CN113999237A

CN113999237A - 一种核苷类前药及其用途

Info

Publication number: CN113999237A
Application number: CN202111271644.0A
Authority: CN
Inventors: 吕佳声; 吉祥; 贺小林; 杜显超; 孔宪起; 陈大为
Original assignee: Risen Suzhou Pharma Tech Co Ltd
Current assignee: Risen Suzhou Pharma Tech Co Ltd
Priority date: 2021-10-29
Filing date: 2021-10-29
Publication date: 2022-02-01
Anticipated expiration: 2041-10-29
Also published as: CN113999237B

Abstract

本发明涉及一种可口服治疗哺乳动物病毒感染的核苷类前药，具体地，本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，或其药物组合物，以及上述化合物或组合物在制备用于治疗、抑制或预防感染病毒所致疾病的药物中的用途。

Description

一种核苷类前药及其用途

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种核苷类前药或其组合物在治疗人、猫或其它哺乳动物由病毒感染所致疾病中的用途。

背景技术

在急性传染病中，绝大部分都是病毒性传染病，其具有发病率高，死亡率高的特点。病毒是一类个体极其微小、缺乏独立代谢能力、以寄生方式存在的病原微生物。病毒的种类繁多，目前，已发现了许多对人类具有高传染性和高致病性的病毒，这些病毒常造成地方性甚至全球性传染病暴发，对人类社会有极大的危害，如流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒、非典型性肺炎(SARS)病毒、中东呼吸综合征(MERS)病毒、埃博拉病毒等。一些病毒也可感染动物，引起各种轻到重度疾病，同时，动物也成为这些病毒的携带者和传染源，令人类对其防不胜防。

以冠状病毒为例，冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales) 冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具囊膜(envelope)、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。冠状病毒除了感染人类，还可感染多种哺乳动物，包括猫、蝙蝠、猪、犬、貂、鼠、牛、马等(CCDC Weekly/Vol.3/No.41)。

猫冠状病毒(FCoV)在猫中广泛存在，全世界估计有40～80％的猫携带该病毒。在自然界中，FCoV以两种不同的生物型存在：猫肠道冠状病毒(FECV) 和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)，后者是前者的突变形式。FECV感染的猫大多数是无症状的，但FIPV感染容易侵入其他器官，发展成传染性腹膜炎(FIP)。此病好发于3-9个月的年轻猫，尤其常发于群聚饲养的猫群。病程可能是突发性(幼猫较常发生)或缓慢且持续数周。本病致死率高达95％，前期诊断存在一定难度，一般认为唯有组织病理学检查才能100％确诊。在治疗上，目前没有针对FIP的特效药物。一旦发现感染，通常采取支持疗法：强制进食(以食道或胃管)，输液以矫正脱水，胸腔穿刺术以舒缓呼吸症状等。也常使用抑制免疫和抗炎症药物，如高剂量类固醇、细胞毒性药物等。

针对上述病毒感染的治疗，美国吉利德公司做了很多研究。其不仅公开了以瑞德西伟为代表的化合物可用于治疗包括冠状病毒在内的众多病毒引发的疾病(WO2009132135)，也公开了其活性成分GS-441524可用于治疗猫冠状病毒引起的猫传染性腹膜炎(简称“猫传腹”)等疾病(WO2018169946)。目前，研发人员已经发现，GS-441524在治疗包括人和猫在内的哺乳动物感染冠状病毒所致疾病中，具有很好的效果(Advantages ofthe Parent Nucleoside GS-441524 over Remdesivir for Covid-19 Treatment，Medical Chemicstry Letters,Victoria C.et al.；Development and validation of aUHPLC-MS/MS method for quantification of the prodrug remdesivir and itsmetabolite GS-441524:a tool for clinical pharmacokinetics of SARS-CoV-2/COVID-19 and Ebola virus disease,J Antimicrob Chemother,Valeria Avataneo etal.)。已经有研发人员依据GS-441524设计出了一些可用于治疗人或猫或其它哺乳动物的药物或前体药物(Potency and pharmacokinetics of GS-441524 derivatives againstSARS-CoV-2,Bioorg.Med. Chem.46(2021)116364)。然而，本申请人在研究中发现可用于口服的 GS-441524的前药鲜少报道，而可用于治疗猫的口服药则更少。相较于注射给药等实施方式，口服药具有施用方便、减轻痛苦等优点，但是，由于口服药要经过消化道吸收，其接触的环境更为复杂。因此如何设计出效果好的可口服的 GS-441524前药，仍是本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本申请主要解决的技术问题是提供一种GS-441524前药化合物，可用于口服治疗包括人和猫等哺乳动物由病毒感染引起的疾病。在一方面，本发明提供一种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或酯或水合物或立体异构体：

其中，

R¹选自H、取代或未取代的C2-C5烷酰基，具体地，可以是C3-C5、C4-C5 或C5烷酰基；

R²选自H、取代或未取代的寡肽酰基、取代或未取代的C5-C10烷基酰基或取代或未取代的C5-C10环烷基酰基；具体地，可以是C5-C10、C6-C10、 C8-C10、C5-C9、C6-C9烷酰基，诸如C5烷酰基、C10烷酰基、环戊基/环己基丙酰基，环戊基/环己基乙酰基或C4-C10、C6-C10、C8-C10、C4-C9、C6-C9 环烷基烷酰基；

上述R¹和R²不同时为H。

本发明提供的化合物，在施用至哺乳动物后，表现出较高的血浆药物暴露量和/或较长的体内清除半衰期，从而增加了GS-441524的口服生物利用度和治疗有效性。由于本申请提供的化合物具有良好的口服吸收和药物代谢性质，显著提高GS-441524口服生物利用度，可应用于制备治疗哺乳动物由病毒感染所致疾病的药物，尤其是口服用药。

进一步地，化合物包括式(II)所示的化合物：

其中，R²选自取代或未取代的寡肽酰基。

进一步地，化合物包括式(III)所示的化合物：

其中，R³为H或酰胺基，诸如甘氨酰缬氨基。进一步地，化合物包括式(IV)所示的化合物：

其中，R¹为取代或未取代的C2-C5烷酰基，

进一步地，化合物包括以下所示的化合物：

在一些实施方式中，上述化合物作为GS-441524的前药施用于受病毒感染的哺乳动物。

在另一方面，本申请还提供一种药物组合物，该药物组合物包括如上任意所述的化合物或者其药学上可接受的盐或水合物或立体异构体，以及至少一种药学上可接受的赋形剂或载体或稀释剂。

进一步地，药学上可接受的赋形剂包括粘合剂，填充剂，崩解剂，润滑剂和助流剂中的一种或多种。

进一步地，药学上可接受的载体包括乳膏、乳剂、凝胶、脂质体和纳米颗粒中的一种或多种。

在又一方面，本申请提供的上述任一化合物或者其药学上可接受的盐或水合物或立体异构体或上述任一药物组合物，可应用于预防、抑制和治疗病毒感染所致疾病的口服药物的制备。

进一步地，病毒选自：

(1)感染人的冠状病毒：重症急性呼吸综合征冠状病毒SARS-CoV(Severe acuterespiratory syndrome coronavirus，SARS-CoV)、2019新型冠状病毒(2019 -nCoV或SARS-CoV-2)、中东呼吸综合征冠状病毒MERS-CoV(Middle East respiratory syndromecoronavirus，MERS-CoV)；

(2)致普通感冒的冠状病毒：所述致普通感冒的冠状病毒优选选自以下项组成的组：人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43)、人冠状病毒229E (Human coronavirus229E)、人冠状病毒NL63(Human coronavirus NL63)、人冠状病毒HKUl(Human coronavirusHKUl)；

(3)人流感病毒：甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒；

(4)黄病毒科病毒：丙型肝炎病毒(HCV)、登革热病毒(DENV)、寨卡病毒(Zika)；

(5)丝状病毒科病毒：马尔堡病毒(MBV)、埃博拉病毒(EBV)；

(6)沙粒病毒科病毒：原型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)，拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、莫佩亚(Mopeia)病毒(MOPV)、伊派 (Ippy)病毒和莫巴拉(Mobala)病毒(MOBV)

(7)副黏液病毒科病毒：包括人副流感病毒(Human parainfluenza viruses)、腮腺炎病毒(Mump virus)、麻疹病毒(Measles virus)、呼吸道合胞病毒(RSV) 诸如人呼吸道合胞病毒(HRSV)；

(8)感染其他哺乳动物的冠状病毒：猫肠道冠状病毒(FECV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)。

在一些实施方式中，本发明化合物或组合物预防、抑制和治疗的疾病为： (1)人冠状病毒感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；(2)人呼吸道合胞病毒(HRSV)感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；(3)人流感病毒感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；(4)丙型肝炎病毒(HCV)引起的慢性丙型肝炎及其并发症；(5)登革热病毒(DENV)引起的登革热及其并发症；(6)寨卡病毒(Zika)引起的感染及其并发症；(7)马尔堡病毒(MBV)、埃博拉病毒(EBV)引起的出血热及其并发症；(8)SARS-CoV-2引起的新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease2019，COVID-19)；(9)拉沙病毒(LASV) 引起的拉沙(Lassa)出血热；以及(10)上述疾病的任意组合。

在一些实施方式中，本发明化合物或组合物预防、抑制和治疗的疾病为感染猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)引起的猫传染性腹膜炎、感染猫肠道冠状病毒 (FECV)引起的猫肠炎，或感染猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪流行性腹泻。

在一些实施方式中，上述化合物或药物组合物适用于口服施用。在一些实施方式中，上述化合物或药物组合物可适用于注射施用。

在一些实施方式中，口服施用或注射施用的受试者为哺乳动物。

在一些实施方式中，口服施用或注射施用的受试者为人。在另一些实施方式中，口服施用或注射施用的受试者为猫、猪、鼠、貂或狗，尤其是猫。

本申请提供的GS-441524前药化合物，或其药学上可接受的盐或异构体，或其药物组合物，在施用至哺乳动物后，至少具有以下优点中的一个：良好的口服生物利用度、较长的半衰期、较高的血浆药物暴露量。鉴于本申请提供的化合物不仅性能优越，且具有良好的口服生物利用度，因此不仅可用于注射施用，还可应用于制备治疗病毒感染所致疾病的口服药物。

附图说明

图1：GS-441524(5mg/kg)、化合物5(7.68mg/kg)以等摩尔的剂量分别静脉注射施用于大鼠；以及GS-441524(30mg/kg)、化合物5(46.1mg/kg)以等摩尔量的剂量分别口服施用于大鼠后，平均血浆GS-441524浓度相对时间的对比曲线图。

图2：GS-441524(5mg/kg)、化合物1(6.44mg/kg)以等摩尔的剂量分别静脉注射施用于猫，GS-441524(30mg/kg)、化合物1(38.7mg/kg)以等摩尔量的剂量分别口服施用于猫后，平均血浆GS-441524浓度相对时间的对比曲线图。

图3：GS-441524(5mg/kg)、化合物5(7.68mg/kg)以等摩尔的剂量分别静脉注射施用于猫，GS-441524(30mg/kg)、化合物5(46.1mg/kg)以等摩尔量的剂量分别口服施用于猫后，平均血浆GS-441524浓度相对时间的对比曲线图。

图4：GS-441524(5mg/kg)、化合物c(6.7mg/kg)以等摩尔的剂量分别静脉注射施用于猫，GS-441524(30mg/kg)、化合物c(40.2mg/kg)以等摩尔的剂量分别口服施用于猫后，平均血浆GS-441524浓度相对时间的对比曲线图。

具体实施方式

为了对本发明的说明书中所使用的术语提供清楚且一致的理解，在下文中提供一些定义。此外，除了特殊说明，本发明所用的全部技术和科学术语具有同本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的相同的含义。

当在权利要求和/或说明书中与术语“包括”结合使用时，词语“一”的使用可以表示“一个”，但它也与“一个或多个”，“至少一个”和“一个或多于一个”的含义已知。类似地，词语“另一个”可以表示至少第二个或者很多个。

如在本说明书和权利要求中所使用的词语“包括”(以及包括的任何形式，诸如“包括”和“包含”)，“具有”(以及任何形式的具有，“具有”、“包含”和“含有”) 是包括性的和开放式的，并且不排除另外的未列出的要素或处理步骤。术语“约”或“大约”用于表示该值包括在确定该值中所用的仪器和方法带来的误差。

本发明所用术语“药学上可接受的”是指该术语描述的药物、药品、惰性成分等，适合用于与人和低等动物的组织相接触，而没有异常毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、过敏反应等，与合理的利益/风险比率相称。它优选的是指在美国药典或其它公认的药典中列出的用于动物，更特别是用于人的化合物、组合物以及制剂等。

化合物的“药学上可接受的立体异构体”是指是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体。进一步讲，分子中原子或原子团互相连接次序相同，但空间排列不同而引起的异构体称为立体异构体，主要分为两大类：因键长、键角、分子内有双键、有环等原因引起的立体异构体称为构型异构体 (configuration stereo-isomer)。一般来讲，构型异构体之间不能或很难互相转换。仅由于单键的旋转而引起的立体异构体称为构象异构体(conformational stereo-isomer)，有时也称为旋转异构体(rotamer)。当旋转异构体中的旋转受阻而无法旋转时，则成为“立体异构体”，例如在联苯结构中，当α-和α’-位上存在较大且不同的取代基时，两个苯环之间的单键旋转由于取代基间的阻碍而无法自由旋转，因此产生两个立体异构体。

化合物的“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的化合物的盐。理想的化合物的盐(碱性、酸性或带电官能团)可以保留或改善如本发明所定义的母体化合物的生物活性和性质，并且不是生物学上不需要的。药学上可接受的盐可以由含有碱性或酸性片段的母体化合物通过常规化学方法合成。通常，这种盐通过化合物(游离酸或碱)与等化学计量的碱或酸在水中或有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备。盐可以在药剂的最终分离或纯化过程中原位制备，或者将游离酸或碱形式的已纯化的本发明化合物单独的与所期望的相应碱或酸反应并分离由此形成的盐而制备。术语“药学上可接受的盐”还包括含有共价键合至阴离子基团的阳离子基团的两性离子化合物，它们被称作“内盐”。

术语“前药”或其等同表述是指在体外或体内直接或间接转化成活性形式的药剂(例如参见R.B.Silverman,1992,"The Organic Chemistry of Drug Design and DrugAction,"Academic Press,Chap.8；Bundgaard,Hans；Editor.Neth.(1985), "Design ofProdrugs".360 pp.Elsevier,Amsterdam；Stella,V.；Borchardt,R.； Hageman,M.；Oliyai,R.；Maag,H.；Tilley,J.(Eds.)(2007),"Prodrugs:Challenges and Rewards,XVIII,1470 p.Springer)。前药可用于改变具体药物的生物分布(例如，使药剂通常不会进入蛋白酶反应位点)或药代动力学。已经使用多种基团例如酯、醚、磷酸酯/盐等来修饰化合物以形成前药。当将前药施用至受试者时，该基团通过酶促或非酶促、还原、氧化或水解地裂解掉，或者以其它方式释放出活性化合物。如本文中所使用的，“前药”包括药学上可接受的盐，或药学上可接受的溶剂化物，以及上文的任何结晶形式。前药通常(尽管不一定)是药学上无活性的，直至其转化为活性形成。

应当理解的是本发明所用术语“取代”或“被取代”包括隐含的条件，即这种取代随着取代原子化合价和取代基的变化，取代产生稳定的化合物(例如化合物不能自发进行重排、环化、消除等过程)。如本发明所用术语“取代的”包括有机化合物所有允许的取代基。在广义上，允许的取代基包括的无环和环状，支链化和非支链支化，碳环和杂环，芳香族和非芳香族为取代基有机化合物。取代基可以是一个或多个。术语“取代的”是指当上述基团与在一个或多个位置被取代时，取代基包括酰基氨基(包括氨基甲酰基和脲基)、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、烷氧基羰基、羧基、羧基、氨基羰基、单和二烷基氨基羰基、氰基、叠氮基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、硫基、烷硫基、芳硫基、烷硫基羰基、硫代羧酸酯、低烷基、低链烯基、低炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、低烷氧基、芳氧基、芳氧基羰氧基、苄氧基、苄基、亚磺酰基、烷基亚磺酰基、磺酰基、硫酸盐、磺酸盐、磺酰胺、磷酸盐、膦酸盐、亚氨基、甲酰基等。如果允许，任何上述取代基可以进一步被取代，例如被烷基、芳基或其它基团取代。

本发明所用术语“酰”是指一分子羧酸脱羟基后留下的-C(＝O)R_a的片段，术语“酰基”指化合物或片段中至少一个碳或杂原子与-C＝O上的碳原子共价键合。术语“C2-C5烷酰基”是指R_a为含有1-4个碳原子的直链或支链的饱和烃基，具体地，R_a可以是例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基等，优选为异丁基。

本发明所用术语“胺基”或“氨基”是指未取代或取代的通式-NR_bR_c的片段，其中R_b和R_c各自独立地为氢、烷基、芳基或杂环基，或R_b和R_c一起与它们所连接的氮原子形成杂环。因此，本发明所用术语“酰胺”或“酰氨”指酰基上的碳与氨基或胺基上的氮相连接的组合基团，本发明所用术语“酰胺基”或“酰氨基”指化合物或片段中至少一个碳或杂原子与酰胺基团或酰氨基团上的氮原子相连的结构。

术语“环烷基”，“脂环族”，“碳环”和等同表述是指在单环、螺环(共享一个原子)或稠合(共享至少一个键)碳环体系中包含饱和或部分不饱和碳环的基团，其中碳环体系具有3至15个碳原子。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯-1-基、环戊烯-2-基、环戊烯-3-基、环己基、环己烯-1- 基、环己烯-2-基、环己烯-3环庚基、双环[4,3,0]壬基、降冰片基等。术语环烷基包括未取代的环烷基和取代的环烷基

术语“C5-C10环烷基酰基”是指-C(＝O)R_a中的R_a为含有4-9个碳原子的直链或支链或含环烷基的饱和烃基，例如正己基、异己基、3-甲基戊基酰基、庚基、壬基、环戊烷乙基等，优选为壬基或环戊烷乙基。

术语“肽”是指由两个或两个以上氨基酸分子间脱水缩合后以酰胺键相互连接在一起形成的化合物。“寡肽”一般而言，构成肽的氨基酸数目为2(二肽) 至10(十肽),具体的，寡肽可以是二肽、三肽、四肽，优选为二肽。

术语“寡肽酰基”是指寡肽上的羧基脱羟基基团后的主要部分。

本发明所用术语“氨基酸”通常是指同时包含羧酸基团和胺基基团的有机化合物。术语“氨基酸”包括“天然”和“非天然”的氨基酸。另外，术语氨基酸包括 O-烷基化或N-烷基化的氨基酸，以及具有含氮、硫或氧的侧链(例如Lys，Cys 或Ser)的氨基酸，其中氮、硫或氧原子可以被或不被酰基化或烷基化。氨基酸可以是L-氨基酸，D-氨基酸或L-和D-混合的氨基酸，包括(但不限于)外消旋混合物。

本发明所用术语“天然氨基酸”和等同表达是指通常在天然存在的蛋白质中发现的L-氨基酸。天然氨基酸的实例包括但不限于丙氨酸(Ala)，半胱氨酸 (Cys)，天冬氨酸(Asp)，谷氨酸(Glu)，苯丙氨酸(Phe)，甘氨酸(Gly)，组氨酸(His)，异亮氨酸(Ile)，赖氨酸(Lys)，亮氨酸(Leu)，甲硫氨酸(Met)，天冬酰胺(Asn)，脯氨酸(Pro)，谷氨酰胺(Gln)，精氨酸(Arg)，丝氨酸(Ser)，苏氨酸(Thr)，色氨酸(Trp)，酪氨酸(Tyr)，β-丙氨酸(β-Ala)和γ-氨基丁酸(GABA)等。

本发明所用术语“非天然氨基酸”是指天然氨基酸的任何衍生物，包括D-型氨基酸及其衍生物，以及α-和β-氨基酸衍生物。应注意的是，在本发明中某些非天然氨基酸的(例如羟脯氨酸)可在自然界中存在于某些生物组织或特定蛋白质中。具有许多不同保护基团、适于固相肽合成中直接应用的氨基酸是可以通过购买得到的。除了二十个最常见的天然氨基酸，可以根据本发明使用如下实例的非天然氨基酸和氨基酸衍生物(括号中为常见的缩写)：2-氨基己二酸(Aad)，3-氨基己二酸(β-Aad)，2-氨基丁酸(2-Abu)，α，β-脱氢-2-氨基丁酸 (8-AU)，1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACPC)，氨基异丁酸(Aib)，3-氨基异丁酸 (β-Aib)，2-氨基-噻唑啉-4-羧酸，5-氨基戊酸(5-Ava)，6-氨基己酸(6-Ahx)，2-氨基庚酸(Ahe)，8-氨基辛酸(8-Aoc)，11-氨基十一烷酸(11-Aun)，12-氨基十二烷酸(12-Ado)，2-氨基苯甲酸(2-Abz)，3-氨基苯甲酸(3-Abz)，4-氨基苯甲酸(4-Abz)，4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸(Statine，Sta)，氨基氧基乙酸 (Aoa)，2-氨基四氢化萘-2-羧酸(ATC)，4-氨基-5-环己基-3-羟基戊酸(ACHPA)，对氨基苯丙氨酸(4-NH2-Phe)，2-氨基庚二酸(Apm)，联苯基丙氨酸(Bip)，对溴苯丙氨酸(4-Br-Phe)，邻氯苯丙氨酸(2-Cl-Phe)，间氯苯丙氨酸(3-Cl-Phe)，对氯苯丙氨酸(3-Cl-Phe)，间-氯酪氨酸(3-Cl-Tyr)，对苯甲酰基苯丙氨酸(Bpa)，叔丁基甘氨酸(TLG)，环己基丙氨酸(Cha)，环己基甘氨酸(Chg)，锁链素 (Des)，2,2-二氨基庚二酸(Dpm)，2,3-二氨基丙酸(Dpr)，2,4-二氨基丁酸(Dbu)， 3,4-二氯苯丙氨酸(3,4-Cl2-Phe)，3,4-二氟苯丙氨酸(3,4-F2-Phe)，3,5-二碘酪氨酸(3,5-I2-Tyr)，N-乙基甘氨酸(EtGly)，N-乙基天冬酰胺(EtAsn)，邻氟苯丙氨酸(2-F-Phe)，间氟苯丙氨酸(3-F-Phe)，对氟苯丙氨酸(4-F-Phe)，间 -氟酪氨酸(3-F-Tyr)，高丝氨酸(Hse)，高苯丙氨酸(Hfe)，高酪氨酸羟基赖氨酸(Hyl)，异羟基赖氨酸(aHyl)，5-羟色氨酸(5-OH-Trp)，3-或4-羟基脯氨酸(3-或4-Hyp)，对碘苯丙氨酸-异酪氨酸(3-I-Tyr)，二氢吲哚-2-羧酸(Idc)，异艾杜霉素(Ide)，异亮氨酸(α-Ile)，异哌啶酸(Inp)，N-甲基异亮氨酸(MeLys)，间甲基酪氨酸(3-Me-Tyr)，N-甲基缬氨酸(MeVal)，1-萘基丙氨酸(1-Nal)， 2-萘基丙氨酸(2-Nal)，对硝基苯丙氨酸(4-NO2-Phe)，3-硝基酪氨酸 (3-NO2-Tyr)，正亮氨酸(Nle)，正缬氨酸(Nva)，鸟氨酸(Orn)，邻磷酸酪氨酸(H2PO3-Tyr)，八氢吲哚-2-羧酸(Penicillamine)，五氟苯丙氨酸(F5-Phe)，苯基甘氨酸(Phg)，哌啶酸(Pip)，炔丙基甘氨酸(Pra)，焦谷氨酸(PGLU)，肌氨酸(Sar)，四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)，噻唑烷-4-羧酸(硫代脯氨酸，Th)。

本发明还提供了一种药物组合物，在一实施方式中，该药物组合物包括：本发明所披露的化合物或其药学上可接受的盐或异构体或水合物，以及药学上可接受的赋形剂或载体或稀释剂。

具体的，药学上可接受的赋形剂包括粘合剂，填充剂，崩解剂，润滑剂和助流剂中的一种或多种。药学上可接受的载体或稀释剂包括乳膏、乳剂、凝胶、脂质体和纳米颗粒中的一种或多种。

术语“治疗”是指在已经诊断、观察到了疾病、失调或病症或者其症状之后，开始进行行动，以便暂时或永久地消除、减轻、抑制、减缓或改善折磨受试者的疾病、失调或病症的至少一种潜在原因，或者折磨受试者的疾病、失调、病症有关的症状。因此，治疗包括抑制(例如阻止或缓解疾病、失调或病症或与其相关的临床症状的发展或进一步发展)活动性疾病。具体地，如本申请中所使用的术语“治疗”用于具体表示将包括根据本发明的化合物或组合物的治疗物给药至已患有感染的患者。术语“治疗”还涉及将根据本发明的化合物或组合物，可选地与一种或多种抗菌剂一起施用以减轻或缓解与病毒感染相关的一种或多种症状；或者减缓病毒感染或与病毒感染相关的一种或多种症状的发展；或者减轻病毒感染相关的一种或多种症状的严重性；或者抑制病毒感染的临床表现；或者抑制病毒感染的不良症状的表现。

术语“预防”是指以某种方式(例如在疾病、失调、病症或其症状发作之前) 开始进行行动，从而暂时或永久地预防、抑制、压制或降低受试者患有疾病、失调或病症等的风险(如通过例如缺乏临床症状来确定)或在易患特定疾病、病症或病症的受试者的情况下延迟其发作。在某些情况下，该术语还指减缓疾病、失调或病症的进展或抑制其发展成有害的或其他不希望的状态。具体地，本申请中所使用的术语“预防”用于表示施用根据本发明的化合物或组合物以预防病毒感染所致相关疾病的发生。术语“预防”还涵盖通过对易发生病毒感染的患者或有病毒感染风险的患者给药，根据本发明的化合物或组合物的施用来预防至少一种病毒感染。

冠状病毒(Coronavirus，CoV)属于套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)，是一种有包膜的正链RNA病毒，其亚科包含α、β、δ及γ四属。

目前已知的感染人的冠状病毒中，HCoV-229E和HCoV-NL63属于α属冠状病毒，HCoV-OC43、SARS-CoV、HCoV-HKU1、MERS-CoV和SARS-CoV -2均为β属冠状病毒。SARS-CoV-2也被称为2019-nCoV。2003年和2012年分别爆发的高致病性冠状病毒“非典”SARS-CoV和“中东呼吸综合征”MERS- CoV均属于β属冠状病毒。2019年年底爆发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 与SARS-CoV有约80％相似性、与MERS-CoV有40％的相似性，也属于β属冠状病毒。该类病毒的基因组是一条单股正链RNA，是基因组最大的RNA病毒之一，编码包括复制酶、刺突蛋白、囊膜蛋白、包膜蛋白和核壳蛋白等。在病毒复制的初始阶段，基因组被翻译成两条长达几千个氨基酸的肽链即前体多聚蛋白(Polyprotein)，随后前体蛋白被蛋白酶切割生成非结构蛋白(如RNA 聚合酶和解旋酶)和结构蛋白(如刺突蛋白)及辅助蛋白。

术语“猫冠状病毒”，猫冠状病毒(Feline coronavirus，FCoV)是家猫和野生猫致死性疾病猫传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis，FIP)的病原。FCoV 病毒有4种主要结构蛋白，分别是刺突蛋白(Spike protein，S)、膜蛋白(Membrane protein，M)、小膜蛋白(Small envelope protein，E)和核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein，N)。其中S蛋白是排列在包膜突起的糖蛋白，分子量约为180～200kDa，它对于诱导宿主的抗体应答和细胞免疫很重要。冠状病毒可通过S蛋白与特定的细胞受体结合，是决定病毒致病性和组织嗜性的关键因素，S蛋白是诱导机体产生中和抗体的保护性抗原，目前疫苗的相关研究的也集中在S蛋白区域。

FCoV根据S蛋白氨基酸序列和抗体交叉中和差异分为2种血清型：I型和II型。血清I型是主要流行毒株类型，其S蛋白完全来源于FCoV。血清II型 FCoV临床不常见，由犬冠状病毒(Canine coronavirus，CCoV)和FCoV双重重组而来。FCoV-I型在世界范围内广泛流行，在美国和欧洲一些国家，FCoV -I型毒株感染率高达80-95％；在亚洲地区主要流行FCoV-II型，感染率高达 25％。血清I型和II型FCoV毒株均存在2种在抗原和形态学上不同的生物型(或病理型)：猫肠道冠状病毒(Feline enteric coronavirus，FECV)和猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus，FIPV)。

如本文所使用的，术语“病毒感染所致疾病”意指已知病毒在其中发挥一定作用的任何疾病、病症或其他病理病状。因此，在一些实施例中，本申请涉及治疗或减轻已知病毒在其中发挥一定作用的一种或多种疾病的严重性。具体地，病毒所致疾病为人冠状病毒感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；人呼吸道合胞病毒(HRSV)感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；人流感病毒感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；丙型肝炎病毒(HCV)引起的慢性丙型肝炎及其并发症；登革热病毒(DENV)引起的登革热及其并发症；寨卡病毒(Zika)引起的感染及其并发症；马尔堡病毒(MBV)、埃博拉病毒(EBV) 引起的出血热及其并发症；SARS-CoV-2引起的新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)；拉沙病毒(LASV)引起的拉沙(Lassa)出血热；或者上述任意疾病的任意组合。在一些实施例中，病毒所致疾病为猫冠状病毒引起猫传腹或猫肠炎。在一些实施例中，病毒所致疾病为猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪流行性腹泻。

本发明提供的化合物和组合物可以以本领域已知的任何适当方式施用于受试者。合适的给药途径包括但不限于口服；肠胃外，例如肌内、静脉内、皮下 (例如注射或植入)、腹腔内、脑池内、关节内、脑内(脑实质内和脑室内；鼻腔；阴道；舌下；眼内；直肠；局部(例如透皮)；口腔和吸入。一般通过皮下或肌肉内给药的积存注射法也可用于在限定的时间段内释放本申请公开的化合物或组合物。

在一些实施方式中，本发明提供的药物组合物适于口服使用的形式，例如片剂、胶囊、锭剂、糖锭、水性或油性混悬剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬质或软质胶囊，或糖浆、溶液、微珠或酏剂。用于口服使用的药物组合物可以根据本领域已知用于制造药物组合物的任何方法来制备，并且这样的组合物可以含有一种或多种试剂，例如甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂以提供药学上可接受的制剂。片剂、胶囊等通常含有与适用于制造片剂的无毒的药学上可接受的载体或赋形剂混合的活性成分。这些载体或赋形剂可以是例如稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉，明胶或阿拉伯胶以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。

本发明所提供的药物组合物优选含有重量比为0.001-99wt％的活性成份，优选的比例是本发明的活性化合物作为活性成分占总重量的0.1wt％-90wt％或 1wt％-50wt％，其余部分为药学可接受的载体、稀释液或溶液或盐溶液。

本发明的化合物和药物组合物可对哺乳动物临床使用，包括人和其他哺乳动物，可以通过口、鼻、皮肤、肺或者胃肠道等的注射或口服给药途径。最优选为口服。最优选日剂量为0.01-400mg/kg体重，一次性服用，或0.01-200mg/kg 体重分次服用。不管用何种服用方法，受试者的最佳剂量应依据具体的治疗而定。通常情况下是从小剂量开始，逐渐增加剂量一直到找到最适合的剂量。

在一些实施方式中，化合物或组合物是口服制剂，被施用于感染了猫冠状病毒或患有猫传染性腹膜炎(猫传腹)或猫肠炎的猫。

在一些实施方式中，化合物或组合物是口服制剂，被施用于感染了“非典” (SARS-CoV)、“中东呼吸综合征”(MERS-CoV)或“新型冠状病毒”(SARS- CoV-2)的人。

本发明所用术语“生物利用度”是指对患者施用药物或者前药后达到受治疗者体循环的药物的速度和数量，并且可以通过评估例如化合物血浆或血液浓度对时间分布来确定。用于表征血浆或血液浓度对时间曲线的参数包括曲线下面积(AUC)，峰浓度时间(T_max)和最大药物浓度(C_max)。术语“C_max”是指在对受治疗者施用一定剂量的化合物后，受治疗者的生物样品中化合物的最大浓度。术语“T_max”是到对受治疗者施用一定剂量的化合物后受治疗者的生物样品中化合物的最大浓度(C_max)的时间。“t_1/2”是在向受试者施用一定剂量的化合物后，受试者的生物样品中化合物的终末消除半衰期。口服生物利用度通常被表示为F(％)，是指在口服给药方式下化合物的AUC相对于静脉内(IV)给药后化合物的AUC的百分比。

本发明的化合物作为GS-441524的前药时，上述曲线下面积(AUC)，峰浓度时间(T_max)，最大药物浓度(C_max)及“t_1/2”均指本发明的化合物在受试者体内转化为GS-441524后，GS-441524的曲线下面积(AUC)，峰浓度时间(T_max)，最大药物浓度(C_max)及“t_1/2”。

在一些实施方式中，本申请公开的化合物，可以作为GS-441524的前药，进入受治疗者的体内后，分解成活性成分GS-441524。

在一些实施方之中，还提供了本发明的化合物或其药物组合物在制备用于在有此需要的受试者中增加GS-441524的治疗有效性的药物中的用途。具体地，增加GS-441524的治疗有效性是指，与施用GS-441524相比，施用本发明的化合物或其药物组合物可增加受试者中GS-441524的治疗有效性。

在一些实施方式中，增加GS-441524的治疗有效性是指，与施用GS-441524 本身相比，施用本发明的化合物或其药物组合物可至少达到以下效果中的一种：增加GS-441524的生物利用度、血液或血浆中GS-441524的AUC、GS-441524 的C_max、GS-441524的T_max，改善GS-441524的t_1/2、GS-441524的治疗性生物分布和/或GS-441524在受试者中的生物吸收。

在一些实施方式中，增加GS-441524的治疗有效性是指，与施用GS-441524 本身相比，在施用本发明的化合物或其药物组合物后，增加了在受试者中 GS-441524的口服生物利用度。

为了更好地理解本发明并更清楚地展示出如何实现本发明，现通过示例的方式并参考附图，并阐述了根据本发明的实施方式的特征。

实施例

通过参考以下实施例将更容易理解本发明，所述实施例用于说明本发明，而不应被解释为以任何方式限制本发明的范围。

除非另有定义或上下文另有明确规定，本申请使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。应当理解，与本申请所述类似或等同的任何方法和材料可用于本发明的实践或测试。除非另有说明，否则本申请中所使用的材料和仪器均常规商购所得。

制备例：

化合物1的合成

化合物1-1(4g，13.7mmol，1eq)分散到丙酮(80mL)中，加入2,2- 二甲氧基丙烷(7.15g，68.7mmol，5eq)和对甲苯磺酸水合物(2.87g，15.1mmol， 1.1eq)。混合物在室温下搅拌过夜，然后旋去大部分溶剂。残余物用碳酸氢钠水溶液调节pH至中性，混合物用二氯甲烷萃取。有机相干燥后旋干，残余物通过硅胶柱层析(MeOH/DCM＝0％～7％)得到化合物1-2(4.41g，收率95％)。

化合物1-2(300mg，0.9mmol，1eq)分散到二氯甲烷中(20mL)，依次加入异戊酸(101.7mg，0.99mmol，1.1eq)，DMAP(5.5mg，0.045mmol，0.05 eq)和DCC(224.2mg，1.09mmol，1.1eq)。混合物在室温下搅拌过夜，然后过滤。滤液旋干后，残余物通过硅胶柱层析(MeOH/DCM＝0％～5％)得到化合物1-3(230mg，收率61.1％)。

化合物1-3(230mg，0.55mmol，1eq)分散到二氯甲烷中(10mL)，搅拌下滴加盐酸二氧六环溶液(700μL，5eq)。混合物在室温下搅拌0.5小时，然后用碳酸氢钠水溶液调节pH至7～8。混合物旋干，残余物用残余物通过硅胶柱层析(MeOH/DCM＝0％～10％)得到化合物1(146.2mg，收率69.8％)。¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ7.88(s,1H),6.91(q,J＝4.5Hz,2H),4.89(d,J＝5.5 Hz,1H),4.43(dd,J＝12.0,3.0Hz,1H),4.41-4.36(m,1H),4.32(dd,J＝12.0,5.0 Hz,1H),4.21-4.12(m,1H),2.25-2.13(m,2H),2.03(dp,J＝14.0,7.0Hz,1H),0.93(dd,J＝6.5,2.5Hz,6H).¹³C NMR(125MHz,CD₃OD)δ174.30,157.23,148.28, 125.66,117.93,117.60,112.09,102.50,83.32,81.40,75.60,72.12,64.17,44.03, 26.78,22.65,22.63.m/z,(ESI⁺):376.15,(ESI^-):374.03.

化合物2的合成

使用正癸酸作为起始原料，相关合成步骤参考化合物1的合成。¹H NMR (500MHz,CD3OD)δ7.82(s,1H),6.85(q,J＝4.5Hz,2H),4.81(d,J＝5.5Hz,1H), 4.38(dd,J＝12.0,3.0Hz,1H),4.35-4.30(m,1H),4.28(dd,J＝12.0,5.0Hz,1H), 4.11-4.07(m,1H),2.3-2.19(m,2H),1.55-1.49(m,2H),1.31-1.16(m,12H),0.85(t, J＝7.0Hz,3H).13C NMR(125MHz,CD3OD)δ175.06,157.24,148.29,125.68, 117.94,117.59,112.09,102.53,83.32,81.47,75.62,72.06,64.16,34.93,33.04, 30.55,30.39,30.14,25.98,23.72,14.45.m/z,(ESI+):446.17,(ESI-):444.12.

化合物3的合成

使用3-环戊基丙酸作为起始原料，相关合成步骤参考化合物1的合成。¹H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.86(s,1H),6.88(q,J＝4.5Hz,2H),4.85(s,1H), 4.41(dd,J＝12.0,3.0Hz,1H),4.39-4.33(m,1H),4.29(dd,J＝12.0,5.0Hz,1H), 4.14(t,J＝6.0Hz,1H),2.42-2.19(m,2H),1.80-1.66(m,3H),1.66-1.42(m,6H), 1.13-0.97(m,2H).13C NMR(125MHz,CD3OD)δ175.14,157.20,148.27,125.70, 117.90,117.62,112.07,102.56,83.43,81.38,75.66,72.13,64.20,40.84,34.30, 33.35,32.20,26.02.m/z,(ESI+):416.19,(ESI-):414.15.

化合物4的合成

化合物1-1(2.2g，7.6mmol，1eq)分散到DMF(22mL)中，加入咪唑 (3.1g，45.6mmol，6eq)，混合物在氮气保护下冷却至0摄氏度。缓慢滴加 1,3-二氯-1,1,3,3-四异丙基二硅氧烷(2.9g，9.5mmol，1.2eq)。反应液升至室温并搅拌3～5小时，加入乙酸乙酯和水再搅拌10分钟。静止后分离有机相，有机相用盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤后旋干。残余物通过硅胶柱层析纯化(MeOH/DCM＝0％～5％)得到化合物4-2(3.5g，收率87.5％)。

化合物4-2(2.67g,5mmol,1eq)分散到二氯甲烷(20mL)中，依次加入 DMAP(61mg，0.5mmol，0.1eq)，DCC(1.13g，5.5mmol，1.1eq)和异戊酸(0.51g，5mmol，1.0eq)。混合物室温搅拌过夜后，过滤除去固体。滤液旋干后，残余物通过硅胶柱层析纯化(DCM)得到化合物4-3(2.8g，收率91％)。

化合物4-3(1.85g，3mmol，1eq)分散到四氢呋喃(10mL)中，加入1 M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(12mL，12mmol，4eq)。反应液室温下搅拌 2小时后旋干。残余物通过硅胶柱层析纯化(MeOH/DCM＝0％～5％)得到化合物4(731mg，收率65％)。¹H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.88(s,1H),7.03(d, J＝4.5Hz,1H),6.96(d,J＝4.5Hz,1H),5.43-5.40(m,1H),5.22(d,J＝6.0Hz,1H), 4.45(d,J＝3.0Hz,1H),3.91-3.8(m,2H),2.39(d,J＝7.5Hz,2.0H),2.32-2.18(m, 1H),1.06(d,J＝6.5Hz,6H).13C NMR(125MHz,CD3OD)δ173.99,157.53, 148.56,124.50,118.53,118.00,113.90,102.71,86.58,81.42,74.29,74.19,63.00, 44.17,26.70,22.81,22.78.m/z,(ESI+):376.17,(ESI-):374.14.

化合物5的合成

Boc-甘氨酰-L-缬氨酸作为起始原料，相关合成步骤参考对比例中化合物b 的合成。¹H NMR(500MHz,D2O)δ7.89(s,1H),6.96(d,J＝4.5Hz,1H),6.92(d, J＝4.5Hz,1H),5.00(d,J＝5.0Hz,1H),4.51(dd,J＝8.0,5.0Hz,1H),4.43-4.31 (m,2H),4.27(dd,J＝12.5,5.0Hz,1H),4.02(d,J＝5.5Hz,1H),3.79(q,J＝16.0 Hz,2H),1.93-1.76(m,1H),0.73-0.68(m,6H).13C NMR(125MHz,D2O)δ 172.51,167.18,150.17,138.14,127.20,116.09,114.51,112.60,108.30,82.39, 77.80,75.04,70.40,63.91,58.41,40.27,29.91,18.01,17.04.m/z,(ESI+):448.32, (ESI-):446.24.

对比例：

对比化合物a的合成

使用丁酸作为起始原料，相关合成步骤参考化合物1的合成。¹H NMR (CD3OD,500MHz)δppm 0.96(t,J＝7.5Hz,3H),1.61-1.66(m,2H),2.31-2.35(m, 2H),4.13(t,J＝6.0Hz,1H),4.33-4.45(m,3H),4.83(d,J＝5.0Hz,1H),7.02(d, J＝4.5Hz,1H),7.19(d,J＝4.5Hz,1H),8.02(s,1H).13C NMR(CD3OD,125MHz)δ ppm 12.50,17.93,35.35,62.72,70.57,74.61,79.67,81.96,104.80,111.69,115.34, 115.86,126.91,141.98,152.90,173.42.m/z(ESI+):362.2.

对比化合物b的合成

化合物1-2(500mg，1.51mmol，1eq)溶解到二氯甲烷中(20mL)，然后加入Boc-甘氨酸(264.4mg，1.51mmol，1eq)，DMAP(1.84mg，0.015mmol， 0.01eq)和DCC(342.5mg，1.66mmol，1.1eq)。混合物在室温下搅拌过夜，然后过滤。滤液旋干后，残余物通过硅胶柱层析(MeOH/DCM＝0％～5％)得到化合物b-2(510mg，收率69.2％)。

化合物b-2(450mg，0.92mmol，1eq)分散到二氯甲烷中(20mL)，搅拌下滴加盐酸二氧六环溶液(1.15mL，5eq)。混合物在室温下搅拌0.5小时，然后加入少量水淬灭反应。混合物旋干，残余物用残余物通过硅胶柱层析 (MeOH/DCM＝0％～15％)得到化合物b(320mg，收率79.6％)。¹H NMR(500 MHz,D2O)δ8.00(s,1H),7.26(d,J＝5.0Hz,1H),7.01(d,J＝5.0Hz,1H),4.88(d, J＝5.0Hz,1H),4.55-4.45(m,2H),4.40(dd,J＝12.0,6.0Hz,1H),4.28(t,J＝5.5 Hz,1H),3.84(q,J＝17.5Hz,2H).13C NMR(125MHz,D2O)δ167.62,149.35, 136.78,127.30,115.80,114.22,112.77,108.91,82.32,78.02,74.72,70.16,64.91, 39.8.m/z,(ESI+):349.0,(ESI-):347.0.

对比化合物c的合成

使用Boc-L-缬氨酸作为起始原料，相关合成步骤参考化合物b的合成。¹H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.97(s,1H),7.19(d,J＝4.5Hz,1H),6.97(d,J＝4.5 Hz,1H),4.80(d,J＝5.0Hz,1H),4.55-4.59(m,1H),4.45-4.48(m,1H),4.37-4.40 (m,1H),4.10-4.00(m,1H),3.94(d,J＝4.5Hz,1H),2.31-2.15(m,1H),0.99(dd,J ＝6.8,1.5Hz,6H).13C NMR(125MHz,CD3OD)δ169.98,153.47,142.02,128.70, 117.04,116.50,113.59,107.31,82.71,81.50,75.75,72.07,66.64,59.39, 31.01,18.30,18.17.m/z,(ESI+):391.13,(ESI-):389.16.

对比化合物d的合成

使用Boc-L-异亮氨酸作为起始原料，相关合成步骤参考化合物b的合成。¹H NMR(500MHz,CD3OD)δ0.83(t,J＝7.5Hz,3H),0.90(d,J＝7.0Hz,3H), 1.51-1.24(m,1H),1.37-1.45(m,1H),1.74-1.82(m,1H),3.57(d,J＝4.0Hz,1H), 4.14(t,J＝5.5Hz,1H),4.41(d,J＝9.0Hz,1H),4.49-4.53(m,1H),4.94(d,J＝5.0 Hz,1H),6.91(s,2H),7.85(s,1H).13CNMR(125MHz,CD3OD)δ11.99,15.41, 26.04,39.47,59.22,65.45,72.14,75.28,81.48,83.11,102.60,112.36,117.65, 117.98,125.31,148.27,157.15,173.86.m/z,(ESI+):405.1.

对比化合物e的合成

丙三醇(e-1)(1.0g，10.8mmol，1eq)溶解到二氯甲烷(4mL)中。混合物在氮气保护下冷却至0摄氏度。缓慢滴加正壬酰氯(e-2)(3.84g，21.6mmol，2eq)。反应液缓慢升至室温并搅拌过夜。反应液浓缩后，残余物通过柱层析纯化 (EA/PE＝1/100～1/20)得到化合物e-3(752mg，收率18.6％)。

化合物e-3(2g，5.37mmol，1eq)溶解到乙酸乙酯(20mL)中，加入三乙胺(651.9mg，6.44mmol，1.2eq)和DMAP(6.56mg，0.05mmol，0.01eq)。混合物在氮气保护下冷却至0摄氏度。缓慢加入氯甲酸对硝基苯酯(1.2g，5.9mmol， 1.1eq)。反应液缓慢升至室温并搅拌3小时。反应液浓缩后，残余物通过柱层析纯化(EA/PE＝1/100～1/20)得到化合物e-4(1.6g，收率55.4％)。

化合物1-2(300mg，0.9mmol，1eq)溶解到二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(174mg，1.7mmol，1.9eq)和DMAP(132.7mg，1.1mmol，1.2eq)，最后加入化合物e-4(584.2mg，1.1mmol，1.2eq)。反应液在室温下搅拌过夜，过滤后，对滤液进行浓缩。残余物通过柱层析纯化(MeOH/DCM＝0％～1％)得到化合物e-5(560mg，收率84.74％)。

化合物e-5(560mg，0.77mmol，1eq)溶解到DCM中，加入4M的盐酸二氧六环溶液(1mL)。混合物在室温下搅拌0.5小时，然后用碳酸氢钠水溶液调节pH至7～8。混合物旋干，残余物用残余物通过硅胶柱层析 (MeOH/DCM＝0％～5％)得到化合物4-6(230mg，收率42.4％)。¹H NMR(500 MHz,CD3OD)δ7.89(s,1H),6.97-6.87(m,2H),5.19-5.11(m,1H),4.84-4.80(m, 1H),4.65-4.52(m,1H),4.51-4.33(m,4H),4.27-4.11(m,3H),2.41-2.22(m,4H), 1.71-1.49(m,4H),2.36-1.21(m,20H),0.90(t,J＝7.0Hz,6H).13C NMR(125MHz,CD3OD)δ174.87,157.17,155.82,148.23,125.51,117.87,117.48,112.21,102.59, 82.92,81.68,75.62,74.93,71.68,67.90,63.09,63.03,34.77,34.72,32.93,30.30, 30.21,30.09,30.05,25.91,25.87,23.66,14.44.m/z,(ESI+):690.7,(ESI-):688.7.

生物学测定

材料：本申请所用的GS-441524购自上海特伯化学科技有限公司。

药代动力学研究的一般方法：

将待测化合物溶解在水中，其浓度由化合物所施用的特定动物的期望剂量和给药体积确定。向动物(以口服、皮下注射、腹腔注射、或静脉注射等方式) 施用经计量的给药溶液体积。给予待测化合物之后，在特定时间点(例如0、5、 10、15、30分钟，1、1.5、2、3、4和6小时)收集血液样品。使用标准技术将血液样品转化为血浆样品。LC-MS/MS分析后以获得待测化合物在血浆中的浓度。

本发明提供的化合物，进入受试者体内会被分解为活性成分GS-441524。测量大鼠口服和静脉注射给药后血浆中的GS-441524浓度并计算其生物利用度 F％。

1大鼠中本发明化合物的药代动力学研究

在将各化合物与GS-441524分别单次静脉注射/口服施用至禁食的SD雄性大鼠后，在施用后的0.08h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、12h和 24h时收集血液样品。通过离心(8000rpm)来分离血浆，并且将其冷冻(-20℃) 直至用于分析。通过HPLC-MS/MS来确定大鼠血浆中化合物的浓度。将血浆分配至含内标和乙腈的适当的管中，使管剧烈震荡1分钟，以实现脱蛋白，随后以12000rmp离心5分钟。取上清液用纯水稀释，震荡混匀后再次取样转移至自动采样瓶中，并且注射入色谱分析系统中。利用DAS 3.2.8软件来计算药代动力学参数，如AUC_0-t，Cmax，tmax，t1/2，MRT，C1和Vd。如下计算绝对生物利用度：F＝[AUC(i.g.)×剂量(i.v.)]/[AUC(i.v.)×剂量(i.g.)]×100％。

2猫中本发明化合物的药代动力学研究

在将各化合物与GS-441524分别单次静脉注射/胃内施用至禁食的猫后，在施用后的0.08h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、12h和24h时收集血液样品。通过离心(8000rpm)来分离血浆，并且将其冷冻(-20℃)直至用于分析。通过HPLC-MS/MS来确定大鼠血浆中化合物的浓度。将血浆分配至含内标和甲醇或乙腈的适当的管中。使管剧烈震荡3分钟，以实现脱蛋白，随后以8000rmp离心5分钟。将上清液转移至自动采样瓶中，并且注射入色谱分析系统中。利用WinMonlin 6.3软件来计算药代动力学参数，如AUC_0-t，Cmax， tmax，t1/2，MRT，C1和Vd。如下计算绝对生物利用度：F＝[AUC(i.g.)×剂量(i.v.)]/[AUC(i.v.)×剂量(i.g.)]×100％。

各化合物和GS-441524获得的实验结果示于表1，表2，图1和图2。

表1.化合物和GS-441524在大鼠体内的药代参数

注：t_1/2：半衰期，半衰期数值越大，表示药物消除或分布过程越慢。

CL：清除率，单位时间内从体内清除的药物表观分布容积数。

C_max：药峰浓度，给药后出现的血药浓度最高值。

PO：口服给药。

IV：静脉注射给药。

表1数据表明，GS-441524在大鼠的施用过程中，生物利用度很低。本申请公开的化合物，与GS-441524相比，其在大鼠口服施用过程中，不仅具有更高的C_max值和/或半衰期，而且其生物利用度也具有显著的提高(相较GS-441524, 约增加了0.6-1.2倍)。因此，本申请公开的化合物在大鼠体内不仅具有很好的药代动力学特性，而且具有很好的口服效果。

表2.化合物和GS-441524在猫体内的药代参数

表2数据表明，GS-441524在猫的口服施用过程中，生物利用度很低。本申请公开的化合物，与GS-441524相比，其在猫的口服施用中，具有更高的C_max值和/或半衰期，其口服生物利用度也具有猫大鼠体内不仅具有很好的药代动力学特性，而且具有很好的口服效果。

本申请公开的化合物，作为GS-441524的前药，施用于哺乳动物时，具有很好的药代动力学特性，面对更加复杂的肠胃环境，能够有效的被吸收转化，具有良好的口服生物利用度，增加了GS-441524的治疗有效性，因此，本申请公开的化合物及其药物组合物针对哺乳动物，不仅优化了GS-441524的药代动力学特性，而且具有很好的口服效果。

尽管参照本发明的实施例详细描述了本发明，但提供这些实施例是为了说明而不是限制本发明。根据本发明原理能够得到的其它实施例均属于本发明权利要求所界定的范畴。

Claims

1.一种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体：

其中，

R¹选自H、取代或未取代的C2-C5烷酰基；

R²选自H、取代或未取代的寡肽酰基、取代或未取代的C5-C10烷基酰基或环烷基酰基；

所述R¹和R²不同时为H。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物包括式(II)所示的化合物：

其中，R²选自取代或未取代的寡肽酰基。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物包括式(III)所示的化合物：

其中，R³为H或酰胺基。

4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物包括式(IV)所示的化合物：

R¹为取代或未取代的C2-C5烷酰基。

5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物包括以下所示的化合物：

6.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1至5中任一项所述的化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体，以及至少一种药学上可接受的赋形剂或载体或稀释剂。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上可接受的赋形剂包括粘合剂，填充剂，崩解剂，润滑剂和助流剂中的一种或多种；或者所述药学上可接受的载体包括乳膏、乳剂、凝胶、脂质体和纳米颗粒中的一种或多种。

8.权利要求1至5中任一项所述的化合物或者其药学上可接受的盐或立体异构体和权利要求6至7中任一项所述的药物组合物在制备用于预防、抑制和治疗病毒感染所致疾病的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述病毒包括：

(1)感染人的冠状病毒：重症急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、2019新型冠状病毒(2019-nCoV或SARS-CoV-2)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)；

(2)致普通感冒的冠状病毒：人冠状病毒(OC43)、人冠状病毒(229E)、人冠状病毒(NL63)、人冠状病毒(HKUl)；

(5)丝状病毒科病毒：马尔堡病毒(MBV)、埃博拉病毒(EBV)；

(6)沙粒病毒科病毒：原型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、莫佩亚病毒(MOPV)、伊派(Ippy)病毒、莫巴拉病毒(MOBV)；

(7)副黏液病毒科病毒：人副流感病毒(HPIV)、腮腺炎病毒、麻疹病毒、人呼吸道合胞病毒(HRSV)；以及

10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述病毒感染所致疾病包括：(1)人冠状病毒感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；(2)人呼吸道合胞病毒(HRSV)感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；(3)人流感病毒感染引起的普通感冒、高危症状感染、呼吸道感染、肺炎及其并发症；(4)丙型肝炎病毒(HCV)引起的慢性丙型肝炎及其并发症；(5)登革热病毒(DENV)引起的登革热及其并发症；(6)寨卡病毒(Zika)引起的感染及其并发症；(7)马尔堡病毒(MBV)、埃博拉病毒(EBV)引起的出血热及其并发症；(8)SARS-CoV-2引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)；(9)拉沙病毒(LASV)引起的拉沙出血热；以及(10)上述疾病的任意组合。

11.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述病毒感染所致疾病为感染猫冠状病毒引起的猫传染性腹膜炎或猫肠炎，或感染猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪流行性腹泻。

12.根据权利要求8至11中任一项所述的用途，其特征在于，所述化合物或药物组合物适用于口服施用。

13.根据权利要求8至11中任一项所述的用途，其特征在于，所述化合物或药物组合物适用于注射施用。

14.根据权利要求8至11中任一项所述的用途，所述化合物或药物组合物的受试者为哺乳动物。

15.根据权利要求8至11中任一项所述的用途，所述化合物或药物组合物用的受试者为猫、猪、鼠、貂或狗，尤其是猫。

16.根据权利要求8至11中任一项所述的用途，所述化合物或药物组合物的受试者为人。