CN113980828B - 一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株 - Google Patents
一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113980828B CN113980828B CN202110558130.7A CN202110558130A CN113980828B CN 113980828 B CN113980828 B CN 113980828B CN 202110558130 A CN202110558130 A CN 202110558130A CN 113980828 B CN113980828 B CN 113980828B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- bacillus
- chlorogenic acid
- uwb19
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 55
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 55
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 title claims abstract description 55
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title claims description 15
- 241001070941 Castanea Species 0.000 title claims description 7
- 235000014036 Castanea Nutrition 0.000 title claims description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 60
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 60
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims abstract description 25
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 23
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 claims description 6
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 4
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 claims description 2
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 abstract description 31
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 abstract description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 abstract description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 4
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 3
- 241000533293 Sesbania emerus Species 0.000 description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 3
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 3
- AAWZDTNXLSGCEK-LNVDRNJUSA-N (3r,5r)-1,3,4,5-tetrahydroxycyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound O[C@@H]1CC(O)(C(O)=O)C[C@@H](O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-LNVDRNJUSA-N 0.000 description 2
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- AAWZDTNXLSGCEK-UHFFFAOYSA-N Cordycepinsaeure Natural products OC1CC(O)(C(O)=O)CC(O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001018064 Homo sapiens Lysosomal-trafficking regulator Proteins 0.000 description 2
- 102100033472 Lysosomal-trafficking regulator Human genes 0.000 description 2
- 244000038561 Modiola caroliniana Species 0.000 description 2
- 235000010703 Modiola caroliniana Nutrition 0.000 description 2
- AAWZDTNXLSGCEK-ZHQZDSKASA-N Quinic acid Natural products O[C@H]1CC(O)(C(O)=O)C[C@H](O)C1O AAWZDTNXLSGCEK-ZHQZDSKASA-N 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- CWVRJTMFETXNAD-GMZLATJGSA-N 5-Caffeoyl quinic acid Natural products O[C@H]1C[C@](O)(C[C@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-GMZLATJGSA-N 0.000 description 1
- 241000205585 Aquilegia canadensis Species 0.000 description 1
- 241000193408 Bacillus badius Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000196881 Castanopsis Species 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 1
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000237330 gutta percha tree Species 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229930000223 plant secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N trans-5-O-caffeoyl-D-quinic acid Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)C[C@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Abstract
本发明公开了一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株，命名为栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19‑14，于2021年05月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2021547，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。本发明栗褐芽孢杆菌UWB19‑14是利用现有菌株经过紫外‑微波诱变获得的一株突变菌株，通过发酵培养发现UWB19‑14发酵绿原酸的能力显著增强，与现有技术的绿原酸产量相比，属于高产绿原酸菌株。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术改造技术领域，具体涉及一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株。
背景技术
绿原酸(CGA，5-O-咖啡酰奎尼酸)是由咖啡酸和奎尼酸组成常见的植物次生代谢产物，保护植物细胞免受环境胁迫中起着重要作用。研究表明，CGA具有多种生理功能，例如抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化剂、清除自由基、预防心血管疾病、神经保护作用、解毒功能等，是国际公认的“植物黄金”。近年来，国内外对绿原酸的研究格外关注，对于绿原酸的分布、生物合成途径和生物活性应用等多方面开展了深入研究。而植物内生菌作为一种新型的微生物资源，具有与植物宿主合成相同或者相似活性成份的能力，这为次生代谢产物的发掘提供了新的途径。因此，内生细菌可以用作某些植物中天然代谢产物的潜在替代来源。由于野生菌株合成绿原酸产量低，其在医学或商业中的应用受到限制。因此，有必要采取策略改变菌株合成CGA的方式来克服这些缺陷。
绿原酸最早在1837年，Robiquet等从咖啡豆中分离出一种酸性物质，该物质经氯化铁处理后变成绿色，但是并没有提出该物质的具体概念。直到1846年，Payen等在报道绿咖啡豆中的酚类成份时将该酸性物质定义为“绿原酸”。同年，Rochlederd进一步研究发现绿原酸在含氨溶液中呈黄色，但暴露在氧气中变为绿色，并提出绿原酸的分子式为C16H9O8。随后，Gorter等(1908)确认该物质是由奎尼酸和咖啡酸缩合而成的绿原酸，但目前国内外对绿原酸在微生物合成方面的研究仍然相对落后。而当前世界绿原酸的提取源头依然是天然植物，如咖啡豆、金银花、杜仲以及向日葵等。但是，对于任何一种物质而言，单一的来源途径不利于可持续的发展。随着国内外对绿原酸的不断研究，使得绿原酸的应用越来越广泛，然而在有些方面仍然需要我们努力：拓展绿原酸的来源途径；开发高产绿原酸的制备工艺，为大规模工业生产提供了一种有效的策略以及开发和利用绿原酸生产菌株提供理论基础。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，利用紫外-微波诱变改造现有菌株，得到一株高产绿原酸的菌株。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：
一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株，命名为栗褐芽孢杆菌(Bacillusbadius)UWB19-14，于2021年05月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M2021547，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。
一种生产绿原酸的发酵方法，采用如上所述的栗褐芽孢杆菌BacillusbadiusUWB19-14为发酵菌。
优选的，发酵方法包括摇瓶发酵和发酵罐发酵，所述的摇瓶发酵采用优化培养基，所述发酵罐发酵采用基础发酵培养基和优化培养基。
优选的，所述优化培养基为木薯粉30g·L-1、葡萄糖30g·L-1、酵母提取物30g·L-1、MgSO4 0.2g·L-1、H2O定容至1L；
优选的，所述基础发酵培养基为牛肉浸粉5g·L-1、蛋白胨10g·L-1、NaCl 5g·L-1、琼脂20g·L-1、H2O定容至1L。
优选的，所述摇瓶发酵的发酵温度为32℃，发酵时间为7天。
栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14与栗褐芽孢杆菌B19相比，本发明的菌株具有更高的绿原酸发酵能力。
本发明的菌株经250mL三角瓶发酵结果显示，突变菌株UWB19-14生产绿原酸达13.78mg·L-1，比出发菌株B19(1.35mg·L-1)提高了9.21倍，且具有良好的遗传稳定性。
如上所述栗褐芽孢杆菌诱变菌株在提高绿原酸产量方面的应用。
本发明的菌株在优化培养基及培养条件下发酵7天，绿原酸产量最高达到52.93mg·L-1。此发酵条件下，其绿原酸产量比出发菌株B19提高了38.2倍。
本发明的菌株利用优化培养基将突变株UWB19-14在5L发酵罐中扩大培养，发现在菌体生长至对数期时绿原酸产量达到最大(61.64mg·L-1)，其绿原酸产量比出发菌株B19提高了44.66倍。
与现有技术相比，本发明具有如下有益的技术效果：
本发明栗褐芽孢杆菌UWB19-14是利用现有菌株经过紫外-微波诱变获得的一株突变菌株，通过发酵培养发现UWB19-14发酵绿原酸的能力显著增强，与现有技术的绿原酸产量相比，属于高产绿原酸菌株。
保藏信息说明
栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14于2021年05月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏号为CCTCC M 2021547。
附图说明
图1为本发明栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的紫外诱变时间与致死率曲线。
图2为本发明栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的微波处理时间与致死率曲线。
图3为绿原酸的标准曲线(HPLC)。
图4为绿原酸标准品与本发明栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的高效液相色谱(HPLC)分析。
图5为栗褐芽孢杆菌UWB19-14的菌落形态(图5a)和革兰氏染色(图5b)。
图6为栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)B19(图A1、B1)与本发明栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14(图A2、B2)的扫描电镜图；A1、A2为10000倍，B1、B2为40000倍。
图7为本发明栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的电泳图。
图8为本发明栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的250mL摇瓶发酵条件优化。
图9为本发明栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的5L发酵罐基础培养基发酵生产CGA过程曲线。
图10为本发明栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的5L发酵罐优化培养基发酵生产CGA过程曲线。
具体实施方式
下面结合附图具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例中采用的原料、试剂若无特殊说明，皆为市售所得。下述实施例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。菌株B19为发明人之前发现的菌株，经HPLC色谱检测其绿原酸产量是9.77含量为1.35mg·L-1。
实施例中采用的培养基及配方
细菌基础培养基：牛肉膏3g·L-1、蛋白胨10g·L-1、NaCl 5g·L-1、琼脂20g·L-1、H2O定容至1L、pH 7.2-7.4。
初筛固体培养基：牛肉膏3g·L-1、蛋白胨10g·L-1、NaCl 5g·L-1、AlCl3 2.5g·L-1、NaNO2 5g·L-1、琼脂20g·L-1、H2O定容至1L、pH 9.0。
基础发酵培养基：牛肉浸粉5g·L-1、蛋白胨10g·L-1、NaCl 5g·L-1、琼脂20g·L-1、H2O定容至1L、1％的接种量，37℃、pH 7.0、220rpm。
实施例1
栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的紫外-微波诱变筛选
1.1紫外诱变致死率曲线及最佳剂量
将出发菌株B19制备成种子液，用生理盐水将种子液稀释至10-6倍，分别取稀释后所得种子液100μl于细菌基础培养基和初筛固体培养基中并均匀涂布，倒置于37℃恒温箱中培养3-4小时；然后将上述两个培养基的平板置于功率15W的紫外灯下30cm处进行照射，每个梯度(即照射时间为0、4、8、10、12、14、16、18、20、22、24s)设置三个平行；以15W照明灯照射相应时间作为空白对照组；均放置于37℃恒温箱中培养48h，并分别记录每个平板上的菌落数目，按照公式(1-1)计算诱变致死率，绘制致死率曲线(图1)。
致死率＝(对照组菌落数-实验组菌落数)/对照组菌落数×100％ (1-1)
1.2微波诱变致死率曲线及最佳剂量
以紫外诱变获得的正突变菌株中遗传最稳定且活性较高者进行微波诱变，制备该菌株的菌悬液，用无菌生理盐水将其稀释至10-6，吸取稀释后的1mL菌悬液放入2ml的EP管内，采用高火微波挡(800W、脉冲频率2450MHz)进行诱变，每次微波辐射EP管10s后取出置于冰水混合物中冷却5s(以防诱变时微波热效应导致菌体大量死亡)；对不同时间梯度进行微波辐射(即辐射时间为0、10、30、50、70、90、110、130、150s)，诱变结束后，吸取100μl菌液均匀涂布于细菌基础培养基和初筛固体培养基的平板上，37℃静置培养48h，观察菌株生长情况，统计菌落数，按照公式(1-1)计算致死率，绘制致死率曲线(图2)。
1.3初筛方法
待“1.2”中诱变处理过微波诱变的菌株在初筛固体培养基上生长48h后，选择菌落周围最先显现出大范围紫红色和紫红色圆圈单菌落作为初筛菌株，并对其进行编号和斜面保藏。
1.4复筛方法
将挑选出来的初筛菌株接种到细菌基础培养基中生长12h，取1mL菌液于250mL三角瓶中(含50mL基础发酵培养基)发酵3天。液体发酵完成后，取20mL发酵液进行超声破胞(20Hz，600W)20min，在常温下，10000rpm离心10min。取上清液加入1:1的75％乙醇静置过夜，调pH为2.0-3.0，45℃真空浓缩至2mL，添加3mL色谱级甲醇溶解。利用高效液相色谱法检测样品中的CGA。选择表现出在327nm紫外检测下显著提高的菌株作为复筛菌株。经紫外-微波复合诱变筛选的突变菌株发酵绿原酸产量如表1所示：
表1紫外-微波复合诱变所得菌株复筛结果
| 菌株 | 绿原酸产量(mg·L-1) | 菌株干重(g·L-1) |
| 出发菌株B19 | 1.35±0.13 | 1.90±0.04 |
| UWB19-1 | 7.70±0.25 | 1.85±0.04 |
| UWB19-2 | 3.28±0.24 | 1.78±0.06 |
| UWB19-3 | 8.42±0.11 | 1.84±0.05 |
| UWB19-4 | 7.85±0.36 | 1.79±0.04 |
| UWB19-5 | 6.22±0.07 | 1.76±0.04 |
| UWB19-6 | 11.88±0.08 | 1.78±0.04 |
| UWB19-7 | 5.46±0.28 | 1.85±0.04 |
| UWB19-8 | 6.80±0.20 | 1.89±0.07 |
| UWB19-9 | 7.23±0.13 | 1.75±0.07 |
| UWB19-10 | 2.40±0.11 | 1.91±0.07 |
| UWB19-11 | 6.29±0.18 | 1.83±0.10 |
| UWB19-12 | 6.15±0.16 | 1.94±0.06 |
| UWB19-13 | 7.22±0.17 | 1.82±0.05 |
| UWB19-14 | 13.78±0.21 | 2.08±0.14 |
| UWB19-15 | 5.27±0.17 | 1.97±0.03 |
| UWB19-16 | 6.49±0.16 | 1.85±0.12 |
| UWB19-17 | 1.01±0.08 | 1.86±0.07 |
| UWB19-18 | 8.16±0.40 | 1.82±0.09 |
| UWB19-19 | 9.67±0.22 | 1.81±0.09 |
| UWB19-20 | 8.35±0.22 | 1.83±0.04 |
1.5 UWB19-14的传代稳定性
为了获得高产CGA的生产菌株，通过连续多次紫外-微波诱变筛选出性状优良的突变菌株进行传代稳定性试验；在细菌基础培养基上活化并传代5次后，使用250mL三角瓶进行发酵培养，37℃，200rpm，发酵7天，测定发酵液中CGA的产量(表2)。
表2 UWB19-14菌株遗传稳定性
| 传代次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| CGA含量(mg·L-1) | 13.16±0.09 | 13.99±0.29 | 13.35±0.49 | 13.5±0.16 | 13.82±0.27 |
| 菌株干重(g·L-1) | 2.01±0.05 | 1.96±0.03 | 1.86±0.10 | 1.95±0.05 | 2.02±0.04 |
实施例2
UWB19-14的生长曲线
取1mL活化好的出发菌株B19和菌株UWB19-14接种到250mL三角瓶中(含50mL基础发酵培养基)，在37℃、200rpm摇床中培养，每隔2h取一次菌液于酶标仪600nm处测吸光值，每组三个平行，绘制生长曲线(图3)。
实施例3
UWB19-14的此生代谢产物-绿原酸的定量分析(高效液相色谱，HPLC)
3.1样品制备方法
将UWB19-14在细菌基础培养基中发酵培养(37℃、200rpm条件下培养7天)，发酵完成后取20mL发酵液使用浓度为5mol·L-1的HCL将pH值调至2.0-3.0，超声破碎(25KHz，500w)30min释放胞内的物质，10000rpm离心10min，取上清液与体积浓度为75％的乙醇溶液1：1混合超声提取30min，然后避光静置过夜，采用旋转真空浓缩仪45℃下浓缩至干，加入3mL色谱级甲醇溶解，10000rpm离心10min，上清液用有机过滤器(0.22μm)过滤，取10μl样品进行HPLC分析(图4)。
3.2色谱条件
Wasters高效液相检测条件：C18柱(Echway Corporation，China；JADE-PAKODS-AQ；250mm×4.6mm，5μm)；流动相为0.5％乙酸A和乙腈B，流动相比例为0min，95％A；5min，92％A；15min，50％A；20min，10％A；21min，95％A；25min，95％A；进样量10μl，柱温35℃，流速为1.0ml·min-1，检测波长为327nm，通过内标法定性分析和外标法定量分析。
3.3绿原酸的标准曲线测定
将20mg绿原酸标准品全部溶于20mL色谱级甲醇中，得到1g·L-1标准品母液，将1g·L-1母液稀释分别得30、40、50、60、80、100、120、150、200、300mg·L-1的标准品稀释液，使用HPLC测定保留时间和峰面积，每组平行3次，以CGA浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制CGA标准曲线(图5)。
实施例4
UWB19-14的鉴定
4.1菌落形态鉴定
挑取甘油保存的UWB19-14在细菌基础培养基上划线，于37℃恒温培养箱培养24h，观察菌落形态；该菌落形状椭圆，边缘整齐，表面光滑、不粘绸、平坦、呈乳白色(图5a)。UWB19-14菌株直径(宽度)较出发菌株缩小了1.45倍(p<0.01)，长度增加了1.05倍(p<0.01)。
4.2细胞形态观察
挑取活化好的单菌落使用北京索莱宝革兰氏染色试剂盒进行试验，在100倍油镜下观察菌体的形态；经革兰氏染色发现，菌株UWB19-14呈现蓝紫色，属于革兰氏阳性菌，也是一种杆状菌(图5b)。
4.3 16s rDNA鉴定
使用TianGen细菌基因组DNA提取试剂盒提取B19菌株的DNA，根据前人报道，扩增16S rDNA使用通用引物27F和1492R；PCR体系为50μl：通用引物27F和1492各1μl，2×Es TaqMaster Mix(Dye)酶25μl，ddH2O 21μl，DNA模板2μl；所用到的引物序列如下：
表3 16S rDNA扩增引物
| 16S rDNA扩增引物 | |
| 27F | 5′-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3′ |
| 1492R | 5′-TAGGGTTACCTTGTTACGACTT-3′ |
反应程序：95℃2min，95℃30s，55℃30s，72℃1min，35cycles，72℃2min，4℃保存；对PCR产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳验证(电泳图如图7所示)，最后送公司进行测序。
测序结果如序列表所示，UWB19-14菌株的16s rDNA序列的扩增长度为1422bp(序列如SEQ NO.1所示)，提交GenBank数据库进行比对，结果显示，该序列与Bacillus badius110(NR 112633)同源性达99％，结合UWB19-14菌株形态学和显微镜观察等特性，菌株鉴定为Bacillus badius菌属的一个菌株，命名为栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14。
实施例5
栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的出发菌株B19与诱变菌株UWB19-14(即栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14)的扫描电镜观察
(1)取样：将实施例1“1.4”中获得的诱变菌株UWB19-14接种于细菌基础培养基中发酵培养3天，取0.5mL发酵液8000rpm离心3min，弃上清，加入0.1mol·L-1磷酸缓冲液1mL，用移液枪吹打，8000rpm离心3min，弃上清，重复3次；
(2)固定：加入0.5mL 2.5％戊二醛固定液于4℃冰箱固定2-4h，8000rpm离心3min，弃上清，加入0.1mol·L-1磷酸缓冲液1mL，用移液枪吹打，8000rpm离心3-5min，弃上清，重复3次；加入0.5mL 2.5％甲醇固定4-6h，加入0.1mol·L-1磷酸缓冲液1mL，用移液枪吹打，8000rpm离心3-5min，弃上清，重复3次；
(3)脱水：乙醇梯度洗脱，30％、50％、70％、85％、95％各1次，100％乙醇2次，叔丁醇置换2次；15-20min/次，8000rpm，3-5min；
(4)干燥：置于40℃烘箱烘干至干燥。
通过扫描电镜观察发现紫外-微波处理后的栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14表型发生了显著变化(图6)。出发菌株B19和诱变菌株UWB19-14的菌体形态在10000倍下显微结构差别较大，发现出发菌株B19的菌体形状规则，菌株较短，但较为粗壮；而诱变菌株UWB19-14的直径变小，长度增加。
为了更精确的比较菌株在诱变前后的形态变化，通过ImageJ软件(imagej v1.8.0官方版)测量菌株诱变前后直径的宽度和长度大小，并通过SPSS Statistics 26软件(SPSS22.0官方版)进行统计学分析。结果如表4和表5所示，诱变处理后，菌体形态宽度为0.3651μm，较处理前(0.8958μm)缩小了1.45倍(p<0.0001)(表4)；诱变处理后菌体的长度为4.8784μm，是诱变前(2.3772μm)的1.05倍(p<0.001)(表5)；说明菌体形态变化比较显著，紫外-微波复合诱变效果较好。
表4出发菌株B19与诱变菌株UWB19-14的菌体宽度的比较
表5出发菌株B19与诱变菌株UWB19-14的菌体长度的比较
实施例6
栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的250mL摇瓶发酵条件优化
6.1培养基及配方
优化培养基：木薯粉30g·L-1、葡萄糖30g·L-1、酵母提取物30g·L-1、MgSO40.2g·L-1、H2O定容至1L；
6.2栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-1的单因素优化
通过单因素试验逐次对栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的发酵条件：温度(25℃、28℃、32℃、37℃、40℃)、接种量(1％、2％、3％、4％、5％，体积百分比)、转速(150、180、200、220、240rpm·min-1)、pH(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0)和装液量(0、40、50、60、80、100mL/250mL)进行优化，结果表明在pH 9.0，培养温度32℃、接种量4％、转速220rpm、装液量30mL/250mL条件下，发酵7天时绿原酸产量最高，达到52.93mg·L-1(图8)。
实施例7
栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14的5L发酵罐扩大生产
7.1培养基及配方
(1)基础发酵培养基：牛肉浸粉5g·L-1、蛋白胨10g·L-1、NaCl 5g·L-1、琼脂20g·L-1、H2O定容至1L、1％的接种量，37℃、pH 7.0、220rpm；
(2)优化培养基：木薯粉30g·L-1、葡萄糖30g·L-1、酵母提取物30g·L-1、MgSO40.2g·L-1、H2O定容至1L；4％的接种量，32℃、pH 9.0、220rpm。
7.2 5L发酵罐放大实验
栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14置于5L发酵罐的基础发酵培养基中培养，发现绿原酸含量在1-4天显著增加，发酵培养至第8天获得最高产量13.46mg·L-1(图9)。当栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14置于5L发酵罐的优化培养基中培养时，菌株UWB19-14在培养第一天就开始大量合成CGA，CGA的最高产量达61.64mg·L-1(图10)。
该结果表明，优化培养基中木薯粉具有较高的营养(同时含有淀粉、蛋白质、脂质、纤维、钙和磷等多种营养物质)和功能价值，能够有效促进菌株的营养吸收，以廉价原料木薯粉为碳源，更符合植物内生菌生长的营养物质来源。
综上检测表明，栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius)UWB19-14经过复合诱变处理后，发酵生产绿原酸的能力显著增强。因经诱变处理后菌株的表型发生显著变化，对菌株进一步优化后获得一株工业化菌株。因此，可应用到实际生产当中，不仅拓展了绿原酸的来源途径，且改善生态环境的可持续发展。
发酵工艺放大试验是指在实验室摇瓶基础上已获得高产基因表达的最适条件，再逐步转移至发酵罐中生产，为了更加深入了解诱变菌株UWB19-14的发酵特性和生产CGA的能力，以前期在摇瓶中获得的最优发酵条件转移至5L发酵罐中发酵培养，探究放大生产过程中CGA产量的变化规律，为将来实现CGA的工业化生产打下坚实的基础。
本发明栗褐芽孢杆菌UWB19-14，后期研究过程通过酶学活性和中间产物分析解析了绿原酸代谢途径中PAL、TAL和C3H为该菌株合成绿原酸的关键酶。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
序列表
<110> 广西大学
<120> 一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株
<130> JC
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1422
<212> DNA
<213> Bacillus badius
<400> 1
cggctggctc ccgtaagggt taccccaccg acttcgggtg ttgcaaactc tcgtggtgtg 60
acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg gcatgctgat ccgcgattac 120
tagcgattcc ggcttcatgc aggcgagttg cagcctgcaa tccgaactga gaatggtttt 180
atgggattgg ctaaaccttg cggtcttgca gccctttgta ccatccattg tagcacgtgt 240
gtagcccagg tcataagggg catgatgatt tgacgtcatc cccaccttcc tccggtttgt 300
caccggcagt caccttagag tgcccaactg aatgctggca actaagatca agggttgcgc 360
tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg acgacaacca tgcaccacct 420
gtcaccgctg tccccgaagg gaaaggcctg tctccagacc ggtcagcggg atgtcaagac 480
ctggtaaggt tcttcgcgtt gcttcgaatt aaaccacatg ctccaccgct tgtgcgggcc 540
cccgtcaatt cctttgagtt tcagccttgc ggccgtactc cccaggcgga gtgcttaatg 600
cgttagctgc agcactgaag ggcggaaacc ctccaacact tagcactcat cgtttacggc 660
gtggactacc agggtatcta atcctgttcg ctccccacgc tttcgcgcct cagcgtcagt 720
tacagaccag agagccgcct tcgccactgg tgttcctcca catctctacg catttcaccg 780
ctacacgtgg aattccgctc tcctcttctg cactcaagcc tcccagtttc caatgaccct 840
ccacggttga gccgtgggct ttcacatcag acttaagaag ccgcctgcgc gcgctttacg 900
cccaataatt ccggacaacg cttgccacct acgtattacc gcggctgctg gcacgtagtt 960
agccgtggct ttctggtcag gtaccgtcaa ggtacggaca gttacttccg tacttgttct 1020
tccctgacaa cagagcttta cgatccgaaa accttcttca ctcacgcggc gttgctccgt 1080
cagactttcg tccattgcgg aagattccct actgctgcct cccgtaggag tctgggccgt 1140
gtctcagtcc cagtgtggcc gatcaccctc tcaggtcggc tacgcatcgt tgccttggtg 1200
agccgttacc tcaccaacta gctaatgcgc cgcgggtcca tctgtaagcg acagctaaaa 1260
gccgcctttc cattcttctt catgcgaaga aaaagaatat ccggtattag ccccggtttc 1320
ccggagttat cccagtctta caggcaggtt acccacgtgt tactcacccg tccgccgcta 1380
acttgaacgg aagcaagctt ccgtcaagtc cgctcgactt gc 1422
Claims (5)
1.一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株，其特征在于：所述的高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株命名为栗褐芽孢杆菌Bacillus badiusUWB19-14，于2021年05月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2021547，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。
2.如权利要求1所述栗褐芽孢杆菌诱变菌株在生产绿原酸中的应用。
3.一种生产绿原酸的发酵方法，其特征在于：以如权利要求1所述的栗褐芽孢杆菌Bacillus badiusUWB19-14为发酵菌。
4.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于：发酵方法包括摇瓶发酵和发酵罐发酵，所述的摇瓶发酵采用优化培养基，所述发酵罐发酵采用基础发酵培养基和优化培养基；
其中，所述优化培养基为木薯粉30g·L-1、葡萄糖30g·L-1、酵母提取物30g·L-1、MgSO40.2 g·L-1、H2O定容至1L；
所述基础发酵培养基为牛肉浸粉5g·L-1、蛋白胨10g·L-1、NaCl 5g·L-1、琼脂20g·L-1、H2O定容至1L。
5.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于：所述摇瓶发酵的发酵温度为32℃，发酵时间为7天。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110558130.7A CN113980828B (zh) | 2021-05-21 | 2021-05-21 | 一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110558130.7A CN113980828B (zh) | 2021-05-21 | 2021-05-21 | 一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113980828A CN113980828A (zh) | 2022-01-28 |
| CN113980828B true CN113980828B (zh) | 2024-02-20 |
Family
ID=79731750
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110558130.7A Active CN113980828B (zh) | 2021-05-21 | 2021-05-21 | 一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113980828B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114703091B (zh) * | 2022-03-11 | 2023-09-05 | 广西大学 | 一株高产绿原酸菌株及其应用 |
| CN115491323B (zh) * | 2022-05-26 | 2023-11-10 | 广西大学 | 一株沙福芽孢杆菌sc-11及其应用 |
| CN115927058B (zh) * | 2022-08-23 | 2023-07-07 | 山东宝来利来生物工程股份有限公司 | 一株产绿原酸的侧孢短芽孢杆菌及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108192830A (zh) * | 2018-01-21 | 2018-06-22 | 广西大学 | 一种能生长分泌次生代谢物绿原酸的菌株s2-16及其应用 |
| CN112646739A (zh) * | 2020-11-25 | 2021-04-13 | 山东碧蓝生物科技有限公司 | 一株芽孢杆菌及其应用 |
-
2021
- 2021-05-21 CN CN202110558130.7A patent/CN113980828B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108192830A (zh) * | 2018-01-21 | 2018-06-22 | 广西大学 | 一种能生长分泌次生代谢物绿原酸的菌株s2-16及其应用 |
| CN112646739A (zh) * | 2020-11-25 | 2021-04-13 | 山东碧蓝生物科技有限公司 | 一株芽孢杆菌及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113980828A (zh) | 2022-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113980828B (zh) | 一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株 | |
| CN105112476B (zh) | 一种发酵生产脂肽类生物表面活性剂的方法 | |
| CN110373359B (zh) | 一种白色链霉菌X-18及利用该菌生产ε-聚赖氨酸的方法 | |
| CN110272839B (zh) | 一株不动杆菌及其在生产手性3-环己烯-1-甲酸中的应用 | |
| CN102888351B (zh) | 一种灵菌红素高产菌株及其生产方法 | |
| CN106282044B (zh) | 一种生丝微菌和吡咯喹啉醌的制备方法 | |
| WO2011153872A1 (zh) | 一种用于发酵生产环磷酸腺苷的节杆菌及其应用 | |
| CN108546660A (zh) | 甲壳素脱乙酰基酶高产菌株及其应用 | |
| CN117343871B (zh) | 一种鲍氏不动杆菌、酯化液及在黄水处理中的应用 | |
| CN101338291B (zh) | 一种制备冠菌素的方法及其专用菌株 | |
| CN104450571B (zh) | 一种高效降解蝇蛆蛋白的苏云金芽孢杆菌菌株 | |
| CN105420159B (zh) | 一种热凝胶多糖菌株及其应用 | |
| CN113817650B (zh) | 一株产吡嗪高温放线菌、分离筛选及应用 | |
| CN112680387B (zh) | 一种发酵产放线菌素d的锈赤蜡黄链霉菌株及其应用 | |
| CN107557311B (zh) | 一株嗜酸乳杆菌及其在发酵产抑菌多肽中的应用 | |
| CN107641602B (zh) | 一株产朊假丝酵母及其在发酵产蛋白中的应用 | |
| CN116286560A (zh) | 一株拉乌尔菌hc6及其低温生产2,3-丁二醇的应用 | |
| CN114292763B (zh) | 一株高产γ-氨基丁酸和可溶性β-葡聚糖的酿酒酵母及其应用 | |
| CN116286545A (zh) | 一种类球红细菌诱变菌株hcyj-01及应用 | |
| CN112661807B (zh) | 抗菌脂肽Fengycin在抑制黄曲霉生长和毒素合成中的应用 | |
| CN112725238B (zh) | 一种发酵产利普司他汀的毒三素链霉菌株及其应用 | |
| CN111154679B (zh) | 一种黄曲霉毒素降解菌的高效发酵方法 | |
| CN109706100A (zh) | 一株巴氏葡萄球菌突变株及其在制备5-氨基乙酰丙酸中的应用 | |
| CN109735473B (zh) | 发酵法制水溶性姜黄素 | |
| CN103740781B (zh) | 一种培养游动放线菌获取雷帕霉素发酵液的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |