CN114015608B - 一种含有生防菌微胶囊的功能型蔬菜育苗基质及其制备方法和应用 - Google Patents

一种含有生防菌微胶囊的功能型蔬菜育苗基质及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种含有生防菌微胶囊的功能型蔬菜育苗基质及其制备方法和应用。制备方法包括(1)制备生防菌微胶囊：将生防菌的发酵液与载体混合后造粒，使用保护剂喷雾，形成保护层，待颗粒干燥后得到生防菌微胶囊；(2)制备功能型蔬菜育苗基质：将生防菌微胶囊添加至常规育苗基质中。本发明针对番茄、黄瓜、辣椒等作物培育种苗，在常规育苗基质的基础上，添加由具备广谱抗病和促生功能的阿姆利则链霉菌S1‑12和/或耐旱芽孢杆菌B2‑12制备的微胶囊，使活菌耐干燥、耐储存，并能在育苗过程中缓慢释放，稳定并延长了功能活性，达到防控病虫害、促生壮苗的作用。

Description

一种含有生防菌微胶囊的功能型蔬菜育苗基质及其制备方法 和应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种含有生防菌微胶囊的功能型蔬菜育苗基质及其制备方法和应用。
背景技术
随着设施农业的快速发展，蔬菜工厂化育苗广泛普及，穴盘育苗因具有良好的机械适配性、搬运便捷性和单位面积成苗量大等优点，在世界各国广泛应用，目前已成为蔬菜集约化育苗的主要技术形式之一。育苗基质是一种能够代替土壤，为幼苗生长发育提供足够水分、营养、适宜pH值等良好根系生长环境的物质，可以起到固定支撑幼苗直立生长，提供种子萌发、幼苗生长必需的水分、营养成分和根系呼吸氧气，缓冲生长环境温度剧烈变化对根际温度的冲击，维系根际良好菌群结构的作用。
常规育苗基质一般以泥炭、腐熟植物残体为主要原料，并配以适当比例的轻质无机材料制备。但由于原料选用不科学、生产工艺不标准、产品质量检测方法缺乏等，基质质量参差不齐，病虫害的危害依然存在。
现阶段，主要通过向育苗基质中添加少量农药实现对病虫害的防治，例如中国专利申请CN107082697A在育苗基质中加入多菌灵可湿性粉剂。向育苗基质中添加拮抗微生物是另一种防病抗虫手段。中国专利申请CN104818233A在育苗基质中添加死谷芽孢杆菌，对西瓜、辣椒、番茄、黄瓜具有很好的促生效果；中国专利申请CN107056409A通过添加棘孢木霉孢子粉制备防治根腐病的生物炭营养基质；中国专利申请CN106701635A在育苗基质中加入链霉菌制备具有杀根结线虫能力的生物育苗基质。
然而，育苗基质的理化环境不同于土壤，轻质化原料透气性强但保水性差，因此并不利于微生物的存活和定殖。多种市售育苗基质产品检测结果显示，目标微生物检出率很低。
发明内容
针对育苗基质的理化环境不同于土壤，轻质化原料透气性强但保水性差，不利于微生物的存活和定殖的技术问题，本发明提供一种含有生防菌微胶囊的功能型蔬菜育苗基质及其制备方法和应用，本发明针对番茄、黄瓜、辣椒等作物培育种苗，在常规育苗基质的基础上，添加由具备广谱抗病和促生功能的阿姆利则链霉菌S1-12和/或耐旱芽孢杆菌B2-12制备的微胶囊，使活菌耐干燥、耐储存，并能在育苗过程中缓慢释放，稳定并延长了功能活性，达到防控病虫害、促生壮苗的作用。
第一方面，本发明提供一种含有生防菌微胶囊的功能型蔬菜育苗基质的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备生防菌微胶囊：将生防菌的发酵液与载体混合后造粒，使用保护剂向制得的颗粒进行喷雾，形成保护层，待颗粒干燥后得到生防菌微胶囊；
所述生防菌为阿姆利则链霉菌S1-12、耐旱芽孢杆菌B2-12中的至少一种，
所述阿姆利则链霉菌S1-12于2021年10月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.23578，分类命名为阿姆利则链霉菌Streptomyces amritsarensis；
所述耐旱芽孢杆菌B2-12已于2021年10月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.23577，分类命名为Bacillus inaquosorum；
(2)制备功能型蔬菜育苗基质：将步骤(1)制得的生防菌微胶囊添加至常规育苗基质中。
进一步的，所述常规育苗基质包括市售育苗基质和自制育苗基质。
进一步的，所述自制育苗基质的制备方法为：
将泥炭、玉米秸秆发酵料、蛭石、珍珠岩、菌渣等原料混合后，通过高温和微波双重灭菌处理。
进一步的，所述生防菌微胶囊中，生防菌含量为108-1010cfu/g。
进一步的，所述阿姆利则链霉菌S1-12的发酵液的制备方法为：
使用高氏1号培养基活化阿姆利则链霉菌S1-12，然后将活化后的阿姆利则链霉菌S1-12转接到发酵培养基中，于28-30℃条件下，180r/min振荡培养，得发酵液。
进一步的，所述耐旱芽孢杆菌B2-12的发酵液的制备方法包括如下步骤：
(1)使用LB培养基活化耐旱芽孢杆菌B2-12；
(2)然后将活化后的耐旱芽孢杆菌B2-12转接到液体种子培养基中，于28-30℃条件下，180r/min振荡培养24h，得种子液；
(3)将种子液按5％比例接种到液体发酵培养基中，于罐压0.04-0.06Mpa、温度28±2℃、通气量1：0.8-1.2条件下，120r/min搅拌培养36-48h，得发酵液。
进一步的，所述载体为硅藻土、淀粉、活性炭中的至少一种与粉碎的珍珠岩的混合物，载体有利于菌体稳定存活，在蔬菜育苗期间，更容易释放菌体，保证有效定殖，从而发挥生防功能。
进一步的，所述载体的用量为发酵液的3-5倍。
进一步的，所述保护剂为羟甲基纤维素钠、环氧化淀粉、麦芽糊精、氧化海藻酸钠中的至少两种，保护剂在基质储存过程中，对微胶囊中的菌体具有很好的保护作用。
第二方面，本发明提供一种采用上述制备方法制得的功能型蔬菜育苗基质。
进一步的，所述功能型蔬菜育苗基质中的生防菌活菌数总数≥2.0×107cfu/g。
第三方面，本发明还提供一种上述功能型蔬菜育苗基质在番茄、黄瓜、辣椒培育种苗中的应用。
本发明的有益效果在于：
本发明功能型蔬菜育苗基质所使用的阿姆利则链霉菌S1-12、耐旱芽孢杆菌B2-12分离筛选自设施蔬菜土壤，对环境具有更好的适应性，对多种土传病原真菌具有强抑菌活性，在土壤中利于定殖并稳定发挥防控病害效果，从而减少或替代化学杀菌剂。
通过添加阿姆利则链霉菌S1-12、耐旱芽孢杆菌B2-12，本发明提供的蔬菜育苗基质，可有效预防镰刀菌(Fusarium spp.)、疫霉菌(Phytophthora spp.)、丝核菌(Rhizoctonia spp.)、灰霉菌(Botrytis spp.)、腐霉(Pythium spp.)、轮枝菌(Verticillium spp.)、链格孢菌(Alternaria spp.)及根结线虫(Meloidogyne spp.)引起的植物苗期病虫害；可显著促进所育种苗生长，达到壮苗的效果，同时生防菌在种苗根际大量定殖，移栽后仍能继续发挥生防作用。
另一方面，本发明将生防菌制成微胶囊后，再加入到常规育苗基质中，可使菌体耐干燥，抵御机械力和外界不良环境的影响，从而长时间保持生物活性，大幅度提高菌体的存活能力，从而在基质储存过程中延长货架期，保证目标微生物的有效活菌数，对于增加育苗基质的生物功能具有重要的意义；而且，在育苗过程中，微胶囊化还可以达到缓释控释的目的，有利于延长菌剂的生防效果。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是阿姆利则链霉菌S1-12对尖孢镰孢的抑菌效果图。
图2是耐旱芽孢杆菌B2-12对尖孢镰孢的抑菌效果图。
图3是实施例7中阿姆利则链霉菌S1-12活菌菌数随时间的变化柱状图。
图4是实施例7中耐旱芽孢杆菌B2-12活菌菌数随时间的变化柱状图。
图5是实施例8中阿姆利则链霉菌S1-12活菌菌数随时间的变化柱状图。
图6是实施例8中耐旱芽孢杆菌B2-12活菌菌数随时间的变化柱状图。
图7是实施例9中微胶囊组及CK组对育苗的促生作用对比图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
对于阿姆利则链霉菌S1-12的处理：
具体实施方式中所使用的高氏1号培养基中含有可溶性淀粉20.0g、K2HPO4 0.5g、NaCl 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、KNO3 1.0g、FeSO4·7H2O 0.01g、水1000mL，高氏1号培养基的pH值控制在7.2-7.4。
具体实施方式中所使用的发酵培养基中含有大豆蛋白粉20g、葡萄糖10g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、蛋白胨2g、酵母粉1g、水1000mL，发酵培养基的pH值控制在7.2-7.4，发酵培养基在121℃下湿热灭菌60min。
具体实施方式中所使用的NA培养基配方为蛋白胨10g、NaCl 5g、牛肉膏3g、琼脂粉15g、水1000mL，NA培养基pH值控制在7.2-7.4。
对于耐旱芽孢杆菌B2-12的处理：
具体实施方式中所使用的液体种子培养基配方为淀粉5.0g、酵母粉1.0g、K2HPO42.0g、MgSO4·7H2O 0.5g、CaCO3 0.1g、FeSO4·6H2O 0.005g、水1000mL，液体种子培养基pH值控制在7.4-7.5。
具体实施方式中所使用的液体发酵培养基中含有蔗糖10g、玉米粉40g、大豆蛋白粉10g、酵母粉2g、(NH4)2SO4 2g、MgSO4 0.2g、CaCO3 1g、K2HPO4 1g、KH2PO4 1g、水1000mL，液体发酵培养基pH值控制在7.4-7.5。
具体实施方式中所使用的LB培养基配方为蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 5g、1000mL水，LB培养基pH值控制在7.2-7.4。
具体实施方式中所使用的NA培养基配方为蛋白胨10g、NaCl 5g、牛肉膏3g、琼脂粉15g、水1000mL，NA培养基pH值控制在7.2-7.4。
实施例1阿姆利则链霉菌S1-12的分离
对山东寿光一棚龄超过20年的设施番茄的番茄根围土样进行取样，稀释106倍，取1mL涂高氏1号固体培养基平板，重复50个平板，根据菌落形态，将链霉菌菌落挑取，并转接划线纯化。
将该菌株16S rDNA序列(Genbank：OK626407)提交NCBI BLAST进行相似性比较，与阿姆利则链霉菌(Streptomyces amritsarensis)模式菌株2A相似性达99.86％，结合形态新特征，鉴定该菌株为阿姆利则链霉菌(Streptomyces amritsarensis)，命名为阿姆利则链霉菌S1-12。
实施例2阿姆利则链霉菌S1-12的抑菌试验
(1)将立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、疫霉菌(Phytophthoracapsici)及链格孢菌(Alternaria solani)分别接种在PDA培养基上活化2天。
(2)用灭菌的直径5mm的打孔器于各病原真菌菌落边缘打取菌苔，分别移置于直径9cm的NA培养基上，同时将阿姆利则链霉菌S1-12用牙签挑取少许点平板另一侧(与病原真菌菌饼6cm)，25℃条件下对峙培养，每处理重复3次，以只接病原菌的为对照。
(3)待对照病原菌菌落快长到链霉菌接菌点时，测量各自菌落的半径，并计算抑制率，结果如图1、表1所示，阿姆利则链霉菌S1-12对几种供试病原真菌具有广谱抑菌活性。
表1阿姆利则链霉菌S1-12对几种土传植物病原真菌的对峙试验
Figure BDA0003373409500000071
实施例3含有阿姆利则链霉菌S1-12微胶囊的功能型蔬菜育苗基质的制备
按照如下步骤制备阿姆利则链霉菌S1-12微胶囊：
(1)将阿姆利则链霉菌S1-12接种到高氏1号培养基活化；
(2)将活化后的阿姆利则链霉菌S1-12转接至发酵培养基中，发酵温度控制在28-30℃范围内，180r/min振荡培养，得到有效活菌数为109-1012cfu/g的发酵液；
(3)将发酵液与4倍用量的载体混合，圆盘造粒，其中载体为硅藻土、淀粉、活性炭中的至少一种与粉碎的珍珠岩的混合物；
(4)使用保护剂向制得的颗粒进行喷雾，保护剂为羟甲基纤维素钠、环氧化淀粉、麦芽糊精、氧化海藻酸钠中的至少两种，形成保护层，待颗粒干燥后得到微胶囊，微胶囊中阿姆利则链霉菌S1-12的有效活菌数为108-1010cfu/g。
使用时，可将微胶囊与市售的常规育苗基质混合，该常规育苗基质规格为：有机质含量≥35％，总养分N+P2O5+K2O≥2，水分5-15％，pH值5.5-7.0，制得的功能型蔬菜育苗基质中，阿姆利则链霉菌S1-12活菌数≥2.0×107cfu/g。
该功能型蔬菜育苗基质可作为设施番茄、设施黄瓜和/或设施辣椒等作物的育苗基质使用。
实施例4耐旱芽孢杆菌B2-12的分离
对山东寿光一棚龄超过20年的设施番茄的番茄根围土样进行取样，稀释106倍，取1mL涂NA固体培养基平板，28℃培养3天，挑取细菌菌落，依次与尖孢镰孢菌(Fusariumoxysporum)、茄病镰孢菌(F.solani)、藤仓镰孢菌(F.fujikuroi)、木贼孢菌(F.equiseti)、共享镰孢菌(F.commune)、镰孢霉菌(F.delphinoides)、轮纹镰孢菌(F.concentricum)、三线镰孢菌(F.tricinctum)对峙培养，筛选对几种病原真菌有广谱抑菌活性的菌株。
挑取对所有供试病原真菌均有较强抑菌活性的菌株B2-12，16S rDNA序列(Genbank：OK626405)提交NCBI BlAST进行相似性比较，与Bacillus inaquosorum NRRL B-23052(GenBank：EU138467)相似性达99.91％，结合形态新特征，鉴定该细菌菌株为耐旱芽孢杆菌(Bacillus inaquosorum)，命名为耐旱芽孢杆菌B2-12。
实施例5耐旱芽孢杆菌B2-12的抑菌试验
(1)将尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、茄病镰孢菌(F.solani)、藤仓镰孢菌(F.fujikuroi)、木贼孢菌(F.equiseti)、共享镰孢菌(F.commune)、镰孢霉菌(F.delphinoides)、轮纹镰孢菌(F.concentricum)、三线镰孢菌(F.tricinctum)分别接种在PDA培养基上活化2天。
(2)用灭菌的直径5mm的打孔器于各病原真菌菌落边缘打取菌苔，分别移置于直径9cm的NA培养基上，同时将耐旱芽孢杆菌B2-12用牙签挑取少许点平板另一侧(与病原真菌菌饼6cm)，25℃条件下对峙培养，每处理重复3次，以只接病原菌的为对照。
(3)待对照病原菌菌落快长到链霉菌接菌点时，测量各自菌落的半径，并计算抑制率，结果如图2、表2所示，耐旱芽孢杆菌B2-12对几种供试病原真菌具有广谱抑菌活性。
表2耐旱芽孢杆菌B2-12对几种土传植物病原真菌的对峙试验
Figure BDA0003373409500000091
实施例6含有耐旱芽孢杆菌B2-12微胶囊的功能型蔬菜育苗基质的制备
按照如下步骤制备耐旱芽孢杆菌B2-12微胶囊：
(1)将耐旱芽孢杆菌B2-12接种到LB培养基活化；
(2)将活化后的耐旱芽孢杆菌B2-12转接至液体种子培养基中，控制培养温度保藏在28-30℃范围内，180r/min振荡培养24h，得种子液；
(3)将种子液按5％比例接种到液体发酵培养基中，控制发酵条件保藏在罐压0.04-0.06Mpa、温度28±2℃、通气量1：0.8-1.2范围内，120r/min搅拌培养，得到有效活菌数为109-1012cfu/g的发酵液；
(4)将发酵液与4倍用量的载体混合，圆盘造粒，其中载体为硅藻土、淀粉、活性炭中的至少一种与粉碎的珍珠岩的混合物；
(5)然后使用保护剂向制得的颗粒进行喷雾，保护剂为羟甲基纤维素钠、环氧化淀粉、麦芽糊精、氧化海藻酸钠中的至少两种，形成保护层，待颗粒干燥后得到微胶囊剂，微胶囊剂中耐旱芽孢杆菌B2-12的有效活菌数为108-1010cfu/g。
使用时，可将微胶囊与市售的常规育苗基质混合，该常规育苗基质规格为：有机质含量≥35％，总养分N+P2O5+K2O≥2，水分5-15％，pH值5.5-7.0，制得的功能型蔬菜育苗基质中，耐旱芽孢杆菌B2-12活菌数≥2.0×108cfu/g。
该功能型蔬菜育苗基质可作为设施番茄、设施黄瓜和/或设施辣椒等作物的育苗基质使用。
实施例7功能型蔬菜育苗基质储存试验
(1)阿姆利则链霉菌S1-12
微胶囊组：按照实施例3方法制备含有阿姆利则链霉菌S1-12微胶囊的功能型蔬菜育苗基质，功能型蔬菜育苗基质中阿姆利则链霉菌S1-12活菌数≥2.0×107cfu/g，用常规包装密封，置于室温条件下保存。
发酵液组：按照实施例3方法制备阿姆利则链霉菌S1-12发酵液，并添加到市售的常规育苗基质中(满足阿姆利则链霉菌S1-12活菌数≥2.0×107cfu/g)，用常规包装密封，置于室温条件下保存。
每隔30天，统计计算一次基质中的活菌菌数，结果如图3所示。
(2)耐旱芽孢杆菌B2-12
微胶囊组：按照实施例6方法制备含有耐旱芽孢杆菌B2-12微胶囊的功能型蔬菜育苗基质，功能型蔬菜育苗基质中耐旱芽孢杆菌B2-12活菌数≥2.0×108cfu/g，用常规包装密封，置于室温条件下保存。
发酵液组：按照实施例6方法制备耐旱芽孢杆菌B2-12发酵液，并添加到市售的常规育苗基质中(满足耐旱芽孢杆菌B2-12活菌数≥2.0×108cfu/g)，用常规包装密封，置于室温条件下保存。
每隔30天，统计计算一次基质中的活菌菌数，结果如图4所示。
实施例8功能型蔬菜育苗基质中生防菌的定殖测定试验
(1)阿姆利则链霉菌S1-12
微胶囊组：按照实施例3方法制备含有阿姆利则链霉菌S1-12微胶囊的功能型蔬菜育苗基质，功能型蔬菜育苗基质中阿姆利则链霉菌S1-12活菌数≥2.0×107cfu/g，装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
发酵液组：按照实施例3方法制备阿姆利则链霉菌S1-12发酵液，并添加到市售的常规育苗基质中(满足阿姆利则链霉菌S1-12活菌数≥2.0×107cfu/g)，装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
播种后每隔7天调查一次，每次每处理调查3盆，连续调查4次。取根系周围基质，对菌株进行统计计数(不包括微胶囊)，结果如图5所示。
(2)耐旱芽孢杆菌B2-12
微胶囊组：按照实施例6方法制备含有耐旱芽孢杆菌B2-12微胶囊的功能型蔬菜育苗基质，功能型蔬菜育苗基质中耐旱芽孢杆菌B2-12活菌数≥2.0×108cfu/g，装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
发酵液组：按照实施例6方法制备耐旱芽孢杆菌B2-12发酵液，并添加到市售的常规育苗基质中(满足耐旱芽孢杆菌B2-12活菌数≥2.0×108cfu/g)，装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
播种后每隔7天调查一次，每次每处理调查3盆，连续调查4次。取根系周围基质，对菌株进行统计计数(不包括微胶囊)，结果如图6所示。
实施例9功能型蔬菜育苗基质的育苗生防试验
(1)阿姆利则链霉菌S1-12
微胶囊组：按照实施例3方法制备含有阿姆利则链霉菌S1-12微胶囊的功能型蔬菜育苗基质，功能型蔬菜育苗基质中阿姆利则链霉菌S1-12活菌数≥2.0×107cfu/g，装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
发酵液组：按照实施例3方法制备阿姆利则链霉菌S1-12发酵液，并添加到市售的常规育苗基质中(满足阿姆利则链霉菌S1-12活菌数与微胶囊组一致)，装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
(2)耐旱芽孢杆菌B2-12
微胶囊组：按照实施例6方法制备含有耐旱芽孢杆菌B2-12微胶囊的功能型蔬菜育苗基质，功能型蔬菜育苗基质中耐旱芽孢杆菌B2-12活菌数≥2.0×108cfu/g，装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
发酵液组：按照实施例6方法制备耐旱芽孢杆菌B2-12发酵液，并添加到市售的常规育苗基质中(满足耐旱芽孢杆菌B2-12活菌数与微胶囊组一致)，装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
(3)空白对照
CK组：直接将市售的常规育苗基质装入一次性纸杯，按常规方式育辣椒苗，用无菌水浇灌，每次浇水以不溢出为宜；出苗后，每盆保留2棵。
30天后，统计(1)、(2)、(3)试验中各组辣椒苗的发病率，计算防效，结果如下表3所示，微胶囊处理对育苗的促生作用如图7所示。
表3各组辣椒苗的统计结果
Figure BDA0003373409500000121
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种含有生防菌微胶囊的功能型蔬菜育苗基质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)制备生防菌微胶囊：将生防菌的发酵液与载体混合后造粒，使用保护剂向制得的颗粒进行喷雾，形成保护层，待颗粒干燥后得到生防菌微胶囊；
所述生防菌为阿姆利则链霉菌S1-12、耐旱芽孢杆菌B2-12中的至少一种，所述阿姆利则链霉菌S1-12于2021年10月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.23578，分类命名为阿姆利则链霉菌Streptomyces amritsarensis；
所述耐旱芽孢杆菌B2-12已于2021年10月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.23577，分类命名为Bacillus inaquosorum；
(2)制备功能型蔬菜育苗基质：将步骤(1)制得的生防菌微胶囊添加至常规育苗基质中。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述生防菌微胶囊中，生防菌含量为108-1010cfu/g。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述阿姆利则链霉菌S1-12的发酵液的制备方法为：
使用高氏1号培养基活化阿姆利则链霉菌S1-12，然后将活化后的阿姆利则链霉菌S1-12转接到发酵培养基中，于28-30℃条件下，180r/min振荡培养，得发酵液。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述耐旱芽孢杆菌B2-12的发酵液的制备方法包括如下步骤：
(1)使用LB培养基活化耐旱芽孢杆菌B2-12；
(2)然后将活化后的耐旱芽孢杆菌B2-12转接到液体种子培养基中，于28-30℃条件下，180r/min振荡培养24h，得种子液；
(3)将种子液按5％比例接种到液体发酵培养基中，于罐压0.04-0.06Mpa、温度28±2℃、通气量1：0.8-1.2条件下，120r/min搅拌培养36-48h，得发酵液。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述载体为硅藻土、淀粉、活性炭中的至少一种与粉碎的珍珠岩的混合物。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述保护剂为羟甲基纤维素钠、环氧化淀粉、麦芽糊精、氧化海藻酸钠中的至少两种。
7.一种采用如权利要求1所述的制备方法制得的功能型蔬菜育苗基质。
8.如权利要求7所述的功能型蔬菜育苗基质，其特征在于，所述功能型蔬菜育苗基质中的生防菌活菌数总数≥2.0×107cfu/g。
9.一种如权利要求7所述的功能型蔬菜育苗基质在番茄、黄瓜、辣椒培育种苗中的应用。
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