CN113952298B - 硫酸头孢喹肟纳米混悬液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种硫酸头孢喹肟纳米混悬液及其制备方法。本发明使用研钵研磨法制备纳米混悬液，具体步骤如下：精密称取稳定剂，加入到油相中，涡旋使混合均匀；精密称定原料药至研钵中，加入少量混合液研磨至药物分散均匀，将剩余混合液加入到研磨好的分散液研磨一定时间至分散均匀。含药处方如下：26.32％硫酸头孢喹肟、52.63％
Figure DDA0003399285250000011
5.26％单硬脂酸甘油酯、15.79％Labrafil M 1944
Figure DDA0003399285250000012
本发明显著提高了硫酸头孢喹肟的溶出速率，进而提高了硫酸头孢喹肟的生物利用度。

Description

硫酸头孢喹肟纳米混悬液及其制备方法
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种硫酸头孢喹肟纳米混悬液及其制备方法。
背景技术
头孢喹肟是第一个动物专用的第四代抗生素，具有很广泛的抗菌谱、很强的抗菌活性和较低的耐药性，相比于第三代抗生素，抗菌活性大大增强，而且几乎没有肾毒性，对其展开研究具有很大的临床意义。头孢喹肟微溶于水，难溶于乙腈，不溶于乙醇和氯仿，可以看出头孢喹肟低溶解性的特点会限制其在体内水性环境中的吸收，实际上难溶性药物的生物利用度常常难以达到疾病治疗要求，大大限制了它们在临床上的使用。
纳米混悬剂作为20世纪末发展起来的一种新型纳米递药系统，根据Noyes-Whitney和Ostwald-Freundlich方程可知，药物制成纳米混悬液可以减小药物粒径，增大药物的比表面积，使得难溶性药物溶解度大大增加，以提高药物的溶出度和生物利用度。此外该技术较其他增溶技术适用范围广，不仅适用于难溶于水而脂溶性强的药物，也适用于既难溶于水又难溶于油的药物。因此这种兼具通用性和有效性的技术能够有效的增溶难溶性药物，使更多的难溶性药物的大规模上市应用成为可能。
虽然纳米混悬液有诸多特点与优势，但目前纳米混悬液的物理稳定性是限制其进一步扩大市场应用的难题所在。纳米混悬液的物理稳定性问题主要包括纳米混悬液中粒子的沉降、粒子的聚集、粒子的生长、晶型的转变等，加入一定量合适的稳定剂，可以避免纳米混悬液不稳定现象的发生。
CN103301147A公开了一种复方头孢噻呋纳米混悬剂及其制备方法，CN107412170B公开了一种头孢洛宁纳米混悬剂冻干粉及其制备方法，CN103118670A公开了一种用于动物乳房内施用的含抗生素的纳米颗粒组合物。但现有技术报道的纳米混悬体系都不适用于硫酸头孢喹肟。
发明内容
本发明的目的是提供一种硫酸头孢喹肟纳米混悬液及其制备方法，将硫酸头孢喹肟制备成油性纳米混悬注射液，以提高硫酸头孢喹肟的溶出度及生物利用度，从而提高硫酸头孢喹肟的药效。
本发明采用如下技术方案来实现。
一种硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述混悬液包括硫酸头孢喹肟、油相和稳定剂。
进一步的，所述油相选自二辛酸癸酸丙二醇酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、丙二醇单辛酸酯、癸二酸二乙酯、异壬酸异壬酯、二甲基硅油、维生素E和角鲨烯中的一种或几种；优选二辛酸癸酸丙二醇酯LabrafacTM PG。
进一步的，所述稳定剂选自吐温、聚维酮、单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯、泊洛沙姆、TPGS、壳聚糖、聚乙烯醇、十二烷基硫酸钠、聚乙二醇PEG、羟丙基甲基纤维素、司盘中的一种或几种；优选为Tween60、Tween80、PVP K30、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯中的一种或几种；更优选为辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯Labrasol®、单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯Labrafil M 1944 CS®中的一种或两种或三种的混合。
进一步的，所述纳米混悬液作为药物制剂中间体的应用，其特征在于，所述药物制剂选自注射剂、片剂、颗粒剂或冻干粉针剂。
进一步的，所述硫酸头孢喹肟纳米混悬液中，所述硫酸头孢喹肟、油相和稳定剂质量比为15∶（30~70）∶（20~60）；优选15∶（40~60）∶（30~50）；更优选15∶50∶43。
进一步的，所述稳定剂为辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单硬脂酸甘油酯和油酸聚乙二醇甘油酯，所述硫酸头孢喹肟、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯的质量比为15∶（20~40）∶（1~5）∶（5~15），优选为15∶30∶3∶10。
进一步的，所述硫酸头孢喹肟纳米混悬液中硫酸头孢喹肟的浓度（10~50）mg/mL；优选为25 mg/mL。
本发明还提供一种硫酸头孢喹肟纳米混悬液的制备方法，包括如下步骤：
（1）称取处方量的稳定剂和油相，混匀；
（2）将硫酸头孢喹肟通过研钵研磨法均匀分散于（1）的混合液中，制得硫酸头孢喹肟纳米混悬液。
进一步的，所述制备方法包括如下步骤：
（1）称取处方量的稳定剂和油相，混匀；
（2）将硫酸头孢喹肟加入部分（1）的混合液中，研磨至分散均匀；
（3）将剩余（1）的混合液倒入（2）的分散体系中，继续研磨至均匀，制得硫酸头孢喹肟纳米混悬液。
进一步的，所述制备方法包括如下步骤：
（1）精密称取稳定剂Labrasol® 306.0 mg、单硬脂酸甘油酯30.6 mg及Labrafil M1944 CS® 102.0mg，加入到5 mL 二辛酸癸酸丙二醇酯LPG中，涡旋3 min使混合均匀；
（2）精密称定硫酸头孢喹肟原料药153 mg至研钵中，加入（1/4~1/3）量的（1）混合液研磨至药物分散均匀；
（3）将剩余（1）的混合液加入到研磨好的（2）的分散液研磨3 h至完全分散均匀，制得硫酸头孢喹肟纳米混悬液。
本发明具有以下有益效果：
本发明以市售制剂为对照，将硫酸头孢喹肟制备成油性纳米混悬注射液，以提高硫酸头孢喹肟的溶出度及生物利用度，从而提高硫酸头孢喹肟的药效。
本发明的创新点在于目前已上市或是正在研究的药物纳米混悬液大部分都是将药物分散在水相中形成水性分散液，而本发明是将药物分散在油相中制成纳米混悬液，意义在于：一方面头孢喹肟这种药物存在引湿性，将该药分散在油中能避免药物的吸湿降解变质，大大提升药物的稳定性，方便保存使用；另一方面，由于油相比水相粘度大得多，药物从油相中溶出并经跨膜吸收的时间延长，从而会相应延长药物的作用时间，提高生物利用度；其次在制备方法上，经筛选发现，介质研磨法和高压均质法均不用于硫酸头孢喹肟油性纳米混悬液的制备；在处方工艺因素筛选过程中，油相选择与市售硫酸头孢喹肟混悬剂普遍选择的大豆油、油酸乙酯等油相不同的是，选择了嘉法狮公司的LabrafacTM PG（LPG），经研究LPG较一般使用的油相在理化性质上有很多优势；稳定剂选择了不仅能够维持药物纳米混悬液稳定也能促进透膜吸收的表面活性剂Labrasol®以及同样具有增溶作用和稳定作用的助表面活性剂Labrafil M 1944 CS®。
附图说明
图1是硫酸头孢喹肟体外标准曲线。
图2是各种稳定剂制得的硫酸头孢喹肟纳米混悬液0 h、24 h及48 h内的粒径和PDI变化情况(mean±SD, n=3)。
图3是Labrasol®浓度对硫酸头孢喹肟纳米混悬液的粒径和PDI的影响（mean±SD,n=3）。
图4是单硬脂酸甘油酯浓度对硫酸头孢喹肟纳米混悬液的粒径和PDI的影响（mean±SD, n=3）。
图5是Labrafil M 1944 CS®浓度对硫酸头孢喹肟纳米混悬液的粒径和PDI的影响（mean±SD, n=3）。
图6是研磨时间对硫酸头孢喹肟纳米混悬液的粒径和PDI的影响（mean±SD, n=3）。
图7是硫酸头孢喹肟纳米混悬液外观形态，其中左：硫酸头孢喹肟纳米混悬液；右：为市售创导硫酸头孢喹肟油混悬液。
图8是硫酸头孢喹肟纳米混悬液的粒径及粒径分布。
图9是售制剂及本发明硫酸头孢喹肟纳米混悬液沉降率对比图。
图10是硫酸头孢喹肟纳米混悬液与市售注射剂体外溶出曲线图。
图11是市售与自制硫酸头孢喹肟制剂在大鼠体内的平均药时曲线图，*p <0.05CEF-NSP vs CEF-SP；**p <0.01 CEF-NSP vs CEF-SP。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1 硫酸头孢喹肟标准曲线的建立（高效液相HPLC法）
色谱柱：AgilentC18 (250 mm×4.6 mm, 5μm）
流动相：0.1%甲酸水溶液∶乙腈=90∶10 (v/v)
柱温：30℃
流速：1 mL/min
紫外检测波长：270 nm
进样量：20μL
线性结果如表1。以浓度C为横坐标，A（峰面积）为纵坐标，进行线性回归分析，得标准曲线如图1。由图1可知，硫酸头孢喹肟标准曲线回归方程为：A=45743C+6447.1（r2=0.9990），这表明硫酸头孢喹肟溶液在浓度2.5μg/mL-50μg/mL范围内线性关系良好。
表1 硫酸头孢喹肟标准曲线测定结果
Figure DEST_PATH_IMAGE001
实施例2 方法回收率试验和精密度试验
方法回收率：使用已知纯度原料药对照品或样品测定低、中、高三个浓度（n=3）共九个数据点来评价回收率的RSD，一般要求RSD<2%。结果如表2所示，该分析方法的平均方法回收率为101.44%，相对标准偏差RSD为1.46%<2%，符合HPLC对药物含量测定的要求，准确度良好。
表2 硫酸头孢喹肟方法回收率测定结果
Figure DEST_PATH_IMAGE002
精密度：指同一份样品，经多次测定后结果之间的相近程度，用多组结果计算得到的相对标准偏差RSD来衡量精密度的好坏。体外方法学验证考虑测定结果的可重复性，通过计算同一浓度3份样品的测定结果的RSD来考察精密度的优良。结果如表3所示，三次峰面积测定结果的相对标准偏差RSD为0.66%，符合HPLC对药物含量测定的要求，精密度良好。
表3 硫酸头孢喹肟精密度测定结果
Figure DEST_PATH_IMAGE003
实施例3 纳米混悬液的制备方法的选择
高压均质法不适用于硫酸头孢喹肟油性纳米混悬液的制备。本发明硫酸头孢喹肟纳米混悬液是油性纳米混悬液且药物浓度为25 mg/mL，浓度很大，因此粘度较大，使用高压均质法制备时，易堵塞均质阀，损坏机器；还有高压均质过程会消耗大量能量，可能会诱导粒子相互聚集，加速“Ostwald”熟化，影响纳米混悬液的稳定性。
（1）介质研磨法制备硫酸头孢喹肟纳米混悬液
精密称取稳定剂Labrasol® 306.0 mg、单硬脂酸甘油酯30.6mg及Labrafil M1944 CS® 102.0 mg加入到5 mL LPG中，涡旋3 min使混合均匀。精密称定硫酸头孢喹肟原料药153mg至试管中，超声至完全混合均匀，加入装有氧化锆研磨珠和磁力搅拌子的研磨瓶中，分散液与研磨珠体积比为3:2。置于磁力搅拌器上，以一定转速搅拌3 h后取即得制剂。用LPG稀释后测定制剂0 h的粒径和DPI。
（2）研钵研磨制备硫酸头孢喹肟纳米混悬液
精密称取稳定剂Labrasol® 306.0 mg、单硬脂酸甘油酯30.6 mg及Labrafil M1944 CS® 102.0mg，加入到5 mL LPG中，涡旋3 min使混合均匀。精密称定硫酸头孢喹肟原料药153 mg至研钵中，加入少量混合液研磨至药物分散均匀。将剩余混合液加入到研磨好的分散液研磨3 h至完全分散均匀，用LPG稀释后测定制剂0 h的粒径和DPI。
介质研磨法和经研钵研磨制备得到的硫酸头孢喹肟纳米混悬液的粒径和PDI结果如表4所示：采用介质研磨制得的纳米混悬液的粒径和PDI都显著大于研钵研磨得到的纳米混悬液；在室温下放置48 h后，研钵研磨得到的纳米混悬液粒径相对稳定，而介质研磨得到的纳米混悬液粒径明显增大，稳定性差。可知介质研磨也不适用于制备硫酸头孢喹肟纳米混悬液，不仅粒径大粒度分布宽，且药物损失大。分析原因可能是油性纳米混悬液较水性纳米混悬液粘度大，油相对研磨珠存在很大的吸附力，导致在一定转速下研磨珠难以被分散开，因此药物与研磨珠之间的碰撞摩擦不足能使药物粒子达到纳米级别，还会导致研磨的不均匀，粒度分布宽；除此之外，经观察，高粘度的含油的纳米混悬液还会与器壁发生粘连，这会导致一部分药物未得到充分研磨，这也是导致粒径分布极不均匀的重要原因。相反，采用研钵研磨虽耗费的时间很长，但操作简单成本低，药物损失小；经测定，制得的硫酸头孢喹肟纳米混悬液粒径小，粒度分布窄，是比较理想的纳米混悬液。
表4 不同制备方法对硫酸头孢喹肟纳米混悬液粒径和PDI的影响
Figure DEST_PATH_IMAGE004
实施例4 油相的选择
与市售硫酸头孢喹肟混悬剂普遍选择的大豆油、油酸乙酯等油相不同的是，本发明选择了嘉法狮公司的二辛酸癸酸丙二醇酯LabrafacTM PG（LPG）。经研究LPG较一般使用的油相在理化性质上有很多优势：黏度很低在9-12 mpa·s（20 ℃），有利于药物沉降之后的再分散，有利于推注减少注射疼痛感；并由沉降体积比结果可知，虽然其黏度低，但由LPG值得的硫酸头孢喹肟纳米混悬液混悬效果更佳，放置稳定性更好。
实施例5 处方因素的筛选
纳米混悬液是一个热力学不稳定体系，选择一定量合适的稳定剂是保证纳米混悬液稳定的前提。合适的稳定剂不仅可以减小粒子之间的引力，避免粒子之间的碰撞，增大分散介质黏度，减少粒子之间的聚集以及粒子的沉降，维持纳米混悬液的物理稳定；同时稳定剂可以吸附在药物微粒表面，缩小粒子与分散介质之间的界面张力，对于缩小粒径分布大有帮助，缩小粒径分布还进一步可以减小粒子之间的饱和溶解度之差，减小浓度梯度，抑制“Ostwald”熟化现象的发生。
纳米混悬液的物理稳定性问题是纳米混悬液研究中的一大难题，对其的研究是一个漫长而又复杂的过程，加入适合的稳定剂是提高纳米混悬液稳定性的常见方法。但目前对稳定剂分子内在相互作用机制理论研究并不完善；其次稳定剂的筛选是一个复杂的过程，出现无效筛选的几率很大。
目前稳定剂的是筛选一般是单独使用和联合使用两种，常用稳定剂包括离子型和非离子型表面活性剂，其中，离子型表面活性剂主要通过静电斥力维持纳米混悬液中药物粒子的稳定，而非离子型稳定剂主要通过空间位阻作用来阻止粒子间的聚集维持纳米混悬液的稳定。通常将这两种类型表面活性剂联合使用会使纳米混悬液具有更好的长期稳定性。但联合使用的稳定剂筛选过程复杂，难度很高。
1、稳定剂种类的筛选
本发明主要对PVPK30、Tween80、Tween60、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯Labrasol®、单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯Labrafil M 1944 CS®这六种稳定剂及其比例进行筛选。
选定药物/稳定剂的比例为2∶1、药物浓度为25 mg/mL，分别用Tween60、Tween80、PVPK30、Labrasol®、单硬脂酸甘油酯及Labrafil M 1944 CS®作为稳定剂用研钵研磨法制备处方量的硫酸头孢喹肟纳米混悬液。以0 h、24 h、48 h的粒径和PDI、还有静置沉淀量为评价指标评价稳定剂的稳定效果，六种稳定剂0 h、24 h、48 h的粒径和PDI结果如图2所示，72 h内静置沉淀变化如表5所示。
表5 各种稳定剂制备得到的硫酸头孢喹肟纳米混悬液在72h内的静置沉淀量情况
Figure DEST_PATH_IMAGE005
由图2可知，六种稳定剂中由单硬脂酸甘油酯、Labrafil M 1944 CS®以及Labrasol®制备得到的硫酸头孢喹肟纳米混悬液的粒径和PDI比较理想，其中Labrasol®的效果最为突出。但Labrasol®制得的硫酸头孢喹肟纳米混悬液在放置48-72 h后，粒径增大明显且沉降量较多，对纳米混悬液的稳定效果较其他两种单硬脂酸甘油酯及Labrafil M1944 CS®差，可能是单硬脂酸甘油酯和Labrafil M 1944 CS®相比于Labrasol®粘度较大，加入油相中可以增加体系粘度，增加体系的稳定性，而同时Labrasol®在促进吸收方面作用很好，综上考虑选用Labrasol®为主要稳定剂，辅助以单硬脂酸甘油酯和Labrafil M 1944CS®，筛选比例以制备粒径小、粒度窄且稳定的硫酸头孢喹肟纳米混悬液。
2、稳定剂比例的筛选
按药物与稳定剂的质量比精密量取处方量的稳定剂Labrasol®或单硬脂酸甘油酯或Labrafil M 1944 CS®，加入到LPG中，涡旋3min使混合均匀。精密称定处方量的硫酸头孢喹肟原料药至研钵中，加入少量混合液研磨至药物分散均匀。将剩余混合液加入到研磨好的分散液研磨3 h至完全分散均匀。
（1）药物与Labrasol®的质量比
选定药物与Labrasol®的质量比为2∶1、1∶1及1∶2这三个比例分别用研钵研磨制备处方量的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，评价Labrasol®浓度对药物粒径及PDI的影响。由图3可知，当药物与Labrasol®比例为2∶1时，药物的粒径和PDI最大，随着Labrasol®浓度的升高，药物与Labrasol®比例达到1∶2时，药物的粒径和PDI最小，考虑到Labrasol®是效果很好的吸收促进剂，但加入过多会引起溶血反应，因此选用药物与Labrasol®的比例为1∶2。
（2）药物与单硬脂酸甘油酯的质量比
选定药物与单硬脂酸甘油酯的质量比为2∶1、5∶1及7∶1这三个比例分别用研钵研磨法制备处方量的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，评价单硬脂酸甘油酯浓度对药物粒径及PDI的影响。单硬脂酸甘油酯是一种很好非离子型助表面活性剂，由图4可知，药物∶单硬脂酸甘油酯=7∶1时，药物的粒径和PDI最大，原因可能是单硬脂酸甘油酯无法提供足够的空间位阻，以维持体系的稳定；当药物∶单硬脂酸甘油酯增大到5∶1时，药物粒径较小，继续增大该辅料的用量，药物粒径和PDI也无明显变化，以减少辅料用量为原则，选择药物与单硬脂酸甘油酯的质量比为5∶1。
（3）药物与LABRAFIL 1944 CS的质量比
选定药物与Labrafil M 1944 CS®的质量比为2∶1、3∶2及1∶1这三个比例分别用研钵研磨法制备处方量的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，评价Labrafil M 1944 CS®浓度对药物粒径及PDI的影响。由图5可知，当药物∶Labrafil M 1944 CS®=2∶1时，其浓度较小难以明显增大体系黏度，从而稳定纳米混悬液体系；当其浓度进一步增加至质量比为3∶2时，药物的粒径和PDI最小，继续增加Labrafil M 1944 CS®的浓度，粒径变化不明显。因此选用药物与Labrafil M 1944 CS®的质量比为3∶2。
实施例6 研磨时间的筛选
精密称取稳定剂Labrasol® 306.0 mg、单硬脂酸甘油酯30.6 mg及Labrafil M1944 CS® 102.0 mg，加入到5 mL LPG中（药物∶Labrasol®∶单硬脂酸甘油酯∶Labrafil M1944 CS®=5∶10∶1∶3），涡旋3min使混合均匀。精密称定153 mg的硫酸头孢喹肟原料药至研钵中，加入少量混合液研磨至药物分散均匀。将剩余混合液加入到研磨好的分散液研磨一定时间至完全分散均匀。分别测定研磨0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h的制剂的粒径和DPI，筛选研磨时间。由图6可知，研磨时间对纳米混悬液的粒径和PDI影响很大，随着时间的延长，药物粒径和PDI均在减小，其中研磨时间对PDI的影响最为明显，研磨时间的增加，研磨会更加充分更加均匀，因此也会使纳米混悬液更加均匀，PDI下降也会明显。研磨达到3h时，药物粒径和PDI已经达到比较理想的状态。
实施例7
精密称取稳定剂Labrasol® 306.0 mg、单硬脂酸甘油酯30.6 mg及Labrafil M1944 CS® 102.0 mg，加入到5 mL LPG中，涡旋3 min使混合均匀。精密称定硫酸头孢喹肟原料药153 mg至研钵中，加入少量混合液研磨至药物分散均匀。将剩余混合液加入到研磨好的分散液研磨3 h至完全分散均匀，得硫酸头孢喹肟纳米混悬液。
经过本次处方工艺筛选，初步确定硫酸头孢喹肟纳米混悬液的处方组成：药物与各稳定剂的质量比（药物：Labrasol®：单硬脂酸甘油酯：Labrafil M 1944 CS®=5:10:1:3，其中药物与Labrasol®的质量比1:2；药物与单硬脂酸甘油酯的质量比5:1；药物与LabrafilM 1944 CS®质量比3:2），研磨时间确定为3 h,稀释倍数为20倍，按此处方制备得到的硫酸头孢喹肟纳米混悬液粒径较小，粒度分布较均匀，之后再对此纳米混悬液进行一系列理化性质评价。
以市售创导硫酸头孢喹肟注射液（10 mL：0.25 g，江西创导动物保健品有限公司）为对照，观察自制硫酸头孢喹肟纳米混悬液的外观形态。外观形态见图7，通过研钵研磨制得的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，外观为均匀乳黄色的混悬液，外观性状良好。
实施例8 粒径及粒径分布
按照实施例7制备出硫酸头孢喹肟纳米混悬液，取适量经LPG稀释20倍后用激光粒径仪测定纳米混悬液的粒径及粒径分布。由图8可知硫酸头孢喹肟纳米混悬液粒径范围在200-2000 nm左右，平均粒径为725.15±79.19 nm，多分散系数为0.782±0.42，粒径分布较为对称，分散均匀。
实施例9 粘度测定
取实施例7制得的摇匀后的硫酸头孢喹肟纳米混悬液10 mL，用粘度计测定粘度，与市售创导硫酸头孢喹肟注射液（10 mL：0.25 g，江西创导动物保健品有限公司）作对比。由表6可知，硫酸头孢喹肟纳米混悬液的粘度远低于市售的硫酸头孢喹肟油混悬液。对于注射剂来说，粘度低的优势在于：易于推注，避免注射时的疼痛感，家畜顺应性好；粘度低易于药物从体系中扩散出来，提高药物体内跨膜吸收程度，能提高药物生物利用度，提高药效。
表6 硫酸头孢喹喹肟纳米混悬液与市售同浓度硫酸头孢喹肟油混悬液粘度对比
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实施例10 沉降体积比
图9可知，将实施例7制备的5 mL硫酸头喹肟纳米混悬液及市售注射剂放置于常温下自然沉降一定时间后，观察纳米混悬液及市售注射液的沉降率发现，硫酸头孢喹肟纳米混悬液在静置12 h及24 h后沉降率为0.51，而市售注射剂沉降率为0.22，说明硫酸头孢喹肟纳米混悬剂较市售注射剂较为稳定，内部颗粒分散均匀，不易沉降。
实施例11 体外溶出实验
从图10看出，当选取三批制剂进行体外溶出实验，硫酸头孢喹肟纳米混悬液在含有0.05%吐温80的pH=7.4的磷酸盐缓冲液中溶出迅速，3 min便可溶出90%；而市售硫酸头孢喹肟注射剂溶出较为缓慢，时间达到45 min时才可溶出91%，即硫酸头孢喹肟纳米混悬液溶出速率远远大于市售硫酸头孢喹肟注射液。
实施例12 市售与自制硫酸头孢喹肟制剂在大鼠体内药动学的比较
对照品：硫酸头孢喹肟混悬注射液（江西创导动物保健品有限公司，25 mg/mL，平均粒径：1542 nm, PDI：0.981，批号：兽药字140172299）
自制品：按实施例7方法制备的硫酸头孢喹肟油性纳米混悬液。
1、动物分组和给药的剂量、途径
随机选取10只健康大鼠，平均分为两组，每组5只大鼠。一组用来注射市售硫酸头孢喹肟混悬注射液（Cefquinome suspension），为CEF-SP组；另一组用来注射自制的硫酸头孢喹肟油性纳米混悬液（Cefquinome oily nanosuspension），为CEF-NSP组。通过比较两组的药代动力学参数来评价自制硫酸头孢喹肟纳米混悬液在大鼠体内的吸收情况。市售制剂与自制制剂均按40mg/kg的剂量对大鼠进行给药，给药方式为对大鼠大腿的肌肉注射。
2、给药及血样的采集
大鼠给药前禁食12h，不限制饮水。给药前对大鼠进行称重，按40mg/kg肌注给药。给药后于10min、20min、30min、45min、1h、1.5h、2.5h、3.5h、4.5h、6h、8.5h通过大鼠眼眶取血操作方法采集血样。将已被1%肝素钠溶液浸润过的直径为0.5mm的毛细管，旋转刺入大鼠眼内眦部采血并离心，而后将离心后的上层血浆置于低温环境中保存，完成血样的采集工作。
3、血浆样品处理方法
首先，取给药后采集的不同硫酸头孢喹肟浓度的血浆样品100µL，加入等体积的100µL的乙腈后在旋涡混合器涡旋混合1min，将大鼠血浆中的蛋白质等大分子物质沉淀完全。然后在4℃下10000 r/min离心10min，取100µL上清液并加入100µL的UP水混匀，最后通过0.22µm有机系滤器过滤，置于液相小瓶内衬管中用于后续的高效液相色谱检测。
4、数据分析
将经高效液相色谱检测出的硫酸头孢喹肟血药浓度数据代入PK Solver软件中进行处理。计算药动学参数AUC、tmax、Cmax、t1/2等。并根据数据计算相对生物利用度Frel=AUCCEF-NSP* XCEF-SP/（AUCCEF-SP* XCEF-NSP）*100%。使用SPSS软件进行统计分析，将CEF-SP组与CEF-NSP组比较，若t检验P<0.05则有统计学意义。
5、给药后CEF-SP组与CEF-NSP组的药时曲线
为比较市售硫酸头孢喹肟注射液与自制的硫酸头孢喹肟油性纳米混悬液的大鼠体内药动学，设立了两个给药组。CEF-SP组肌肉注射市售硫酸头孢喹肟混悬注射液；CEF-NSP组肌肉注射自制的硫酸头孢喹肟油性纳米混悬液，给药后于10 min、20min、30min、45min、1h、1.5h、2.5h、3.5h、4.5h、6h、8.5h采血，血样经处理后用已建立的方法学进行检测，得到的各时间点的平均药时曲线如图11所示。CEF-SP组与CEF-NP组的CEF血药浓度在给药后约1小时迅速下降，8.5小时接近定量限。
6、药动学参数
经过非房室模型拟合后，市售硫酸头孢喹肟混悬液与自制硫酸头孢喹肟油性纳米混悬液肌肉注射后在大鼠体内的药动参数中，所有参数均反映了两种制剂在大鼠体内的吸收、分布和消除特性。硫酸头孢喹肟给药CEF-NSP组与CEF-SP组的CL/F、Cmax、AUC0-t和AUC0-∞均有显著性差异(p<0.05)。计算所得的CEF-SP组与CEF-NSP组的t1/2分别为1.42±0.36 h和1.86±0.97 h，Tmax分别为0.48±0.17h和0.65±0.22h，皆无显著性差异；Cmax分别为32.23±7.71μg/mL和62.88±12.54μg/mL；AUC0-∞分别为66.03±13.35μg/ml*h和118.69±21.73μg/ml*h，根据相对生物利用度的计算公式Frel= AUCCEF-NSP* XCEF-SP/（AUCCEF-SP* XCEF-NSP）*100%计算出CEF-NSP的Frel为158.18%，证明在注射相同剂量硫酸头孢喹肟时，CEF-NSP组吸收更快更好，生物利用度更高。CEF-SP组与CEF-NSP组的CL/F分别为0.17±0.03 L/h/kg和0.11±0.02 L/h/kg，表明自制的硫酸头孢喹肟纳米混悬液在大鼠体内的消除速度更慢，有更多的药物能在体内发挥作用。
最后说明的是，以上实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通计时人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者同等替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (11)

1.一种硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述混悬液包括硫酸头孢喹肟、油相和稳定剂；
所述油相为二辛酸癸酸丙二醇酯LabrafacTM PG；
所述稳定剂选自辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯Labrasol®、单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯Labrafil M 1944 CS®中的一种或两种或三种的混合；
所述硫酸头孢喹肟、油相和稳定剂质量比为15∶（30~70）∶（20~60）。
2.根据权利要求1所述的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述纳米混悬液作为药物制剂中间体的应用，所述药物制剂选自注射剂、片剂、颗粒剂或冻干粉针剂。
3.根据权利要求1所述的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述硫酸头孢喹肟、油相和稳定剂质量比为15∶（40~60）∶（30~50）。
4.根据权利要求3所述的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述硫酸头孢喹肟、油相和稳定剂质量比为15∶50∶43。
5.根据权利要求1所述的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述稳定剂为辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯Labrasol®、单硬脂酸甘油酯和油酸聚乙二醇甘油酯Labrafil M 1944CS®，所述硫酸头孢喹肟、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯Labrasol®、单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯Labrafil M 1944 CS®的质量比为15∶（20~40）∶（1~5）∶（5~15）。
6.根据权利要求5所述的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述硫酸头孢喹肟、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯Labrasol®、单硬脂酸甘油酯、油酸聚乙二醇甘油酯Labrafil M1944 CS®的质量比为15∶30∶3∶10。
7.根据权利要求1所述的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述硫酸头孢喹肟纳米混悬液中硫酸头孢喹肟的浓度10~50 mg/mL。
8.根据权利要求7所述的硫酸头孢喹肟纳米混悬液，其特征在于，所述硫酸头孢喹肟纳米混悬液中硫酸头孢喹肟的浓度为25 mg/mL。
9.根据权利要求1-8任一所述的硫酸头孢喹肟纳米混悬液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）称取处方量的稳定剂和油相，混匀；
（2）将硫酸头孢喹肟通过研钵研磨法均匀分散于（1）的混合液中，制得硫酸头孢喹肟纳米混悬液。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）称取处方量的稳定剂和油相，混匀；
（2）将硫酸头孢喹肟加入部分（1）的混合液中，研磨至分散均匀；
（3）将剩余（1）的混合液倒入（2）的分散体系中，继续研磨至均匀，制得硫酸头孢喹肟纳米混悬液。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）精密称取稳定剂Labrasol® 306.0 mg、单硬脂酸甘油酯30.6 mg及Labrafil M1944 CS® 102.0mg，加入到5 mL 二辛酸癸酸丙二醇酯LabrafacTM PG中，涡旋3 min使混合均匀；
（2）精密称定硫酸头孢喹肟原料药153 mg至研钵中，加入（1/4~1/3）量的（1）混合液研磨至药物分散均匀；
（3）将剩余（1）的混合液加入到研磨好的（2）的分散液研磨3 h至完全分散均匀，制得硫酸头孢喹肟纳米混悬液。
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