CN113952332A - 香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用 - Google Patents

香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113952332A
CN113952332A CN202111339552.1A CN202111339552A CN113952332A CN 113952332 A CN113952332 A CN 113952332A CN 202111339552 A CN202111339552 A CN 202111339552A CN 113952332 A CN113952332 A CN 113952332A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pancreatic cancer
bergapten
cell
cfpac
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111339552.1A
Other languages
English (en)
Inventor
杨军丽
桑春艳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lanzhou Institute of Chemical Physics LICP of CAS
Original Assignee
Lanzhou Institute of Chemical Physics LICP of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lanzhou Institute of Chemical Physics LICP of CAS filed Critical Lanzhou Institute of Chemical Physics LICP of CAS
Priority to CN202111339552.1A priority Critical patent/CN113952332A/zh
Publication of CN113952332A publication Critical patent/CN113952332A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A61K31/37—Coumarins, e.g. psoralen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
    • A61K36/758—Zanthoxylum, e.g. pricklyash
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种香柑内酯化合物的药物活性——抗胰腺癌活性，以期用于制备康胰腺癌的药物，属于植物有效成分分离领域和医药领域。本发明通过CCK‑8法、抑制CFPAC‑1细胞迁移、诱导CFPAC‑1细胞凋亡实验表明，从花椒中分离的香柑内酯类化合物ZB‑1具有很好的抗胰腺癌活性，可作为活性化合物，用于制备治疗胰腺癌的药物。

Description

香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用
技术领域
本发明涉及一种香柑内酯化合物的药物活性——抗胰腺癌活性，以期用于制备康胰腺癌的药物，属于植物有效成分分离领域和医药领域。
背景技术
胰腺癌（PC）具有很高的侵袭性和致命性，是目前已知预后最差的恶性肿瘤之一。近年来，我国胰腺癌的发病率呈上升趋势，其死亡率居恶性肿瘤的前10位，5年生存率只有10%。胰腺癌患者中大约有80%-85%的患者无法手术切除或者已经发生转移，即使可以局部手术切除的患者，预后仍然很差，通过手术得到控制的患者只有10%~15%。药物治疗是胰腺癌治疗的主要手段之一，但由于耐药性和缺乏药物特异性，药物总体有效率不到20%。为了延长胰腺癌患者的生存期，迫切需要开发寻找更加安全有效的胰腺癌化疗药物。
天然产物作为药物的重要来源，在新药的发现和开发中发挥着重要的作用。60%以上的抗肿瘤药物与天然产物密切相关。因此，寻找天然活性化合物，发现新型抗胰腺癌药物，有助于推动寻找高效抗胰腺癌药物。香柑内酯，是从干燥成熟的花椒果中分离出来的天然甘松萜类化合物。其具体分离方法为：花椒干燥果皮用70%乙醇水溶液室温提取3次，每次7天；合并萃取液，减压除去溶剂，得到总萃取物；将总萃取物分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取，分别得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相；将得乙酸乙酯相减压浓缩，得到提取物；乙酸乙酯相萃取物通过硅胶柱色谱分离，石油醚/丙酮（20:1~ 0:1，v/v）梯度洗脱，共得到 15 种组分（Fr.1-Fr.15）。其中Fr.8经甲醇重结晶得白色粉末，经制备型薄层层析（二氯甲烷-乙酸乙酯，40:1）展开，得到的化合物即为香柑内酯，标记为ZB-1。该化合物通过文献谱图比对确定为香柑内酯(Choi et al., 2012)。Choi, J.Y., Kim,H.M., Lee, J.M., et al., 2012. Antibacterial activity of Zanthoxylumschinifolium. Nat. Prod. Sci. 18 (2), 137-140。结构如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
香柑内酯是一种重要的线型呋喃香豆素类化合物,是一种具有很强生物活性的天然产物，其对皮肤有光学活性，具有抗微生物活性和杀灭软体动物作用，临床上用于治疗银屑病。现代药理实验研究表明，香柑内酯对肿瘤、细胞增生也有一定的抑制活性，是一种潜在的抗肿瘤药物的中间体。然而，对于香柑内酯的抗胰腺癌活性尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种花椒中香柑内酯的抗胰腺癌活性，以期用于制备治疗抗胰腺癌的药物。
下面通过通过CCK-8法、抑制CFPAC-1细胞迁移、诱导CFPAC-1细胞凋亡实验，对于香柑内酯类化合物ZB-1的抗胰腺癌活性进行具体研究和分析。
、香柑内酯类化合物抑制胰腺癌细胞增殖活性
本实验用人源胰腺癌细胞CAPAN-2、CFPAC-1、PANC-1、SW1990细胞，取对数生长期的CAPAN-2、CFPAC-1、PANC-1、SW1990细胞，接种于96孔板（每孔1×104个细胞），待细胞贴壁后，分别加入浓度范围为0.1-100 µM梯度的待测化合物，培养72 h，然后每孔加入10 µLCCK-8溶液继续培养4小时，振荡10 min，酶标仪450 nm测定吸光度值，采用CCK-8法检测花椒中香柑内酯类化合物ZB-1对胰腺癌细胞CAPAN-2、CFPAC-1、PANC-1、SW1990细胞的增殖抑制作用，根据OD值计算SW1990胰腺癌细胞的存活率，如图1。
图1结果表明，化合物ZB-1对胰腺癌细胞CAPAN-2、CFPAC-1、PANC-1、SW1990具有增殖抑制作用，化合物ZB-1的浓度分别为0.05 µM、0.5 µM、5 µM、50 µM。作用CAPAN-2细胞72h后，细胞存活率（%）分别为95.33±1.41、76.06±3.48、 63.46±1.55、38.24±1.81；作用CFPAC-1细胞72 h后，细胞存活率分别为76.86±2.49、55.09±3.03、37.60±1.90、14.18±0.80；作用PANC-1细胞72 h后，细胞存活率分别为83.84±1.28、70.5±4.14、55.74±2.66、35.72±4.65；作用SW1990细胞72 h后，细胞存活率分别为88.44±0.35、78.99±4.29、47.26±2.31、26.40±2.66。以上结果表明ZB-1能够明显抑制胰腺癌细胞的增殖，其中，对CFPAC-1细胞效果最显著。具有开发胰腺癌治疗药物的潜能。
、花椒中香柑内酯类化合物ZB-1抑制CFPAC-1细胞迁移
在六孔板背面用marker笔和无菌直尺划线，线与线之间相隔1cm，每孔均匀划5条直线。选用对数生长期的细胞，消化离心后，用完全培养基重悬细胞，细胞计数板计数细胞密度，使接种细胞数目为4×105/孔，将6孔板置于 5%CO2、37℃的饱和湿度无菌恒温孵育箱中培养过夜。用100μL枪头在6孔板孔细胞表面均匀划线，保证线条间距相等，划线过程中注意枪头与板面垂直。用PBS缓冲液小心清洗3次，去除划落的细胞及碎片。根据实验设计，加入不同浓度的化合物ZB-1（5μM、10μM）处理细胞，将细胞置于培养箱中继续培养。按 0 h、48h 在倒置显微镜下观察细胞迁移情况并拍照，如图2。
结果如图2所示，根据上述实验方法处理细胞后，加入完全培养基（阴性对照组）以及ZB-1 化合物5μM和10μM，计0 h，然后继续培养细胞，48 h后弃掉培养液，用PBS溶液洗3次，在倒置显微镜下观察，空白对照组细胞增殖明显，并在48 h后细胞划痕完全愈合，而ZB-1干预组，即ZB-1 化合物5 μM和10 μM组，细胞培养48 h后，跟0 h比较，细胞划痕间距由于细胞增殖有所减少，但跟空白组比较，48 h后，细胞划痕的愈合减慢，表明化合物ZB-1能够抑制CFPAC-1细胞的迁移。
、花椒中香柑内酯类化合物ZB-1诱导胰腺癌细胞凋亡
取对数生长期CFPAC-1细胞，普通洁净的盖玻片放入六孔板板中进行爬片，种入细胞后过夜，加入5 µM的化合物ZB-1，培养24 h，弃掉培养液，加入固定液，固定10 min，弃固定液，用PBS洗2遍，每次3 min，加入0.5 mL Hoechst染色液，染色5 min，用PBS洗2遍，在载玻片上滴加荧光淬灭剂，盖上贴有细胞的盖玻片，在倒置荧光显微镜下观察，拍照。结果如图3所示，阴性对照组中，细胞形态均一，细胞核完整；和对照组细胞核形态完整、密度均匀、细胞核形态均一等状态比较，化合物ZB-1在5 μM和10 μM时能够使CFPAC-1细胞核发生皱缩裂解，细胞核染色质不均匀分布，有典型的细胞凋亡形态（箭头所示）。该实验结果表明花椒中分离得到香柑内酯类化合物ZB-1能够诱导胰腺癌细胞CFPAC-1细胞发生细胞凋亡。
、花椒中香柑内酯类化合物ZB-1抑制CFPAC-1细胞微管蛋白活性
取对数生长期CFPAC-1细胞，移至预先放置盖玻片的六孔板中，每孔细胞数量为4×104个，培养24 h，分别用10 μM的ZB-1处理细胞，37℃、5% CO2继续培养24 h，弃掉培养液，用4%多聚甲醛固定10 min，PBS摇床清洗3次，每次5min。然后加入0.01% Triton-X100，透膜5 min，PBS清洗3次，加入免疫荧光封闭液，室温静置封闭2 h。孵育α-Tubulin一抗，抗体混合用PBS稀释，比例为1:100。然后4℃过夜孵育。一抗孵育完后，用PBS摇床清洗3次，每次5min。孵育二抗，比例为1:200。室温避光孵育2 h。细胞核复染，加入DAPI 染液，室温避光孵育10 min，酒精梯度脱水后，抗荧光淬灭试剂封片。利用荧光显微镜再进行检测，拍照并收集照片。免疫荧光实验观察微管的结构变化，结果如图4所示，在空白对照组中，CFPAC-1细胞微管形态规则，分布致密，整个纺锤体完整性良好；而化合物ZB-1处理细胞后，能够诱导不规则的纺锤体形成，微管束明显减少，刚性程度减弱，对纺锤体的形成影响明显，纺锤体的缩小和错乱显著，排列不规则和混乱。以上现象表明化合物ZB-1能够抑制细胞微管蛋白活性，从而影响CFPAC-1细胞纺锤体的形成，使微管的组装受到限制，染色体不能正常分配到细胞两极，从而影响了肿瘤细胞的正常有丝分裂和增殖，达到抑制肿瘤细胞生长的效果。
综上所述，本发明通过CCK-8法、抑制CFPAC-1细胞迁移、诱导CFPAC-1细胞凋亡实验，表明本发明从花椒中分离的香柑内酯类化合物ZB-1具有很好的抗胰腺癌活性，可作为活性化合物，用于制备治疗胰腺癌的药物。
附图说明
图1为ZB-1抑制胰腺癌细胞CAPAN-2、CFPAC-1、PANC-1、SW1990的增殖。
图2为ZB-1抑制胰腺癌细胞CFPAC-1迁移（标尺：100 μm）。
图3为ZB-1诱导胰腺癌CFPAC-1细胞发生凋亡（标尺：50 μm）。
图4为ZB-1抑制胰腺癌CFPAC-1细胞微管蛋白活性（标尺：50 μm）。
具体实施方式
基于上述研究成果，以香柑内酯化合物ZB-1为活性物质，按药剂学可接受的辅料和规工艺制备成内服制剂，如胶囊剂、片剂、颗粒剂等；或注射剂。

Claims (3)

1.香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用，其特征在于：所述香柑内酯的结构式如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
。
2.如权利要求1所述香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用，其特征在于：以香柑内酯为活性组分，采用药学上可接受的辅料和工艺制备成内服制剂。
3.如权利要求1所述香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用，其特征在于：所述内服制剂为颗粒剂、胶囊剂、注射剂。
CN202111339552.1A 2021-11-12 2021-11-12 香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用 Pending CN113952332A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111339552.1A CN113952332A (zh) 2021-11-12 2021-11-12 香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111339552.1A CN113952332A (zh) 2021-11-12 2021-11-12 香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113952332A true CN113952332A (zh) 2022-01-21

Family

ID=79470492

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111339552.1A Pending CN113952332A (zh) 2021-11-12 2021-11-12 香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113952332A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060009506A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Odyssey Thera, Inc. Drugs for the treatment of neoplastic disorders

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060009506A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Odyssey Thera, Inc. Drugs for the treatment of neoplastic disorders

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FENG LI ET AL.: "Anti-Austerity Agents from Rhizoma et Radix Notopterygii (Qianghuo)", 《PLANTA MED》 *
杨秀伟等: "40种香豆素类化合物对人表皮癌细胞系A432细胞株和人乳腺癌细胞系BCAP细胞株增殖抑制活性的筛选", 《中国现代中药》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kuo et al. A tumor cell growth inhibitor from Polygonum hypoleucum Ohwi
CN112194572B (zh) 一种酚类化合物zkyy-037及其制备方法和应用
Kim et al. Caesalpinia sappan induces cell death by increasing the expression of p53 and p21WAF1/CIP1 in head and neck cancer cells
CN113952332A (zh) 香柑内酯作为活性成分在制备抗胰腺癌药物中的应用
CN111617165A (zh) 一种三叶青的粗提物在抑制胰腺癌方面的应用
CN112274541A (zh) 半枫荷或其提取物在制备抗肿瘤药物中的应用
CN111671780A (zh) 具有神经细胞保护活性的透骨草木脂素制备方法及其应用
CN111228246A (zh) 一种萜酚的应用和制备方法
CN103191143B (zh) 一种强心苷化合物的用途
CN110776409B (zh) 一种印度黄檀的提取方法及提取物在抗肿瘤药物中的应用
CN109970757B (zh) 一种新鱼藤酮型黄酮类化合物及其制备方法和用途
CN113082019A (zh) 一种愈创木烷型倍半萜类化合物在制备治疗胰腺癌药物中的应用
CN113797191B (zh) 一种化合物治疗血管增生相关疾病以及抗肿瘤的用途
CN111358804A (zh) Cynanoside H在制备防治乳腺癌的药物中的应用
CN110776542A (zh) 一种从金花茶提取的化合物及其制备抗肿瘤药物应用
CN113666897B (zh) 甘松萜类化合物及其分离和在制备抗胰腺癌药物中的应用
CN111494382A (zh) 氯化两面针碱的新应用
CN112516134B (zh) 一种含羟基的化合物在制备药物中的应用
CN108299292B (zh) 5,7-二溴-8-(甲氧甲氧基)-2-甲基喹啉或其药用盐在治疗乳腺癌中的应用
CN115518069B (zh) 六氢苯并菲啶类生物碱在保护多巴胺神经元中的应用
CN115703753B (zh) 一种苯并呋喃型衍生物及其制备方法和应用
CN109464438B (zh) 粗毛甘草素a在用于抗肿瘤药物中的用途
CN102850372A (zh) 一种蓍草倍半萜内酯化合物及其提取方法和应用
CN117186166B (zh) 芳香性甾体类化合物及其制备方法和应用
CN101875661A (zh) 从壁虎中提取的抗肿瘤化合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20220121