CN114008053A - Nmda受体调节剂的前药 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及具有式I的NMDA受体调节剂的新颖前药。本发明的单独方面涉及包含所述化合物的药物组合物以及这些化合物治疗神经障碍或神经精神障碍例如抑郁症的用途。
Description
技术领域
本发明涉及作为NMDA受体调节剂的前药的化合物，包含所述化合物的药物组合物，以及它们在治疗神经障碍或神经精神障碍(例如抑郁症，特别是重度抑郁症(MDD)和难治性抑郁症(TRD))中的用途。
背景技术
世界卫生组织估计将有3.5亿人患有MDD，并预测到2030年抑郁症将构成全球社会最大的健康负担。粗略估计的患病率是，抑郁症在某个阶段影响人口的1/5，对女性的影响比男性高(在美国分别为5％-9％和2％-3％的发病率，占总发病率6.6％)。北美疾病控制中心(North-American Center for Disease Control)报告称，从2005年到2008年，在任何给定的月份中，美国人群中有8.9％接受处方抗抑郁药，此外还接受针对焦虑、疼痛和其他非心境障碍的处方[Global Burden of Disease Study.[全球疾病负担研究]Lancet.[柳叶刀]1997年5月17日；349(9063):1436-1442]。
抗抑郁药是市售的，因此是技术人员已知的。不同类型的抗抑郁药的实例包括但不限于选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)、5-羟色胺去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)、单胺氧化酶抑制剂(MAOI)和三环抗抑郁药。已知抗抑郁药的典型局限性是疗效延迟和在多疗程药物治疗后缓解率低，并且某些抗抑郁药有严重的副作用[Antidepressantsand the risk of suicidal behaviours.[抗抑郁药和自杀行为的风险]Jama.[美国医学会杂志]2004年7月21日；292(3):338-343]。
近年来，N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的调节剂在治疗MDD中，特别是在难治性抑郁症(TRD)中获得了更多的注意。特别地，由于其抗抑郁作用且起效快，氯胺酮(NMDA受体的拮抗剂)被用于治疗MMD。但是，用氯胺酮进行MDD治疗具有心理副作用和需要静脉施用的缺点。
NMDA受体是四聚体配体门控的离子通道，也参与必要的生理过程，例如突触可塑性和发育。NMDA受体是包含两个GluN1亚基和两个GluN2/GluN3亚基的异四聚体。这意味着它们组装成二异聚体或三异聚体受体。大多数天然NMDA受体由两个GluN1亚基和两个GluN2亚基组成。NMDA受体的激活需要在两个不同的结合位点同时结合。谷氨酸是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质，与GluN2亚基结合，而甘氨酸与GluN1和GluN3亚基结合。
NMDA受体的另一种已知调节剂是D-环丝氨酸，它是部分甘氨酸位点激动剂。由于D-环丝氨酸的神经活性和在治疗抑郁症和抑郁障碍(例如MDD)方面的潜在用途，因此已对其进行了深入研究[Heresco-Levy,U.,Javitt,D.C.,Gelfin,Y.,Gorelik,E.,Bar,M.,Blanaru,M.,Kremer,I.,2006.Controlled trial of d-cycloserine adjuvant therapyfor treatment-resistant major depressive disorder.[d-环丝氨酸辅助疗法治疗难治性重度抑郁症的对照试验]J.Affect.disorders.[情感障碍杂志]93,239-243]和PTSD[Olden,M.,Wyka,K.,Cukor,J.,Peskin,M.,Altemus,M.,Lee,F.S.,Finkelstein-Fox,L.,Rabinowitz,T.,Difede,J.,2017.Pilot study of a telehealth-delivered medicationaugmented exposure therapy protocol for PTSD.[PTSD远程医疗交付的药物增强暴露治疗方案的先导研究]J.Nerv.Ment.Dis.[神经精神疾病杂志]205,154-160]。然而，D-环丝氨酸的治疗经常遭受精神病理学刺激的困扰，例如焦虑、欣快、躁动、感觉刺激、头昏/嗜睡、疲劳、头痛和胃肠道不适[Schade,S.,Paulus,W.,2016.D-Cycloserine inneuropsychiatric diseases:a systematic review.[D-环丝氨酸在神经精神疾病中的应用：系统综述]Int.J.Neuropsychopharmacol[国际神经精神药理学杂志]
Urwyler等人,J.Med.Chem.[医学化学杂志]2009,52,5093-5107公开了对NMDA受体的甘氨酸位点具有亲和力的3-酰基氨基-2-氨基丙酸衍生物。
尽管在本领域存在长期的兴趣，但是对于开发有效、耐受性良好且有活性的药物来治疗抑郁症(特别是MDD和TRD)，显然仍存在未满足的需求。化合物的前药是NMDA受体的调节剂，与母体化合物相比，其渗透性和脑暴露得到改善，可以满足这种未满足的需求。
发明内容
针对此背景，本发明的目的是提供一种NMDA受体调节剂的前药。因此，本发明涉及具有式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R2选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R3选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4羟基卤代烷基、氰基、NRaRb、SRcRd、OR6、L-(OR6)和R7；
Ra和Rb独立地选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基；
Rc和Rd独立地选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基；
R6选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基和C1-4羟基卤代烷基；
L表示C1-3亚烷基；
R7选自由以下组成的组：C3-6环烷基，苯基，4、5或6元杂环和5或6元杂芳基，其中所述环烷基、苯基、杂环或杂芳基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；
R5选自由以下组成的组：C1-5烷基、C1-4卤代烷基、羟基烷基、C1-4羟基卤代烷基、R8、WR8、和W(OR9)；
W选自由以下组成的组：C1-3亚烷基和-CH2C(O)-；
R8选自由以下组成的组：C3-6环烷基，苯基，4、5或6元杂环和5或6元杂芳基，其中所述环烷基、苯基、杂环或杂芳基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；并且
R9是未被取代或被1、2或3个F取代的C1-3烷基。
在另外的方面中提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含具有式I的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂。
在另外的方面中提供了一种用于治疗抑郁症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的具有式I的化合物或其可接受的盐或药物组合物。
在另外的方面中提供了一种具有式I的化合物或其药学上可接受的盐，其作为药物使用。
在另外的方面中提供了一种具有式I的化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物，其用于在治疗抑郁症中使用。
在另外的方面中提供了具有式I的化合物或其药学上可接受的盐，或包含具有式I的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物在制备用于治疗抑郁症的药物中的用途。
在参考以下详细说明后，本发明的这些以及其他方面将变得显而易见。应理解的是，本文提到的本发明的多个方面、实施例、实施方式以及特征可以单独地或以任何组合要求保护。
在此所引用的所有文献(包括出版物、专利申请以及专利)均通过引用以其全部内容特此结合，并且引用的程度如同每个文献被单独地并且明确地指示通过引用结合并且以其全部内容在此阐述。
标题和副标题在此仅为方便而使用，并且不应以任何方式被解释为限制本发明。
附图说明
图1：化合物2c在MEST模型中的作用。
Y轴：估算的癫痫阈值(CC50)电流(mA)；X轴：最左边的柱：媒介物10％HPβCD；左起第二个柱：3mg/kg的化合物2c；左起第三个柱：10mg/kg的化合物2c；最右边的柱：30mg/kg的化合物2c。
指示了事后比较的显著性水平(相对于媒介物组)：*<0.05，**<0.01，***<0.001。
图2：化合物2c和氯胺酮在强迫游泳实验模型中的作用。
Y轴：静止时间(s)；X轴：最左边的柱：溶媒；左起第二个柱：氯胺酮(5mg/kg)；中间的柱：化合物2c(3mg/kg)；右起第二个柱：化合物2c(10mg/kg)；最右边的柱：化合物2c(30mg/kg)
指示了事后比较的显著性水平(相对于溶媒组)：*<0.05，**<0.01，***<0.001。
图3：化合物2c和氯胺酮在静息状态脑电图(rsEEG)中的作用。
Y轴：基线归一化功率(dB)；X轴：频率(Hz)；
图3a：在前肢皮质ML 0.7中获得的rsEEG；给药化合物2c后30-40min(20mg/kg，在10％HPβCD中)；氯胺酮(盐水中10mg/kg)；或10％HPβCD。
+：化合物2c：*：氯胺酮；Ο：10％HPβCD。
图3b：在前肢皮质ML-0.7中获得的rsEEG；给药化合物2c后30-40min(20mg/kg，在10％HPβCD中)；氯胺酮(盐水中10mg/kg)；或10％HPβCD。
+：化合物2c：*：氯胺酮；Ο：10％HPβCD。
图3c：在丘脑ML-0.7中获得的rsEEG；给药化合物2c后30-40min(20mg/kg，在10％HPβCD中)；氯胺酮(盐水中10mg/kg)；或10％HPβCD。
+：化合物2c：*：氯胺酮；Ο：10％HPβCD。
图3d：在颅顶点ML 2.0中获得的rsEEG；给药化合物2c后30-40min(20mg/kg，在10％HPβCD中)；氯胺酮(盐水中10mg/kg)；或10％HPβCD。
+：化合物2c：*：氯胺酮；Ο：10％HPβCD。
指示了事后比较的显著性水平(相对于溶媒组)：*<0.05，**<0.01，***<0.001。
图4：全身施用化合物1c后，在大鼠中的微透析研究。
X轴：时间(分钟)；Y轴：大鼠腹侧海马中被测化合物的浓度(μM)；Ο：化合物1c；·：化合物2c。
具体实施方式
本发明涉及具有式V的母体化合物的酯前药或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R2选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R3选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4羟基卤代烷基、氰基、NRaRb、SRcRd、OR6、L-(OR6)和R7；
Ra和Rb独立地选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基；
Rc和Rd独立地选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基；
R6选自由以下组成的组：氢、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基和C1-4羟基卤代烷基；
L表示C1-3亚烷基；并且
R7选自由以下组成的组：C3-6环烷基，苯基，4、5或6元杂环和5或6元杂芳基，其中所述环烷基、苯基、杂环或杂芳基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代。
诸位发明人观察到，与溶媒相比，本发明的前药的给药在强迫游泳实验和最大电休克阈值实验中给出了显著的响应。
诸位发明人观察到，与表3a和3b所示的本发明的母体化合物相比，本发明的前药具有改善的渗透性。
诸位发明人观察到，皮下施用剂量为20mg/kg的化合物2c在静息状态脑电图上显示出显著效果，并且显示出与氯胺酮所观察到的相似，如图3所示。
1.定义
如本文所用的术语“C1-3烷基”、“C1-4烷基”、“C1-5烷基”、“C1-6烷基”、“C1-7烷基”和“C1-8烷基”是指具有一到八个碳原子(包括端值)的直链(即，不分支的)或支链的饱和烃。此类基团的实例包括但不限于，甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、1-丁基、2-丁基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、正己基、异丙基、异丁基、异戊基、正庚基以及正辛基。
如本文所用的术语“烷氧基”是指具有式-OR’的部分，其中R’指如以上定义的烷基。特别地，“C1-4烷氧基”是指这样的部分，其中烷基部分具有1、2、3或4个碳原子。“C1-4烷氧基”的实例包括甲氧基、乙氧基、正丁氧基和叔丁氧基。
如本文所用的术语“烷氧基烷基”是指通过如本文所定义的烷基基团附接至母体分子部分的如本文所定义的烷氧基基团。实例包括但不限于甲氧基甲基和乙氧基甲基。
如在本发明的上下文中所使用，术语“卤基”与“卤素”可以互换使用并且是指由F、Cl、I和Br组成的组中的原子。
如本文所用的术语“C1-6氟烷基”是指具有从一个至六个(包含端值)碳原子的被一个或多个氟原子取代的直链或支链饱和烃。实例包括但不限于，三氟甲基、五氟乙基、1-氟乙基、1,2-二氟乙基以及3,4-二氟己基。
类似地，术语“C1-4氟烷基”是指具有从一个至四个(包含端值)碳原子、每个碳原子被一个或多个氟原子取代的直链或支链C1-4氟烷基的饱和烃。
如本文所用的术语“氰基”是指通过CN基团的碳原子附接到母体分子上的-CN基团。
术语“苯基”旨在表示苯基团，其中在附接点处除去一个H。
如本文所用的术语“杂芳基”是指芳族单环。芳族单环是含有至少一个独立地选自由N、O和S组成的组的杂原子(例如，独立地选自O、S和N的1、2、3或4个杂原子)的五元或六元环。五元芳族单环具有两个双键，并且六元芳族单环具有三个双键。杂芳基的代表性实例包括但不限于吲哚基、吡啶基(包括吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基)、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、吡咯基。
如本文所用的术语“杂环”或“杂环的”意指单环杂环、二环杂环、或三环杂环。单环杂环是含有至少一个独立地选自由O、N和S组成的组的杂原子的三元、四元、五元、六元、七元或八元环。三元或四元环含有零个或一个双键和一个选自由O、N和S组成的组的杂原子。五元环含有零个或一个双键和一个、两个或三个选自由O、N和S组成的组的杂原子。六元环含有零个、一个或两个双键和一个、两个或三个选自由O、N和S组成的组的杂原子。七元和八元环含有零个、一个、两个或三个双键和一个、两个或三个选自由O、N和S组成的组的杂原子。单环杂环的代表性实例包括但不限于吡咯烷基、氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、氮丙啶基、二氮杂环庚烷基、1,3-二噁烷基、1,3-二氧杂戊环基、1,3-二硫戊环基、1,3-二噻烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、异噁唑啉基、和异噁唑烷基。
如本文所用的术语“环烷基”是指含有3至10个碳原子、0个杂原子和0个双键的碳环系统。环烷基可以是单环或双环的，其中两个环是桥联的、稠合的或螺环的。环烷基的代表性实例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
对于本文所述的化合物，其基团和取代基可根据原子和取代基的所允许化合价进行选择，使得选择和取代产生稳定的化合物，例如，该化合物不会自发地经历转化，例如通过重排、环化、消除等。
除非本文另外指示或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中，术语“一个/种(a/an)”和“该(the)”以及类似指称对象的使用应解释为包括单数和复数二者。例如，除非另外指示，否则短语“该化合物”应理解为是指本发明的多种“化合物”或具体描述的方面。
除非另外陈述或与上下文明显矛盾，否则在此使用涉及一种或多种要素的术语如“包括(comprising)”、“具有(having)”、“含有(including)”或“包含(containing)”的本发明的任何一方面或多方面的描述，旨在提供对“由那一种或多种特定要素组成”、“基本上由那一种或多种特定要素组成”或“基本上包含那一种或多种特定要素”的本发明的类似一方面或多方面的支持(例如，除非另外陈述或与上下文明显矛盾，否则在此所述的包含特定要素的组合物应理解为也描述由那个要素组成的组合物)。
在本发明上下文中，术语NMDA受体部分甘氨酸激动剂旨在表示通过正构甘氨酸结合位点结合并激活NMDA受体并引起与甘氨酸相关的部分功效的化合物。
在本发明上下文中，术语化合物的“治疗有效量”意指足以在包括施用所述化合物的治疗性介入中治愈、缓解或部分阻滞给定疾病(例如抑郁症)及其并发症的临床表现的量。将足以实现以上的量定义为“治疗有效量”。用于各目的有效量将取决于疾病(例如抑郁症)或损伤的严重程度以及受试者的体重及一般状态。将理解的是，可以使用常规实验确定适当剂量，例如通过构建值矩阵并测试矩阵中的不同点来实现，这均在受训医师的普通技术内。
在本发明上下文中，术语“治疗(treatment和treating)”意指管理并护理患者用于抗击疾病的目的。该术语意图包括对患者所患的给定疾病(例如抑郁症)的治疗的完整范围，例如施用活性化合物以缓解症状或并发症、以延迟疾病(例如抑郁症)的进展、以缓解或减轻症状及并发症、和/或以治愈或消除抑郁疾病。欲治疗的患者优选是哺乳动物，特别是人类。在本发明上下文中，“疾病”可以与障碍(disorder)、病症(condition)、功能障碍(malfunction)、功能异常(dysfunction)等同义使用。
在本发明上下文中，术语“前药”或“前药衍生物”指示在施用至活的受试者(例如哺乳动物，优先地人类)后，在体内转化为药理学活性部分的化合物。该转化优选地发生在哺乳动物体内，例如在小鼠、大鼠、狗、小型猪、兔、猴和/或人类体内。
在本发明上下文中，术语“母体化合物”和“母体分子”指示在相应前药的转化中获得的或作为活性部分施用至患者的药理学活性部分。例如，“母体化合物”应理解为具有式V的化合物，以化合物1a、1b、1c、1d、1e、1f、1g、1h、1i、1j、1k、1l、1m、1n、1o或1p为例。
2.本发明的实施例
在下文披露本发明的实施例。第一实施例表示为E1，第二实施例表示为E2，依此类推。
E1.一种具有式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R2选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R3选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4羟基卤代烷基、氰基、NRaRb、SRcRd、OR6、L-(OR6)和R7；
Ra和Rb独立地选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基；
Rc和Rd独立地选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基；
R6选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基和C1-4羟基卤代烷基；
L表示C1-3亚烷基；
R7选自由以下组成的组：C3-6环烷基，苯基，4、5或6元杂环和5或6元杂芳基，其中所述环烷基、苯基、杂环或杂芳基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；
R5选自由以下组成的组：C1-5烷基、C1-4卤代烷基、羟基烷基、C1-4羟基卤代烷基、R8、WR8、和W(OR9)；
W选自由以下组成的组：C1-3亚烷基和-CH2C(O)-；
R8选自由以下组成的组：C3-6环烷基，苯基，4、5或6元杂环和5或6元杂芳基，其中所述环烷基、苯基、杂环或杂芳基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；并且
R9是未被取代或被1、2或3个F取代的C1-3烷基。
E2.根据实施例E1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自由以下组成的组：氢、卤素和C1-4烷基；
R2选自由以下组成的组：氢、卤素和C1-4烷基；
R3选自由以下组成的组：氢、卤素和C1-4烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、OR6和R7；
R6选自由以下组成的组：氢、C1-4烷基和C1-4卤代烷基；
R7选自由以下组成的组：C3-6环烷基和苯基，其中所述环烷基和苯基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；
R5选自由以下组成的组：C1-5烷基、R8、WR8、和W(OR9)；
W是C1-3亚烷基；
R8选自由以下组成的组：C3-6环烷基、苯基，其中所述环烷基和苯基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；并且
R9是未被取代或被1、2或3个F取代的C1-3烷基。
E3.根据实施例E1至E2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是氢。
E4.根据实施例E1至E3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是氢。
E5.根据实施例E1至E4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自由以下组成的组：氢、C1-4烷基和卤素。
E6.根据实施例E5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自由以下组成的组：氢、氟和甲基。
E7.根据实施例E6所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是氢。
E8.根据实施例E1至E2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1、R2和R3是氢。
E9.根据实施例E1至E8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是C1-4烷基。
E10.根据实施例E1至E9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是甲基。
E11.根据实施例E1至E8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是C1-4氟烷基。
E12.根据实施例E1至E8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是卤素。
E13.根据实施例E1至E8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是未被取代或被C1-3烷基取代的苯基。
E14.根据实施例E1至E8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是C1-4烷氧基。
E15.根据实施例E1至E7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自由以下组成的组：C1-4烷基，C1-4氟烷基、NRaRb、SRcRd、C1-4羟基烷基C1-4烷氧基、卤素、以及未被取代或被乙基取代的苯基。
E16.根据实施例E15所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自由以下组成的组：甲基、乙基、异丙基、环丙基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、异丙氧基、乙氧基、甲氧基、溴、氟、二甲氨基、甲硫基和乙基苯基。
E17.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式Ia：
E18.根据实施例E1至E17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、-CH2-环丙基、2-甲氧基乙基、异戊基、苄基、环己基、2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基和苯基。
E19.根据实施例E1至E18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是C1-5烷基。
E20.根据实施例E1至E19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、丙基、丁基和异丙基。
E21.根据实施例E1至E20中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、丙基和丁基。
E22.根据实施例E1至E21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自由以下组成的组：甲基和乙基。
E23.根据实施例E1至E22中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是甲基。
E24.根据实施例E1至E22中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是乙基。
E25.根据实施例E1至E24中任一项所述的化合物，所述化合物选自由以下组成的组：
(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙基甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯；
(2-氧代-2-吡咯烷-1-基-乙基)(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯；
(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基-噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；以及
(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；或其药学上可接受的盐。
E26.根据实施例E1所述的化合物，所述化合物选自由以下组成的组：
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙基甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯；以及
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯；或其药学上可接受的盐。
E27.根据实施例E1所述的化合物，所述化合物选自由以下组成的组：
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯；以及
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯；或其药学上可接受的盐。
E28.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实施例E1至E27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂。
E29.根据实施例E1至E27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于作为药物使用。
E30.根据实施例E1至E28中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物，用于在治疗抑郁症中使用。
E31.根据实施例E30所述的化合物或药物组合物，其中所述抑郁症选自：重度抑郁症；难治性抑郁症；紧张性抑郁症；忧郁性抑郁症；非典型抑郁症；精神病性抑郁症；产期抑郁症；产后抑郁症；双相抑郁症，包括I型双相抑郁症和II型双相抑郁症；以及轻度、中度或重度抑郁症。
E32.根据实施例E1至E28中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物，用于在治疗选自自杀意念、双相障碍(包括双相抑郁症)、强迫症和癫痫持续状态的病症中使用。
E33.一种治疗抑郁症的方法，所述方法包括将治疗有效量的根据实施例E1至E28中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物施用至有需要的患者(例如人类患者)。
E34.根据实施例E33所述的治疗抑郁症的方法，其中所述抑郁症选自：重度抑郁症；难治性抑郁症；紧张性抑郁症；忧郁性抑郁症；非典型抑郁症；精神病性抑郁症；产期抑郁症；产后抑郁症；双相抑郁症，包括I型双相抑郁症和II型双相抑郁症；以及轻度、中度或重度抑郁症。
E35.根据实施例E1至E28中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物在制备用于治疗抑郁症的药物中的用途。
E36.根据实施例E35所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述抑郁症选自由以下组成的组：重度抑郁症；难治性抑郁症；紧张性抑郁症；忧郁性抑郁症；非典型抑郁症；精神病性抑郁症；产期抑郁症；产后抑郁症；双相抑郁症，包括I型双相抑郁症和II型双相抑郁症；以及轻度、中度或重度抑郁症。
对本发明所涵盖的化合物的提及包括本发明的化合物的游离物质、本发明的化合物的药学上可接受的盐，例如酸加成盐或碱加成盐、以及本发明的化合物及其药学上可接受的盐的多晶形和非结晶形式。此外，本发明的化合物及其药学上可接受的盐能潜在地以未溶剂化形式存在以及以与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在。本发明涵盖了溶剂化和未溶剂化形式二者。
可以通过使用作为
的一部分的结构＝名称(Struct＝Name)命名算法对化合物名称进行指定。
应该理解的是，本发明的化合物可具有互变异构形式、立体异构体、几何异构体，并且这些也构成本发明的实施例。
可以通过已知方法将外消旋形式拆分为旋光对映体，例如通过用光学活性酸分离其非对映异构盐并且通过用碱处理来离析光学活性胺化合物。可以例如通过分步结晶来实现此类非对映异构体盐的分离。适合于此目的的光学活性酸可以包括但不限于d-酒石酸或l-酒石酸、扁桃酸或樟脑磺酸。用于将外消旋体拆分为旋光对映体的另一种方法是基于在光学活性基质上的层析。本发明的化合物还可以通过从手性衍生化试剂(例如，手性烷基化或酰基化试剂)形成并层析分离非对映异构体衍生物，随后切割手性助剂来拆分。以上方法中的任一种都可以应用于拆分本发明的化合物的旋光对映体自身或应用于拆分合成的中间体的旋光对映体，然后可以通过在此描述的方法将其转化为光学拆分的终产物，该终产物是本发明的化合物。可以使用本领域的普通技术人员已知的用于拆分光学异构体的另外的方法。此类方法包括由J.Jaques、A.Collet和S.Wilen在“Enantiomers,Racemates,andResolutions[对映异构体、外消旋体与拆分]”，John Wiley and Sons[约翰威利父子公司]，纽约，1981中讨论的那些。光学活性化合物还可以从光学活性起始材料制备。
本发明还包括同位素标记的化合物，其与式I所要求保护的化合物相似，其中一个或多个原子由相同元素的原子表示，其原子质量或质量数与自然界中通常发现的原子质量或质量数不同(例如2H、3H、11C、13C、15N、18F等)。特别提及2H取代的化合物，即其中一个或多个H原子由氘表示的化合物。
在本发明的一个实施例中，具有式I的化合物的一个或多个氢原子由氘表示。应认识到，在大多数合成化合物中，元素以天然同位素丰度存在并导致氘的固有掺入。但是，氢同位素(如氘)的天然同位素丰度相对于本文所述化合物的稳定同位素取代程度而言并不重要(约0.015％)。因此，如本文所使用的，在一个位置处原子指定为氘表明氘的丰度显著大于氘的天然丰度。任何未被指定为特定同位素的原子旨在表示该原子的任何稳定同位素，如对于本领域普通技术人员显而易见的。
在一个实施例中，化合物中指定为“D”的位置具有在该位置处大于约60％，如在该位置处大于约70％，如在该位置处大于约80％，如在该位置处大于约85％的最小氘掺入。在另外的实施例中，化合物中指定为“D”的位置具有在该位置处大于约90％，如在该位置处大于约95％，如在该位置处大于约97％，如在该位置处大于约99％的最小氘掺入。
a.药学上可接受的盐
本发明的化合物(母体化合物及其各自的前药)通常以游离物质形式或以其药学上可接受的盐形式利用。当本发明的化合物含有游离碱时，此类盐可以以常规方式通过用摩尔当量的药学上可接受的酸处理本发明的化合物的游离碱的溶液或悬浮液来制备。适合的有机酸及无机酸的代表性实例描述于下文。
在本发明上下文中的药学上可接受的盐旨在指示无毒的，即生理上可接受的盐。
术语“药学上可接受的盐”包括在母体分子中的氮原子上，与无机酸和/或有机酸形成的盐。所述酸可以选自例如盐酸、氢溴酸、磷酸、亚硝酸、硫酸、苯甲酸、柠檬酸、葡糖酸、乳酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、乙酸、丙酸、草酸、马来酸、富马酸、谷氨酸、焦谷氨酸、水杨酸、糖精、以及磺酸，例如甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、和苯磺酸。
在本发明的实施例中，药学上可接受的盐是氯化氢盐。
在本发明的实施例中，药学上可接受的盐是溴化氢盐。
术语药学上可接受的盐还包括在本发明的化合物的酸基团上，与无机碱和/或有机碱形成的盐。所述碱可以选自例如碱金属碱，例如氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾，碱土金属碱，例如氢氧化钙和氢氧化镁，以及有机碱，例如三甲胺。
有用于形成药学上可接受的盐的酸和碱的另外实例可以例如在Stahl和Wermuth(编辑)“Handbook of Pharmaceutical salts.Properties,selection,and use[药用盐类手册-性质、选择和使用]”，威利-VCH出版社(Wiley-VCH)，2008中找到。
3.用于治疗的病症
本发明涵盖了本发明的化合物用于治疗以上列出的所有疾病和障碍的用途。
如上所述，本发明可用于治疗抑郁症和抑郁障碍。因此，在一个实施例中，本发明的化合物用于治疗抑郁症。
抑郁症的诊断通常是由精神科医生或其他精神健康专业人员进行的临床评估后得出的。美国精神病学协会出版的DSM(Diagnostic and Statistical Manual of MentalDisorders,Fourth Edition[精神障碍诊断和统计手册第四版](DSM IV))和ICD(ICD-10:International Statistical Classification of Diseases and Related HealthProblems-10th Revision[ICD-10：疾病和相关健康问题的国际统计分类-第10版]，由世界卫生组织定期发布)或任何其他精神病分类系统概述了两套最受认可的重度抑郁症和其他抑郁障碍或心境障碍的诊断标准。
抑郁症的体征和症状是例如情绪低落、失去兴趣(快感缺失)、体重或食欲变化、睡眠问题、精神运动活动(客观或主观)、易疲劳、无价值感、注意力难以集中、自杀意念、信心丧失、性功能障碍和自责。
因此在本发明的实施例中，用本发明所述化合物进行的治疗可预防、改变、减少或减轻一种或多种抑郁症的体征和症状，所述抑郁症的体征或症状选自由以下组成的组：情绪低落、失去兴趣(快感缺失)、体重或食欲变化、睡眠问题、精神运动活动(客观或主观)、易疲劳、无价值感、注意力难以集中、自杀意念、信心丧失、性功能障碍和自责。
技术人员熟悉用于测量抑郁症状改善的各种测试。测量改善的测试实例是但不限于HAM-D或MADRS量表。
在一个实施例中，所述抑郁症是重度抑郁症。
在另外的实施例中，所述抑郁症是难治性抑郁症。
在另外的实施例中，所述抑郁症选自：重度抑郁症；难治性抑郁症；紧张性抑郁症；忧郁性抑郁症；非典型抑郁症；精神病性抑郁症；产期抑郁症；产后抑郁症；双相抑郁症，包括I型双相抑郁症和II型双相抑郁症；以及轻度、中度或重度抑郁症。
在本发明的实施例中，本发明的化合物用于治疗疼痛[Expert Rev ClinPharmacol.[临床药理学专家综述]2011年5月1日；4(3):379-388]。
在另外的实施例中，所述疼痛是神经性疼痛。
临床前动物模型通过使用NDMA甘氨酸位点调节剂已经证明了促进认知和抗抑郁样作用[Peyrovian等人,Progress in Neuropsychopharmacology&BiologicalPsychiatry.[神经心理药理学和生物精神病学进展]92(2019)387-404]。
因此在本发明的实施例中，具有式I的化合物或其药学上可接受的盐用于在治疗选自自杀意念、双相障碍(包括双相抑郁症)、强迫症和癫痫持续状态的病症中使用。
在另外的实施例中，所述病症是自杀意念。
在本发明的实施例中，本发明的化合物用于治疗神经障碍或神经精神障碍。
a.组合治疗
在本发明的一个实施例中，本发明的化合物作为唯一活性化合物用作独立治疗(stand-alone treatment)。在本发明的另一个实施例中，本发明的化合物可以与在障碍(例如抑郁症)的治疗中有用的其他药剂组合使用。如本文中在本发明的方法(包括组合施用治疗有效量的本发明的化合物和另一种化合物，该化合物在治疗神经退行性疾病或障碍的治疗中有用)的上下文中使用的术语“组合使用”、“与……组合”以及“……的组合”等旨在是指同时或者顺序地(以任何顺序)与所述其他化合物一起施用本发明的化合物。
这两种化合物可以同时施用或者在这两种化合物的施用之间有时间间隔的相继施用。可以作为同一药物制剂或组合物的一部分、或在分开的药物制剂或组合物中，施用这两种化合物。可以在同一天或不同天施用这两种化合物。它们可以通过同一个途径施用，例如通过口服施用，通过储库(depot)型，通过肌内注射或静脉注射；或者通过不同途径施用，其中一种化合物例如口服施用或通过储库放置，并且另一种化合物例如注射给药。可以通过相同给药方案或间隔施用这两种化合物，例如每天、每周、或每月一次或两次；或可以通过不同给药方案施用这两种化合物，例如其中每天一次施用一种化合物，并且每天或每周或每月两次施用另一种化合物。
在一些情况下，当用本发明的化合物开始治疗时，待治疗的患者可能已经用在抑郁症的治疗中有用的一种或多种其他化合物进行治疗。在其他情况下，当用在抑郁症或精神病的治疗中有用的一种或多种其他化合物开始治疗时，该患者可能已经用本发明的化合物进行治疗。在其他情况下，用本发明的化合物的治疗和用在精神病的治疗中有用的一种或多种其他化合物的治疗同时开始。
b.用于组合治疗的化合物
可以有利地与本发明的化合物组合的治疗活性化合物的实例包括镇静剂或催眠药，例如苯并二氮
类；抗惊厥药，例如拉莫三嗪、丙戊酸、托吡酯、加巴喷丁、卡马西平；情绪稳定剂，例如锂；多巴胺能药物，例如多巴胺激动剂和L-Dopa；治疗ADHD的药物，例如托莫西汀；精神兴奋剂，例如莫达非尼、氯胺酮、哌醋甲酯和苯丙胺；其他抗抑郁药，例如米氮平、米安色林、伏替西汀、依地普仑(cipralex)和安非他酮；激素类，例如T3、雌激素、DHEA和睾酮；非典型抗精神病药，例如奥氮平、依匹哌唑和阿立哌唑；典型抗精神病药，如氟哌啶醇；用于治疗阿尔茨海默氏病的药物，例如胆碱酯酶抑制剂和盐酸美金刚，叶酸；S-腺苷基-甲硫氨酸；免疫调节剂，例如干扰素；阿片类，例如丁丙诺啡；血管紧张素II受体1拮抗剂(AT1拮抗剂)；ACE抑制剂；他汀类；和α1肾上腺素拮抗剂，例如哌唑嗪。
c.施用途径
包含本发明的化合物(作为唯一活性化合物或与另一种活性化合物组合)的药物组合物可以被具体配制用于通过任何适合途径施用，例如经口、经直肠、经鼻、经颊、舌下、经肺、经皮和非经肠(例如皮下、肌内和静脉内)途径。
将领会的是，该途径将取决于待治疗的受试者的一般状况和年龄、待治疗的病症的性质以及活性成分。
d.剂量
在一个实施例中，每天以从约0.5mg/kg体重至约50mg/kg体重的量施用本发明的化合物。具体而言，每日剂量可以处于每天1mg/kg体重至约30mg/kg体重的范围内。精确剂量将取决于施用频率及模式，待治疗的受试者的性别、年龄、体重及一般状况，待治疗的病症、任何待治疗的伴随疾病的性质及严重程度，所希望的治疗效果以及本领域的普通技术人员已知的其他因素。
在一个实施例中，施用频率是每天1、2、3、4或5次。
在一个实施例中，施用频率是每周一次。
在一个实施例中，施用频率是每周两次。
针对成人的典型口服剂量在以下范围内：500-3000mg/天的本发明的化合物，例如700-2800mg/天，例如1000-2000mg/天或1200-1700mg/天。方便地，将本发明的化合物以单位剂型施用，该单位剂型以如下的量包含所述化合物：约100至1000mg，例如100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、750mg或多达1000mg的本发明化合物。
在一个实施例中，施用频率是每天1、2、3、4或5次。
在一个实施例中，施用频率是每周一次。
在一个实施例中，施用频率是每周两次。
针对成人的典型IV剂量在以下范围内：20-300mg/天的本发明的化合物，例如50-200mg/天，例如70-150mg/天或75-125mg/天。方便地，将本发明的化合物以单位剂型施用，该单位剂型以如下的量包含所述化合物：约10至300mg，例如10mg、20mg、50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg的本发明的化合物。
在一个实施例中，施用频率是每周一次。
在一个实施例中，施用频率是每周两次。
4.药物制剂和赋形剂
在下文中，术语“赋形剂”或“药物上可接受的赋形剂”是指药物赋形剂，包括但不限于填充剂、抗粘合剂、粘合剂、包衣、着色剂、崩解剂、调味剂、助流剂、润滑剂、防腐剂、吸着剂、甜味剂、溶剂、溶媒和佐剂。
本发明还提供了包含本发明的化合物(例如在本文实验部分中所披露的化合物之一)的药物组合物。本发明还提供了一种用于制造包含本发明的化合物的药物组合物的方法。根据本发明的药物组合物可以用药学上可接受的赋形剂根据常规技术进行配制，这些常规技术例如在以下中披露的那些：Remington,“The Science and Practice ofPharmacy[药学科学与实践]”,第22版(2013),由Allen,Loyd V.,Jr.编辑。
用于口服施用的药物组合物包括固体口服剂型，例如片剂、胶囊、粉剂以及颗粒剂；和液体口服剂型，例如溶液、乳剂、悬浮液和糖浆剂以及待溶解或悬浮在合适液体中的粉剂和颗粒剂。
固体口服剂型可以离散单位形式呈现(例如片剂或硬胶囊或者软胶囊)，各自含有预定量的活性成分，并且优选地包括一种或多种适合的赋形剂。适当时，根据本领域中熟知的方法，这些固体剂型可以制备为具有包衣，例如肠溶衣，或着它们可以被配制以提供活性成分的改进释放，例如延迟或延长释放。适当时，该固体剂型可以是在唾液中崩解的剂型，例如口腔分散片剂。
适于固体口服制剂的赋形剂的实例包括但不限于：微晶纤维素、玉米淀粉、乳糖、甘露醇、聚维酮、交联羧甲纤维素钠、蔗糖、环糊精、滑石、明胶、果胶、硬脂酸镁、硬脂酸和纤维素的低级烷基醚。类似地，固体制剂可以包括本领域已知的用于延迟或延长释放制剂的赋形剂，例如单硬脂酸甘油酯或羟丙甲纤维素。如果将固体材料用于口服施用，则该制剂可以例如通过将活性成分与固体赋形剂混合，并且随后在常规压片机中压缩该混合物来制备；或可以例如将该制剂以例如粉剂、丸剂或微型片剂形式置于硬胶囊中。固体赋形剂的量将广泛变化，但将典型地在每剂量单位从约25mg至约1g的范围。
液体口服剂型能以例如酏剂、糖浆剂、口服滴剂或充液胶囊呈现。液体口服剂型还能以用于在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液的粉剂呈现。适合于液体口服制剂的赋形剂的实例包括，但不限于乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、泊洛沙姆、山梨醇、聚山梨醇酯、甘油单酯和甘油二酯、环糊精、椰子油、棕榈油和水。液体口服剂型可以例如通过将活性成分溶解或悬浮在水性或非水性液体中，或通过将活性成分掺入水包油或油包水液体乳液中来制备。
可以将另外的赋形剂(例如，着色剂、调味剂和防腐剂等)用于固体和液体口服制剂中。
用于非经肠施用的药物组合物包括：用于注射或输注的无菌水性及非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液、用于注射或输注的浓缩物以及欲在使用之前在用于注射或输注的无菌溶液或分散液中复水的无菌粉剂。适合于非经肠制剂的赋形剂的实例包括，但不限于水、椰子油、棕榈油和环糊精溶液。必要时应该适当缓冲水性制剂，并且用足够盐水或葡萄糖使水性制剂变得等张。
其他类型的药物组合物包括栓剂、吸入剂、乳膏剂、凝胶剂、皮肤贴片、植入物和用于经颊或舌下施用的制剂。
用于任何药物制剂的赋形剂必须符合预期的施用途径并且与活性成分相容。
5.本发明的化合物
表1：本发明的例示性母体化合物
表2：本发明的例示性前药
6.实验部分
a.本发明的化合物的制备
可以通过在以下反应方案1-18和实例中所概述的方法制备本发明的具有通式I的化合物(其中R1、R2、R3、R4和R5如上所定义)。在所描述的方法中，使用其本身为本领域的熟练化学师已知或对本领域的普通技术人员而言可以是显而易见的变体或修饰是可能的。此外，根据以下反应方案和实例，用于制备本发明的化合物的其他方法对本领域的普通技术人员而言将是容易显而易见的。
这些方案可以涉及在合成本发明的化合物的过程中使用选择性保护基。本领域的普通技术人员将能够选择用于具体反应的适当保护基团。在下文描述的合成方法中，对于例如氨基、酰胺基、羧酸以及羟基基团的取代基而言，掺入保护和脱保护策略可以是必要的，以合成具有式I的化合物。此类基团的保护和脱保护的方法在本领域是熟知的，并且可以发现于T.Green等人，Protective Groups in Organic Synthesis[有机合成中的保护基团]，1991，第2版，John Wiley&Sons[约翰威利父子公司]，纽约中。
本部分中的这些方案是有用的合成本发明化合物的方法的代表。它们不旨在以任何方式约束本发明的范围。
方案1
具有通式I的化合物(方案1)可以通过标准的脱保护程序由具有通式IV的化合物制备。例如，具有通式I的化合物(方案1)可以由具有通式IV的化合物制备，其中Pg1是N-苄氧羰基基团(Cbz)，并且R5的定义如通式I中所示。
具有通式IV的化合物可以通过具有通式III的化合物与具有通式II的羧酸(或其盐)通过标准的肽偶联来制备，例如使用O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐，在溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺)中，在碱(例如N,N-二异丙基乙胺)存在下。
方案2
具有通式I的化合物(方案2)可以通过标准的酯化程序由具有通式V的化合物制备。例如，具有通式I的化合物(方案2)可以由具有通式V的化合物通过在甲醇中用试剂(如亚硫酰氯)处理(R5＝Me)来制备。具有通式V的化合物可以通过标准的脱保护程序由具有通式IV的化合物制备。例如，可以使用如乙酸中的HBr的条件，由具有通式IV的化合物制备具有通式V的化合物(方案2)，其中Pg1是Cbz并且Pg2是苄基。
具有通式IV的化合物可以通过具有通式III的化合物与具有通式II的羧酸(或其盐)通过标准的肽偶联来制备，例如使用O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐，在溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺)中，在碱(例如N,N-二异丙基乙胺)存在下。
方案3
具有通式II的噻吩并[3,2-b]吡啶-2-羧酸(或其盐)(方案3)可以通过在溶剂例如(四氢呋喃(THF))中使用碱(例如二异丙基氨基锂(LDA))，在低温下去质子化，然后加入二氧化碳VII，并使反应混合物达到室温而从具有通式VI的噻吩并[3,2-b]吡啶获得。
方案4
具有通式VI的噻吩并[3,2-b]吡啶(其中R4是Cl)是可商购的。具有通式VI的噻吩并[3,2-b]吡啶(其中R4是Br)(方案4)可以通过在高温下用如氧溴化磷(V)VIII的试剂处理化合物VIa来获得。
方案5
具有通式VIc的噻吩并[3,2-b]吡啶(方案5)可以通过在高温下在水中在例如HI的反应条件下处理化合物VIb来获得。
方案6
具有通式VI的噻吩并[3,2-b]吡啶(方案6)(其中R4是C1-6烷氧基)可以通过在反应条件下(例如在醇ROH X存在下，在高温下用碱(例如钠)去质子化)处理化合物VIb来获得。
方案7
具有通式VI的噻吩并[3,2-b]吡啶(方案7)(其中R4可以是如通式I所述的三氟甲基)可以通过在反应条件下(例如在金属催化剂(如碘化亚铜)，试剂(例如氟化钾)和全氟化前体(例如三甲基(三氟甲基)硅烷(TMSCF3)XI的存在下)处理化合物VIc来获得。
方案8
具有通式VI的噻吩并[3,2-b]吡啶(方案8)(其中R4可以是如通式I所述的-CH2OH)可以通过用还原剂(例如硼氢化钠)处理而从化合物XIII获得。化合物XIII可以在反应条件下(例如在甲醇中的盐酸)从化合物XII获得。化合物XII可通过在金属催化剂(如[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)，与二氯甲烷和双(二苯亚甲基丙酮)钯和锌形成的复合物)的存在下使用试剂(如氰化锌)从化合物VIb获得。
方案9
具有通式II的噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(或其盐)(方案9)(其中R4可以如通式I所述)可以由相应的酯通过在水性条件下在本领域化学师已知的各种条件下水解来制备(其中Pg可以为甲基)，如具有通式XVII的化合物中。具有通式XVII的化合物可以在反应条件(例如氢化)下，在催化剂(例如碳载钯)的存在下，从具有通式XVI的化合物获得。具有通式XVI的化合物可通过使具有通式XIV的化合物与具有通式XV的试剂在反应条件下(例如在催化剂(如[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)，与二氯甲烷和碱(如碳酸钾)形成的复合物)的存在下)反应而获得。具有通式XIV的化合物(其中Pg为甲基)可以通过在甲醇作为溶剂中用试剂(如亚硫酰氯)处理而从具有通式IIa的化合物获得。
方案10
具有通式II的化合物(或其盐)(其中R4如通式I所述)(方案10)可以在催化剂(如[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)，与二氯甲烷或[1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)和碱(如碳酸钠)形成的复合物)的存在下，使具有通式IIb的化合物与具有通式XVIII的试剂反应而获得。
方案11
具有通式II的噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(或其盐)(方案11)(其中R4可以是如通式I所述的二氟甲基)可以由相应的酯通过在水性条件下在本领域化学师已知的各种条件下水解来制备(其中Pg可以为甲基)如具有通式XX的化合物中。具有通式XX的化合物(其中R4可以是二氟甲基)可以通过用试剂(如(二乙基氨基)三氟化硫)处理具有通式XIX的化合物来制备。具有通式XIX的化合物可以在臭氧存在下，然后用试剂(如三苯基膦)处理由具有通式XVI的化合物制备。
方案12
具有通式II的噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(或其盐)(方案12)(其中R1是氢)可以由相应的酯通过在本领域化学师已知的水性条件下水解来制备(其中Pg可以为甲基)，如具有通式XXIII的化合物中。具有通式XXIII的化合物可以通过在碱(例如三乙胺)存在下使具有通式XXI的醛与具有通式XXII的试剂反应来制备。
方案13
具有通式XXI的醛(方案13)可以使用还原剂(例如二异丁基氢化铝)由具有通式XXVI的化合物制备。具有通式XXVI的化合物可通过使具有通式XXIV的化合物(其中X是卤素(例如碘))与试剂(例如XXV)在催化剂(如[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)，与二氯甲烷和碱(如磷酸钾)形成的复合物)的存在下反应而获得。具有通式XXIV的化合物可以由具有通式XXIII的化合物通过使用碱(例如二异丙基氨基锂)，然后加入亲电子卤素物质(例如分子碘)进行去质子化来制备。
方案14
具有通式XXI的醛(方案14)可以在反应条件下(例如在臭氧存在下)，然后用试剂(如三苯基膦)处理，由具有通式XXX的化合物制备。具有通式XXX的化合物可通过使具有通式XXIX的化合物与具有通式XVa的试剂在反应条件下(例如在催化剂(如[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)，与二氯甲烷和碱(如碳酸钾)形成的复合物)的存在下)反应而获得。具有通式XXIX的化合物可通过使具有通式XXVIII的化合物(其中X是卤素(例如碘))与试剂(例如XXV)在催化剂(如[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)，与二氯甲烷和碱(如碳酸钾)形成的复合物)的存在下反应而获得。具有通式XXVIII的化合物可以由具有通式XXVII的化合物通过使用碱(例如二异丙基氨基锂)然后加入亲电子卤素物质(例如分子碘)进行去质子化来制备。
方案15
具有通式IV的化合物(其中R4＝-CH2F)(方案15)可以使用试剂(如(二乙基氨基)三氟化硫)由具有通式IV的化合物(其中R4＝-CH2OH)制备。
方案16
具有通式V的化合物(方案16)可以在反应条件(例如氢化)下，在催化剂(例如碳载钯)的存在下，从具有通式XXXII的化合物制备。具有通式XXXII的化合物可以通过使受保护的胺(例如IIIa)与具有通式XXXI的羧酸通过标准的肽偶联方法反应来制备，例如使用O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐，在溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺)中，在碱(例如N,N-二异丙基乙胺)存在下。具有通式XXXI的化合物可以在反应条件下(例如在催化剂(如[1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)和碱(如碳酸钾)的存在下))，使具有通式IIa的化合物(其中X为Cl或Br)与具有通式XVb的试剂反应而获得。
方案17
具有通式III的化合物(其中R5如本文所定义的)(方案17)可以通过使用标准的酯化方法使具有通式XXXIII的羧酸与具有通式XXXIV的醇反应来制备。
方案18
具有通式III的化合物(其中R5如本文所定义的)(方案18)可以通过对具有通式XXXVI的化合物(其中Pg3可以是叔丁氧基羰基保护基团(Boc)，而Pg1可以是氨基甲酸苄氧基酯(Cbz))进行脱保护来制备。具有通式XXXVI的化合物(其中R5如通式I所定义)可以通过使用标准的酯化方法使具有通式XXXV的羧酸与具有通式XXXIV的醇反应来制备。具有通式XXXV的化合物(其中Pg3可以是叔丁氧基羰基保护基团(Boc))可以通过使用标准方法通过保护具有通式XXXIII的化合物来制备。
b.通用方法
LC-MS方法
使用以下鉴定的方法之一获得分析型LC-MS数据。
方法AA：使用沃特斯Acquity UPLC-MS。柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7μm；2.1x50mm；柱温：60℃；溶剂系统：A＝水/三氟乙酸(99.965:0.035)和B＝乙腈/水/三氟乙酸(94.965:5:0.035)；方法：线性梯度洗脱，其中A:B＝90:10，在1.0分钟内至0:100并且流速为1.2mL/min。
方法BB：使用沃特斯Acquity UPLC-MS。柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7μm；2.1x50mm；柱温：60℃；溶剂系统：A＝水/三氟乙酸(99.5:0.5)和B＝乙腈/水/三氟乙酸(94.965:5:0.035)；方法：线性梯度洗脱，其中A:B＝90:10，在1.0分钟内至0:100并且流速为1.2mL/min。
制备型HPLC
制备型HPLC(方法A)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,SHIMADZU LC-8ALCMS2010；柱：YMC-Actus Triart C18 150*30 5μm；流动相A：水(0.05％HCl v/v)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从5％至35％，然后保持在100％持续3min；流速(ml/min)：25；柱温：35℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法B)：仪器：Gilson GX-215,Gilson 322泵,Gilson 156UV检测器；柱：YMC-Actus Triart C18 150*30 5μm；流动相A：水(0.05％HCl v/v)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从0％至28％，然后保持在100％持续3min；流速(ml/min)：25；柱温：40℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法C)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson322泵,Gilson156UV检测器；柱：Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相A：水(0.05％氢氧化氨v/v)；流动相B：MeCN；梯度：在10min内从42％至72％，然后保持在100％持续2.5min；流速(ml/min)：25；柱温：25℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法D)：仪器：Gilson GX-281,Gilson 322泵,Gilson 156UV检测器；柱：Gemini 150*25mm*5μm；流动相A：水(0.05％氢氧化氨v/v)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从52％至82％，然后保持在100％持续2min；流速(ml/min)：25；柱温：30℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法E)：仪器：Gilson GX-215,Gilson 322泵,Gilson 156UV检测器；柱：Venusil ASB Phenyl 250*50 10μm；流动相A：水(0.05％HCl)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从15％至45％，然后保持100％B持续1min；流速(mL/min)：25；柱温：40℃-，波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法F)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson 322泵,Gilson156UV检测器；柱：Venusil ASB Phenyl 250*50mm*10μm；流动相A：水(0.05％HCl)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从18％至48％，然后保持在100％持续1min；流速(ml/min)：25；柱温：40℃；波长：220nm，254nm。
制备型HPLC(方法G)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson 322泵,Gilson156UV检测器；柱：Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相A：水(0.05％氢氧化氨v/v)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从64％至94％，然后保持在100％持续2.5min；流速(ml/min)：25；柱温：25℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法H)：HPLC仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson 322泵,Gilson 156UV检测器；柱：Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相：A：水(0.05％氢氧化氨v/v)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从34％至64％，然后保持在100％持续2.5min；流速(ml/min)：25；柱温：25℃；波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法I)：仪器：Gilson GX-215,Gilson 322泵,Gilson 156UV检测器；柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：A：水(10mM NH4HCO3)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从21％至51％，然后保持在100％持续2.5min；流速(ml/min)：25；柱温：30℃；波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法J)：仪器：Gilson GX-215液体处理器,Gilson 322泵,Gilson156UV检测器；柱：DYA-5C18 150*25mm*5μm；流动相A：水(0.05％HCl v/v)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从6％至36％，然后保持在100％持续3min；流速(ml/min)：25；柱温：35℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法K)：仪器：Gilson GX-281,Gilson 322泵,Gilson 156UV检测器；柱：Phenomenex Gemini C18 250*50*10μm；流动相A：水(10mM NH4HCO3)；流动相B：MeCN；梯度：B在11.2min内从10％至40％，保持在100％持续2.5min；流速(ml/min)：22；柱温：40℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法L)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson322泵,Gilson156UV检测器；柱：Waters Xbridge 150*25 5μm；流动相A：水(10mM NH4HCO3)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从25％至55％，然后保持在100％持续1.5min；流速(ml/min)：25；柱温：30℃；波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法M)：HPLC仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson 322泵,Gilson 156UV检测器；柱：Venusil ASB Phenyl 250*50 10μm；流动相A：水(0.05％HCl)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从0％至20％，然后保持在100％持续3min；流速(ml/min)：25；柱温：40℃；波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法N)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson 322泵,Gilson156UV检测器；柱：Agela Durashell C18 150mm×25mm×5μm；流动相A：水(0.225％FA,v/v)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从32％至62％，保持100％B持续2min；流速(ml/min)：25；柱温：40℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法O)：仪器：Gilson GX-281,Gilson 322泵,Gilson 156UV检测器；柱：Waters Xbridge 150*25*5μm；流动相A：水(10mM NH4HCO3)；流动相B：MeCN；梯度：B在8.4min内从40％至66％，然后保持在100％持续2min；流速(ml/min)：25；柱温：30℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法P)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson322泵,Gilson156UV检测器；柱：Agela ASB 150*25mm*5μm；流动相A：水(0.05％HCl)；流动相B：MeCN；梯度：B在8min内从0％至30％，然后保持在100％持续0min；流速(ml/min)：25；柱温：40℃；波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法Q)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson 322泵,Gilson156UV检测器；柱：Agela ASB 150*25mm*5μm；流动相A：水(0.05％HCl)；流动相B：MeCN；梯度：B在8min内从0％至25％，然后保持在100％持续0min；流速(ml/min)：25；柱温：40℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法R)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson 322泵,Gilson156UV检测器；柱：Agela ASB 150*25mm*5μm；流动相A：水(0.05％HCl)；流动相B：MeCN；梯度：B在8min内从0％至25％，然后保持在100％持续0min；流速(ml/min)：25；柱温：40℃以及波长：220nm 254nm。
制备型HPLC(方法S)：仪器：Gilson GX-281液体处理器,Gilson 322泵,Gilson156UV检测器；柱：Agela Durashell C18 150mm×25mm×5μm；流动相A：水(0.225％FA,v/v)；流动相B：MeCN；梯度：B在10min内从40％至70％，保持100％B持续0min；流速(ml/min)：25；柱温：40℃以及波长：220nm 254nm。
制备型SFC(方法SFC1)：仪器：Berger,MULTIGR AM-II；柱：DAICEL CHIRALPAK AS-H(250mm*30mm,5μm)；流动相：CO2/IPA(0.1％NH3在H2O中)＝35/35；流速：60mL/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm。
在Bruker Avance仪器上于300、400、500或600MHz下记录1H NMR光谱。将TMS用作内参考标准品。以ppm表示化学位移值。以下缩写用于NMR信号的多重性：s＝单峰、d＝双重峰、t＝三重峰、q＝四重峰、qui＝五重峰、h＝七重峰、dd＝双双重峰、dt＝双三重峰、dq＝双四重峰、tt＝三三重峰、m＝多重峰、br s＝宽单峰并且br＝宽信号。
缩写是根据ACS Style Guide[ACS风格指南]：“The ACS Style guide–A manualfor authors and editors[ACS风格指南-作者与编辑手册]”Janet S.Dodd,编辑.1997,ISBN:0841234620。
c.中间体的制备
中间体1
(R)-3-(苄氧基)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-氧代丙-1-氯化铵
在28℃下向苯甲醇(56.0mL)中滴加亚硫酰氯(2.1g，17.6mmol)。添加完成后，分几批添加(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(3.8g，15.9mmol)，并将反应在28℃搅拌24h。LCMS显示反应完成。在80℃/0.02巴下除去过量的苄醇，并将残余物在环己烷(35mL)中搅拌16h。将滤饼用甲基叔丁基醚(50mL)过滤并研磨，得到标题化合物(3.0g，产率：51.6％)。LCMS(m/z)329.2[M+H+],tR＝(min,方法AA)＝0.52。
中间体2
(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸
在0℃下向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(4.5g，18.9mmol)在10％碳酸钠水溶液(50mL)中的溶液中加入二噁烷(30mL)和二碳酸二叔丁酯(6.18g，28.32mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌16h。将混合物用水(100mL)稀释并且用甲基叔丁基醚(50mL×3)洗涤。将水层用2N HCl酸化至pH 5-6，并且用乙酸乙酯(80mL×3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物在二异丙醚(40mL)中浆化并收集，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(5.5g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.43-7.28(m,5H),5.20-5.09(m,2H),4.52-4.28(m,1H),3.69-3.40(m,2H),1.43(s,9H)。
中间体3
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯
在0℃下，向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(200g，839mmol)的甲醇(1L)溶液中滴加亚硫酰氯(656g，5.5mol)。将混合物温热至25℃并搅拌18h。浓缩反应物，并将残余物用MTBE(500mL X 2)洗涤，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(240g)HCl盐。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.31-7.39(m,5H),5.13(s,2H),4.50-4.54(m,1H),3.77(s,3H),3.43-3.48(m,1H),3.24-3.27(m,1H)
中间体4
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸乙酯
向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(5g，21mmol)的乙醇(60mL)溶液中滴加亚硫酰氯(4.99g，42mmol)。将混合物在30℃下搅拌16h。浓缩反应物，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸乙酯HCl盐(6.0g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38(br s,3H),7.94(d,1H),7.41-7.30(m,5H),5.07(s,2H),4.46-4.37(m,1H),4.12(q,2H),3.25-3.15(m,1H),3.11-2.99(m,1H),1.18(t,3H)。
中间体5
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸丙酯
在0℃下，向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(2.0g，8.4mmol)的n-PrOH(30mL)溶液中添加亚硫酰氯(2.0g，16.78mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物浓缩。将残余物用甲基叔丁基醚(5mL)和己烷(15mL)处理。通过过滤收集固体，并且用己烷(15mL×2)洗涤并干燥，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸丙酯(2.2g)HCl盐。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(br s,3H),7.88(br d,1H),7.40-7.32(m,5H),5.11-5.03(m,2H),4.42-4.36(m,1H),4.04(t,2H),3.28-3.22(m,1H),3.13-3.01(m,1H),1.61-1.54(m,2H),0.87(t,3H)。
中间体6
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸异丙酯盐酸盐
向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(5g，21mmol)的i-PrOH(60mL)溶液中滴加亚硫酰氯(5.0g，42mmol)。将混合物在30℃下搅拌16h。然后加入另外的亚硫酰氯(3mL)，然后将反应在30℃下搅拌24h。将混合物浓缩，得到10g粗产物。将粗产物用环己烷(30mL)处理并搅拌3h。收集固体并干燥，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸异丙酯HCl盐(6.3g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38(br,3H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.39-7.29(m,5H),5.06(s,2H),4.95-4.86(m,1H),4.39-4.31(m,1H),3.22-3.12(m,1H),3.10-2.99(m,1H),1.17(dd,J＝9.2,6.4Hz,6H)。
中间体7
(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸环丙酯
向(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(1.1g，3.25mmol)和环丙醇(208mg，3.58mmol)在DMF(25mL)中的混合物中加入N,N-二异丙基乙胺(1.26g，9.75mmol)和HATU(1.85g，4.88mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌16h。将混合物用水(20mL)稀释，并且用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL×3)洗涤，并且浓缩。将残余物通过Combi Flash在硅胶上纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸环丙酯(1.1g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.30(m,5H),5.75(br s,1H),5.12(s,2H),4.80(brs,1H),4.40-4.34(m,1H),4.20-4.15(m,1H),3.57-3.50(m,2H),1.43(s,9H),0.78-0.70(m,4H)。
中间体8
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸环丙酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸环丙酯(1.0g，2.64mmol)在HCl/乙酸乙酯(15mL)中的混合物在15℃下搅拌1小时。在低于40℃下浓缩混合物，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸环丙酯HCl盐(810mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.00(br s,3H),7.86(br d,J＝8.4Hz,1H),7.42-7.31(m,5H),5.07(s,2H),4.37-4.30(m,1H),4.15-4.09(m,1H),3.25-3.00(m,2H),0.74-0.57(m,4H)。
中间体9
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸丁酯
在0℃下经30分钟向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(8g，33.6mmol)和丁-1-醇(30mL)的混合物中滴加亚硫酰氯(12g，101mmol)。将所得混合物在30℃下搅拌15.5h。将反应在真空中浓缩。通过在25℃下用石油醚(50mL)洗涤来纯化残余物，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸丁酯盐酸盐(11g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,3H),7.92(d,1H),7.30-7.38(m,5H),5.04(s,2H),4.36-4.43(m,1H),4.05(t,2H),3.18(m,1H),3.04(m,1H),1.47-1.55(m,2H),1.23-1.32(m,2H),0.82-0.87(t,3H)。
中间体10
(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸环己酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(1g，2.96mmol)、HATU(1.69g，4.43mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.15g，8.9mmol)在DMF(25mL)中的混合物在20℃下搅拌30min，加入环己醇(326mg，3.25mmol)，并将得到的混合物在50℃下搅拌16h。将混合物用水(25mL)稀释，并且用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过Combi Flash纯化(硅胶，从0至30％，石油醚中的乙酸乙酯)，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸环己酯(520mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.28(m,5H),5.89-5.65(m,1H),4.92-4.70(m,2H),4.49-4.33(m,1H),3.68-3.47(m,2H),1.91-1.73(m,4H),1.61-1.34(m,15H)。
中间体11
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸环己酯盐酸盐
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸环己酯(520mg，1.24mmol)在HCl/乙酸乙酯(4mL，4M)中的溶液在20℃下搅拌1小时。浓缩混合物，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸环己酯HCl盐(440mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44-8.06(m,3H),7.34-7.13(m,5H),6.58(br d,J＝6.8Hz,1H),5.03(s,2H),4.78-4.33(m,2H),3.59-3.23(m,2H),1.89-1.19(m,10H)。
中间体12
(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸苯酯
向(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(1g，2.9mmol)在DMF(25mL)中的溶液中添加HATU(1.69g，4.4mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.15g，8.9mmol)和苯酚(306mg，3.25mmol)。将混合物在50℃下搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至25％)，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸苯酯(890mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.32(m,7H),7.27-7.21(m,1H),7.19-7.09(m,2H),5.91(br s,1H),5.15(s,2H),4.91(br s,1H),4.72-4.62(m,1H),3.88-3.76(m,1H),3.74-3.63(m,1H),1.44(s,9H)。
中间体13
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苯酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸苯酯(890mg，2.15mmol)在HCl/乙酸乙酯(4M，15mL)中的混合物在15℃下搅拌1小时。在低于40℃下浓缩混合物，得到化合物(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苯酯HCl盐(870mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(br s,3H),8.19(br d,J＝8.0Hz,1H),7.46-7.27(m,8H),7.11(d,J＝7.6Hz,2H),5.22-5.03(m,2H),4.74-4.62(m,1H),3.30-3.14(m,1H)。
中间体14
2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸酯
向(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(1g，2.96mmol)、HATU(1.69g，4.43mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.15g，8.87mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入2-羟基-1-(吡咯烷-1-基)乙酮(382mg，2.96mmol)。将混合物在50℃下搅拌16h。将混合物用水(20mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至54％)，得到2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸酯(700mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41-7.29(m,5H),6.20(br,1H),6.11(d,J＝6.8Hz,1H),5.18-5.07(m,2H),5.01(d,J＝14.4Hz,1H),4.55-4.39(m,2H),3.90-3.70(m,1H),3.65-3.31(m,5H),2.05-1.97(m,2H),1.92-1.85(m,2H),1.43(s,9H)。
中间体15
2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸酯
向(R)-2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸酯(700mg，1.56mmol)在乙酸乙酯(4mL)中的溶液中加入HCl/乙酸乙酯(4M，10mL)。将混合物在15℃下搅拌1小时。将混合物在真空中浓缩，得到2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸酯HCl盐(600mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(br s,3H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.39-7.32(m,5H),5.07(s,2H),4.98(d,J＝15.2Hz,1H),4.76(d,J＝15.2Hz,1H),4.60-4.51(m,1H),3.39(t,J＝6.4Hz,2H),3.30(t,J＝7.2Hz,2H),3.26-3.14(m,2H),1.92-1.86(m,2H),1.81-1.72(m,2H)。
中间体16
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸异戊酯
在0℃下，向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(5g，21mmol)的3-甲基丁-1-醇(50mL)溶液中添加亚硫酰氯(5g，42mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h。在80℃/0.02巴下除去3-甲基丁-1-醇，将残余物溶于水(30mL)中，并用乙酸乙酯(20mL×3)洗涤。浓缩水层，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸异戊酯盐酸盐(6g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(br,3H),7.97(d,1H),7.38-7.30(m,5H),5.10-4.99(m,2H),4.48-4.38(m,1H),4.10(t,2H),3.24-3.16(m,1H),3.12-3.02(m,1H),1.58-1.67(m,1H),1.45(q,2H),0.87-0.83(m,6H)。
中间体17
(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸2-甲氧基乙酯
向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(5g，21mmol)的2-甲氧基乙醇(50mL)溶液中添加亚硫酰氯(5g，42mmol)。将混合物在20℃下搅拌16h。浓缩混合物，得到(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸2-甲氧基乙酯HCl盐(7g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(br,3H),7.95(d,1H),7.38-7.31(m,5H),5.11-5.00(m,2H),4.49-4.40(m,1H),4.25-4.15(m,2H),3.50(m,2H),3.25(m,4H),3.05(m,1H)。
中间体18
7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂
在-78℃下向7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶(10.0g，58.9mmol)在THF(150mL)中的溶液中滴加正丁基锂(n-BuLi)(己烷中2.5M，23.6mL)。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后将气态二氧化碳(15psi)鼓泡通过反应溶液，并使混合物在16h内升温至20℃。将混合物用THF(20mL)稀释并过滤，得到7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(12g)。
d.本发明的例示性化合物的制备
化合物1a
(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：7-甲酰基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯
在-78℃下，将臭氧鼓泡通过7-乙烯基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(700mg，3.19mmol)在MeOH(30mL)中的溶液持续10min，然后将混合物加热到25℃。添加PPh3(1.26g，4.79mmol)并将混合物在25℃搅拌2h。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过CombiFlash(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至30％)纯化，得到7-甲酰基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(550mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.35(s,1H),9.10(d,J＝4.4Hz,1H),8.33(s,1H),7.82(d,J＝4.4Hz,1H),4.02(s,3H)。
步骤2：7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯
在0℃，向7-甲酰基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(550mg，2.49mmol)在二氯甲烷(DCM)(15mL)中的溶液中添加二乙基氨基三氟化硫(DAST)(602mg，3.74mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h。将混合物用水(0.5mL)淬灭并在减压下浓缩。将残余物通过CombiFlash(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至30％)纯化，得到7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(350mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.89(d,J＝4.4Hz,1H),8.30(s,1H),7.48(d,J＝4.4Hz,1H),7.17-6.73(m,1H),4.01(s,3H)。
步骤3：7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
向7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(440mg，1.81mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加溶解在水(1mL)中的LiOH.H2O(228mg，5.43mmol)。将混合物在25℃下搅拌3h。将混合物在减压下浓缩。将残余物溶解于水(10mL)中并用乙酸乙酯(10mL)洗涤。用2N HCl(2mL)酸化水层，并收集沉淀，得到7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(320mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(d,J＝4.4Hz,1H),8.22(s,1H),7.73(d,J＝4.4Hz,1H),7.63-7.32(m,1H)。
步骤4：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(320mg，1.40mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(511mg，1.40mmol，HCl盐)在DMF(8mL)中的溶液中添加O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(674mg，2.10mmol)和N,N-二异丙基乙胺(543mg，4.20mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释，并且用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，并在减压下浓缩。将残余物通过Combi Flash(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至60％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(600mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(d,J＝4.4Hz,1H),7.90(s,1H),7.46(d,J＝4.4Hz,1H),7.39-7.27(m,10H),7.06-6.76(m,1H),6.05(br d,1H),5.22(s,2H),5.12(s,2H),4.68-4.59(m,1H),4.01-3.92(m,1H),3.91-3.82(m,1H)。
步骤5：(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的制备
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(200mg，0.37mmol)在33％HBr的AcOH(4mL)中的混合物在50℃搅拌16h。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法A)，得到(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HCl盐(86mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.58(br t,J＝6.0Hz,1H),8.91(d,J＝4.8Hz,1H),8.66-8.58(m,3H),8.55(s,1H),7.69(d,J＝4.8Hz,1H),7.63-7.31(m,1H),4.22-4.12(m,1H),3.94-3.76(m,2H)
LCMS(MH+):m/z＝316.2,tR(min,方法BB)＝0.29。
[α]20D＝-6.5,(c＝2mg/mL,DMSO)。
化合物2a
(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
向(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸(380mg，0.74mmol，HBr盐)在MeOH(5mL)中的溶液中加入亚硫酰氯(263mg，2.21mmol)。将混合物在50℃下搅拌16h。将混合物在减压下浓缩。将残余物溶于水(5mL)中，并用饱和碳酸钠水溶液调节至pH＝8，并用乙酸乙酯(10mL×4)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)进行洗涤，并用无水硫酸钠进行干燥，进行过滤并在减压下浓缩。将残余物通过Combi Flash(DCM:MeOH，其中MeOH从0至15％)纯化，得到(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(145mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.86(d,J＝4.8Hz,1H),8.00(s,1H),7.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.08(brs,1H),7.06-6.73(t,1H),3.97-3.88(m,1H),3.83-3.74(m,4H),3.61-3.51(m,1H)
LCMS(MH+):m/z＝330.2,tR(min,方法BB)＝0.34min。
[α]20D＝-39.7,(c＝1mg/mL,CH3OH)。
化合物1b
(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
将7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(500mg，2.46mmol)、环丙基硼酸(423mg，4.92mmol)和K3PO4(1.04g，4.92mmol)在二噁烷(10mL)和水(2mL)中的混合物在N2下搅拌。然后加入[1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(PdCl2(dtbpf))(80mg，0.123mmol)并将混合物在密封管中于110℃搅拌16h。将混合物倒进水(15mL)中，用乙酸乙酯(20mL)萃取。用HCl水溶液(3M)调节水的pH(4-5)，并浓缩以提供7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(700mg)。
步骤2：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
将粗制7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(650mg，2.89mmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(1.05g，2.89mmol，HCl盐)、N,N-二异丙基乙胺(1.12g，8.67mmol)和O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(1.39g，4.34mmol)在DMF(5mL)中的混合物在30℃下搅拌16h。将混合物倒进水(20mL)中，并且用乙酸乙酯(20mLx 2)萃取。将合并的有机相用盐水(30mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过combiFlash(乙酸乙酯:石油醚＝0-50％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(260mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(br,1H),8.60(d,1H),8.18(s,1H),7.89(br d,1H),7.36-7.22(m,10H),7.04(d,J＝5.2Hz,1H),5.11(d,J＝5.2Hz,2H),5.06(m,2H),4.47-4.42(m,1H),3.77-3.65(m,2H),2.10-2.18(m,1H),1.24-1.17(m,2H),1.05-0.96(m,2H)。
步骤3：(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(80.0mg，0.15mmol)和HBr/AcOH(3mL，33％)的混合物在50℃搅拌16h。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法B)，得到(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HCl盐(15mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δ8.59-8.52(m,1H),8.09-8.02(m,1H),7.24-7.14(m,1H),4.21-4.12(m,1H),3.95(dd,1H),3.85(dd,1H),2.26(m,1H),1.45(dd,2H),1.24-1.14(m,2H)。
LCMS(MH+):m/z＝306.2,tR(min,方法BB)＝0.22。
[α]20D＝12.0(c＝0.25mg/mL,CH3OH)。
化合物2b
(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(980mg，4.47mmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(1.29g，4.47mmol，HCl盐)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基四氟硼酸铵(TBTU)(2.15g，6.7mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.89g，22.35mmol)在DMF(20mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。将混合物用水(30mL)稀释，并且用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将有机相用盐水(10mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过CombiFlash(石油醚:乙酸乙酯＝0-80％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(600mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(d,J＝4.8Hz,1H),7.90(s,1H),7.37-7.26(m,6H),6.83(d,J＝4.8Hz,1H),5.99(br d,J＝6.8Hz,1H),5.12(s,2H),4.66-4.52(m,1H),3.99-3.83(m,2H),3.80(s,3H),2.18-2.04(m,1H),1.25-1.16(m,2H),1.01-0.93(m,2H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(700mg，1.54mmol)和HBr/AcOH(10mL，30％)的混合物在25℃搅拌16h。将混合物用甲基叔丁基醚(20mL)稀释。将沉淀物过滤。干燥滤饼，得到粗产物。将粗产物用CH3OH(10mL)洗涤。过滤产物，得到(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HBr盐(230mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.53(br t,1H),8.84(d,1H),8.55(br s,3H),8.41(s,1H),7.34(d,1H),3.88-3.73(m,5H),2.39-2.28(m,1H),1.38(m,2H),1.20(br s,2H)。
LCMS(MH+):m/z＝320.0,tR(min,方法BB)＝0.31。
[α]20D＝-1.0,(c＝1.0mg/mL,CH3OH)。
化合物1c
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
将7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(300mg，1.37mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(344mg，2.74mmol，0.4mL)、PdCl2(dtbpf)(90mg，0.14mmol)和K3PO4(727mg，3.43mmol)在水(4mL)和二噁烷(12mL)中的混合物在密封管中加热至80℃在N2下持续16h。将混合物过滤。用HCl(2M，4mL)将水相调节至pH＝3-4。浓缩混合物，得到7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(260mg)。将粗产物不经任何进一步纯化而用于下一步骤。
步骤2：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(300mg，粗品)在DMF(10mL)中的溶液中加入TBTU(748mg，2.33mmol)、N,N-二异丙基乙胺(602mg，4.66mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(566mg，1.55mmol，HCl盐)。将混合物在20℃下搅拌15h。将混合物用水(30mL)稀释，并且用乙酸乙酯(25mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至100％)，得到390mg粗产物。将粗产物与DCM(15mL)一起研磨并通过过滤分离并干燥，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(230mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.04(br t,J＝5.6Hz,1H),8.64(d,J＝4.8Hz,1H),8.19(s,1H),7.89(br d,J＝8.4Hz,1H),7.37-7.22(m,11H),5.17-5.00(m,4H),4.48-4.39(m,1H),3.76-3.62(m,2H),2.57(s,3H)。
步骤3：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(100mg，0.20mmol)和HBr/AcOH(3mL，33％)的混合物在50℃搅拌16h。将混合物用甲基叔丁基醚(3mL)和水(3mL)稀释。将水相用甲基叔丁基醚(3mL x 2)萃取。将水相冻干，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HBr盐(50mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.42(br s,1H),8.91-8.80(m,1H),8.54-8.32(m,4H),7.61(br s,1H),4.20-4.10(m,1H),3.90-3.69(m,2H),2.71(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝280.1,tR(min,方法BB)＝0.17。
[α]20D＝-11.0,(c＝1.0mg/mL,CH3OH)。
化合物2c
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(800mg，4.14mmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(1.2g，4.14mmol，HCl盐)、TBTU(1.99g，6.21mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.68g，20.7mmol，3.6mL)在DMF(20mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。将混合物用水(90mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将有机相用盐水(20mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过CombiFlash(石油醚:乙酸乙酯＝0-90％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(1.1g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(d,J＝4.8Hz,1H),7.91(s,1H),7.40-7.25(m,6H),7.13(d,4.4Hz,1H),6.02(br d,J＝6.8Hz,1H),5.11(s,2H),4.63-4.55(m,1H),3.98-3.83(m,2H),3.79(s,3H),2.58(s,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(600mg，1.4mmol)和HBr/AcOH(6mL，33％)的混合物在25℃搅拌16h。将混合物用甲基叔丁基醚(6mL)稀释。将沉淀物过滤并干燥，得到粗产物(0.6g)。将粗产物用MeOH(5mL)洗涤并过滤。将滤饼干燥，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HBr盐(400mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.91(d,J＝6.4Hz,1H),8.45(s,1H),7.91-7.86(m,1H),4.39(t,J＝4.8Hz,1H),4.10-4.03(m,1H),3.97-3.91(m,1H),3.90(s,3H),2.93(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝294.4,tR(min,方法BB)＝0.27。
[α]20D＝-2.0,(c＝1.0mg/mL,CH3OH)。
化合物2d
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(2.5g，粗品)在DMF(30mL)中的溶液中加入TBTU(6.23g，19.4mmol)、N,N-二异丙基乙胺(5.02g，38.8mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸乙酯(3.45g，11.38mmol，HCl盐)。将混合物在20℃下搅拌16h。将混合物用水(50mL)稀释，并且用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至100％)两次，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯(2.6g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(d,J＝4.8Hz,1H),7.93(s,1H),7.49(br s,1H),7.36-7.24(m,5H),7.14(d,J＝4.8Hz,1H),6.06(br d,J＝6.4Hz,1H),5.12(s,2H),4.63-4.55(m,1H),4.25(m,2H),4.00-3.82(m,2H),2.59(s,3H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯(1.6g，3.62mmol)在30％HBr的AcOH(20mL)中的混合物在20℃搅拌3h。将混合物浓缩。向残余物中加入水(35mL)，并用甲基叔丁基醚(30mL)洗涤。将水层冻干，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯2HBr盐(1.55g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(br s,1H),8.86(d,J＝4.8Hz,1H),8.54(br s,3H),8.41(s,1H),7.64(m,1H),4.28-4.22(m,1H),4.18(q,J＝7.2Hz,2H),3.85-3.72(m,2H),2.71(s,3H),1.18(t,J＝7.2Hz,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝308.4,tR(min,方法BB)＝0.30。
[α]20D＝2.1,(c＝7.6mg/mL,MeOH)。
化合物2e
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(300mg，粗品)、TBTU(748mg，2.33mmol)和N,N-二异丙基乙胺(602mg，4.66mmol)在DMF(6mL)中的混合物中加入(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸丙酯(479mg，1.71mmol，HCl盐)。将混合物在20℃下搅拌14h。向反应混合物中加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash(石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0％至80％)纯化两次，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯(140mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.64(d,J＝4.8Hz,1H),7.93(s,1H),7.36-7.27(m,6H),7.15(d,J＝4.8Hz,1H),5.96(br d,J＝5.6Hz,1H),5.14(s,2H),4.64-4.55(m,1H),4.16(m,2H),4.03-3.78(m,2H),2.61(s,3H),1.75-1.68(m,2H),0.95(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯(140mg，0.31mmol)在30％HBr的AcOH(6mL)中的混合物在20℃搅拌1小时。将反应混合物浓缩。向残余物中加入MeCN(2mL)，并用甲基叔丁基醚(10mL×3)洗涤。通过过滤收集固体，加水(10mL)并冻干，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯HBr盐(98mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.32(br t,J＝6.0Hz,1H),8.76(d,J＝5.2Hz,1H),8.50(m,3H),8.32(s,1H),7.50(d,J＝4.8Hz,1H),4.30-4.21(m,1H),4.18-4.05(m,2H),2.65(s,3H),1.64-1.54(m,2H),0.85(t,J＝7.2Hz,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝322.1,tR(min,方法BB)＝0.36。
[α]20D＝-0.57(c＝4.6mg/mL,CH3OH)。
化合物2f
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(2.5g，粗品)在DMF(30mL)中的溶液中加入TBTU(6.23g，19.41mmol)、N,N-二异丙基乙胺(5.02g，38.82mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸异丙酯(3.5g，11.0mmol，HCl盐)。将混合物在20℃下搅拌16h。将混合物用水(50mL)稀释，并且用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至100％)两次，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯(2.4g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(d,J＝4.8Hz,1H),7.93(s,1H),7.48(br s,1H),7.36-7.24(m,5H),7.14(d,J＝4.8Hz,1H),6.03(br d,J＝6.8Hz,1H),5.15-5.05(m,3H),4.61-4.51(m,1H),3.97-3.82(m,2H),2.60(s,3H),1.27(d,J＝6.0Hz,6H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯
将在30％HBr的AcOH(15mL)中的(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯(1.6g，3.51mmol)在20℃搅拌2h。将混合物浓缩。向残余物中加入水(35mL)，并用甲基叔丁基醚(30mL)洗涤。将水层冻干，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯HBr盐(1.6g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.36(m,1H),8.79(d,J＝5.2Hz,1H),8.55-8.40(m,3H),8.35(s,1H),7.55(d,J＝5.2Hz,1H),5.04-4.93(m,1H),4.24-4.15(m,1H),3.80-3.70(m,2H),2.68(s,3H),1.20(dd,J＝15.6,6.0Hz,6H)。
LCMS(MH+):m/z＝322.4,tR(min,方法BB)＝0.34。
[α]20D＝1.8,(c＝7.0mg/mL,MeOH)。
化合物2g
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(200mg，粗品)在DMF(3mL)中的溶液中加入(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸环丙酯(326mg，1.04mmol，HCl盐)、TBTU(499mg，1.55mmol)和N,N-二异丙基乙胺(401mg，3.11mmol)。将反应混合物在10℃下搅拌3h。向反应混合物中加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从70％至80％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯(150mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(br t,J＝5.6Hz,1H),8.60(d,J＝4.8Hz,1H),8.16(s,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.33-7.21(m,6H),5.07-4.97(m,2H),4.35-4.24(m,1H),4.02-3.99(m,1H),3.66-3.53(m,2H),2.54(s,3H),0.65-0.46(m,4H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯
向(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯(120mg，0.26mmol)在AcOH(5mL)中的溶液加入在AcOH(0.5mL)中的30％HBr。将反应混合物在10℃下搅拌2h。向混合物中加入甲基叔丁基醚(6mL)，并搅拌5分钟，然后静置5分钟，然后丢弃有机溶剂。将残余物浓缩。然后将残余物用甲基叔丁基醚(5mL×2)洗涤，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯HBr盐(100mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.36(br t,J＝5.6Hz,1H),8.80(d,J＝5.2Hz,1H),8.52(br s,3H),8.34(s,1H),7.55(d,J＝4.8Hz,1H),4.28-4.21(m,1H),4.20-4.14(m,1H),3.80-3.75(m,2H),2.68(s,3H),0.75-0.61(m,4H)。
LCMS(MH+):m/z＝319.8,tR(min,方法BB)＝0.32。
[α]20D＝2(c＝1mg/mL,MeOH)。
化合物2h
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯
在N2下，向(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸丁酯(428mg，1.29mmol，HCl盐)、N,N-二异丙基乙胺(502mg，3.88mmol)和7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(250mg，粗品)在DMF(50mL)中的溶液中加入TBTU(623mg，1.94mmol)。将混合物在20℃下搅拌16h。向反应中添加水(100ml)，并且用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层浓缩。将残余物通过CombiFlash(硅胶，石油醚:乙酸乙酯，乙酸乙酯从0％至70％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯(120mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(d,J＝4.8Hz,1H),7.92(s,1H),7.41-7.27(m,6H),7.15(d,J＝4.8Hz,1H),5.96(br d,J＝6.8Hz,1H),5.13(s,2H),4.65-4.51(m,1H),4.26-4.13(m,2H),4.04-3.89(m,1H),3.88-3.77(m,1H),2.60(s,3H),1.66-1.55(m,2H),1.42-1.32(m,2H),0.92(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯(120mg，0.26mmol)在30％HBr的AcOH(10mL)中的溶液在20℃搅拌2h。将反应浓缩。向残余物中加入MeCN(1mL)和甲基叔丁基醚(20mL)，并在20℃下搅拌1小时，过滤并干燥，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯HBr盐(95mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.43(br t,J＝5.6Hz,1H),8.84(d,J＝5.6Hz,1H),8.53(br s,3H),8.39(s,1H),7.61(d,J＝5.2Hz,1H),4.26-4.24(m,1H),4.20-4.08(m,2H),3.84-3.76(m,2H),2.71(s,3H),1.59-1.47(m,2H),1.35-1.22(m,2H),0.78(t,J＝7.2Hz,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝336.1,tR(min,方法BB)＝0.41。
[α]20D＝3(c＝2mg/mL,MeOH)。
化合物2i
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(200mg，粗品)在DMF(3mL)中的溶液中加入(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸异丁酯(377mg，1.14mmol，HCl盐)、TBTU(499mg，1.55mmol)和N,N-二异丙基乙胺(401mg，3.11mmol)。将反应混合物在15℃下搅拌2h。向反应混合物中加入水(10mL)并用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从50％至60％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯(130mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.64(d,J＝4.8Hz,1H),7.92(s,1H),7.39-7.27(m,6H),7.15(d,J＝4.0Hz,1H),5.95(d,J＝6.4Hz,1H),5.13(s,2H),4.65-4.55(m,1H),4.06-3.92(m,3H),3.87-3.80(m,1H),2.60(s,3H),2.00-1.90(m,1H),0.94(d,J＝6.8Hz,6H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯(120mg，0.26mmol)在30％HBr的AcOH(3mL)中的溶液在10℃搅拌1小时。将溶剂除去。将残余物用MeCN(1mL)和甲基叔丁基醚(5mL)的混合物洗涤。倾析有机层，然后将残余物冻干，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯HBr盐(110mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.32(br s,1H),8.78(br s,1H),8.51(br s,3H),8.35(br s,1H),7.53(br s,1H),4.35-4.25(m,1H),4.03-3.89(m,2H),3.81(t,J＝5.6Hz,2H),2.67(s,3H),1.97-1.82(m,1H),0.88(dd,J＝2.0,6.8Hz,6H)。
LCMS(MH+):m/z＝336.1,tR(min,方法BB)＝0.41。
[α]20D＝2(c＝1mg/mL,MeOH)。
化合物2J
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙基甲酯
向(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸(150mg，0.42mmol，HBr盐)在环丙基甲醇(5mL)中的溶液中加入亚硫酰氯(99mg，0.83mmol)。将混合物在40℃下搅拌16h。将反应混合物浓缩。将残余物用甲基叔丁基醚(10mL×3)洗涤。将固体通过过滤收集并且干燥。将产物通过制备型HPLC纯化(方法E)并冻干，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙基甲酯HCl盐(49mg)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.91(d,J＝5.6Hz,1H),8.46(s,1H),7.87(d,J＝5.6Hz,1H),4.39(t,J＝5.6Hz,1H),4.20-3.95(m,4H),2.93(s,3H),1.34-1.09(m,1H),0.63-0.54(m,2H),0.40-0.31(m,2H)。
LCMS(MH+):m/z＝333.8,tR(min,方法BB)＝0.37。
[α]20D＝4.1(c＝7.8mg/mL,CH3OH)。
化合物2k
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(800mg，4.14mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸2-甲氧基乙酯(2.07g，6.21mmol，HCl盐)在DMF(20mL)中的溶液中加入TBTU(1.60g，4.97mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.61g，12.42mmol)。将混合物在20℃下搅拌16h。将反应混合物用水(10mL)淬灭并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash(乙酸乙酯/石油醚，其中乙酸乙酯从0％至100％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯(800mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.01(t,J＝5.6Hz,1H),8.63(d,J＝4.8Hz,1H),8.20(s,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.37-7.24(m,6H),5.09-4.99(m,2H),4.42-4.34(m,1H),4.20-4.12(m,2H),3.74-3.57(m,2H),3.50-3.42(m,2H),3.17(s,3H),2.57(s,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯
向(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯(400mg，0.85mmol)在AcOH(10mL)中的溶液中添加在AcOH(1mL)中的30％HBr，将混合物在20℃搅拌16h。将混合物浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法E)，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯HCl盐(170mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(t,J＝5.6Hz,1H),8.88-8.74(m,4H),8.54(s,1H),7.60(d,J＝5.2Hz,1H),4.33-4.18(m,3H),3.54-3.48(m,2H),3.17(s,3H),2.70(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝338.1,tR(min,方法BB)＝0.3。
[α]20D＝-14(c＝3mg/mL,DMSO)。
化合物2l
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(200mg，粗品)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸异戊酯(393mg，1.14mmol，HCl盐)在DMF(5mL)中的混合物中加入TBTU(499mg，1.55mmol)和N,N-二异丙基乙胺(401mg，3.11mmol)，将混合物在20℃搅拌1小时。向混合物中加入水(10mL)，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，将有机层用盐水(20mL×3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法上的Combi Flash(石油醚:乙酸乙酯，乙酸乙酯从0％至70％)纯化两次，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯(250mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.65(d,J＝4.8Hz,1H),7.92(s,1H),7.38-7.28(m,6H),7.16(d,J＝4.4Hz,1H),5.92(br d,J＝6.4Hz,1H),5.14(s,2H),4.64-4.55(m,1H),4.29-4.19(m,2H),4.01-3.79(m,2H),2.61(s,3H),1.73-1.65(m,1H),1.59-1.52(m,2H),0.92(d,J＝6.4Hz,6H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯(200mg，0.41mmol)在30％HBr的AcOH(6mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。向样品中添加水(15mL)并冻干。将获得的固体进一步通过制备型HPLC纯化(方法F)，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯HCl盐(105mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.66(br t,J＝5.6Hz,1H),8.82-8.75(m,4H),8.52(s,1H),7.54(d,J＝4.8Hz,1H),4.15-4.12(t,2H),3.92-3.73(m,2H),2.67(s,3H),1.65-1.54(m,1H),1.45-1.38(m,2H),0.77(t,J＝6.8Hz,6H)。
LCMS(MH+):m/z＝349.8,tR(min,方法BB)＝0.45。
[α]20D＝+2.5(c＝4.0mg/mL,CH3OH)。
化合物2m
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(300mg，粗品)在DMF(10mL)中的溶液中加入TBTU(748mg，2.33mmol)、N,N-二异丙基乙胺(602mg，4.66mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(566mg，1.55mmol，HCl盐)。将混合物在20℃下搅拌15h。将混合物用水(30mL)稀释，并且用乙酸乙酯(25mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至100％)，得到390mg粗产物。将粗产物与DCM(15mL)一起研磨，并收集固体并干燥，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(230mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.04(br t,J＝5.6Hz,1H),8.64(d,J＝4.8Hz,1H),8.19(s,1H),7.89(br d,J＝8.4Hz,1H),7.37-7.22(m,11H),5.17-5.00(m,4H),4.48-4.39(m,1H),3.76-3.62(m,2H),2.57(s,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(100mg，0.20mmol)在AcOH(5mL)中的溶液中加入在AcOH(0.5mL)中的30％HBr。将混合物在20℃下搅拌1小时40分钟。将混合物用甲基叔丁基醚(6mL)稀释，并且形成沉淀物。丢弃有机层并收集沉淀物。将残余物用MeCN(5mL)洗涤并干燥，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯HBr盐(82mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.92(d,J＝6.0Hz,1H),8.33(s,1H),7.88(d,J＝5.6Hz,1H),7.44-7.37(m,2H),7.29-7.15(m,3H),5.38-5.32(m,1H),5.30-5.24(m,1H),4.44(t,J＝5.6Hz,1H),4.09-4.01(m,1H),3.99-3.90(m,1H),2.93(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝370,tR(min,方法BB)＝0.42。
[α]20D＝8.6(c＝3.2mg/mL,CH3OH)。
化合物2n
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯
将7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(300mg，1.55mmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸环己酯(590mg，1.65mmol，HCl盐)、TBTU(747.77mg，2.33mmol)和N,N-二异丙基乙胺(602mg，4.66mmol)在DMF(10mL)中的混合物在20℃下搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释，并且用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。将有机相用盐水(10mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过Combi Flash纯化(硅胶，从0至60％，石油醚中的乙酸乙酯)，得到350mg的粗产物。通过SFC分离(方法SFC1)纯化该化合物，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯(270mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(d,J＝4.8Hz,1H),7.94(s,1H),7.51-7.41(m,1H),7.37-7.27(m,5H),7.14(d,J＝4.4Hz,1H),6.03(d,J＝6.8Hz,1H),5.12(s,2H),4.90-4.81(m,1H),4.62-4.50(m,1H),4.00-3.77(m,2H),2.60(s,3H),1.91-1.64(m,4H),1.57-1.28(m,6H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯(150mg，0.30mmol)在30％HBr的AcOH(2mL)中的溶液在20℃搅拌40min。将混合物浓缩。将残余物用CH3CN(2mL×3)洗涤，并倾析有机层。将残余物冻干，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯HBr盐(98mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(m,1H),8.83(d,J＝5.2Hz,1H),8.61-8.40(m,3H),8.37(s,1H),7.59(d,J＝5.2Hz,1H),4.86-4.73(m,1H),4.33-4.17(m,1H),3.84-3.71(m,2H),2.70(s,3H),1.85-1.72(m,2H),1.69-1.55(m,2H),1.49-1.14(m,6H)。
LCMS(MH+):m/z＝361.8,tR(min,方法BB)＝0.45。
[α]20D＝1.50(c＝4.0mg/mL,CH3OH)。
化合物2o
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(150mg，粗品)在DMF(5mL)中的溶液中加入TBTU(374mg，1.16mmol)、N,N-二异丙基乙胺(301mg，2.33mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苯酯(272mg，粗品，HCl)。将混合物在15℃下搅拌16h。将混合物用水(15mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至100％)，得到240mg的产物。将产物进一步用DCM(3mL)研磨。通过过滤收集固体，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯(100mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(br t,J＝5.6Hz,1H),8.63(d,J＝4.8Hz,1H),8.24(s,1H),8.06(d,J＝7.6Hz,1H),7.44-7.26(m,9H),7.09(d,J＝7.6Hz,2H),5.16-5.05(m,2H),4.65-4.54(m,1H),3.88-3.78(m,2H),2.57(s,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯(90mg，0.18mmol)和30％HBr在AcOH(3mL)中的混合物在15℃搅拌1小时。将混合物浓缩。将残余物与MeCN(2mL)和甲基叔丁基醚(5mL)一起研磨。收集固体并干燥，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯HBr盐(65mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.91(d,J＝5.6Hz,1H),8.45(s,1H),7.88(d,J＝5.6Hz,1H),7.48-7.42(m,2H),7.35-7.27(m,3H),4.68(t,J＝5.2Hz,1H),4.21-4.15(m,2H),2.94(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝355.8,tR(min,方法BB)＝0.41。
[α]20D＝-9.3(c＝2.5mg/mL,CH3OH)。
化合物2p
2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯
制备2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯
向7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(150mg，粗品)在DMF(10mL)中的溶液中加入TBTU(374mg，1.16mmol)、N,N-二异丙基乙胺(301mg，2.33mmol)和2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸酯(300mg，粗品，HCl盐)。将混合物在15℃下搅拌16h。将混合物用水(15mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至100％，然后MeOH:乙酸乙酯，其中MeOH从0％至15％)两次，得到2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯(170mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.18-9.07(m,1H),8.60(d,J＝4.8Hz,1H),8.20(s,1H),7.40-7.31(m,5H),7.11(d,J＝4.8Hz,1H),6.12(br d,J＝6.8Hz,1H),5.19-5.06(m,3H),4.67-4.61(m,1H),4.53(d,J＝14.8Hz,1H),4.42-4.31(m,1H),3.85-3.77(m,1H),3.71-3.59(m,2H),3.46-3.37(m,2H),2.60(s,3H),2.07-2.02(m,2H),1.96-1.88(m,2H)。
步骤2：2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯
向2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯(120mg，0.23mmol)在AcOH(5mL)中的溶液中加入在AcOH(0.5mL)中的30％HBr。将混合物在15℃下搅拌2h。向混合物中加入甲基叔丁基醚(6mL)，并搅拌5min，并且静置5min，然后倾析有机溶剂。将残余物浓缩。然后将残余物用甲基叔丁基醚(5mL×2)洗涤，得到化合物2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯HBr盐(102mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(br t,J＝5.6Hz,1H),8.81(d,J＝5.2Hz,1H),8.62(br s,3H),8.35(s,1H),7.57(d,J＝4.8Hz,1H),5.09(d,J＝15.2Hz,1H),4.92(d,J＝15.2Hz,1H),4.55-4.46(m,1H),3.48-3.36(m,4H),2.69(s,3H),1.96-1.88(m,2H),1.86-1.78(m,2H)。
LCMS(MH+):m/z＝390.8,tR(min,方法BB)＝0.34min。
[α]20D＝14.5(c＝4.6mg/mL,CH3OH)。
化合物1d
(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
将在水(10mL)和二噁烷(20mL)中的7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(1.0g，4.55mmol)、(2-乙基苯基)硼酸(1.16g，7.74mmol)、Na2CO3(1.45g，13.6mmol)和Pd(dppf)Cl2(333mg，0.46mmol)脱气，并且然后在N2下加热至110℃持续16h。将混合物浓缩，并将残余物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。用HCl(2M，5mL)将水相调节至pH＝3-4。将沉淀物过滤并干燥，得到7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(700mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.86(d,1H),8.18(s,1H),7.51-7.47(m,2H),7.45(d,1H),7.40-7.36(m,1H),7.35-7.32(m,1H),2.45-2.43(m,2H),0.97(t,3H)
步骤2：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
将7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(200mg，0.71mmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(258mg，0.71mmol，HCl盐)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(340mg，1.06mmol)和N,N-二异丙基乙胺(456mg，3.53mmol)在DMF(10mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。将混合物用水(30mL)稀释，并且用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将有机相用盐水(10mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法G)，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(200mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(d,1H),7.89(s,1H),7.47-7.38(m,2H),7.36-7.25(m,12H),7.22(d,1H),7.08(br s,1H),5.97(br s,1H),5.19(s,2H),5.10(s,2H),4.60-4.59(m,1H),3.98-3.78(m,2H),2.55-2.42(m,2H),1.04(t,3H)。
步骤3：(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(60mg，0.10mmol)和HBr/AcOH(3mL，33％)的混合物在50℃搅拌16h。将混合物用MTBE(3mL)稀释，过滤并用MTBE(3x3mL)洗涤。将滤饼干燥，得到(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HBr盐(43mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.24-9.22(m,1H),8.87(d,1H),8.41-8.26(m,4H),7.54-7.44(m,3H),7.41-7.36(m,1H),7.35-7.30(m,1H),4.24-4.07(m,1H),3.82-3.77(m,1H),3.74-3.69(m,1H),2.45-2.43(m,2H),0.96(t,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝370.1,tR(min,方法BB)＝0.46。
[α]20D＝-6.67,(c＝1.5mg/mL,CH3OH)。
化合物2q
(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
在0℃下向(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸(295mg，555.28mmol，HBr盐)在MeOH(10mL)中的混合物中滴加亚硫酰氯(199mg，1.67mmol)。完成添加之后，将反应在30℃下搅拌42hr。将混合物浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法H)，得到粗产物(0.2g)。将粗产物通过制备型HPLC纯化(方法I)，得到(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(45mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.99(br s,1H),8.81(d,J＝4.8Hz,1H),8.31(s,1H),7.54-7.26(m,5H),3.61(s,3H),3.57-3.52(m,1H),3.49-3.42(m,2H),2.44-2.42(m,2H),0.96(t,J＝7.6Hz,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝384.4,tR(min,方法BB)＝0.49min。
[α]20D＝-12.0,(c＝0.5mg/mL,CH3OH)。
化合物1e
(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶
向MeOH(5.0mL)中添加Na(135mg，0.59mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，并加入7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶(200mg，1.18mmol)。将混合物在110℃-120℃下再搅拌15h。将反应混合物在减压下浓缩，以得到7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶(160mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(d,1H),7.67(d,1H),7.50(d,1H),6.70(d,1H),4.04(s,3H)。
步骤2：7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
在-78℃下向7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶(150mg，0.90mmol)在THF(15mL)中的溶液中添加n-BuLi(己烷中2.5M，0.5mL)。将混合物在-78℃下搅拌0.5小时。将CO2鼓泡到溶液中持续0.5小时。将混合物加温至室温并且再搅拌15h。在减压下浓缩反应混合物以除去溶剂。将残余物用水(20mL)和HCl(2M，至pH约5)稀释，过滤并干燥，得到7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(120mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(br,1H),7.86(s,1H),7.04(br,1H),4.01(s,3H)。
步骤3：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(120mg，0.57mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(207mg，0.63mmol，HCl盐)在DMF(5mL)中的溶液中添加O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(276mg，0.86mmol)和N,N-二异丙基乙胺(370mg，2.87mmol)。将混合物在20℃-30℃下搅拌16h。将残余物用水(20mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以给出残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/石油醚的洗脱液)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(48mg)。
步骤4：(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(125mg，0.24mol)在HBr/AcOH(5mL，约33％)中的溶液在50℃搅拌16h。在减压下浓缩反应混合物，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HBr盐(100mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(t,Hz,1H),9.00(d,1H),8.40-8.30(m,4H),7.52(d,1H),4.22(s,3H),4.15-4.13(m,1H),3.84-3.72(m,2H)。
LCMS(MH+):m/z＝296.2,tR(min,方法BB)＝0.28。
[α]20D＝-1.45,(c＝2.75g/mL,CH3OH)。
化合物2r
(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
在0℃下向(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸(35mg，0.12mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入亚硫酰氯(1mL)，并在15℃-30℃下搅拌16h。在减压下浓缩反应混合物以除去溶剂。将残余物用t-BuOMe/MeOH(15mL V:V＝15:1)稀释并过滤，并将滤饼在减压下干燥，得到残余物。将残余物用水(15mL)和碳酸钠(饱和水溶液)稀释至pH约9，并且用乙酸乙酯(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩，以给出残余物。将残余物用水(15mL)和HCl(2M)稀释至pH约4，并且冷冻干燥，得到(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HCl盐(35mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δ8.74(d,J＝6.8Hz,1H),8.09(s,1H),7.41(d,J＝6.8Hz,1H),4.42(t,J＝5.2Hz,1H),4.40(s,3H)。4.25-3.99(m,2H),3.94(s,3H)
LCMS(MH+):m/z＝310.2,tR(min,方法BB)＝0.31。
[α]20D＝4(c＝1mg/mL,CH3OH)。
化合物1f
(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：7-碘噻吩并[3,2-b]吡啶
在130℃下将7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶(1.00g，5.90mmol)在HI(10mL，45％在水中)中的溶液搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，用饱和Na2CO3水溶液小心淬灭至pH＝6-7，并用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过CombiFlash(石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从5％至10％)纯化，得到7-碘噻吩并[3,2-b]吡啶(1.2g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝4.8Hz,1H),7.85-7.77(m,2H),7.66(d,J＝5.2Hz,1H)。
步骤2：7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶
向7-碘噻吩并[3,2-b]吡啶(500mg，1.92mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入CuI(401mg，2.11mmol)、KF(334mg，5.75mmol)和TMSCF3(327mg，2.30mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌16h。将反应混合物用水(10mL)淬灭并且用乙酸乙酯(3x10mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水(3x10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过CombiFlash(石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0％至3％)纯化，得到7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶(140mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87(d,J＝4.4Hz,1H),7.90(d,J＝5.6Hz,1H),7.68(d,J＝5.6Hz,1H),7.52(d,J＝4.8Hz,1H)。
步骤3：7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
将7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶(120mg，0.59mmol)在THF(2mL)中的溶液冷却至-78℃，并用n-BuLi(2.5M己烷溶液，0.5ml，1.25mmol)逐滴处理并在-78℃下搅拌30分钟。将反应混合物用CO2(15psi)鼓泡并在-78℃下搅拌1hr。将反应混合物用水(10mL)淬灭并且用乙酸乙酯(3x10mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水(3x10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(70mg)。
LCMS(MH+):m/z＝247.9,tR＝0.709min。
步骤4：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(130mg，0.52mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(192mg，0.52mmol，HCl盐)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(253mg，0.79mmol)和N,N-二异丙基乙胺(203mg，1.58mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物用水(10mL)淬灭并且用乙酸乙酯(3x10mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水(3x10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物进一步通过制备型HPLC纯化(方法F)，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(50mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(d,J＝4.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.58(d,J＝4.4Hz,1H),7.40-7.28(m,10H),5.93(d,J＝6.8Hz,1H),5.27(s,2H),5.13(s,2H),4.66-4.60(m,1H),4.05-3.92(m,1H),3.88-3.77(m,1H)。
步骤5：(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(50mg，0.90mmol)在HBr/AcOH(2mL，33％)中的溶液在50℃搅拌16h。将溶剂除去。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法J)，得到(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HBr盐(8mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.69(br,1H),9.02(d,J＝3.6Hz,1H),8.63(br,4H),7.93(d,J＝4.0Hz,1H),4.20-4.10(m,1H),3.79-3.77(m,2H)。
LCMS(MH+):m/z＝334.1,tR(min,方法BB)＝0.36。
[α]20D＝-10.0(c＝1.0mg/mL,CH3OH)。
化合物2s
(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
向7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(1.00g，4.05mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(1.40g，4.86mmol，HCl盐)、TBTU(1.95g，6.07mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.57g，12.15mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3x10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过CombiFlash(石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从80％至90％)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(500mg)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(500mg，1.04mmol)在HBr/AcOH(10mL，33％)中的溶液在15℃搅拌16h。将溶剂移除。将残余物用AcOH洗涤(2mL)。过滤反应混合物，将滤饼用AcOH(1ml)洗涤，并且收集滤饼，得到(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HBr盐(220mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.36(t,J＝6.0Hz,1H),9.04(d,J＝4.8Hz,1H),8.56-8.45(m,3H),8.43(s,1H),7.95(d,J＝4.4Hz,1H),4.29-4.25(m,1H),3.84-3.70(m,5H)。
LCMS(MH+):m/z＝348.2,tR(min,方法BB)＝0.42。
[α]20D＝+2.0(c＝1.0mg/mL,CH3OH)。
化合物1g
(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶
向丙-2-醇(15mL)中添加Na(339mg，15mmol)。将混合物在50℃搅拌1小时，并加入7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶(500mg，2.95mmol)。将混合物在110℃-120℃下再搅拌15h。将反应混合物在减压下浓缩以除去溶剂，以得到7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶(320mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝5.6Hz,1H),7.66(d,J＝5.6Hz,1H),7.49(d,J＝5.6Hz,1H),6.70(d,J＝5.6Hz,1H),4.84-4.81(m,1H),1.37(d,J＝6.0Hz,6H)。
步骤2：7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
在-78℃下向7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶(320mg，1.7mmol)在THF(15mL)中的溶液中添加n-BuLi(己烷中2.5M，0.9mL)。将混合物在-78℃下搅拌0.5小时。将CO2鼓泡到溶液中持续0.5h。将混合物在20℃-30℃下再搅拌15h。在减压下浓缩反应混合物以除去溶剂。将残余物用水(20mL)和HCl(2M)稀释至pH约5，过滤，并将滤饼在减压下干燥，得到7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(210mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58(d,J＝5.4Hz,1H),8.00(s,1H),7.11(d,J＝5.4Hz,1H),4.93-4.99(m,1H),1.37(d,J＝6.0Hz,6H)。
步骤3：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯的制备
向7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(200mg，0.84mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(304mg，0.93mmol，HCl盐)在DMF(10mL)中的溶液中添加O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(406mg，1.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(545mg，4.2mmol)。将混合物在20℃-30℃下搅拌16h。将残余物用水(20mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(0-90％乙酸乙酯/石油醚的洗脱液)纯化，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(86mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(d,J＝5.2Hz,1H),7.76(s,1H),7.38-7.27(m,10H),7.09(br,1H),6.72(d,J＝5.6Hz,1H),5.99(d,J＝7.2Hz,1H),5.20(s,2H),5.11(s,2H),4.85-4.85(m,1H),4.65-4.55(m,1H),3.97-3.80(m,2H),1.47(d,J＝5.6Hz,6H)。
步骤4：(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(80mg，0.15mmol)在HBr/AcOH(10mL，33％)中的溶液在50℃搅拌16h。在减压下浓缩反应混合物以除去溶剂。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法K)，得到(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸(26mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(br,1H),8.54(d,J＝5.2Hz,1H),8.10(s,1H),7.57(br,2H),7.08(d,J＝5.2Hz,1H),5.02-4.90(m,1H),3.69-3.65(m,1H),3.55-3.40(m,2H),1.36(d,J＝6.0Hz,1H)。
LCMS(MH+):m/z＝324.2,tR(min,方法BB)＝0.24。
[α]20D＝18(c＝1mg/mL,CH3OH)。
化合物2t
(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
向7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(500mg，2.11mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(670mg，2.32mmol，HCl盐)在DMF(20mL)中的溶液中加入TBTU(1.0g，3.17mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.36g，10.55mmol)。将混合物在20℃-30℃下搅拌2h。将残余物用水(40mL)稀释，并且用乙酸乙酯(50mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/石油醚的洗脱液)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(510mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(d,J＝5.6Hz,1H),7.88(s,1H),7.43(br s,1H),7.34-7.22(m,5H),6.71(d,J＝6.4Hz,1H),6.05(d,J＝6.8Hz,1H),5.10(s,2H),4.85-4.79(m,1H),4.60-4.50(m,1H),3.94-3.80(m,2H),3.76(s,3H),1.46(d,J＝6.0Hz,6H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(260mg，0.55mmol)在HBr/AcOH(4mL，30％)中的溶液在10℃-20℃搅拌16h。将反应混合物用甲基叔丁基醚(10mL)稀释并过滤，用甲基叔丁基醚(10mL x 3)洗涤并干燥，得到化合物(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HBr盐(175mg)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.52(br,1H),8.94(d,J＝6.4Hz,1H),8.52(br,3H),8.35(s,1H),7.56(d,J＝6.4Hz,1H),5.25-5.19(m,1H),4.25-4.20(m,1H),3.85-3.66(m,5H),1.42(d,J＝6.0Hz,6H)。
LCMS(MH+):m/z＝338.2,tR(min,方法BB)＝0.29。
[α]20D＝1.3(c＝2mg/mL,CH3OH)。
化合物1h
(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶
将噻吩并[3,2-b]吡啶-7-醇(2g，13mmol)和POBr3(25g，8mmol)的混合物在110℃加热2h。将混合物冷却并倒入冰水(100mL)中，然后加入2M NaOH溶液以将pH调节至8。将混合物用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥、过滤并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至30％)，得到7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶(2.5g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(d,J＝4.8Hz,1H),7.82(d,J＝6.0Hz,1H),7.66(d,J＝5.6Hz,1H),7.46(d,J＝5.2Hz,1H)。
步骤2：7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂
在-70℃下向二异丙胺(473mg，4.67mmol)在THF(20mL)中的溶液中滴加n-BuLi(己烷中2.5M，1.87mL)，并在-70℃下搅拌30min。然后滴加溶于THF(5mL)中的7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶(1g，4.67mmol)，并在-70℃下搅拌30min。然后将气态二氧化碳鼓泡通过反应混合物，并使混合物在2h内升温至25℃。将该混合物过滤并将滤饼用THF(10mL×2)洗涤。收集固体并干燥，得到7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(800mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(d,J＝5.2Hz,1H),7.68(s,1H),7.62(d,J＝5.2Hz,1H)。
步骤3：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(200mg，0.76mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(268mg，0.83mmol)、N,N-二异丙基乙胺(196mg，1.52mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(276mg，0.76mmol，HCl盐)。将混合物在25℃下搅拌2h。将混合物用水(15mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至80％)两次，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(190mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.54(d,J＝4.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.51(d,J＝5.2Hz,1H),7.38-7.24(m,11H),6.05(br d,J＝6.8Hz,1H),5.22(s,2H),5.16-5.08(m,2H),4.68-4.57(m,1H),4.00-3.82(m,2H)。
步骤4：(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(100mg，0.18mmol)和30％HBr在AcOH(3mL)中的混合物在25℃搅拌16h。将混合物浓缩。向残余物中加入水(5mL)，并用甲基叔丁基醚(5mL×2)洗涤。将水层冻干，得到(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HBr盐(75mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(t,J＝5.6Hz,1H),8.64(d,J＝4.8Hz,1H),8.41(s,1H),8.36(br d,J＝4.0Hz,3H),7.84(d,J＝4.8Hz,1H),4.19-4.12(m,1H),3.88-3.80(m,1H),3.77-3.69(m,1H)。
LCMS(MH+):m/z＝343.9,tR(min,方法BB)＝0.34。
[α]20D＝-4.8(c＝3.2mg/mL,CH3OH)。
化合物2u
(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
向7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(400mg，1.52mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入TBTU(730mg，2.27mmol)、N,N-二异丙基乙胺(392mg，3.03mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(437mg，1.52mmol，HCl盐)。将混合物在25℃下搅拌3h。将混合物用水(15mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至80％)三次，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(350mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.12(br t,J＝5.6Hz,1H),8.63(d,J＝4.8Hz,1H),8.34(s,1H),7.87-7.78(m,2H),7.37-7.23(m,5H),5.09-4.99(m,2H),4.42-4.34(m,1H),3.75-3.58(m,5H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(340mg，0.69mmol)在30％HBr的AcOH(5mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。将混合物浓缩。向残余物中加入MeOH(2mL)，然后加入甲基叔丁基醚(6mL)。过滤混合物，并且收集固体并干燥，得到(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HBr盐(230mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(t,J＝5.6Hz,1H),8.64(d,J＝5.2Hz,1H),8.49(brs,3H),8.40(s,1H),7.84(d,J＝4.8Hz,1H),4.31-421(m,1H),3.86-3.71(m,5H)。
LCMS(MH+):m/z＝358,tR(min,方法BB)＝0.39。
[α]20D＝2.9(c＝3.5mg/mL,CH3OH)。
化合物1i
(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：噻吩并[3,2-b]吡啶-7-甲腈
在N2气氛下，向7-氯噻吩并[3,2-b]吡啶(5g，29.48mmol)和Zn(CN)2(3.77g，32.1mmol)在DMF(50mL)中的溶液中添加Pd2(dba)3(2.70g，2.95mmol)、Pd(dppf)Cl2(2.16g，2.95mmol)和Zn粉(385mg，5.90mmol)。将混合物在120℃下搅拌2h。将混合物用乙酸乙酯(80mL)和水(50mL)稀释，并通过硅藻土(Celite)过滤。将滤液用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL×3)洗涤，并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至20％)，得到噻吩并[3,2-b]吡啶-7-甲腈(2.8g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.85(d,J＝4.8Hz,1H),7.94(d,J＝5.6Hz,1H),7.68(d,J＝5.6Hz,1H),7.54(d,J＝4.8Hz,1H)。
步骤2：噻吩并[3,2-b]吡啶-7-甲酸甲酯
将噻吩并[3,2-b]吡啶-7-甲腈(2.8g，17.5mmol)和HCl/MeOH(4M，50mL)的混合物在70℃下搅拌16h。将混合物浓缩。向残余物中加入水(10mL)，并用2N NaOH水溶液将pH调节至8。将混合物用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥、过滤并且浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至35％)，得到化合物噻吩并[3,2-b]吡啶-7-甲酸甲酯(2.7g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.84(d,J＝4.8Hz,1H),7.89(d,J＝5.6Hz,1H),7.86(d,J＝4.8Hz,1H),7.63(d,J＝5.6Hz,1H),4.07(s,3H)。
步骤3：噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基甲醇
向噻吩并[3,2-b]吡啶-7-甲酸甲酯(2.7g，14mmol)在MeOH(30mL)中的溶液中添加NaBH4(793mg，21mmol)。将混合物在25℃下搅拌3h。将混合物浓缩。向残余物中加入水(20mL)并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基甲醇(2.1g)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.62(d,J＝4.4Hz,1H),8.10(d,J＝5.6Hz,1H),7.57(d,J＝6.0Hz,1H),7.32(d,J＝4.8Hz,1H),5.77(t,J＝5.6Hz,1H),4.82(d,J＝5.6Hz,2H)。
步骤4：7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂
在-70℃下向噻吩并[3,2-b]吡啶-7-基甲醇(500mg，3.03mmol)在THF(20mL)中的溶液中滴加n-BuLi(己烷中2.5M，2.4mL)，并在-70℃下搅拌30min。然后将气态二氧化碳(15psi)鼓泡通过反应溶液持续30min，并使混合物在2h内升温至25℃。将该混合物过滤并将滤饼用THF(10mL×2)洗涤。收集固体并干燥，得到化合物7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(700mg)。
步骤5：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(200mg，粗品)在DMF(10mL)中的溶液中加入O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(448mg，1.39mmol)、N,N-二异丙基乙胺(360mg，2.79mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(339mg，0.93mmol，HCl盐)。将混合物在25℃下搅拌2h。将混合物用水(15mL)稀释，并且用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(DCM:MeOH，其中MeOH从0至10％)，得到200mg粗产物。将粗产物进一步通过制备型HPLC纯化(方法O)，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(100mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.01(br t,J＝5.6Hz,1H),8.69(d,J＝4.8Hz,1H),8.16(s,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(d,J＝4.8Hz,1H),7.36-7.22(m,10H),5.86(t,J＝5.6Hz,1H),5.15-5.00(m,4H),4.83(d,J＝5.2Hz,2H),4.48-4.37(m,1H),3.76-3.58(m,2H)。
步骤6：(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(60mg，0.12mmol)和12M HCl水溶液(12M，4mL)的混合物在80℃搅拌2h。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法Q)，得到化合物(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HCl盐(18mg)。
1H NMR(400MHz,D2O)δ8.82(d,J＝6.0Hz,1H),8.20(s,1H),7.85(d,J＝6.0Hz,1H),5.22(s,2H),4.18-4.14(m,1H),4.06-3.99(m,1H),3.94-3.86(m,1H)。
LCMS(MH+):m/z＝296.1,tR(min,方法BB)＝0.26。
[α]20D＝5.0(c＝1.2mg/mL,CH3OH)。
化合物2v
(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
向7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸锂(600mg，粗品)在DMF(15mL)中的溶液中加入TBTU(1.07g，3.35mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.08g，8.37mmol)和(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(806mg，2.79mmol，HCl盐)。将混合物在25℃下搅拌2h。将混合物用水(20mL)稀释，并且用乙酸乙酯(25mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将混合物通过硅胶上的Combi Flash纯化(DCM:MeOH，其中MeOH从0至10％)，得到600mg粗产物。将粗产物进一步通过制备型HPLC纯化(方法M)，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(200mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.00(br t,J＝6.0Hz,1H),8.68(d,J＝4.8Hz,1H),8.18(s,1H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(d,J＝4.8Hz,1H),7.36-7.20(m,5H),5.86(t,J＝5.6Hz,1H),5.11-4.96(m,2H),4.83(d,J＝5.2Hz,2H),4.41-4.31(m,1H),3.72-3.54(m,5H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(90mg，0.20mmol)在12N HCl(10mL)中的混合物在25℃搅拌2h。将混合物在真空中浓缩并冻干。然后向残余物中加入HCl/MeOH(4M，15mL)，并在25℃下搅拌2h。将混合物浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法M)，得到化合物(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HCl盐(25mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(br t,J＝6.0Hz,1H),8.79(d,J＝4.8Hz,1H),8.71(br s,3H),8.42(s,1H),7.54(d,J＝4.8Hz,1H),4.92(s,2H),4.30-4.21(m,1H)。
LCMS(MH+):m/z＝310.1,tR(min,方法BB)＝0.03min。
[α]20D＝-1.8(c＝4.5mg/mL,CH3OH)。
化合物1J
(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
向(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(100mg，0.19mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入DAST(62mg，0.38mmol)。将混合物在20℃下搅拌1小时。将反应用水(1mL)淬灭并浓缩。向残余物中加入水(10mL)，用2NNaOH溶液将pH调节至8，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至100％)，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(25mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.80(s,1H),8.02(s,1H),7.43-7.30(m,12H),6.11(br d,J＝6.4Hz,1H),5.71(d,J＝46.4Hz,2H),5.23(s,2H),5.13(s,2H),4.69-4.61(m,1H),4.00-3.96(m,2H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(25mg，0.05mmol)和30％HBr在AcOH(3mL)中的混合物在50℃搅拌3h。将混合物浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法R)，得到化合物(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HCl盐(9mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.44(t,J＝6.0Hz,1H),8.80(d,J＝4.8Hz,1H),8.54(brd,J＝3.6Hz,3H),8.44(s,1H),7.51(d,J＝4.4Hz,1H),5.87(d,J＝46.0Hz,2H),4.20-4.11(m,1H),3.86-3.80(m,2H)。
LCMS(MH+):m/z＝298.1,tR(min,方法BB)＝0.26。
化合物2w
(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
向(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(100mg，0.23mmol)在DCM(8mL)中的溶液中加入DAST(73mg，0.45mmol)。将混合物在20℃下搅拌1小时。将反应用水(1mL)淬灭并浓缩。向残余物中加入水(10mL)，并用2N NaOH溶液将pH调节至8，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层浓缩。将残余物通过硅胶上的Combi Flash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至100％)，得到化合物(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(25mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(d,J＝4.8Hz,1H),8.09(s,1H),7.62(br,1H),7.38(d,J＝4.8Hz,1H),7.36-7.27(m,5H),6.20(br,1H),5.70(d,J＝46.4Hz,2H),5.13(s,2H),4.66-4.57(m,1H),3.99-3.85(m,2H),3.82(s,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(20mg，0.045mmol)在30％HBr的AcOH(3mL)中的混合物在20℃搅拌1小时。将混合物浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化(方法P)，得到化合物(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HCl盐(9mg，52％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(br,1H),8.80(d,J＝4.4Hz,1H),8.66(br s,3H),8.40(s,1H),7.50(d,J＝4.8Hz,1H),5.86(d,J＝46.4Hz,2H),4.30-4.31(m,1H),3.84-3.77(m,2H),3.74(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝312,tR(min,方法BB)＝0.31。
[α]20D＝2.0(c＝1.0mg/mL,CH3OH)。
化合物1k
(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：3,5-二氟-4-碘吡啶-2-甲腈
在-78℃下向二异丙胺(4.30g，42mmol)在THF(50mL)中的溶液中添加n-BuLi(17mL，己烷中2.5M)，并将反应在-78℃下搅拌0.5h。在-78℃下加入3,5-二氟吡啶-2-甲腈(5g，36mmol)在THF(50mL)中的溶液，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5h。在-78℃下分批添加I2(9.51g，37.5mmol)，并将所得混合物在-78℃下搅拌1小时。添加水(50mL)以淬灭反应。将混合物用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过Combi flash纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0-30％)，得到3,5-二氟-4-碘吡啶-2-甲腈(4.5g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(s,1H)。
步骤2：3,5-二氟-4-甲基吡啶-2-甲腈
将3,5-二氟-4-碘吡啶-2-甲腈(2g，7.52mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(5.39g，42.92mmol)、Pd(dppf)Cl2 .CH2Cl2(1.84g，2.26mmol)和K3PO4(3.20g，15.08mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后将混合物在N2气氛下在120℃搅拌10h。将反应中加入水(10ml)，并用乙酸乙酯(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过Combi flash纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至20％)，得到900mg粗产物。将粗产物通过制备型HPLC进一步纯化(方法N)，得到3,5-二氟-4-甲基吡啶-2-甲腈(270mg)。
步骤3：3,5-二氟-4-甲基吡啶-2-甲醛
在-20℃下向3,5-二氟-4-甲基吡啶-2-甲腈(270mg，1.75mmol)在THF(10mL)中的搅拌的溶液中加入氢化二异丁基铝(DIBAL-H)(2.30mL，1M在甲苯中，2.30mmol)，并且将混合物在-20℃下搅拌1小时。加入水(10mL)以淬灭反应，并加入1N HCl以将pH调节至5-6。将反应混合物用乙酸乙酯(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到3,5-二氟-4-甲基吡啶-2-甲醛(270mg)。
步骤4：6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯
向3,5-二氟-4-甲基吡啶-2-甲醛(270mg，粗品)在DMF(5mL)中的溶液中缓慢加入TEA(349mg，3.45mmol)和2-巯基乙酸甲酯(300mg，2.83mmol)，并将混合物在100℃下搅拌3h。添加水(5ml)，并且将混合物用乙酸乙酯(5mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过Combi flash纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至50％)，得到粗化合物(200mg)。将粗化合物通过制备型HPLC进一步纯化(方法S)，得到6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(40mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(s,1H),8.20(d,J＝1.2Hz,1H),3.99(s,3H),2.55(s,3H)。
步骤5：6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
向6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(40mg，177.59μmol)在MeOH(4mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(22mg，524.26μmol)在水(1mL)中的溶液，并且将所得混合物在30℃下搅拌2h。将溶剂除去。添加水(2mL)，用饱和KHSO4溶液酸化至pH 3-4，并用乙酸乙酯(10mL×5)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(25mg)。
LC-MS:tR＝1.267min,m/z＝212.0[M+H]+。
步骤6：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
将6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(25mg，118μmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(52mg，142μmol，HCl盐)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(57mg，177μmol)和N,N-二异丙基乙胺(31mg，241μmol)在DMF(2mL)中的混合物在30℃下搅拌4h。添加水(2ml)以淬灭反应，并且将混合物用乙酸乙酯(5mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2，乙酸乙酯:石油醚＝1:1)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(25mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53(s,1H),7.78(s,1H),7.40-7.27(m,10H),6.08(br d,J＝5.6Hz,1H),5.30(s,1H),5.21(s,2H),5.11(s,2H),4.69-4.55(m,1H),3.92-3.85(m,2H),2.52(s,3H)。
步骤7：(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HBr盐
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(25mg，48μmol)和在AcOH(2mL)中的33％HBr的混合物在50℃搅拌16h。将溶剂除去。将残余物用TBME(5mL×3)洗涤，将固体过滤，并通过冻干除去残留的溶剂，得到(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HBr盐(16mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(t,J＝5.6Hz,1H),8.71(d,J＝1.6Hz,1H),8.41-8.26(m,3H),8.26(s,1H),4.21-4.09(m 1H),3.86-3.78(m,1H),3.76-3.67(m,1H),2.50(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝298,tR(min,方法BB)＝0.34。
[α]20D＝-16.00(c＝2mg/mL,MeOH)。
化合物2x
(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(70mg，331.42μmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(115mg，0.4mmol，HCl盐)、TBTU(160mg，0.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(89mg，0.69mmol)在DMF(5mL)中的混合物在30℃下搅拌16h。添加水(5ml)以淬灭反应，并用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2，乙酸乙酯:石油醚＝1:1)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(70mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46(s,1H),7.80(s,1H),7.41-7.19(m,6H),6.01-5.85(m,1H),5.05(s,2H),4.59-4.41(m,1H),3.95-3.76(m,2H),3.73(s,3H),2.45(s,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(70mg，0.16μmol)在33％HBr的AcOH(2mL)中的混合物在30℃搅拌1h。将溶剂除去。将粗化合物用TBME(5mL×3)洗涤，过滤，并通过冻干除去残留的溶剂，得到(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HBr盐(50mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.21(t,J＝5.6Hz,1H),8.71(d,J＝1.6Hz,1H),8.63-8.37(br s,3H),8.28(s,1H),4.31-4.20(m,1H),3.85-3.71(m,5H)。
LCMS(MH+):m/z＝312.1,tR(min,方法BB)＝0.38。
[α]20D＝-2.00(c＝3mg/mL,MeOH)。
化合物1l
(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
制备(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸的整体合成方案如下所示。
步骤1：2-氯-3-氟-4-碘-5-甲基吡啶
在-78℃下向二异丙胺(5.8mL，41mmol)在THF(50mL)中的溶液中添加n-BuLi(17.5mL，己烷中2.5M)，并将反应在-78℃下搅拌1小时。在-78℃下滴加2-氯-3-氟-5-甲基吡啶(5.00g，34.4mmol)在THF(50mL)中的溶液，并将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。在-78℃下分批添加I2(9.50g，37.4mmol)，并将所得混合物在-78℃下搅拌1小时。加入饱和NH4Cl(20mL)以淬灭反应，然后在0℃下加入水(50mL)，并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×2)、饱和Na2S2O3溶液(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到2-氯-3-氟-4-碘-5-甲基-吡啶(8.2g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(s,1H),2.47(s,3H)。
步骤2：2-氯-3-氟-4,5-二甲基吡啶
将2-氯-3-氟-4-碘-5-甲基吡啶(4.20g，15.5mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(4.27g，34.0mmol)、K2CO3(4.28g，30.9mmol)和pd(dtbpf)Cl2(1.01g，1.55mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物通过用N2吹扫进行脱气，然后将混合物在N2下在80℃搅拌16h。然后加入另外的2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(4.27g，34.0mmol)，并将所得混合物在80℃下再搅拌16h。添加水(20ml)以淬灭反应，之后用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过Combi flash纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0-10％)，得到2-氯-3-氟-4,5-二甲基吡啶(1.2g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.95(s,1H),2.22-2.27(m,6H)。
步骤3：3-氟-4,5-二甲基-2-乙烯基吡啶
将2-氯-3-氟-4,5-二甲基吡啶(1.70g，10.7mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(2.46g，15.9mmol)、Pd(dppf)Cl2(780mg，1.07mmol)和K2CO3(2.94g，21.3mmol)在二噁烷(80mL)和水(8mL)中的混合物通过用N2吹扫进行脱气，然后将混合物在N2气氛下在80℃搅拌16h。添加水(50ml)，并且将混合物用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并且浓缩。将残余物通过Combi flash纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0-30％)，得到3-氟-4,5-二甲基-2-乙烯基吡啶(1.0g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(s,1H),7.04-6.82(m,1H),6.31(dd,J＝2.0Hz,17.6Hz,1H),5.48(dd,J＝2.0Hz,11.2Hz,1H),2.4(s,3H),2.18(d,J＝2.0Hz,3H)。
步骤4：3-氟-4,5-二甲基吡啶-2-甲醛
在-70℃下，将臭氧(15psi)鼓泡通过3-氟-4,5-二甲基-2-乙烯基吡啶(1.00g，6.61mmol)在DCM(200mL)中的溶液持续15min。然后在-70℃添加PPh3(2.08g，7.94mmol)并将混合物在25℃搅拌2h。将混合物在真空中浓缩，并且将所得残余物通过硅胶上的CombiFlash纯化(石油醚:乙酸乙酯，其中乙酸乙酯从0至50％)，得到3-氟-4,5-二甲基吡啶-2-甲醛(600mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.16(s,1H),8.37(s,1H),2.39(s,3H),2.30(s,3H)。
步骤5：6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯
向3-氟-4,5-二甲基吡啶-2-甲醛(550mg，3.59mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入TEA(1mL，7.18mmol)，并将混合物在25℃搅拌30min，然后缓慢加入2-巯基乙酸甲酯(460mg，4.33mmol)。将混合物在100℃下搅拌3h。添加水(10ml)以淬灭反应，并且将混合物用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤(10mL×2)，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(800mg)，将其无需进一步纯化即使用。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53(s,1H),8.18(s,1H),3.97(s,3H),2.52(s,3H),2.43(s,3H)。
步骤6：6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
向6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(400mg，粗品)在MeOH(8mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(160mg，3.81mmol)在水(2mL)中的溶液，并且将所得混合物在25℃搅拌1小时。将混合物浓缩，并加入水(5mL)，然后用乙酸乙酯(5mL×2)萃取。用饱和KHSO4溶液将水层酸化至pH 3。将固体过滤并干燥，得到6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(140mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.60(brs,1H),8.55(s,1H),8.05(s,1H),2.50(s,3H),2.39(s,3H)。
步骤7：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯
将6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(70mg，338μmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸苄酯(148mg，406μmol，HCl盐)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(163mg，508μmol)和N,N-二异丙基乙胺(88.0mg，677μmol)在DMF(5mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。添加水(5mL)以淬灭反应，并且将混合物用乙酸乙酯(5mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并且浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2，乙酸乙酯:石油醚＝2:1)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(100mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.50(s,1H),7.77(s,1H),7.42-7.28(m,10H),7.08(br s,1H),6.01(d,J＝6.4Hz,1H),5.22(s,2H),5.12(s,2H),4.63(d,J＝3.6Hz,1H),4.00-3.81(m,2H),2.51(s,3H),2.42(s,3H)。
步骤8：(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯(100mg，193μmol)和33％HBr在AcOH(5mL)中的混合物在50℃搅拌16h。将混合物浓缩。将固体悬浮于AcOH(5mL)中，过滤，并用另外的AcOH(1mL×2)洗涤。通过冻干除去溶剂，得到(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸HBr盐(77mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.27(t,J＝5.2Hz,1H),8.69(s,1H),8.29-8.41(m,3H),8.27(s,1H),4.11-4.22(m,1H),3.72-3.84(m,2H),2.58(s,3H),2.44(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝294.2,tR(min,方法BB)＝0.24。
[α]20D＝-3.00(c＝6mg/mL,MeOH)。
化合物2y
(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
制备(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯的整体合成方案如下所示。
步骤1：(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(70mg，337μmol)、(R)-3-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(117mg，0.40mmol，HCl盐)、TBTU(163mg，0.51mmol)和N,N-二异丙基乙胺(88mg，0.68mmol)在DMF(5mL)中的混合物在25℃下搅拌16h。添加水(5mL)以淬灭反应，并且将混合物用乙酸乙酯(5mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并且浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2，乙酸乙酯:石油醚＝2:1)纯化，得到(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(100mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.50(s,1H),7.86(s,1H),7.40-7.27(m,6H),6.00(d,J＝6.4Hz,1H),5.13(s,2H),4.60(m,1H),4.02-3.81(m,5H),2.51(s,3H),2.42(s,3H)。
步骤2：(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯
将(R)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(100mg，0.23mmol)在33％HBr的AcOH(5mL)中的混合物在25℃搅拌2h。将溶剂除去。将固体悬浮于AcOH(5mL)中，过滤，用AcOH(1mL×2)洗涤并冻干，得到(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯HBr盐(65mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.33(t,J＝5.6Hz,1H),8.72(s,1H),8.59-8.40(br s,3H),8.29(s,1H),4.42-4.17(m,1H),3.80-3.73(m,5H),2.60(s,3H),2.45(s,3H)。
LCMS(MH+):m/z＝308.1,tR(min,方法BB)＝0.30min。
[α]20D＝-2.00(c＝5mg/mL,MeOH)。
e.本发明的化合物的体外和体内表征
实例1a：具有式I的前药的母体化合物的亲和力数据和渗透性数据
闪烁亲近测定法(SPA)：
为了确定本发明所述化合物的亲和力，使用SPA。该测定法以384孔板形式(OptiPlate-384)进行，其中每个孔包含5μL测试化合物、5μL NR1s1s2(NMDA受体的配体结合域，MW 35.6kDa，最终0.075ug/孔)、5μL[3H]-MDL-105,519(从西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich)获得的甘氨酸位点的放射性标记的、高亲和力N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)谷氨酸受体拮抗剂，终浓度5nM，Kd＝1.3nM)、5μL链霉亲和素包被的成像珠(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)目录号：RPNQ0273，8ug/孔)的混合物。在超纯水中，测定缓冲液包含pH值为7.4的100mM HEPES-NaOH、150mM NaCl、1mM EDTA、10％甘油。通过包含10μM L-689,560(高效NMDA拮抗剂)和1％DMSO的总结合来定义非特异性结合。在黑暗中孵育30分钟(摇床，Multi-microplate Genie(微孔板混匀器))后，将SPA珠静置3h，然后在Viewlux仪器(珀金埃尔默公司)上读取信号。归一化数据用于计算IC50和Ki值。
MDR1-MDCKII渗透性测定Papp(AB)
将MDR1-MDCKII细胞(从荷兰癌症研究所(Netherlands Cancer Institute)的Piet Borst获得)以2.5x 105个细胞/mL的浓度接种到96孔BD插入系统中的聚乙烯膜(PET)上，直到4-7天形成汇合细胞单层。
实验程序：
用转运缓冲液(含10mM HEPES的HBSS，添加1％BSA，pH 7.4)从DMSO储备溶液中稀释测试化合物，使其浓度为0.5μM(DMSO：0.4％)，并应用于细胞单层的顶侧或基底外侧。在37℃和5％CO2与95％的相对湿度下，经60分钟的孵育，一式三份确定从A至B方向或从B至A方向的测试化合物的渗透。另外，还测定了每种化合物的流出比。根据分析物/IS的峰面积比，通过LC/MS/MS分析定量测试和参考化合物。
参考化合物：在A到B的渗透性中，非诺特罗(浓度：2μM)被用作低渗透性标记物，而普萘洛尔(浓度：2μM)被用作高渗透性标记物，并且还包括P-糖蛋白底物(地高辛)的双向渗透性。
数据分析：
使用以下等式计算表观渗透性系数Papp(cm/s)：
Papp＝(dCr/dt)x Vr/(A x C0) (1)
其中dCr/dt是受体室中化合物的累积浓度作为时间的函数(μM/s)；Vr是受体室中的溶液体积(顶侧上0.05mL；基底外侧上0.25mL)；A是运输的表面面积，即针对单层的面积为0.0804cm2；C0是供体室中的初始浓度(μM)。
使用以下等式计算流出：
流出比＝Papp(BA)/Papp(AB) (2)
计算质量平衡(回收)。将质量平衡定义为：实验结束时从受体室回收的化合物与残留在供体室中的化合物之和除以初始供体量。质量平衡应尽可能高。标准：回收<50％为不足。
为了评估细胞单层的完整性，在一个方向(A到B)上测量了荧光黄(LuciferYellow)渗透性。在对照孔中计算荧光黄的百分比，作为总体细胞膜完整性的估计。如果％荧光黄小于2％，则认为这些孔是完全可接受的。
表3a：本发明母体化合物的渗透性数据和Ki数据
BLOQ＝低于定量水平
NT＝未测试
表3a显示具有式V的化合物对NMDA受体的甘氨酸位点具有亲和力。
实例1b：本发明前药化合物的渗透性数据
前药的实验与表3a所示的母体化合物的实验相同。结果列于表3b中。结果表明，与各个母体化合物相比，母体化合物的前药具有改善的渗透性。
表3b：本发明前药化合物的渗透性。
实例2：体内暴露数据
体内程序：
在雄性斯普拉-道来(Sprague Dawley)大鼠(标准体重范围)中评估了测试化合物的大脑处置。简而言之，通过静脉推注(以10％羟丙基-β-环糊精或10-20％的Captisol配制，pH＝3)施用散装(标称剂量：2mg/kg，2ml/kg)或盒装(标称剂量：1mg/kg/化合物，2ml/kg)测试化合物。
样品收集：
在指定的时间点(每个时间点n＝3)从侧尾静脉采集连续血液样品，然后在取出大脑之前将大鼠置于深异氟烷诱导的麻醉下(每个时间点n＝3)。通过添加酯酶抑制剂(100μM氟磷酸二异丙酯)，可以稳定血液样品以防止进一步的离体代谢。类似地，脑匀浆缓冲液中包含酯酶抑制剂(100-125μM)。
将血液收集到涂有K3-EDTA的试管中，然后将样品轻轻倒置以确保样品均一。在最高4℃的条件下，将试管以3300x g离心10分钟，并且将血浆样品转移到微管(Micronictube)中。处死动物后，解剖脑样品，将其略微“蘸”在滤纸上以去除外部的血液溢出，然后转移到Covaris AFA管中。将血浆和脑样品保存在-80℃直至分析。
样品制备：
在血浆和脑匀浆中分别制备了七个校准标样和三个QC样品，浓度范围为10-10000ng/mL。制备空白样品(带有内标的对照基质)并按与校准标样相同的方式处理。在分析之前，使用Covaris聚焦超声仪将脑样品与milliQ水1:4(w/v)匀浆。用空白基质稀释预期浓度高于定量上限的研究样品。
随后使用相同的提取程序处理研究样品、校准标样、质量对照品和空白样品的脑匀浆和血浆，即通过向25μL样品中加入150μL内标乙腈(甲苯磺丁脲(Tolbutamide))进行蛋白质沉淀。离心样品，并将每个样品的上清液用水按1:1稀释，以降低有机溶剂的含量。
LC-MS/MS：
使用AB Sciex API4000三重四极杆(TQ)质谱仪以正电和负电喷雾电离和MS/MS模式(多反应监测，MRM)操作分析样品。质谱仪连接到配备有Waters Acquity UPLC HSS C18SB(1.7μm，30mm x2.1mm)分析柱的Waters Acquity UPLC。色谱分离是通过3分钟的梯度完成的，从98％的流动相A(0.1％的甲酸水溶液)和2％的流动相B(0.1％的乙腈甲酸)增加到95％的流动相B。流速为0.6mL/min，并且柱温为40℃。MRM转变(m/z)如下：380→248、350→263，甲苯磺丁脲：269→106(负)和271→155(正)。通过线性回归，1/x2加权进行定量。
对照基质匹配的校准标样，对血浆和大脑中前药和药物的浓度进行定量。下表显示了血脑沉积数据。
表4：向雄性斯普拉-道来大鼠施用本发明的前药后，相应母体化合物的体内暴露数据
BLOQ＝低于定量水平
实例3-最大电休克阈值
将初试大鼠在其饲养笼中适应手术室，并随意提供食物和水。在研究开始时对所有大鼠称重，并随机分为治疗组。各个治疗组分别服用10％羟丙基-β-环糊精(溶媒)或化合物2c(3、10或30mg/g)，根据治疗组，在测试前30min通过皮下注射进行动物给药。使用HugoSachs Electronik刺激器分别评估大鼠的强直后肢伸肌惊厥的产生，该刺激器通过角膜电极提供0.3秒持续时间的可调恒定电流(1-300mA)。刺激强度通过“上下”电击滴定法从典型的25mA基线变化。因此，治疗组中的第一只大鼠以预期或估算的癫痫阈值(CC50)电流(即在50％的动物中产生电流的强直后肢伸肌癫痫)受到电击。对于随后的动物，如果前面的大鼠分别表现出或不表现出强直后肢伸展，则刺激强度以对数0.06:10Λ(1+x*0.06)mA的间隔降低或升高。对于治疗组中的所有大鼠，均继续该过程。根据Kimball等人的方法，从n＝12-16的治疗组中产生的数据用于计算CC50值(Kimball A,Burnett W,Doherty D.Chemicalprotection against ionizing radiation.I.Sampling methods for screeningcompounds in radiation protection studies with mice.[化学防护，防止电离辐射。一，在小鼠辐射防护研究中筛选化合物的采样方法]Radiat Res.[辐射研究]1957；7(1):1-12)。根据Litchfield和Wilcoxon(Litchfield J,Wilcoxon F.A simplified method forevaluating dose-effect experiments.[一种简化的评估剂量效应实验的方法]JPharmacol Exp Ther.[药理学和实验治疗学杂志]1949；96(1):99-113)，评估了用药物治疗的动物和溶媒之间的显著差异。
如图1所示，皮下施用3、10和30mg/kg剂量的化合物2c对最大电休克阈值显示出剂量依赖性作用。
实例4-强迫游泳实验
来自Envigo公司(前Harlan；Blackthorn，英国)的成年雄性Wistar Kyoto大鼠。将动物保持在受控条件下(21±1℃，37±1％，12/12h亮/暗周期，上午8点光照)，并随意提供食物和水。在所有研究中，将WKY大鼠随机分为最多5个治疗组(每组n＝20)。根据治疗组，WKY大鼠接受单次施用盐水(溶媒)、氯胺酮(5mg/kg)或化合物2c(3、10或30mg/kg)。在测试g之前24小时通过皮下注射进行动物给药。将WKY大鼠分别置于25±1℃的装有30cm水的玻璃圆柱体(高50cm，直径20cm)中，进行5分钟的测试阶段。测试阶段(使用放置在圆柱体上方的摄像机进行后续行为分析)记录了静止时间(s)。单向方差分析(ANOVA)用于检测FST数据中的统计显著性。Fisher最小显著性差异(LSD)测试用于事后分析。概率值为P<0.05被认为是统计学上显著的。使用SPSS来进行统计分析。
如图2所示，皮下施用3、10和30mg/kg剂量的化合物2c显示出剂量为30mg/kg时对静止时间有显著影响。
实例5-大鼠的静息状态脑电图(rsEEG)
手术程序
在手术当天，将大鼠(270-300g)用0.25ml/100g皮下注射(SC)1:1Hypnorm/速眠安(Dormicum)麻醉，并固定在带有钝耳棒的立体定位仪(大卫·科普夫仪器公司(David KopfInstruments)，图洪加(Tujunga)，加利福尼亚州，美国)中。在头皮下注射麻卡因(0.2mlSC)，并在眼睛上涂凝胶(Neutral Opthta Eye Gel)以防止粘膜变干。在颅骨中开孔，以允许在左和右边缘前/边缘下PFC(AP：距前囟缝合线3.0mm，内侧-侧面(ML)：距矢状缝合线+/-0.7mm，以及DV：距硬脑膜3.0mm)和丘脑(AP：距前囟缝合线-2.8mm，ML：距矢状缝合线+0.7mm，以及DV：距硬脑膜4.4mm)中放置两个深度电极(E363系列；PlasticsOne，美国弗吉尼亚州罗阿诺克(Roanoke,VA,USA))；和颅顶点处的三个螺旋电极(AP：距前囟缝合线-2mm，ML：距矢状缝合线+2.0mm)，参比电极(AP：+8.0mm和ML：-2.0mm)和接地电极(AP：-5mm，ML：+5mm)。在手术期间，将指甲切开以防止大鼠在手术后刮伤伤口。手术完成后，将大鼠置于加热灯下直至意识恢复(最多4小时)。将浸泡过水的食物颗粒放在饲养笼中，这样大鼠就可以轻松快捷地开始喂食。提供了额外的麦片，以帮助恢复。大鼠用Norodyl和Noromox治疗共计5天，并在术后10-14天的恢复期内密切观察。每天记录动物体重。没有大鼠的体重减轻超过手术前体重的10％。7-10天后移除缝合线。在实验结束时，在所有记录电极上进行电损伤，并切开大脑以进行显微镜观察，检查电极位置。深度和螺旋电极阻抗之间的差异通过调查相对功率变化来解决，而共模噪声源从在屏蔽盒中进行记录得以减少，并且从分析中排除了约50、100和150Hz的功率估计。
电生理记录
每天处理大鼠，并使大鼠在记录阶段的一周前习惯于记录盒。在明/暗周期的暗阶段进行记录。在上午8点，将大鼠(400-500g)分别转移到放置在电屏蔽隔音盒(90cm宽，55cm深，65cm高)中的丙烯酸室(30cm宽，45cm深，55cm高)中，并且将它们拴在悬挂在旋转转环上的六针电线上，以便其在记录盒内自由移动。使大鼠适应2小时，然后进行45分钟的基线记录，然后给大鼠皮下注射10％羟丙基-β-环糊精(溶媒)、10mg/kg氯胺酮的生理盐水或20mg/kg化合物2c的10％HPβCD，并在盒子中再留两个小时。大鼠每周只进行一次记录，记录之间至少要间隔六天，以清除化合物。对LFP/ECoG模拟信号进行放大并在0.01-300Hz处进行带通滤波(精度模型(Precision Model)440；布朗利(Brownlee)，帕洛阿尔托，加利福尼亚州，美国)，并以1kHz的采样率转换为数字信号(CED Power1401，电源1(625kHz，16位)和CED扩展ADC16；CED，剑桥，英国)。将模拟50Hz陷波滤波器(精度模型(Precision Model)440，布朗利(Brownlee))应用于第一个数据集的LFP/ECoG信号，但未应用于以下药学-EEG实验。视频记录在EthoVision中进行处理，产生移动性信号，该信号随后在Spike2中与LFP/ECoG信号一起收集，并具有延迟，该延迟随后用于使信号同步。
数据分析
使用sigTOOL工具箱中的函数在MATLAB R2017a(美国马萨诸塞州纳蒂克市的MathWorks公司(The MathWorks,Inc.,Natick,MA,USA))中开发了运动状态检测算法和状态特定的药学-EEG分析。根据Tukey的诚实显著性差异(Turkey’s honest significantdifference)，对药物处理过的动物和溶媒之间的显著差异进行了评估。
如图3a、3b、3c、3d所示，以20mg/kg剂量皮下施用的化合物2c在静息状态脑电图中显示出对高频振荡的显著作用，并且与氯胺酮相似。
实例6-大鼠的微透析
使用最初体重为275-300g的雄性斯普拉-道来大鼠。这些动物是在可控制的条件下于正常室内温度(21±2℃)和湿度(55±5％)的条件下，在12小时的明/暗循环中畜养的，并随意提供食物和自来水。
用hypnorm/速眠安(2ml/kg)麻醉大鼠并且将脑内导向套管
(CMA/12)立体定位植入大脑，旨在将透析探针尖端定位在腹侧海马中(坐标：前囟后5.6mm，侧面-4.8mm，腹侧至硬脑膜7.0mm)。固定螺栓和丙烯酸接合剂被用于固定导向套管。通过直肠探针监测动物的体温并保持在37℃。使大鼠从手术中恢复2天，将它们单独地关在笼子里。
实验当天，将微透析探针(CMA/12，直径0.5mm，长度3mm)插入导向套管。探针通过双通道旋转接头连接到微注射泵。在将探针插入大脑之前不久，开始使用过滤的林格液(145mm NaCl，3mM KCl，1mM MgCl2、1.2mM CaCl2)灌注微透析探针，并以1μl/min的恒定流速继续进行实验。稳定180分钟后，开始实验。在4℃下，每20分钟将透析液收集到含三氟乙酸(最终浓度为0.25％)的聚苯乙烯微瓶中。实验后，处死动物并移除大脑，并验证探针的位置。
通过使用浓度为1000ng/ml的化合物2c和化合物1c的储备溶液确定探针的体外回收。在室温下进行实验。对于每种化合物，将三个微透析探针(CMA/3)插入含有储备溶液的试管中。在将探针插入储备溶液之前不久，开始使用过滤的林格氏溶液灌注微透析探针，并以1μl/min的恒定流速继续进行实验。稳定60分钟后，每个探针采样3个连续的20分钟样品。
如图4所示，在经皮下全身施用剂量为30mg/kg的化合物2c后，在大鼠腹侧海马中观察到可观的化合物1c的细胞外水平。
Claims (36)
1.一种具有式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R2选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R3选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4卤代烷基、氰基、C3-6环烷基和C1-4烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、C1-4羟基卤代烷基、氰基、NRaRb、SRcRd、OR6、L-(OR6)和R7；
Ra和Rb独立地选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基；
Rc和Rd独立地选自由以下组成的组：氢和C1-4烷基；
R6选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基和C1-4羟基卤代烷基；
L表示C1-3亚烷基；
R7选自由以下组成的组：C3-6环烷基，苯基，4、5或6元杂环和5或6元杂芳基，其中所述环烷基、苯基、杂环或杂芳基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；
R5选自由以下组成的组：C1-5烷基、C1-4卤代烷基、羟基烷基、C1-4羟基卤代烷基、R8、WR8、和W(OR9)；
W选自由以下组成的组：C1-3亚烷基和-CH2C(O)-；
R8选自由以下组成的组：C3-6环烷基，苯基，4、5或6元杂环和5或6元杂芳基，其中所述环烷基、苯基、杂环或杂芳基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基、C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；并且
R9是未被取代或被1、2或3个F取代的C1-3烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自由以下组成的组：氢、卤素和C1-4烷基；
R2选自由以下组成的组：氢、卤素和C1-4烷基；
R3选自由以下组成的组：氢、卤素和C1-4烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、OR6和R7；
R6选自由以下组成的组：氢、C1-4烷基和C1-4卤代烷基；
R7选自由以下组成的组：C3-6环烷基和苯基，其中所述环烷基和苯基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；
R5选自由以下组成的组：C1-4烷基、R8、WR8、和W(OR9)；
W是C1-3亚烷基；
R8选自由以下组成的组：C3-6环烷基和苯基，其中所述环烷基和苯基独立地未被取代或被1、2或3个独立地选自卤素、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代，其中所述C1-3烷基和C1-3烷氧基独立地未被取代或被1、2或3个F取代；并且
R9是未被取代或被1、2或3个F取代的C1-3烷基。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是氢。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是氢。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自由以下组成的组：氢、C1-4烷基和卤素。
6.根据权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自由以下组成的组：氢、氟和甲基。
7.根据权利要求6所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是氢。
8.根据权利要求1至2中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1、R2和R3是氢。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是C1-4烷基。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是甲基。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是C1-4氟烷基。
12.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是卤素。
13.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是未被取代或被C1-3烷基取代的苯基。
14.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4是C1-4烷氧基。
15.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4氟烷基、NRaRb、SRcRd、C1-4羟基烷基、C1-4烷氧基、卤素、以及未被取代或被乙基取代的苯基。
16.根据权利要求15所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4选自由以下组成的组：甲基、乙基、异丙基、环丙基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、异丙氧基、乙氧基、甲氧基、溴、氟、二甲氨基、甲硫基和乙基苯基。
17.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式Ia：
18.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、-CH2-环丙基、2-甲氧基乙基、异戊基、苄基、环己基、2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基和苯基。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是C1-5烷基。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、丙基、丁基和异丙基。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、丙基和丁基。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5选自由以下组成的组：甲基和乙基。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是甲基。
24.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R5是乙基。
25.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自由以下组成的组：
(R)-2-氨基-3-(7-(二氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-环丙基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙基甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯；
(2-氧代-2-吡咯烷-1-基-乙基)(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸酯；
(R)-2-氨基-3-(7-(2-乙基苯基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-(三氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-异丙氧基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-溴噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-(羟基甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-(氟甲基)噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(6-氟-7-甲基-噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；以及
(R)-2-氨基-3-(6,7-二甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；或其药学上可接受的盐。
26.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自由以下组成的组：
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丁酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环丙基甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸2-甲氧基乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异戊酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苄酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸环己酯；以及
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸苯酯；或其药学上可接受的盐。
27.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自由以下组成的组：
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸甲酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸乙酯；
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸丙酯；以及
(R)-2-氨基-3-(7-甲基噻吩并[3,2-b]吡啶-2-甲酰胺基)丙酸异丁酯；或其药学上可接受的盐。
28.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂。
29.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求28所述的药物组合物，用于作为药物使用。
30.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求28所述的药物组合物，用于在治疗抑郁症中使用。
31.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求28所述的药物组合物，其根据权利要求30所述使用，其中所述抑郁症选自由以下组成的组：重度抑郁症；难治性抑郁症；紧张性抑郁症；忧郁性抑郁症；非典型抑郁症；精神病性抑郁症；产期抑郁症；产后抑郁症；双相抑郁症，包括I型双相抑郁症和II型双相抑郁症；以及轻度、中度或重度抑郁症。
32.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求28所述的药物组合物，用于在治疗选自由以下组成的组的病症中使用：自杀意念、双相障碍(包括双相抑郁症)、强迫症和癫痫持续状态。
33.一种治疗抑郁症的方法，所述方法包括将治疗有效量的根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求28所述的药物组合物施用至有需要的患者(例如人类患者)。
34.根据权利要求33所述的治疗抑郁症的方法，其中抑郁症选自由以下组成的组：重度抑郁症；难治性抑郁症；紧张性抑郁症；忧郁性抑郁症；非典型抑郁症；精神病性抑郁症；产期抑郁症；产后抑郁症；双相抑郁症，包括I型双相抑郁症和II型双相抑郁症；以及轻度、中度或重度抑郁症。
35.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求28所述的药物组合物在制备用于治疗抑郁症的药物中的用途。
36.根据权利要求35所述的化合物或药物组合物的用途，其中所述抑郁症选自由以下组成的组：重度抑郁症；难治性抑郁症；紧张性抑郁症；忧郁性抑郁症；非典型抑郁症；精神病性抑郁症；产期抑郁症；产后抑郁症；双相抑郁症，包括I型双相抑郁症和II型双相抑郁症；以及轻度、中度或重度抑郁症。
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