CN113995778A - 痰热清在制备抗流感病毒药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及痰热清在制备抗流感病毒药物中的应用。本发明在流感病毒感染小鼠模型中，评估痰热清对流感病毒诱导疾病的治疗作用及治疗效果，结果提示痰热清胶囊及痰热清注射液具有明显的抑制病毒诱导的肺部病理损伤，减缓病毒感染小鼠死亡的作用。

Description

痰热清在制备抗流感病毒药物中的应用
技术领域
本发明涉及中药技术领域，尤其涉及痰热清在制备抗流感病毒药物中的应用。
背景技术
痰热清由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花以及连翘组成，主要用于治疗肺炎、支气管炎发作、肺脓肿和风热感冒等病症。
然而，中医系统中的风热感冒与西医系统下的流行性感冒间存在较大的区别，风热感冒的患者主要表现为发热、恶寒较轻，伴随感冒症状，容易出现咳嗽、鼻塞、流黄鼻涕、而且粘稠、咳黄痰情况；而流行性感冒往往发病比较急，全身的症状较重，而呼吸症状较轻，患者会有怕冷思寒、高热等表现症状，体温可高达39度到40度，还会伴有头痛、头痛、咽干咽痛、全身酸痛，软弱无力的症状。由于两种感冒的症状不同，两种感冒相对应的治疗方法也不相同。
目前尚未有痰热清制剂用于抗流感病毒的相关报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供痰热清在制备抗流感病毒药物中的应用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
提供痰热清在制备抗流感病毒药物中的应用。
优选地，所述抗流感病毒药物为痰热清胶囊或痰热清注射液。
优选地，所述痰热清胶囊的临床剂量为3-4g/人/日。
进一步地，所述痰热清胶囊的临床剂量为3.6g/人/日。
优选地，所述痰热清注射液的临床剂量为10-30mg/人/日。
进一步地，所述痰热清注射液的临床剂量为20mg/人/日。
优选地，所述抗流感病毒药物具备下述至少一方面的功效：
1)显著的生存保护作用；
2)显著的死亡延迟；
3)显著改善肺部的充血性病变以及肺水肿；
4)显著减轻肺部的炎性浸润、组织结构破坏以及肺组织实变。
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
本发明在流感病毒感染小鼠模型中，评估痰热清对流感病毒诱导疾病的治疗作用及治疗效果，结果提示痰热清胶囊及痰热清注射液具有明显的抑制病毒诱导的肺部病理损伤，减缓病毒感染小鼠死亡的作用。
附图说明
图1为正常组小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)；
图2为病毒对照组小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)；
图3为奥司他韦对照组小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)；
图4为痰热清胶囊组(高剂量)小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)；
图5为痰热清胶囊组(中剂量)小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)；
图6为痰热清胶囊组(低剂量)小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)；
图7为痰热清注射液组(高剂量)小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)；
图8为痰热清注射液组(中剂量)小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)；
图9为痰热清注射液组(低剂量)小鼠肺部病理切片图(H&E染色，全切片扫描)。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。
实施例
为评估痰热清胶囊及痰热清注射液对流感病毒诱导疾病的治疗作用，现进行如下实验：
(1)材料与仪器
1.1材料
1.1.1试药
痰热清胶囊，批号：2003108；生产日期：20200319；浓度：1410mg/kg、470mg/kg、160mg/kg；
痰热清注射液，批号：2003206；生产日期：20200306；浓度：7.8mg/kg、2.6mg/kg、0.87mg/kg；
1.1.2实验动物
Balb/C小鼠，级别：SPF级；周龄：6-8周；来源：上海灵畅生物科技有限公司；合格证：2013001832987；
1.1.3病毒种类
甲型流感H1N1-FM1/47鼠肺适应株，来源：ATCC；
1.2仪器
超低温冰箱(Thermo)、IVC系统(江苏冯氏)；
(2)实验过程
2.1实验药物配制和动物分组给药方案
实验给药方式为灌胃给药(痰热清胶囊)和痰热清注射液(尾静脉注射或腹腔注射)，每天1次，给药体积按标准方案。
痰热清胶囊的临床剂量为3.6g/人/日，设定小鼠每天剂量分别为0.16g/kg、0.47g/kg、1.41g/kg。小鼠感染体重按20g/只计算，每只每天给药分别为0.0032g/只/日、0.0094g/只/日、0.0282g/只/日。灌胃每天1次，给药7天。
痰热清注射液的临床剂量为20mg/人/日(成人一般患者)，设定小鼠每天剂量分别为7.8mg/kg、2.6mg/kg、0.87mg/kg。小鼠感染体重按20g/只计算，每只每天给药分别为0.156mg/只/日、0.052mg/只/日、0.0173mg/只/日。尾静脉注射每天1次，给药7天。
2.2实验动物感染、给药及观察过程
病毒攻毒：新鲜制备H1N1-FM1毒株，按照10×LD50配制，冰浴待用。实验小鼠采用异氟烷吸入麻醉方式，双侧滴鼻吸入总计30μL病毒液，按照体重随机分组。
生存实验给药和观察：病毒感染后2h给药0.2mL/只，后续每天1次，预计给药7天，停药后，继续观察7天。
肺部病理观察：病毒感染后2h给药0.2mL/只，后续每天1次，预计给药4天，第5天解剖取肺，分析病理状态。
2.3统计学差异分析
“体重”、“肺指数”、“肺病变”采用Graphpad软件的One-way ANOVA统计方法进行组间比较，P值小于0.05，认为二组间存在统计学差异。采用SAS 9.4进行生存分析；其中，生存率的比较采用卡方检验，生存天数的比较采用Log-Rank检验，P值小于0.05，认为二组间存在统计学差异。
(3)实验结果
3.1小鼠生存保护实验
流感病毒感染攻毒剂量为10倍半数致死剂量(10×LD50)，观察痰热清胶囊和痰热清注射液对小鼠生命保护作用，结果为3次平行实验汇总。
病毒感染后，小鼠第6天开始密集死亡，病毒对照组小鼠6天生存率为57.69％，痰热清胶囊和痰热清注射液在所有剂量上都体现了显著的生存保护作用。其中痰热清胶囊1410mg/kg组小鼠达到91.67％存活，痰热清注射液2.6mg/kg组和痰热清注射液7.8mg/kg组小鼠存活率均为83.33％，与病毒对照组相比有显著性差异，痰热清胶囊与痰热清注射液在高、中剂量组之间也无显著性差异。
14天实验周期观察(7-13天)，相对于病毒对照组小鼠100％死亡，痰热清胶囊组及痰热清注射液组小鼠死亡明显延后，14天仍有少量小鼠存活。痰热清胶囊与痰热清注射液在高、中剂量组之间无显著性差异。
表1 生存保护实验结果
Figure BDA0003234685590000051
注：Normal为正常组；Virus control为病毒对照组；OST为奥司他韦对照组；下同。
生存时间比较：病毒对照组小鼠平均生存时间为6.42天，痰热清胶囊和痰热清注射液的各个剂量组都体现了一定生命延长作用，从13.52-32.98％不等。痰热清胶囊和痰热清注射液中、高剂量组之间对比无统计学差异。
表2 小鼠平均生存天数
Figure BDA0003234685590000061
给药期间体重改变：病毒感染导致小鼠第3天开始体重下降，痰热清胶囊及痰热清注射液各给药组小鼠相对病毒对照组小鼠，没有明显改善总体体重下降趋势。
表3 小鼠体重改变情况
Figure BDA0003234685590000062
Figure BDA0003234685590000071
(续表)
Figure BDA0003234685590000072
3.2小鼠肺部病理观察
痰热清胶囊及痰热清注射液抗流感病毒诱导的肺损伤药效对照实验。10×LD50病毒感染剂量感染雌性小鼠，按体重随机分组。感染2h后给药，每天1次，第4天小鼠杀剖取肺观察。
3.2.1肺病变观察：病毒诱导的小鼠肺部显著充血性病变。病毒对照组小鼠肺部病变为70.71％，而痰热清胶囊组小鼠的肺病变为35.63-53.13％，痰热清注射液组小鼠肺病变率为39.38-61.88％，相对于病毒组小鼠，痰热清胶囊低剂量组和痰热清胶囊高剂量组及痰热清注射液高剂量组有显著改善。痰热清胶囊组小鼠及痰热清注射液组小鼠在低剂量和高剂量无显著性差异。
表4 肺充血性病变比较
Figure BDA0003234685590000081
3.2.2肺指数分析：流感病毒诱导小鼠肺指数快速上升，代表肺部发生严重的炎性浸润，组织水肿。病毒对照组小鼠平均肺指数为16.64，而痰热清胶囊组小鼠肺指数为14.42-16.76，痰热清注射液组小鼠肺指数为14.83-16.46，相对于病毒组小鼠，痰热清胶囊中剂量组和痰热清胶囊高剂量组及痰热清注射液高剂量组有显著改善。痰热清胶囊组小鼠及痰热清注射液组小鼠在低、中、高剂量范围内在肺指数改变上无显著性差异。
表5 肺指数比较
Figure BDA0003234685590000082
Figure BDA0003234685590000091
3.2.3组织切片病理分析：肺部切片HE染色，分析肺部组织显微结构变化。结果(见图1-9)显示病毒感染显著导致了肺部明显的炎性浸润，肺泡组织空泡样破坏，肺部有实变纤维化等。痰热清胶囊组和痰热清注射液组小鼠的肺组织空泡破坏明显减少，炎性浸润现象减轻，肺部实变发生减少。
综上所述，生存实验结果显示：10倍半数致死剂量(10×LD50)的流感病毒感染下，在0-6天给药期间痰热清胶囊组和痰热清注射液组小鼠相对于病毒对照组小鼠有明显的生存保护作用。感染后第6天，痰热清胶囊组小鼠生存率为83.33-91.6％，痰热清注射液组小鼠生存率为66.67-83.33％，而病毒对照组小鼠生存率仅为57.69％，痰热清胶囊和痰热清注射液高、中剂量组间在给药期间无显著性差异。在7-13天的停药观察期间，病毒组小鼠在第9天100％死亡，而痰热清胶囊组和痰热清注射液组小鼠死亡明显延迟。至观察期结束，痰热清胶囊组小鼠有12.5-25％存活，痰热清注射液组小鼠有0-12.5％存活。
肺部病理实验结果显示：在10×LD50的流感病毒感染下，痰热清胶囊组及痰热清注射液组小鼠，相对于病毒组小鼠，肺部的充血性病变、肺水肿有明显改善，具有统计学差异。痰热清胶囊各剂量组小鼠肺病变为35.63-53.13％，肺指数为14.42-16.76；痰热清注射液各剂量组小鼠肺病变为39.38-61.88％，肺指数为14.83-16.46；相对于病毒对照组小鼠肺病变70.71％，肺指数为16.64，具有显著的抑制作用。肺组织切片病理分析结果显示痰热清胶囊及痰热清注射液给药都可以减轻肺部的炎性浸润、组织结构破坏及肺组织实变。
上述实验结果都提示痰热清胶囊及痰热清注射液具有明显的抑制病毒诱导的肺部病理损伤，减缓病毒感染小鼠死亡的作用。
以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.痰热清在制备抗流感病毒药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗流感病毒药物为痰热清胶囊或痰热清注射液。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述痰热清胶囊的临床剂量为3-4g/人/日。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述痰热清注射液的临床剂量为10-30mg/人/日。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗流感病毒药物具备下述至少一方面的功效：
1)显著的生存保护作用；
2)显著的死亡延迟；
3)显著改善肺部的充血性病变以及肺水肿；
4)显著减轻肺部的炎性浸润、组织结构破坏以及肺组织实变。
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