式进行排列即可，不必全部纤维状胶原蛋白严格地相互平行。

本发明的结缔组织体可以为任何形状，例如可以为管状，也可以为片状、棒状、球状等。结缔组织体为管状的情况下，例如可用于人工血管中。另外，为片状的情况下，可以用作人工心膜、硬膜、皮肤、瓣膜、角膜、横隔膜、腹壁等膜状组织体，或者可以用作血管、食道、气管、消化道、淋巴管、尿道、尿管、膀胱等管状或袋状组织体的填补修复材料。此外，在为棒状的情况下，可以作为肌腱、韧带等筋状组织体使用。

另外，结缔组织体除了为管状、片状以外，还可以与各器官相应地成型为任何形状，例如可以成型为与人工瓣膜相对应的形状。人工瓣膜通常具有管部和从管部沿径向朝内向膨出的多个瓣膜叶。

结缔组织体具有管部(管状结构)的情况下，在其两表面(即外周面和内周面)中的至少任一者形成致密表面层即可。其中，如图1、2所示，具有管状结构的结缔组织体30优选至少在其内周面30B形成致密表面层32。另外还优选如图2所示在内周面30B和外周面30A这两方形成致密表面层32的方式。

此外，如图1、2所示，具有环状结构的结缔组织体30优选在其内部设有1个中空部35，也可以如图3所示设有多个中空部35。在设有多个中空部35的情况下，如图3所示，优选在构成该中空部35的外周的管部的内周面30B也形成致密表面层32，还优选在内周面30B和外周面30A这两方形成致密表面层32的方式。通过将强度高的圆筒状的组织埋入到柔软的组织的内部，可在例如肌腱、韧带等棒状移植体中使用。

另外，如图4所示，也可以在结缔组织体30的内部埋入金属、高分子等异种部件37。在埋入异种部件37的情况下，如图4所示，优选在构成该中空部35的外周的管部的内周面30B也形成致密表面层32，还优选如图5所示在内周面30B和外周面30A这两方均形成致密表面层32的方式。如图4、图5所示，在埋有异种部件37的结缔组织体30中，优选异种部件37的周围的表面层也以致密表面层32的形式形成。通过使形成与异种部件37的边界的周围部分成为致密表面层32，异种部件37在柔软的组织内部在保持一定程度的可动性的同时牢固地固定在组织内。因此，能够使异种部件37稳定化，防止其在内部发生偏移。

作为异种部件37，优选使用支架。埋有支架的结缔组织体30可用于管状移植体中，能够在整体组织不破损的情况下追从大幅的变形，能够发生收缩、扩张。

作为异种部件37，除了能够扩张变形的支架以外，还可以举出直线状、环状、螺旋状的结构体等。

另外，作为异种部件37，可以使用具有生物相容性的金属、高分子材料、或者源自生物体的材料等。作为金属，可以举出不锈钢、钛、钴铬合金、镍钛合金、镁合金等。这些金属可适当地用于例如支架中。作为高分子材料，可以举出尼龙树脂、PEEK树脂、有机硅树脂、丙烯酸类树脂、氟树脂、氨基甲酸酯树脂、乙烯树脂、苯乙烯树脂、丙烯树脂等树脂。这些高分子材料可以涂布在金属表面。另外，作为源自生物体的材料，可以举出羟基磷灰石等无机材料；软骨等主要由细胞成分形成的有机材料等。

如上所述，将具有管状结构的结缔组织体用于人工血管、人工瓣膜中的情况下，血液流经其内侧，若在内周面形成致密表面层，则流经其内侧的血液不容易通过致密表面层而渗入到结缔组织体中，在人工血管、人工瓣膜等中不容易形成血栓。

另外，结缔组织体为片状的情况下，可以在该片状结缔组织体的一个表面形成致密表面层，也可以在两表面形成致密表面层。

[结缔组织体的制造方法]

本发明的结缔组织体可以使用结缔组织体形成基材利用胶囊化反应来制造。具体地说，可以在生物体的皮下通过具备下述工序的制造方法来制造。

工序1：将具有组织形成面且组织形成面的至少一部分由高分子材料构成的结缔组织体形成基材配置在生物体内的工序

工序2：由生物体外从生物体内的配置有结缔组织体形成基材的空间中经皮且经管地抽出空气的工序

工序3：在组织形成面上形成结缔组织体的工序

工序4：将形成有结缔组织体的结缔组织体形成基材从生物体内取出的工序

工序5：由结缔组织体形成基材剥离结缔组织体的工序

(结缔组织体形成基材)

首先对上述制造方法中使用的结缔组织体形成基材进行说明。

结缔组织体形成基材在其表面具有用于形成结缔组织体的组织形成面。组织形成面优选按照分隔出与结缔组织体的形状相应的空间(组织形成空间)的方式构成。例如，结缔组织体形成基材可以至少具有彼此对置的一对组织形成面，在该一对组织形成面之间的组织形成空间中通过胶囊化反应形成结缔组织体。

结缔组织体形成基材由下述材料构成即可，该材料具有在生物体内等生物体组织材料的存在环境下不会发生大幅变形的强度，具有化学稳定性，对于灭菌等负荷具有耐性，并且没有刺激生物体的溶出物或该溶出物少。

结缔组织体形成基材具体地说由高分子材料、金属材料等构成。作为高分子材料的优选具体例，可以举出尼龙树脂、PEEK树脂、有机硅树脂、丙烯酸类树脂、氟树脂、氨基甲酸酯树脂、乙烯树脂、苯乙烯树脂、丙烯树脂等作为体内留置型医疗器械的部件使用的材料。作为金属材料的优选具体例，可以举出不锈钢、钛、钴铬合金、镍钛合金、镁合金等作为体内留置型医疗器械的部件使用的材料。

另外，组织形成面的至少一部分由树脂等高分子材料、优选尼龙树脂、PEEK树脂、有机硅树脂、丙烯酸类树脂、氟树脂、氨基甲酸酯树脂、乙烯树脂、苯乙烯树脂、丙烯树脂等作为体内接触型医疗器械的部件使用的材料构成。这些树脂中，生物体组织材料容易致密地聚集在其表面、容易形成致密表面层。因此，结缔组织体形成基材具有彼此对置的一对组织形成面的情况下，优选一个组织形成面由树脂等高分子材料构成，更优选由尼龙树脂、PEEK树脂、有机硅树脂、丙烯酸类树脂、氟树脂、氨基甲酸酯树脂、乙烯树脂、苯乙烯树脂、丙烯树脂等作为体内留置型医疗器械的部件使用的材料构成。另外，优选另一组织形成面由金属材料构成。

组织形成面由上述高分子材料或金属材料构成的情况下，可以使具有组织形成面的部件整体由高分子材料或金属材料构成，也可以仅使组织形成面由高分子材料或金属材料构成。例如，可以通过在金属部件的表面形成高分子材料的覆膜，由此使组织形成面由高分子材料构成。

结缔组织体形成基材的形状根据所制作的结缔组织体进行设计即可，例如在制造管状的结缔组织体的情况下，如图6所示，结缔组织体形成基材10可以使用具备由筒体构成的盖部件11、以及插入到盖部件11的内部的芯材12的材料。

图6所示的结缔组织体形成基材10中，盖部件11的内周面构成一个组织形成面11A，芯材12的外周面构成另一组织形成面12A。在组织形成面11A,12A二者之间形成组织形成空间13。在盖部件11设有连通组织形成空间13与基材外部的孔17。通常在盖部件11设有多个孔17。

在盖部件11的两端面设有分别堵塞组织形成空间13的两端部的盖体14、15。盖体14、15为圆环状，并且在外周设有卡止部14A、15A。卡止部14A、15A在各盖体14,15设置多个。各卡止部14A具有盖部件11的端部所嵌入的槽14C。在各卡止部15A也同样地设有槽(未图示)。盖体14、15中，芯材12的端部嵌入到环状内部，并且盖部件11的端部嵌入到卡止部14A、15A的槽中，由此将盖部件11与芯材12连结并进行固定。

孔17没有特别限定，例如可以为圆、椭圆，也可以为狭缝。孔17为圆或椭圆的情况下，从能够使结缔组织和生物体组织材料容易侵入的方面出发，圆或椭圆的孔径可以被设定为1mm以上，并且可以被设定为10mm以下。

如图6所示，孔17优选为狭缝。通过使孔17为狭缝，孔17不会被结缔组织堵塞而能够使结缔组织容易地侵入到组织形成空间13中。狭缝可以具有能够使结缔组织和生物体组织材料容易地侵入的1mm以上的狭缝宽度，可以具有例如10mm以下的狭缝宽度。另外，狭缝中，通常切口长度优选大于狭缝宽度的2倍，优选小于5倍、更优选小于3倍。

另外，狭缝相对于盖部件11的组织形成面11A的面积比可以被设定为2/3以下。通过减小狭缝的面积比，容易使组织形成面11A上形成的结缔组织体表面的表面状态良好。另外，为了能够使结缔组织和生物体组织材料藉由狭缝侵入到组织形成空间13中，狭缝相对于盖部件11的组织形成面11A的面积比优选为1/10以上。另外，在孔为圆或椭圆等狭缝以外的情况下，也同样地优选孔相对于盖部件11的组织形成面11A的面积比为1/10以上，并且优选为2/3以下。

另外，狭缝可以如图6所示按照其长度方向与基材中心轴平行的方式进行配置，也可以按照其长度方向相对于基材中心轴倾斜的方式进行配置。另外，狭缝可以沿周方向和长度方向分别排列多个。

芯材12的外周面优选由上述树脂等高分子材料、特别是尼龙树脂、PEEK树脂、有机硅树脂、丙烯酸类树脂构成。由此，本发明中，容易在管状的结缔组织体的内周面形成致密表面层。芯材12例如具备中心材12B、以及覆盖中心材12B的外周面的盖管12C，盖管12C可以由上述高分子材料构成。

另一方面，盖部件11由金属材料构成，优选其组织形成面11A(即内周面)由金属材料构成。与上述高分子材料相比，金属材料的表面不容易聚集生物体组织材料，由此可防止盖部件11的孔17在早期被生物体组织材料堵塞。因此，可使生物体组织材料长期聚集在组织形成空间13中。但是，盖部件11也可以由上述高分子材料形成。通过由高分子材料形成，能够如上述的图2所示在管状的结缔组织体的外周面和内周面这两方形成致密表面层。

结缔组织体形成基材并不限于直线的形状，可以具有各种形状，也可以具有曲线的形状，例如如图7、8所示，可以为具有卷成螺旋状的2重以上的环状的结缔组织体形成基材40。

结缔组织体形成基材40中，如图7或图8所示，具备盖部件41。盖部件41具有卷成螺旋状的2重以上的环状。盖部件41例如由上下分割的上侧部件41A和下侧部件41B构成，它们对接而形成管状结构。上侧部件41A和下侧部件41B分别设有连结部件43A,43B，通过该连结部件43A,43B连结而进行相互固定。在盖部件40设有多个孔47，孔47可以沿周向和长度方向排列多个。孔47可以如图7所示为矩形，也可以如图8所示为圆形的孔，还可以为其他形状的孔。

在盖部件40的内部配置有芯材42(参照图9)。如图9所示，芯材42与盖部件41的形状相应地具有卷成螺旋状的2重以上的环状。芯材41的两端42E,42E的宽度和高度比其他部分更大，例如具有球状。通过具有这样的形状，可以通过例如在盖部件41的两端设置凹部而使两端42E,42E嵌合在凹部中，使芯材42相对于盖部件41固定。但是，芯材42的两端并不限于这样的构成。

在结缔组织体形成基材40中，在盖部件41的内周面与芯材42的外周面之间形成有组织形成空间。盖部件41的内周面与芯材42的外周面的材质如上所述。

在使用图7～9所示的结缔组织体形成基材40的情况下，也如上所述在组织形成空间中形成结缔组织体。通过使结缔组织体形成基材40具有2重以上的环状，能够使结缔组织体形成长的管状结构，因此可适于形成例如人工血管用的结缔组织体。

此外，芯材不是必须为1个，也可以设有2个以上。设有2个以上的芯材的结缔组织体形成基材50的具体例如图10所示。结缔组织体形成基材50具备由筒体构成的盖部件51、以及插入到盖部件51的内部的多个芯材52，多个芯材52可以被安装于盖体54、55。另外，如上述所说明，在盖体54、55设有多个卡止部54A、55A，例如通过使盖部件51的端部嵌入到卡止部54A、55A的槽中，使盖部件51与芯材52连结并进行固定。

在设有多个芯材52的情况下，各芯材52为棒状，其粗度例如为0.2～3mm、优选为0.5～2.5mm。另外，在盖部件51的内部空间中，芯材52所占有的最大截面积例如为20～60％左右。需要说明的是，最大截面积是指相对于结缔组织体形成基材40的轴垂直的截面上的构成最大面积的部分的截面积。

在图10中，在盖部件设有多个圆形的孔57，孔57的构成并无限定，可以为如上述所说明的任何孔，也可以为狭缝等。另外，图10中，圆形的孔57呈交错状配置，但配置并无限定，可以为任何排列。

另外，在结缔组织体的内部埋设异种部件的情况下，将异种部件配置在组织形成空间中即可。例如，如图11所示，在具有芯材12和盖部件11的结缔组织形成基材中，将异种部件37配置在芯材12与盖部件11之间的组织形成空间13中即可。但是，异种部件37也可以不与芯材12和盖部件11密合。通过使其不与芯材12和盖部件11密合，源自生物体的组织会进入到异种部件37与芯材12或盖部件11之间，如图5所示，在结缔组织体30中，容易在内周面30B以及外周面30A的整体形成致密表面层32。另外，异种部件37也可以是形成结缔组织体形成基材的一部分，其表面为组织形成面。

另外，在形成管状的结缔组织体的情况下，结缔组织体形成基材不是必须具备盖部件和芯材，例如可省略盖部件。省略了盖部件的结缔组织体形成基材60的一例如图12所示。即使省略盖部件，芯材62的表面也成为组织形成面，在该芯材62表面上通过胶囊化反应形成结缔组织体。另外，在省略了盖部件的结缔组织体形成基材60中，也可以如图12所示在芯材62的外周面上配置异种部件37，异种部件37优选如上所述不与芯材62的外周面密合。如图12所示，在将异种部件37配置在组织形成空间13中、不设置盖部件的情况下，例如得到图4所示的结缔组织体30。

图11、12示出了异种部件37为支架的示例。支架可以通过例如扩径而被安装在芯材62的外周面。异种部件37当然并不限于支架，也可以使用其他材料。

在制作片状的结缔组织体的情况下，结缔组织体形成基材使用具备彼此对置的2张板状部件的基材即可。这种情况下，2张板状部件的彼此对置的面为组织形成面，使生物体组织材料聚集在一对组织形成面之间的组织形成空间中来形成结缔组织体即可。

此时，优选一对组织形成面中的任一者由树脂等高分子材料、特别是尼龙树脂、PEEK树脂、有机硅树脂或丙烯酸类树脂构成。通过由这些高分子材料构成，容易在该组织形成面上形成致密表面层。另外，在2张板状部件的任一者形成狭缝等孔即可。此外，优选一个板状部件的组织形成面由上述高分子材料构成，并且在另一板状部件形成孔，更优选形成有孔的板状部件中，由金属材料构成组织形成面。

此外，例如在制作人工瓣膜等的情况下，结缔组织体形成基材具备芯材、以及芯材被插入在内部的盖部件，将芯材的外周面和盖部件的内周面作为组织形成面，在该一对组织形成面之间分隔出组织形成空间即可。组织形成空间按照构成与人工瓣膜或者人工瓣膜前体(其可通过适当地加工而成为人工瓣膜)相应的形状的方式进行分隔即可。例如，组织形成空间根据包含管部和从管部沿径向朝内向膨出的多个瓣膜叶的人工瓣膜或人工瓣膜前体的形状进行分隔即可。

此时，也优选芯材的外周面由树脂等高分子材料、特别是尼龙树脂、PEEK树脂、有机硅树脂、丙烯酸类树脂构成。由此，容易在人工瓣膜的内周面形成致密表面层。另外，在盖部件可以设有狭缝等孔，其内周面优选由金属材料构成。

接着对上述结缔组织体的制造方法的各工序进行说明。

(工序1)

在工序1中，将结缔组织体形成基材配置在生物体内。作为生物体，可以举出人或狗、牛、猪、山羊、兔、绵羊等人以外的其他哺乳类动物、鸟类、鱼类、其他动物。这些之中，优选哺乳类动物。配置结缔组织体形成基材的生物体内例如为皮下或腹腔内等。

作为将结缔组织体形成基材配置在生物体内的方法，可以进行最小限度的切开术，在生物体表面形成插入口，将结缔组织体形成基材由该插入口埋入到动物内。埋入后缝合伤口。作为结缔组织体形成基材的埋入部位，例如优选具有可接纳结缔组织体形成基材的容积的腹腔内、或者四肢部、肩部或背部、腹部等的皮下。具体地说，在皮下的情况下，可以埋入在真皮层的下侧与脂肪层或肌肉层的上侧之间，更具体地说，配置在对于生物体内的真皮层的下侧与脂肪层或肌肉层的上侧之间充分实施止血而制作的皮下囊袋内。

另外，埋入优选通过微创方法进行，并且在充分麻醉下以最小限度的切开术来进行。出血优选被抑制在最小限度，在产生出血的情况下，需要充分进行止血。皮下囊袋优选确保比所配置的结缔组织体形成基材更大的空间。通过形成比基材更大的皮下剥离面，生物体反应更受到刺激，产生与剥离面的修复治愈的协同作业，促进基材内部的组织形成。

具体地说，首先在生物体的表面形成插入口，由该插入口将生物体内进行剥离，在皮下制作囊袋。通过由插入口插入生物体内组织形成基材，将结缔组织形成基材配置在生物体内。插入口通过缝合等而被闭合。

另外，在使用导向棒时，能够更简便地在抑制皮下出血的同时将结缔组织形成基材配置在生物体内。如图13所示，首先在生物体的表面形成插入口18，由该插入口18将前端形成为凸曲面状的导向棒19的前端部分插入到生物体内(图13的(a)状态)。接着，使导向棒19的外侧滑动，由插入口18将插入管20插入到生物体内(图13的(b)状态、(c)状态)。将插入管20插入后，可以拔出导向棒19。其后将结缔组织体形成基材10插入到插入管20的内部(图13的(d)状态)，用推入棒21推入后(图13的(e)状态)，由插入口18拔出插入管20，由此将结缔组织体形成基材10配置在生物体内。拔出插入管20后，将插入口18通过缝合等进行闭合(图13的(f)状态)。这种情况下，也优选皮下囊袋确保比基材更大的空间。通过使导向棒具有比基材的外径更大的外径，可形成宽广的剥离面，生物体反应更受到刺激，产生与剥离面的修复治愈的协同作业，促进基材内部的组织形成，特别是在基材接触面形成致密胶原蛋白层。

(工序2)

工序1结束后，接着从生物体内的配置有结缔组织体形成基材10的空间22中抽出空气。关于空气的抽出方法，只要由生物体外经皮且经管地抽出就没有特别限定，例如可以从生物体外将注射器的前端插入到空间22，由此抽出空气。真空度优选为0.1至0.5atm的范围。即使简单地从皮肤上进行按压，基材也与皮下组织密合而使皮肤的细胞接近基材表面，但通过使基材的内部进一步构成真空，皮肤的细胞被吸引到基材的内部，促进基材内部的组织形成，特别是在基材接触面形成致密胶原蛋白层。

(工序3)

在工序2中，在抽出空气后，在将结缔组织体形成基材10配置在生物体内的状态下放置规定期间。放置的期间根据生物体的种类而不同，若组织形成20天以上，则可长期放置，所形成的组织的形状几乎无变化。例如为20～90天、优选为30～60天。通过放置规定期间，在结缔组织体形成基材10的组织形成空间中形成结缔组织体。

本制造方法中，通过在工序2中抽出空间22的空气，生物体内的组织与结缔组织体形成基材10的外周面密合。因此，结缔组织和生物体组织材料容易聚集在组织形成空间中，并且由于组织形成面的至少一部分由高分子材料构成，因此结缔组织和生物体组织材料致密地聚集在由该高分子材料构成的组织形成面上。因此，本制造方法中，在由高分子材料构成的组织形成面上形成上述的致密表面层。

另外，在由高分子材料构成的组织形成面上所形成的结缔组织体的最外表面容易平滑地配置扁平状胶原蛋白。此外，在该致密表面层的最外表面以外的部分及其更内侧，结缔组织适度地聚集，纤维状胶原蛋白容易以交叉的方式配置成网眼状，容易形成上述层积结构重叠而成的结构。

(工序4)

在工序4中，将在工序3中形成了结缔组织体的结缔组织体形成基材从生物体中取出。具体地说，可以在生物体表面中的埋入在生物体内的结缔组织体形成基材所在的部位形成取出口，经该取出口取出结缔组织体形成基材。

例如，在结缔组织体形成基材具有由未图示的螺纹部(例如外螺纹)形成的被安装部的情况下，可以将被安装部拧扣在设于基材取出具的前端的螺纹部(例如内螺纹)，由此将结缔组织体形成基材安装于基材取出具的前端，将结缔组织体形成基材从生物体内取出。

或者可以将结缔组织体形成基材的端部利用钳子等夹持固定，由此将结缔组织体形成基材从生物体内取出。

(工序5)

其后，在必要时，在将结缔组织体形成基材破坏后，将在组织形成空间中形成的结缔组织体从组织形成面剥离并取出，由此得到结缔组织体。此处，在结缔组织体形成基材如图6所示具备设有由狭缝形成的孔17的盖部件11、以及芯材12的情况下，结缔组织体如图14所示成为管状的结缔组织体30。另外，在结缔组织体30的外周面30A与狭缝相对应地设置多个突条31，并且在结缔组织体30的内周面30B形成致密表面层。

另外，在将所得到的结缔组织体进行异种移植的情况下，为了防止移植后的排异反应，优选实施脱细胞处理、脱水处理、固定处理等免疫源除去处理。

需要说明的是，上述说明的制造方法并不限于作为一例的上述方法。例如，尽管参照附图对于将结缔组织体形成基材配置在生物体内的方法进行了具体说明，但该方法并不限于该具体例。

另外，上文示出了在生物体内制造结缔组织体的方法，但结缔组织体并不限于在生物体内进行制造的方法。例如也可以在与生物体内相同或近似的环境下制造结缔组织体。

这种情况下，将结缔组织体形成基材适宜地配置在生物体组织材料所在的环境下，与上述同样地在组织形成空间形成结缔组织体即可。其中，分隔出组织形成空间的组织形成面的一部分由高分子材料构成。可以使生物体组织等与结缔组织体形成基材的外周面密合，可容易在由高分子材料构成的组织形成面上形成致密表面层。

[实施例]

通过实施例更详细地说明本发明，但本发明并不受这些示例的任何限定。需要说明的是，在以下的说明中，只要不特别声明，“％”是指“质量％”。

下面对表面层的致密度的测定方法进行具体说明。

[致密度的测定]

(切片制作)

将各实施例、比较例中得到的结缔组织体通过以下的1)～7)的步骤制作石蜡包埋块。

1)将结缔组织体在4％多聚甲醛-磷酸缓冲液中浸渍24小时。

2)取出结缔组织体，浸渍在70％乙醇中。

3)将结缔组织体在99.5％乙醇中浸渍30分钟后取出，将该操作进行5次。

4)将结缔组织体在100％乙醇中浸渍30分钟。

5)将结缔组织体在二甲苯中浸渍30分钟后取出，将该操作进行2次。

6)将结缔组织体在60℃在溶解的石蜡中浸渍30分钟后取出，将该操作进行4次。

7)向包埋用的模具中加入块，使石蜡流入，进行固化，由此制作块。

将石蜡包埋块以厚度3μm进行切割，制作切片。将结缔组织体沿厚度方向进行切割。接着进行切片的脱石蜡处理。脱石蜡处理中，以二甲苯中2次、100％乙醇中2次、70％乙醇中1次、蒸馏水中1次的顺序，将切片分别各浸渍10分钟来进行。

(马森三色染色)

接着，通过下述1)～21)的步骤进行马森三色染色处理。

1)将切片在媒染液(武藤化学株式会社制造、编号“40061”)中浸渍30分钟。

2)将切片从媒染剂中取出，用流水清洗。

3)将切片在铁苏木素溶液(Weigert铁苏木素液1(武藤化学株式会社制造、编号“40341”)与Weigert铁苏木素溶液2(武藤化学株式会社制造、编号“40351”))的等量混合溶液中浸渍10分钟。

4)将切片从混合溶液中取出，用流水清洗。

5)将切片在1％盐酸醇中以数秒的程度上下振荡5次左右来进行清洗。需要说明的是，1％盐酸醇是将盐酸用70％乙醇稀释使其达到1％的浓度的溶液。

6)为了显色，将切片用流水清洗10分钟。

7)在第二媒染剂(武藤化学株式会社制造、编号“81411”)中浸渍30秒。

8)将切片从第二媒染剂中取出，用流水清洗1分钟。

9)在1％乙酸水中以数秒的程度上下振荡5次左右。

10)在0.75％橙黄G(武藤化学株式会社制造、编号“40231”)中浸渍1分钟。

11)将切片从橙黄G中取出，在1％乙酸水中以数秒程度上下振荡5次左右，进行清洗。

12)在马森染色液B(武藤化学株式会社制造、编号“40251”)中浸渍20分钟。

13)在1％乙酸水中以数秒程度上下振荡5次左右，进行清洗。

14)在2.5％磷钨酸液(武藤化学株式会社制造、编号“40181”)中浸渍30分钟。

15)从磷钨酸液中取出后，在1％乙酸水中以数秒程度上下振荡5次左右，进行清洗。

16)在苯胺青液(武藤化学株式会社制造、编号“40201”)中浸渍30分钟。

17)从苯胺青液中取出后，在1％乙酸中以数秒程度上下振荡5次左右，进行清洗。

18)在100％乙醇中以数秒程度上下振荡10次左右，进行清洗。

19)为了将切片脱水，在100％乙醇中浸渍5分钟。

20)将切片在二甲苯中浸渍5分钟，之后从二甲苯中取出。将该操作重复3次。

21)向切片中滴加封入剂(Entellan(R)new Millipore、1.07961.0100、默克公司制造)，盖上盖玻片，使封入剂在玻璃上固化，由此进行封入。

(图像观察)

利用显微镜(尼康公司制造、商品名“ECLIPSE E1000”)附带的透射科勒照明对于如上所述利用封入剂密封的切片以500lx的照度进行照射，以观察倍率10倍进行观察，拍摄30张图像。

对于各图像，利用下述1)～8)的步骤进行图像分析处理，计算出组织致密度比。

1)利用HSV空间的H滤波器提取蓝色部(胶原蛋白部)。

2)通过灰度转换计算出亮度值(256级)。图22中将后述实施例1中的基于亮度值的柱状图以亮度柱状图的形式示出。

3)利用柱状图归一化函数进行柱状图归一化处理，对亮度值进行强调处理并使其进行分布，得到归一化强度柱状图(参照图22)。另外，对亮度值进行反转处理，设亮度最高的部分(即染色最浅的部分)为0、设亮度最低的部分(即染色最深的部分)为1。

4)获得沿着结缔组织体的厚度方向的任意直线L(参照图16)上的亮度数据。

5)利用30点移动平均零相位滤波器进行滤波。

6)求出所获得的亮度数据的整体平均值，将该整体平均值作为阈值。之后求出结缔组织体的一个表面上的直线L上的亮度数据(即直线L的端部上的亮度数据)是否为阈值以上，如果是阈值以上的数据，则从该直线L的端部向另一端部侧移动，将阈值以上的数据部分作为“阈值以上部分”，将该“阈值以上部分”作为“表面层”。其后，同样地向另一端部侧移动，数据小于阈值，并将小于阈值的数据部分作为“小于阈值部分”，将该“小于阈值部分”作为“表面层以外的部分”。

另外，若结缔组织体的一个表面上的直线L上的亮度数据(即直线L的端部上的亮度数据)小于阈值，则从该直线L的端部向另一端部侧，将小于阈值的数据部分作为“小于阈值部分”，将该“小于阈值部分”作为“表面层”。其后同样地向另一端部侧移动，数据为阈值以上，将该“阈值以上”的数据部分作为“阈值以上部分”，并将该“阈值以上部分”作为“表面层以外的部分”。

7)接着求出直线L上的被认定为“表面层”的部分的亮度数据的平均值(Y1)、以及被认定为“表面层以外的部分”的部分的亮度数据的平均值(Y2)，将Y1/Y2作为一个表面的表面层的组织致密度比。

8)对于余下的29张图像，也对于结缔组织体的一个表面的表面层同样地计算出组织致密度比，将在30张图像中求出的组织致密度比的平均值作为一个表面的表面层的“组织致密度比”。

进一步根据需要，对于另一表面的表面层也可以同样地计算出组织致密度比。

[实施例1]

首先准备图6所示的具备筒状的盖部件11、以及芯材12的结缔组织体形成基材10。芯材12具备在内部埋有丙烯酸棒的由不锈钢管形成的中心材12B、以及由有机硅树脂形成的盖管12C。芯材12的外径为16mm。盖部件11的外径为19mm、内径为18mm，1.5×15mm的狭缝沿轴向形成4个、沿周向形成11个，为不锈钢制。因此，由芯材12构成的组织形成面为有机硅树脂，由盖部件11构成的组织形成面为不锈钢。

接着，在麻醉下对于出生后12个月、体重8.5kg的比格犬的背部皮肤进行切开术，在生物体表面形成插入口，由插入口利用剪刀等进行皮下组织的切开剥离，制作可容纳结缔组织体形成基材10的程度的大小的皮下囊袋。将结缔组织体形成基材10由插入口用手推入，埋入结缔组织体形成基材10，埋入后缝合插入口。其后将注射器的针由皮肤插入到基材上，从埋入有结缔组织体形成基材10的周围抽取空气。

接着，将比格犬在常规饲养环境下饲养60天后，再次进行切开术，在生物体表面设置取出口，由生物体内取出形成有结缔组织体的结缔组织体形成基材10。其后从结缔组织体形成基材10中拨出结缔组织体，由此得到图14所示的筒状的结缔组织体30。从结缔组织体形成基材10中拨出之前的结缔组织体30的内周面与结缔组织体形成基材10的芯材12的组织形成面(有机硅树脂)接触或对置。从结缔组织体形成基材10中拨出之前的结缔组织体30的外周面与结缔组织体形成基材10的盖部件11的组织形成面(不锈钢)接触或对置。

将所得到的结缔组织体30切断，利用电子显微镜对截面进行观察，将所得到的照片示于图15。图15中，上方为内周面侧。另外，将所得到的结缔组织体30按照上述方法制作切片，利用显微镜对于马森三色染色后的切片的截面进行观察，将所得到的照片示于图16～18。图17是将结缔组织体30的内周面附近的部分放大的图。图18是将结缔组织体30的厚度方向的中央部分放大的图。

如图16、17所示，在筒状的结缔组织体的内周面侧，空隙少，结缔组织致密，可以理解为形成了致密表面层。

与之相对，如图16、18所示，致密表面层以外的部分(例如厚度方向的中央部分)的空隙多，可以理解为结缔组织体的内部的致密度低于表面层。

另外，根据说明书中记载的方法对于一个表面(内周面)的表面层的致密度进行测定。其结果，如下述表1所示，组织致密度为1.56。另一表面(外周面)的表面层的组织致密度为1.48。

[表1]

另外，利用电子显微镜对结缔组织体的内周面进行观察，将所得到的照片示于图19。进一步将结缔组织体的内周面剥离为层状，利用电子显微镜对内周面以外的致密表面层的表面状态进行观察并将所得到的照片示于图20，进一步进行剥离，利用电子显微镜对于致密表面层以外的状态进行观察并将所得到的照片示于图21。

如图19所示可以理解，在致密表面层的表面，胶原蛋白以扁平状平滑地覆盖，并且胶原蛋白未沿单方向取向而以无规方式进行取向。另一方面，关于致密表面层的表面以外的部分，如图20所示可以理解，纤维状胶原蛋白结成束状，沿大致单方向进行取向。另外，由图15、20的照片可以理解，结成束状且沿单方向取向的纤维状胶原蛋白以多层状进行设置。此外，在图15的照片中，粒状的点以沿横向连续的方式进行配置，由此可以理解，由沿单方向取向的纤维状胶原蛋白的束形成的层中的纤维状胶原蛋白相对于其他层的纤维状胶原蛋白正交，可以理解为纤维状胶原蛋白配置成网眼状。该网眼状的配置持续到内部，如图21所示，在致密度低的结缔组织体的内部也观察到了该配置。

此外，如图20所示，在致密表面层，胶原蛋白的密度高，胶原蛋白的纤维粗，另一方面，如图21所示，在致密表面层以外的部分，纤维状胶原蛋白的束比致密表面层中的胶原蛋白的束更细。

将实施例1中得到的结缔组织体浸渍在狗的全血中，在1、3、5分钟后取出，利用生理盐水进行清洗，之后拍摄照片，进行观察，结果如图23所示，均几乎未发生血液凝固，未形成血栓。

另一方面，将实施例1中得到的结缔组织体的致密表面层剥离，使致密表面层的表面以外的部分露出，浸渍在狗的全血中，在1、3、5分钟后取出，利用生理盐水进行清洗，之后拍摄照片，进行观察，结果如图23所示，在1分钟时在表面的一部分附着有血栓，在5分钟时整个面发生了血栓形成。需要说明的是，关于致密表面层，如图24所示，能够利用镊子容易地剥离为层状，具有壁背离结构。

进一步剥离致密表面层，对重量(B(g))进行测定。将其在25℃真空干燥12小时，测定重量(A(g))。由重量变化求出致密表面层的含水率((B-A)/A×100)，为平均56％。另一方面，对于致密表面层以外的部分也同样地求出含水率，为平均73％。表示与致密表面层以外的部分，致密表面层更不容易吸收水分。

[实施例2]

准备图10所示的具备筒状的盖部件51、以及4根芯材52的结缔组织体形成基材50。芯材52为利用有机硅树脂管包覆的不锈钢圆棒，有机硅树脂管的内径为1mm、外径为2mm，不锈钢圆棒的外径为1mm。盖部件51的外径为10mm、内径为8mm，1.5mm的圆孔按照约20％的开口率(狭缝相对于盖部件的组织形成面的面积比)以交错状配置均等地形成，为不锈钢制。4根芯材52大致均等地配置在盖部件51的内部。因此，由芯材构成的组织形成面为有机硅树脂，由盖部件构成的组织形成面为不锈钢。

接着，在麻醉下对于出生后3个月、体重40kg的家猪的腹部皮肤进行切开术，在生物体表面形成插入口，由插入口利用剪刀等进行皮下组织的切开剥离，制作可容纳结缔组织体形成基材50的程度的大小的皮下囊袋。将结缔组织体形成基材50由插入口用手推入，埋入结缔组织体形成基材50，埋入后缝合插入口。其后将注射器的针由皮肤插入到基材上，从埋入有结缔组织体形成基材50的周围抽取空气。

接着，将猪在常规饲养环境下饲养60天后，再次进行切开术，在生物体表面设置取出口，由生物体内取出形成有结缔组织体的结缔组织体形成基材50。其后从结缔组织体形成基材50中拨出结缔组织体，由此得到显示出图3的截面结构、在内部具有圆柱状的空洞孔(中空部)的圆柱状的结缔组织体30。

另外，根据说明书记载的方法对于结缔组织体30的内部的中空部的周围(内周面)以及外周面的表面层的致密度进行测定。其结果，内部的空洞周围的致密度为1.4，外周面的致密度为1.2。

[实施例3]

准备如图12所示的在圆柱状的芯材62的外周安装有作为异种部件37的支架的结缔组织体形成基材60。芯材62为尼龙树脂的圆棒，外径为15mm。支架为扩张至内径16mm的中空球扩张型的钴铬合金制。因此，由芯材62构成的组织形成面为尼龙树脂，由异种部件37构成的组织形成面为钴铬合金。

接着，在麻醉下对于出生后10个月、体重35kg的山羊的背部皮肤进行切开术，在生物体表面形成插入口，由插入口利用剪刀等进行皮下组织的切开剥离，制作可容纳结缔组织体形成基材的程度的大小的皮下囊袋。将结缔组织体形成基材由插入口用手推入，埋入结缔组织体形成基材，埋入后缝合插入口。其后将注射器的针由皮肤插入到基材上，从埋入有结缔组织体形成基材10的周围抽取空气。

接着，将山羊在常规饲养环境下饲养30天后，再次进行切开术，在生物体表面设置取出口，由生物体内取出形成有结缔组织体的结缔组织体形成基材。其后从结缔组织体形成基材中拨出结缔组织体，由此得到显示出图4的截面结构、在内部具有圆柱状的空洞孔(中空部)的圆柱状的结缔组织体30。

另外，根据说明书记载的方法对于结缔组织体30的一个表面(内周面)的表面层以及内部的支架周围的表面层的致密度进行测定。其结果，结缔组织体30的内周面的组织致密度为1.2，支架周围的表面层的组织致密度为1.1。

[实施例4]

准备如图11所示的具备筒状的盖部件11、以及芯材12的结缔组织体形成基材10，将作为异种部件37的支架配置在盖部件11与芯材12之间的间隙中。芯材12具备由PEEK树脂形成的中心材12B、以及由有机硅树脂形成的盖管12C。芯材12的外径为20mm。盖部件11的外径为25mm、内径为23mm，形成有2mm×20mm的狭缝，为不锈钢制。支架为镍钛合金制，内径为22mm。因此，由芯材构成的组织形成面为PEEK树脂，由盖部件构成的组织形成面为不锈钢，由支架构成的组织形成面为镍钛。

接着，在麻醉下对于后12个月、体重43kg的山羊的背部皮肤进行切开术，在生物体表面形成插入口，由插入口利用剪刀等进行皮下组织的切开剥离，制作可容纳结缔组织体形成基材10的程度的大小的皮下囊袋。将结缔组织体形成基材10由插入口用手推入，埋入结缔组织体形成基材10，埋入后缝合插入口。其后将注射器的针由皮肤插入到基材上，从埋入有结缔组织体形成基材10的周围抽取空气。

接着，将山羊在常规饲养环境下饲养60天后，再次进行切开术，在生物体表面设置取出口，由生物体内取出形成有结缔组织体的结缔组织体形成基材10。其后从结缔组织体形成基材10中拨出结缔组织体，由此得到图5所示的具有截面结构的筒状的结缔组织体30。

另外，根据说明书记载的方法对于结缔组织体30的一个表面(内周面)的表面层、另一表面(外周面)的表面层、以及内部的支架周围的表面层的致密度进行测定。其结果，结缔组织体30的内周面的组织致密度为1.3，结缔组织体30的外周面的组织致密度为1.2，支架周围的表面层的组织致密度为1.1。

[比较例1]

除了不进行利用注射器从生物体内抽取空气的作业以外，与实施例1同样地实施。比较例1中，如图25所示，形成了血液凝固块(左侧的上方部分)，结缔组织体的形成不充分，也未形成致密表面层，如图26所示，液体凝集块在白色的胶原蛋白表面层的一部分形成为红色。并且强度不足，在表面具有龟裂(图26的中央部分)。将比较例1的内周面侧的表面浸渍在狗的全血中，在1、3、5分钟后取出，利用生理盐水进行清洗，之后拍摄照片，进行观察，结果如图27所示，在1分钟时在整个面形成了血栓。

·本公开中，空气的抽取(工序2)对于促进生物体内的结缔组织体形成基材10的组织形成面与生物体细胞的接触或提高接触性是有利的。空气的抽取对于促进生物体内的结缔组织体形成基材10的胶囊化反应是有利的，例如有利于促进胶囊化反应的开始。基于胶囊化反应的结缔组织体30的形成是自生物体内的结缔组织体形成基材10的组织形成面开始的。

·本公开中，在结缔组织体30进行形成或生长的期间(工序3)的初期期间的结缔组织体30的形成速度(生长速度)是影响结缔组织体30中的包含与组织体形成基材10的组织形成面接触或对置的表面的表面层的致密度(及微观结构)的一个要素。本公开中例示出的高分子材料(或高分子材料与金属材料的组合)对于有意地或受控地降低在结缔组织体进行形成或生长的期间(工序3)的初期期间的结缔组织体的形成速度(生长速度)是有利的。将本公开中例示的高分子材料(或高分子材料与金属材料的组合)用于结缔组织体形成基材10的组织形成面时，对于使结缔组织体30具有致密度被调整得较高的致密表面层是有利的。需要说明的是，伴随着结缔组织体的形成的进行，结缔组织体的形成速度可能会不容易受到组织形成面的材料的影响。一个或多个组织形成面的材料选择有助于使结缔组织体的致密表面层比较致密、同时使致密表面层以外的部分比较稀疏，并且还有助于使致密表面层与致密表面层以外的部分的微观结构不同。在数个示例中，致密表面层与致密表面层以外的部分之间的致密度的差异、以及致密表面层与致密表面层以外的部分之间的可以为微观结构的连续变化的微观结构的差异可以以上述壁背离结构的形式进行功能上的观测，例如在显微镜下可以观测为鲜明的或模糊的层边界。

·结缔组织体30中比致密表面层稀疏的表面层以外的部分有时被称为结缔组织体的非表面层部分、主体部分、或基底部分。有时将形成结缔组织体30的致密表面层的胶原蛋白称为第1纤维状胶原蛋白、将形成结缔组织体30的非表面层部分的胶原蛋白称为第2纤维状胶原蛋白。结缔组织体30的致密表面层的第1纤维状胶原蛋白的结构和致密度有时分别被称为第1微观结构和第1致密度。结缔组织体30的非表面层部分的第2纤维状胶原蛋白结构和致密度有时分别被称为第2微观结构和第2致密度。第1纤维状胶原蛋白的结构和致密度对致密表面层赋予第1血液不易渗入性，第2纤维状胶原蛋白的结构和致密度对非表面层部分赋予第2血液不易渗入性，致密表面层所具有的第1血液不易渗入性高于非表面层部分所具有的第2血液不易渗入性。本公开的壁背离结构有时被称为由表面层的第1纤维状胶原蛋白和非表面层部分2的纤维状胶原蛋白形成的源自生物体的可剥离边界。本公开的结缔组织体30有时被称为具备源自生物体的胶原蛋白的可植入产品。本公开的结缔组织体30可以为再生医疗用人工脏器本身或其一部分。

符号的说明

10 结缔组织体形成基材

11 盖部件

12 芯材

11A,12A 组织形成面

13 组织形成空间

14、15 盖体

17 孔

30 结缔组织体

30A 外周面

30B 内周面

32 致密表面层

35 中空部

37 异种部件

Claims (15)

1.一种结缔组织体，其是由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成的结缔组织体，其中，该结缔组织体具备致密表面层，该致密表面层是构成结缔组织体的任一表面的表面层的组织比该表面层以外的部分形成得致密的表面层。

2.如权利要求1所述的结缔组织体，其中，所述胶原蛋白包含纤维状胶原蛋白。

3.如权利要求2所述的结缔组织体，其中，所述纤维状胶原蛋白在所述致密表面层的表面为扁平状且为平滑的。

4.如权利要求2或3所述的结缔组织体，其中，所述纤维状胶原蛋白在所述致密表面层的表面以外的部分以交叉的方式配置成网眼状。

5.如权利要求1～4中任一项所述的结缔组织体，其中，沿着厚度方向计算出的所述表面层的组织致密度相对于所述表面层以外的部分的组织致密度之比为1.1以上。

6.如权利要求1～5中任一项所述的结缔组织体，其中，在内部埋入有异种部件。

7.如权利要求6所述的结缔组织体，其中，在所述异种部件的周围形成所述致密表面层。

8.如权利要求1～7中任一项所述的结缔组织体，其中，所述结缔组织体通过胶囊化反应而形成。

9.一种结缔组织体的制造方法，其是由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成的结缔组织体的制造方法，其中，该方法具备下述工序：

将具有组织形成面且所述组织形成面的至少一部分由高分子材料构成的结缔组织体形成基材配置在生物体内的工序；

由生物体外从生物体内的配置有所述结缔组织体形成基材的空间中经皮且经管地抽出空气的工序；

在所述组织形成面上形成结缔组织体的工序；

将形成有所述结缔组织体的结缔组织体形成基材从生物体内取出的工序；以及

由所述结缔组织体形成基材剥离所述结缔组织体的工序。

10.一种结缔组织体，其使用具备将生物体组织材料所在的环境与用于形成结缔组织体的空间隔开的组织形成面的组织体形成基材、且该组织体形成基材具备连通所述空间与所述环境并使结缔组织侵入到所述空间中的孔，该结缔组织体是将所述组织体形成基材配置在人体以外的生物体内的所述环境中并由所述生物体外从配置有所述组织体形成基材的空间中抽出空气而形成的结缔组织体，其中，

所述组织形成面由高分子材料或金属材料构成；

所述结缔组织体由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成，被用于生物体内的组织中；

所述结缔组织体中，构成与所述组织形成面相接的表面的表面层整体为组织比该表面层以外的部分形成得致密的致密表面层，

所述致密表面层中，沿着厚度方向计算出的所述表面层的组织致密度相对于所述表面层以外的部分的组织致密度之比为1.1以上。

11.一种结缔组织体的制造方法，其是由包含胶原蛋白的源自生物体的组织形成、被用于生物体内的组织中的结缔组织体的制造方法，该方法具备下述工序：

将具有组织形成面且所述组织形成面的至少一部分由高分子材料构成的结缔组织体形成基材配置在人体以外的生物体内的工序；

由所述生物体外从所述生物体内的配置有所述结缔组织体形成基材的空间中经皮且经管地抽出空气的工序；

在所述组织形成面上形成结缔组织体的工序；

将形成有所述结缔组织体的结缔组织体形成基材从所述生物体内取出的工序；以及

由所述结缔组织体形成基材剥离所述结缔组织体的工序。

12.如权利要求11所述的结缔组织体的制造方法，其中，所述结缔组织体通过胶囊化反应形成。

13.一种结缔组织体，其是再生医疗用的结缔组织体，其具备：

具备源自生物体的第1纤维状胶原蛋白的表面层；以及

具备源自生物体的第2纤维状胶原蛋白的非表面层部分，

所述表面层的所述第1纤维状胶原蛋白具有第1微观结构和第1致密度，

所述非表面层部分的所述第2纤维状胶原蛋白具有与所述第1微观结构不同的第2微观结构、以及比所述第1致密度小的第2致密度，

所述表面层和所述非表面层部分形成由于所述第1纤维状胶原蛋白的所述第1致密度与所述第2纤维状胶原蛋白的所述第2致密度的差异、以及所述第1纤维状胶原蛋白的所述第1微观结构与所述第2纤维状胶原蛋白的所述第2微观结构的差异所致的壁背离结构。

14.如权利要求13所述的结缔组织体，其中，所述表面层和所述非表面层部分形成仅由于所述第1致密度与所述第2致密度的差异、以及所述第1微观结构与所述第2微观结构的差异所致的层边界。

15.如权利要求13所述的结缔组织体，其中，

所述第1微观结构和所述第1致密度对所述表面层赋予第1血液不易渗入性，

所述第2微观结构和所述第2致密度对所述非表面层部分赋予第2血液不易渗入性，

所述表面层的所述第1血液不易渗入性比所述非表面层部分的所述第2血液不易渗入性高。

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