CN116286560A - 一株拉乌尔菌hc6及其低温生产2,3-丁二醇的应用 - Google Patents
一株拉乌尔菌hc6及其低温生产2,3-丁二醇的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116286560A CN116286560A CN202310526702.2A CN202310526702A CN116286560A CN 116286560 A CN116286560 A CN 116286560A CN 202310526702 A CN202310526702 A CN 202310526702A CN 116286560 A CN116286560 A CN 116286560A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- raoult
- butanediol
- fermentation
- straw
- xynb86
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- OWBTYPJTUOEWEK-UHFFFAOYSA-N butane-2,3-diol Chemical compound CC(O)C(C)O OWBTYPJTUOEWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 33
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 241000889980 bacterium HC6 Species 0.000 title claims description 3
- 239000010902 straw Substances 0.000 claims abstract description 43
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 32
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 108010038658 exo-1,4-beta-D-xylosidase Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 26
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 26
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 25
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 24
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 19
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- 241000232299 Ralstonia Species 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 241000209149 Zea Species 0.000 claims 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 abstract description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003575 carbonaceous material Substances 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 5
- 239000002154 agricultural waste Substances 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N Butadiene Chemical compound C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000321184 Raoultella Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 2
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101100508063 Enterobacter agglomerans iceE gene Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012880 LB liquid culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 239000002816 fuel additive Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000017525 heat dissipation Effects 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000010907 stover Substances 0.000 description 1
- 229920003051 synthetic elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 1
- 239000005061 synthetic rubber Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010891 toxic waste Substances 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
- C12N9/2485—Xylan endo-1,3-beta-xylosidase (3.2.1.32), i.e. endo-1,3-beta-xylanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01032—Xylan endo-1,3-beta-xylosidase (3.2.1.32), i.e. endo-1-3-beta-xylanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Abstract
本发明提供了一株拉乌尔菌HC6及其低温生产2,3‑丁二醇的应用，属于微生物技术领域。本发明提供的拉乌尔菌（Raoultella sp.）HC6，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年09月07日，保藏编号为CGMCC No.20607。本发明利用拉乌尔菌HC6和从该菌株中分离得到的β‑木糖苷酶XynB86，在低温条件下通过降解玉米秸秆来生产2,3‑丁二醇，节省了外部加热所需能源，减少了原料的化学处理，降低了成本，提高了生产效率，为农业废弃物低碳经济发展提供新思路。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株拉乌尔菌HC6及其低温生产2,3-丁二醇的应用。
背景技术
2,3-丁二醇广泛应用于化工、食品、燃料及航天航空等多个领域，因其热值较高(27,200kJ/kg)，同乙醇(29,100kJ/kg)相当，可用作燃料添加剂，作为一种温和的保湿剂和杀菌剂用于食品、化妆品和医药行业，其脱水成1,3-丁二烯可用于合成橡胶和树脂(Thapaet al.,Bioche Eng J,）。
在以往的研究中，虽然已经发现了多种可以生产2,3-丁二醇的方法，如：利用葡萄糖为底物发酵生产2,3-丁二醇，利用化学预处的各种含有纤维素的有机底物发酵生产2,3-丁二醇，但是这样不仅成本高，而且化学预处理后的水解液一般都会对发酵的微生物有毒害作用。使用农业废弃物直接发酵生成2,3-丁二醇明显具有经济优势。
秸秆是地球上碳水化合物含量最丰富的生物质，将其转化为增值的平台化合物不仅可以缓解能源危机还能够提高农业废弃物的资源利用率。但是，在微生物活动中，温度会对微生物的生长繁殖产生巨大的影响。尤其是对其酶的活性。在低温地区，微生物的酶活性受到温度限制，导致秸秆降解速度慢，并且，通常情况下微生物生物合成需要30℃以上的温度，这导致低温农业种植区的秸秆大量积累并被燃烧处理，造成大气的污染。
耐冷微生物通过产生冷活性酶（Cold-active enzyme）来调节代谢活动从而适应低温环境。冷活性酶在0℃至40℃的温度范围内均具有较高的生物活性，可允许工业生产中的生物催化反应在低温下进行，从而降低工业生产过程中的能量损耗。因此，提供一种新的耐冷微生物来以玉米秸秆为原料生产2,3-丁二醇，对于提高2,3-丁二醇的产率，降低能耗和环境污染是非常有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一株拉乌尔菌HC6及其低温生产2,3-丁二醇的应用。本发明利用拉乌尔菌HC6和从该菌株中分离得到的β-木糖苷酶XynB86，在低温条件下通过降解玉米秸秆来生产2,3-丁二醇，节省了外部加热所需能源，减少了原料的化学处理，降低了成本，提高了生产效率，为农业废弃物低碳经济发展提供新思路。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一株拉乌尔菌（Raoultella sp.）HC6，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年09月07日，保藏编号为CGMCC No.20607。
本发明还提供了一种分离自上述拉乌尔菌HC6的β-木糖苷酶XynB86，编码所述β-木糖苷酶XynB86的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了一种生产2,3-丁二醇的方法，上述拉乌尔菌HC6联合上述β-木糖苷酶XynB86降解玉米秸秆生产2,3-丁二醇。
优选的，所述方法具体为：将所述拉乌尔菌HC6的种子液接种于秸秆液体培养基中发酵，分别于发酵的第0.5、2、3 d，加入所述β-木糖苷酶XynB86的酶液，进行酶促发酵。
优选的，所述种子液的OD600值为1.9~2.1；所述种子液的接种量为所述秸秆液体培养基体积的2~6%。
优选的，所述发酵的温度为12~18℃，转速为150~200 rpm。
优选的，所述酶液的浓度为0.1~0.2 mg/mL，所述酶液与所述秸秆液体培养基的体积比为（0.5~2）：4000。
优选的，所述酶促发酵的温度为12~18℃，转速为150~200 rpm。
优选的，所述发酵和酶促发酵的总时长为4~12 d。
优选的，所述秸秆液体培养基以水为溶剂，包括如下浓度的原料：玉米秸秆段4~6g/L、(NH4)2SO4 1.0~2.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.3~0.6 g/L、K2HPO4 1~3 g/L、CaCl2 0.2~0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.002~0.006 g/L、MnSO4 0.001~0.002 g/L、ZnCl2 0.001~0.002 g/L、CoCl2 0.001~0.002 g/L。
本发明提供了一株拉乌尔菌HC6及其低温生产2,3-丁二醇的应用。本发明利用拉乌尔菌HC6和从该菌株中分离得到的β-木糖苷酶XynB86，可以在12~18℃的低温条件下进行2,3-丁二醇的生产，一方面可以节约外部加热所需能源，另一方面可以加强发酵过程中的散热，减小发酵产热对整个生产系统的影响，提高2,3-丁二醇的产量和转化率，增加生产效率。
本发明生产2,3-丁二醇的原材料为玉米秸秆，是农业种植区最大的废弃物来源，获得难度低。玉米秸秆对环境的影响大，利用难度高，是困扰农民的一大问题。本发明通过低温微生物发酵由秸秆转化为高附加值的产物，可以解决巨大的环境问题。并且，玉米秸秆切段风干后直接进行发酵，不需要进行其余的酸碱等化学处理或加热加压等物理处理，降低了化学处理产生的有毒废液，降低物理处理所需的额外成本，既能降低环境压力又能减少经济压力。增强了秸秆生物利用效率，为农业废弃物低碳经济发展提供新思路。
附图说明
图1为实施例1中，分离出的菌株HC6的菌落形态分布图。
图2为实施例1中，分离出的菌株HC6经革兰氏染色后的菌体形态图。
图3为实施例1中，基于16S rDNA序列的菌株HC6相似菌株的系统发育树。
图4为实施例2中，从拉乌尔菌HC6中扩增出的xynB68基因产物的电泳检测结果。
图5为实施例2中重组菌E.coli BL21-xynB68在具有KanaR抗性的LB固体平板上的生长情况。
图6为实施例2中，从重组菌E.coli BL21-xynB68中扩增出的xynB68基因产物的电泳检测结果，其中，M为2000 bp的DNA Marker，泳道1~4为xynB68基因扩增产物。
图7为实施例2中空白菌E.coli BL21胞内蛋白液和重组菌E.coli BL21-xynB68胞内粗酶液的SDS-PAGE检测结果，其中，M为2000 bp的DNA Marker，pET28a为含有pET-28a（+）空载体的空白菌E.coli BL21胞内蛋白液的条带，XynB68为含有重组表达载体的重组菌E.coli BL21-xynB68胞内粗酶液的条带。
图8为实施例2中纯化蛋白XynB68的SDS-PAGE检测结果。其中，M为2000 bp的DNAMarker，XynB68为纯化蛋白XynB68。
图9为实施例2中纯化蛋白的Western blot的检测结果。其中M为2000 bp的DNAMarker，XynB68为纯化蛋白XynB68。
图10为实施例3中，拉乌尔菌HC6单独发酵和拉乌尔菌HC6联合β-木糖苷酶XynB86发酵的2,3-丁二醇产量和转化率的检测结果。其中，A图为2,3-丁二醇的产量检测结果，B图为2,3-丁二醇的转化率检测结果。
图11为实施例3中，不同处理下玉米秸秆的表面结构特征。其中，A图为未发酵的玉米秸秆表面结构特征，B图为拉乌尔菌HC6单独发酵7d后的玉米秸秆表面结构特征，C图为拉乌尔菌HC6联合β-木糖苷酶XynB86发酵7d后的玉米秸秆表面结构特征。
保藏说明
拉乌尔菌（Raoultella sp.）HC6，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年09月07日，保藏编号为：CGMCC No.20607。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
本实施例从腐烂秸秆堆底部土壤中分离出了一株菌HC6，其菌落形态分布如图1所示，可以看出，该菌株可形成圆形平整、边缘整齐、不透明、表面光滑湿润的乳白色菌落。将该菌株进行革兰氏染色，在光学显微镜下观察菌体形态，形态学观察结果如图2所示，可以看出，该菌株经革兰氏染色后呈红色，属于革兰阴性细菌，以单菌体游离形态存在，菌体呈短杆状。
根据《常见细菌系统鉴定手册》对该菌株进行菌株生理生化特征分析，检测结果如表1所示，将该菌株的生理生化试验结果与《伯杰氏细菌鉴定手册》(第八版)中各模式菌株生理生化指标进行比对。
表1 菌株HC6生理生化特征试验结果
注:“+”代表阳性;“-”代表阴性。
对该菌的16S rDNA进行PCR扩增，采用BLAST软件在GenBank进行同源性比较，采用MEGA 7.0软件进行多序列比对，采用邻接法构建系统发育树。如图3所示，由此确定该菌株HC6为拉乌尔菌。将该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年9月7日，保藏编号为CGMCC No.20607。
实施例2
本实施例从拉乌尔菌HC6（保藏编号为：CGMCC No.20607）中分离出了一种冷活性β-木糖苷酶XynB86，具体分离过程如下：
（1）通过基因组DNA提取试剂盒（上海生工生物工程股份有限公司）抽提拉乌尔菌HC6基因组，采用TAKARA线上引物设计软件（https://www.takarabio.com/learning-centers/cloning/primer-design-and-other-tools）设计xynB68基因引物序列，如表2所示。以拉乌尔菌HC6基因组DNA为模板，采用表2所示的引物对对HC6中的xynB68基因进行PCR扩增。使用1%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，电泳检测结果图4所示。用紫外切胶仪快速切下xynB68目的条带，回收纯化PCR扩增产物，并送往生工生物工程(上海)股份有限公司测序。测得XynB86基因序列如SEQ ID NO.1所示。
SEQ ID NO.1如下：
ATGACTCTTATTCAAAACCCTGTGTTACCTGGATTTAATGCGGACCCCAGTATTATCCGTGTAGATGACACCTACTATATCGCAAACTCTACATTTGAGTGGTTCCCTGGCGTGCGTTTACATGAGTCAAAGGACCTGCAGCACTGGGATCTTCTCCCCAGCCCCTTGTCCACAACCGCGCTGTTAGATATGAAAGGTAACCCTTCATCAGGTGGCATCTGGGCTCCGGCGCTTTCTCATGCTGATGGCAAATTCTGGCTAGTGTATACGGATGTGAAAATCACGGAAGGTGCCTTTAAAGATATGACCAACTATCTGACCACCGCTACGGATATTCGTGGTCCATGGTCAGATCCTATCAAACTCAATGGCGTTGGCTTCGATGCTTCACTGTTCCATGACGATGACGGGCGTAAATATATCGTTCAGCAAACCTGGGACCATCGAGAATATCATCACCCCTTCGATGGCATTACGTTGACTGAGCTTGATACCCGGACATTAAAGTTAAAACCGGAAACAGCGCGAACCCTCTATCGCGGCACGGCCGTTGCGCTTGTCGAGGGGCCACACCTCTACAAACTGAACGGATATTACTATCTTTTCGCCGCTCAGGGAGGGACCGTATTCACCCATCAGGAGGTTGTCGCGCGTTCTAAGACCTTAGATGCCCACAGTTTTACCACGGCACCGGGAGAAGTTTTCCTAACCAACGTCGATACGCCGGACTGCTACATCCAGAAGCAGGGCCACGGCTCTTTGGTTTCAACGCCTGCTGGCGAATGGTATTACGCTTCGCTCTGCGCGCGTCCGTGGAATCGTCCAGGCGAGTCTGTCTACGATCCTCGCGGCTGGTCAACGCTGGGCAGAGAAACGTCGATCCAAAAAGTGTACTGGGATGAAGAGGGCTGGCCGCGCGTTGAAGGCGGCCACGGTGGAAAAACGTTTGTTGAAGGTCCAGAGGATGCCATTTACACCGAAAGCGCAACAGATCACAGTCAGCATGATGCGTTTACCACGTCGACCCTCGATCGCAACTGGAATACGCTCCGCGTTCCGTTCACCAAAAAAATGGGTACCACAGGCGATGGCAAACTGACGTTGATTGGTCAGGGTTCTTTAGCGAATACCCATGACCTGTCGCTTATTGCCCGACGTTGGCAAGCCTTCTATTTTGATGCCCAGGTTAAGGTCAAATTTAATCCATTCAGCTATCAACAAATGGCGGGGTTAACGAATTTCTATAACGATCGTCACTGGAGCTTTGTGTTCATCACCTGGAATGAAATTAATGGCTCAGTCATCGAAATAGGTGAAAATAATCGCGGAAAATACACCTCTTATTTAAAAGATGATGCCATCAAGATCCCCGAAGGTACCGAGTATGTCTGGTTCCGCACCAAAGTTCGCAAACAAACGTACAGCTATGAATATAGCTTTGATGGGATCAGCTTCACTCAAATTCCGGTCACGCTGGATGCCGCAATACTTTCAGATGATTATGTCCTGCAAAGCTATGGTGGGTTCTTTACCGGAGCATTCGTTGGCCTGGCGGCAGTCGACTACTCTGGCTATGAGGTCAGCGCAGATTTTTATGATTTTGCTTATCAGGAGCTCGGTGATTCGTTAACGGCTACTGGCGATTATGGCTGGGACGCAGGGGAATTACGCTCTAATTAA。
表2 xynB68基因引物序列
使用质粒提取试剂盒（上海生工生物工程股份有限公司）提取表达质粒pET-28a（+），采用限制性内切酶HindIII对pET-28a（+）进行单酶切。胶回收线性化的pET-28a（+），于-20℃保存。采用In-fusion连接试剂盒（购自大连宝生物工程有限公司公司）将目的基因xynB68与线性质粒pET-28a（+）连接，得到重组表达载体。
冰上融化E.coli BL21(DE3)感受态细胞，将1 μL重组表达载体（1 μg/μL）加入到10 μL感受态细胞中，冰上放置30 min后，于42℃水浴锅中热休克90 s，迅速转移至冰上5min。在无菌工作台内向各管含重组表达载体的感受态细胞中加入200 μL LB培养液，然后转移到培养管中，37℃条件下，培养1 h。将200 μL细胞悬液倒入具有KanaR抗性的LB固体平板上，把涂布棒在酒精灯上过火灭菌然后把悬液涂布均匀，倒置于37℃恒温孵箱中培养16h，观察菌落生长情况，如图5所示。挑取平板上的阳性单克隆子菌株，采用PCR技术扩增菌株中的xynB68基因，使用1%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，电泳检测结果如图6所示，可以看出，泳道1~4的扩增产物条带清晰，表明重组菌E.coli BL21-xynB68构建成功。将菌株送往生工生物工程(上海)股份有限公司测序。将测序正确的重组菌E.coli BL21-xynB68保存于甘油管中，-80℃保存。
（2）将测序正确的重组菌E.coli BL21-xynB68培养于LB液体培养基中37℃过夜活化。取1 mL活化的重组菌E.coli BL21-xynB68转接至含有50 µg/mL的KanaR的新鲜LB液体培养基中，并于培养箱37℃和160 rpm的恒温摇床中培养。待菌液OD600达到0.5时，加入终浓度为0.5 mM的IPTG溶液，并将培养液转移至16℃和160 rpm的控温培养箱中诱导表达12 h。将菌液于低温高速离心机中4℃、10000 rpm离心10 min，弃上清液。菌体用PBS缓冲液洗涤3遍后，使用细胞超声破碎仪对E.coli BL21-xynB68进行细胞破碎（超声波破碎程序设定为：功率300 W，间隙10 s，工作10 s，总时间20 min），于4℃，12000 rpm，离心30 min，收集上清，得到胞内粗酶液。
按照上述方法，将pET-28a（+）空载体导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中制备空白菌E.coli BL21，并制备胞内蛋白液。
分别将上述重组菌的胞内粗酶液、空白菌的胞内蛋白液与蛋白上样缓冲液按照4：1的比例混合，沸水浴10 min，冷却后，取7 μL点样，恒压200 V跑胶。胶从玻璃片中小心取出，用考马斯亮蓝染色20 min。用脱色液浸泡SDS-PAGE胶，在脱色摇床上过夜脱色后，观察重组菌E.coli BL21-xynB68和空白菌株E.coli BL21(DE3)中Xyn68蛋白的表达情况。
SDS-PAGE验证结果如图7所示，pET28a为含有pET-28a（+）空载体的空白菌E.coliBL21胞内蛋白的条带，XynB68为含有重组表达载体的重组菌E.coli BL21-xynB68胞内蛋白的条带。可以看出，空白菌的包被蛋白液中没有XynB68蛋白条带，重组菌的包被粗酶液中有XynB68蛋白条带。
（3）采用AKTA蛋白纯化系统（镍柱层析）对上述粗酶液进行蛋白纯化。使用结合缓冲液A平衡和清洗蛋白纯化系统1 h后，以20%浓度的洗脱缓冲液B对带有His标签的XynB68进行洗脱，获得的纯化蛋白XynB68，于-80℃保存。
纯化的XynB68蛋白使用SDS-PAGE和Western blot进行验证。SDS-PAGE验证结果如图8所示，可以看出，XynB68蛋白所示的条带清晰，无杂带，表明纯化效果好。
Western blot检测方法如下所示：12 μL的纯化蛋白XynB68与3 μL的蛋白上样缓冲液混合后，沸水浴10 min，用10% SDS-PAGE胶跑蛋白。PVDF膜在甲醇中活化2 min，分离胶小心从玻璃板中取出，将黑面（负极）/海绵/三层滤纸/分离胶/三层滤纸/海绵/白面（正极）在1×WB缓冲液中按照顺序摆放。恒压75V下，在冰上转膜95 min。将膜从转膜仪中取出，放入封闭液中，37℃封闭2 h。弃去封闭液，加入10 mL的TBST缓冲液，摇床上洗涤10 min。弃洗涤液后，加入一抗稀释液，4℃孵育过夜。次日，弃一抗稀释液，加入10 mL的TBST，摇床上洗涤10 min，重复2次。弃去洗涤液，加入二抗稀释液，摇床上室温孵育60 min，弃二抗稀释液。加入10 mL的TBST，摇床上洗涤10 min，重复2次。弃去洗涤液，每1 cm2膜加入0.05 mL的ECL工作液，避光2 min，快速使用高灵敏度全功能成像系统观察XynB68表达与纯化的情况，检测结果如图9所示，可以看出，XynB68蛋白所示的条带清晰，无杂带，纯化效果好。
为了去除纯化蛋白XynB68溶液中的高浓度钠盐和咪唑，对纯化蛋白进行透析：剪取大小为15 cm的透析袋，在2% NaHCO3和1 mmol/L EDTA-2Na（pH=8.0）中煮沸10 min，用蒸馏水清洗3遍。透析夹夹住透析袋尾端，将纯化蛋白装入透析袋中，透析夹夹住透析袋首端。放入低浓度PBS缓冲液（10 mM，pH 7.0 ± 0.05）中，4℃下透析，每2 h换一次透析液。次日，换蒸馏水进行透析，每6 h换一次蒸馏水，透析24 h后取出，于-80℃冷冻后，用冷冻干燥机干燥成粉末，并用无菌水溶解，得到XynB68酶液。使用Bradford试剂盒（购自大连宝生物工程有限公司公司）测定XynB68酶液蛋白浓度，浓度为0.109 mg/mL。
实施例3
本实施例提供了一种联合拉乌尔菌HC6和实施例2制备的β-木糖苷酶XynB86降解玉米秸秆生产2,3-丁二醇的方法，具体如下：
（1）拉乌尔菌HC6的种子液制备
将拉乌尔菌HC6接种于LB液体培养基中，于25℃，160 rpm活化12 h，菌液8000 rpm离心10 min。菌体用无菌水洗涤3遍后，用无菌水将菌悬液调至OD600=2.0，得到拉乌尔菌HC6种子液。
LB液体培养基为：酵母浸粉5 g，蛋白胨10 g，氯化钠10g，溶于950 mL 超纯水中，使用0.1 mol/L的硫酸和0.1 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7左右。
（2）秸秆液体培养基的制备
将玉米秸秆烘干至恒重，剪成3 cm的秸秆段，置于干燥通风处备用。
按照如下配方制备秸秆液体培养基：玉米秸秆段5 g/L、(NH4)2SO4 1.4 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、K2HPO4 2 g/L、CaCl2 0.3 g/L、FeSO4·7H2O 0.005 g/L、MnSO40.0016 g/L、ZnCl2 0.0017 g/L、CoCl2 0.0017 g/L。
（3）2,3-丁二醇的生产
以单独使用拉乌尔菌HC6生产2,3-丁二醇为对照，检测拉乌尔菌HC6联合实施例2制备的β-木糖苷酶XynB86生产2,3-丁二醇的能力，具体如下：
对照组：将步骤（1）的拉乌尔菌HC6种子液以4%的接种量（v/v）接种于秸秆液体培养基中，于15℃、160 rpm的条件下发酵。
实验组：将步骤（1）的拉乌尔菌HC6种子液以4%的接种量（v/v）接种于秸秆液体培养基中，于15℃、160 rpm的条件下发酵。在发酵至第0.5 d时，按照酶液与秸秆液体培养基的体积比1：4000，将实施例2酶液加入到秸秆液体培养基中；发酵至第2 d时，按照酶液与秸秆液体培养基的体积比1：4000，将实施例2酶液加入到秸秆液体培养基中；发酵至第3 d时，按照酶液与秸秆液体培养基的体积比1：4000，将实施例2酶液加入到秸秆液体培养基中，于15℃、160 rpm的条件下继续进行酶促发酵7 d。
每天检测一次对照组和实验组培养基中2,3-丁二醇的产量，并按照以下公式计算转化率。
转化率=2,3-丁二醇产量/秸秆重量×100%
检测结果如图10所示。从图10可以看出，当在拉乌尔菌HC6发酵初期加入冷活性酶XynB68时，培养基中2,3-丁二醇的产量与拉乌尔菌HC6单独发酵时相比有明显的提高，在第2 d即达到了相对稳定水平，并在第6 d达到最高产量为2.23 g/L，和最高转化率为0.334g/g。而拉乌尔菌HC6单独降解玉米秸秆第5 d，2,3-丁二醇产量最高，仅为1.19 g/L，转化率最高，仅为0.178 g/g。表明，联合拉乌尔菌HC6和β-木糖苷酶XynB86降解玉米秸秆，能够使2,3-丁二醇的产量提高1.88倍。
（3）不同处理下对秸秆分解效果
取出步骤（2）秸秆液体培养基中的玉米秸秆，步骤（3）拉乌尔菌HC6单独发酵7 d后的培养基中的玉米秸秆，步骤（3）联合拉乌尔菌HC6和实施例2制备的β-木糖苷酶XynB86发酵7 d后的培养基中的玉米秸秆，使用电镜观察玉米秸秆表面结构特征，检测结果如图11所示。
从图11可以看出，发酵前，玉米秸秆（CS）表面结构整齐完整（A图）；拉乌尔菌HC6单独发酵，可对玉米秸秆造成破坏，结构不再完整（B图）；拉乌尔菌HC6联合β-木糖苷酶XynB86发酵后，玉米秸秆表面结构被破坏严重（C图）。表明，拉乌尔菌HC6联合β-木糖苷酶XynB86发酵对玉米秸秆的分解作用最强。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一株拉乌尔菌（Raoultella sp.）HC6，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2020年09月07日，保藏编号为CGMCC No.20607。
2.一种分离自权利要求1所述的拉乌尔菌HC6的β-木糖苷酶XynB86，其特征在于，编码所述β-木糖苷酶XynB86的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种生产2,3-丁二醇的方法，其特征在于，权利要求1所述的拉乌尔菌HC6联合权利要求2所述的β-木糖苷酶XynB86降解玉米秸秆生产2,3-丁二醇。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法具体为：将所述拉乌尔菌HC6的种子液接种于秸秆液体培养基中发酵，分别于发酵的第0.5、2、3 d，加入所述β-木糖苷酶XynB86的酶液，进行酶促发酵。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述种子液的OD600值为1.9~2.1；所述种子液的接种量为所述秸秆液体培养基体积的2~6%。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵的温度为12~18℃，转速为150~200 rpm。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述酶液的浓度为0.1~0.2 mg/mL，所述酶液与所述秸秆液体培养基的体积比为（0.5~2）：4000。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述酶促发酵的温度为12~18℃，转速为150~200 rpm。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵和酶促发酵的总时长为4~12 d。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述秸秆液体培养基以水为溶剂，包括如下浓度的原料：玉米秸秆段4~6 g/L、(NH4)2SO4 1.0~2.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.3~0.6 g/L、K2HPO4 1~3 g/L、CaCl2 0.2~0.5 g/L、FeSO4·7H2O 0.002~0.006 g/L、MnSO4 0.001~0.002g/L、ZnCl2 0.001~0.002 g/L、CoCl2 0.001~0.002 g/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310526702.2A CN116286560B (zh) | 2023-05-11 | 2023-05-11 | 一株拉乌尔菌hc6及其低温生产2,3-丁二醇的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310526702.2A CN116286560B (zh) | 2023-05-11 | 2023-05-11 | 一株拉乌尔菌hc6及其低温生产2,3-丁二醇的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116286560A true CN116286560A (zh) | 2023-06-23 |
| CN116286560B CN116286560B (zh) | 2023-08-22 |
Family
ID=86818886
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310526702.2A Active CN116286560B (zh) | 2023-05-11 | 2023-05-11 | 一株拉乌尔菌hc6及其低温生产2,3-丁二醇的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116286560B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117417874A (zh) * | 2023-12-19 | 2024-01-19 | 东北农业大学 | 一种工程菌株hc6-mt及其在低温生产海藻糖中的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012103385A2 (en) * | 2011-01-26 | 2012-08-02 | Qteros, Inc. | Biocatalysts synthesizing deregulated cellulases |
| CN111575194A (zh) * | 2020-04-25 | 2020-08-25 | 黑龙江省农垦科学院 | 一种对秸秆降解的混合菌及其应用 |
| CN113773991A (zh) * | 2021-09-15 | 2021-12-10 | 南宁汉和生物科技股份有限公司 | 一种解鸟氨酸拉乌尔菌菌株sk2021-1及其防控旱地蜗牛应用 |
-
2023
- 2023-05-11 CN CN202310526702.2A patent/CN116286560B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012103385A2 (en) * | 2011-01-26 | 2012-08-02 | Qteros, Inc. | Biocatalysts synthesizing deregulated cellulases |
| CN111575194A (zh) * | 2020-04-25 | 2020-08-25 | 黑龙江省农垦科学院 | 一种对秸秆降解的混合菌及其应用 |
| CN113773991A (zh) * | 2021-09-15 | 2021-12-10 | 南宁汉和生物科技股份有限公司 | 一种解鸟氨酸拉乌尔菌菌株sk2021-1及其防控旱地蜗牛应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BAO, W. ET AL.: "Raoultella ornithinolytica strain S12, complete genome, ACCESSION：CP010557.1", GENBANK, pages 1 - 2 * |
| 唐昊等: "纤维素降解菌Raoultella ornithinolytica LL1 的筛选及基因组测序", 生物技术通报, vol. 37, no. 6, pages 85 - 96 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117417874A (zh) * | 2023-12-19 | 2024-01-19 | 东北农业大学 | 一种工程菌株hc6-mt及其在低温生产海藻糖中的应用 |
| CN117417874B (zh) * | 2023-12-19 | 2024-04-09 | 东北农业大学 | 一种工程菌株hc6-mt及其在低温生产海藻糖中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116286560B (zh) | 2023-08-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mohagheghi et al. | Isolation and characterization of Acidothermus cellulolyticus gen. nov., sp. nov., a new genus of thermophilic, acidophilic, cellulolytic bacteria | |
| US10968424B2 (en) | Bacillus subtilis strain, culture method and use thereof | |
| CN110643544B (zh) | 副干酪乳杆菌761及其应用、青贮饲料添加剂、青贮饲料 | |
| CN110591987B (zh) | 唾液乳杆菌358及其应用、青贮饲料添加剂、青贮饲料 | |
| CN110093285B (zh) | 一株耐酸发酵乳杆菌及其应用 | |
| CN116286560B (zh) | 一株拉乌尔菌hc6及其低温生产2,3-丁二醇的应用 | |
| CN110218676B (zh) | 一种丁酸梭菌及其应用 | |
| CN101899407B (zh) | 一株高产3-羟基丁酮的地衣芽胞杆菌mel09的筛选及应用 | |
| CN102925361A (zh) | 一种afb1降解菌及降解酶 | |
| US8148133B2 (en) | Fossil fuel-free process of lignocellulosic pretreatment with biological hydrogen production | |
| CN101338291A (zh) | 一种制备冠菌素的方法及其专用菌株 | |
| CN108865901B (zh) | 一株米曲霉菌株及其在降解黄曲霉毒素中的应用 | |
| Kittithanesuan et al. | Enhanced acetone-butanol production from sugarcane juice by immobilized Clostridium acetobutylicum (ATCC 824) on thin-shell silk cocoons | |
| CN114032187B (zh) | 西藏酸奶来源的马克斯克鲁维酵母菌株及其应用 | |
| CN112725205B (zh) | 一株酵母属菌种及其筛选方法和应用 | |
| CN103468606A (zh) | 一株产酸克雷伯氏菌及其在生产蒜糖醇中的应用 | |
| CN102994408B (zh) | 一种卡拉胶降解菌及其发酵方法和应用 | |
| CN116286561B (zh) | 一株产蛋白酶的耐酸乳酸乳球菌霍氏亚种及其应用 | |
| CN116515795B (zh) | 塔宾曲霉在制备植酸酶和/或降解植酸中的应用 | |
| CN117229961B (zh) | 一种芽孢八叠球菌、菌剂及其应用 | |
| CN114891665B (zh) | 一种海藻糖酶、重组菌及其在酵母制品水解中的应用 | |
| US20220002689A1 (en) | Feruloyl Esterase and Application thereof | |
| CN109735473B (zh) | 发酵法制水溶性姜黄素 | |
| CN104962574A (zh) | 一种节杆菌表达质粒与应用 | |
| CN117757869A (zh) | 一种高效发酵生产格尔德霉素的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |