CN1139317C - 猪笼草工厂化快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及猪笼草工厂化大规模试管快繁方法，包括以猪笼草侧芽、顶芽及带潜伏芽的枝条为外植体，对其进行脱分化及再分化的诱导。对于组培继代得到的试管成苗，在100%草炭中无菌过渡2-3周，pH值约5.4-5.8，再经过三至四个月的培养，就可得到5-6片叶，株高10-13厘米，可达销售水平的商品苗。本方法设备简单、成本低、节省土地、繁殖快、不受野生食虫植物资源日益减少的约束、不受季节和地域限制，是一种便于工厂化生产的有效方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种适于进行猪笼草工厂化快繁的方法。
背景技术
近年来，利用组培技术繁殖珍稀植物以解决资源短缺问题越来越受到重视，成功的例子不胜枚举。但关于食虫植物组培快繁工作在国内有关的专利还未见。猪笼草是一种非常有趣的亚热带食虫植物，传统的繁殖方式可用种子进行繁殖，也可用分株、扦插等方法繁殖，但繁殖率底，加之当前环境资源的破坏，猪笼草的野生资源在日益减少。采用组培的方法进行猪笼草的快繁，既可打破地域界限，又不受资源限制，可以大规模的生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种方法，能大规模进行猪笼草组培快繁生产。
本发明的目的是这样实现的：它包括组培快繁过程和无土栽培过程，
一、所述试管苗组培快繁过程包括：
1.猪笼草外植体的采集准备：选择生长健壮且无病虫害的盆栽猪笼草为母株，在其叶腋处，施用25-50ppm的BA，每隔3-7天施用一次，大约经过30-40天后，母株每节腋芽陆续生出并长大，可供随时采集；
2.猪笼草外植体的采集：选择芽长约0.5-1.5厘米、生长健壮且无病虫害的侧芽为外植体，流水冲洗；
3.外植体的消毒、接种：采用常规消毒、清洗方法，即用75％的酒精浸泡30-50秒，然后用0.1％的新洁尔灭消毒8-10分钟，再用0.1％的升汞消毒5-15分钟，用无菌水冲洗3-4遍后接种在1/3MS+BA 0.1-6ppm+NAA 0.1-5ppm或1/2LS+BA 0.1-6ppm+IBA 0.1-2ppm的培养基上；
4.外植体的脱分化诱导：外植体的脱分化诱导过程：接种在1/2LS+BA 0.1-6ppm+IBA 0.1-2ppm的培养基上，黑暗预处理6周；然后转移至1/2LS+BA 0.1-6ppm+NAA0.1-5ppm培养基上，置于光下培养；再经三个月的培养，可产生丛生芽，将丛生芽切割培养，芽丛每三至四个月继代一次，增殖率为5-10；
5.外植体再分化及试管苗的继代：侧芽的再分化及试管苗继代：接种在1/3MS+BA 0.1-6ppm+NAA 0.1-5ppm培养基上的外植体经过4-5个月的培养，株高可达4-5厘米，生3-4侧芽；将新生侧芽切割、转接，每隔三至四个月继代一次，增殖率为3；
6.试管苗的生根：将株高2-3厘米、具有3-4片叶的健壮试管苗从分化培养基移至1/3MS+NAA 0.1-2ppm培养基中进行生根，加少量活性炭(每升培养基中加0.5-1.5克)可提高生根效率；大约6周后基部即可生出3-5条根；
二、所述无土栽培过程包括：
1.草炭基质消毒：将100％草炭置于培养瓶中，1.1千克每平方厘米高压灭菌20分钟；
2.无菌苗过渡：选择已生根的无菌苗，转移至上述草炭基质中继续无菌培养2-3周，光照保持在5000LUX；
3.经上述过渡的试管苗暴露到外界环境中，湿度保持在60％--80％，温度控制在15-28℃；
4.经过3-4个月的培养，可长成具有5-6片叶，株高10-13厘米，带有两个小笼子的可销售的商品苗；在此期间，保持培养基质湿润，可少量施肥。
上述的无土栽培过程中采用100％的草炭作为基质，PH值在5.4-5.8，无菌过渡的两到三周内，湿度缓慢降低；在以后的培养中，湿度保持在60％--80％。
在上述试管苗快繁过程中，外植体采集的最佳时期为春秋两季，侧芽一般为0.1％新洁尔灭10分钟，升汞处理15分钟。
在上述试管苗快繁过程中，外植体的采集准备过程中，施用BA的最佳浓度为25ppm，喷前用盐酸BA溶液的PH调至5.4-5.8。
在上述试管苗快繁过程中，侧芽脱分化的最佳培养基为1/2LS+BA1ppm+IBA 0.1ppm，所需的环境因子为黑暗处理，温度21-28℃。丛生芽继代的最佳培养基为1/2LS+BA 0.1ppm+NAA 0.1ppm，光照为2000-3000LUX，温度为21-28℃。
在上述试管苗快繁过程中，侧芽再分化的最佳培养基为1/3MS+BA2ppm+NAA 0.1ppm和1/3MS+BA 0.1ppm+NAA 0.1ppm，所需的环境因子为：温度25℃±2℃，每天光照10-12个小时，光强为5000LUX。
本发明的优点和效果：
1.本发明在外植体的准备和采集过程中，其采集方式，在不伤及顶芽的情况下，能够使母株正常生长，即便是野外采集外植体，也能够保证母株的正常存活，这样很好地解决了野生资源日益减少的问题。
2.本发明采用组培快繁技术和无土栽培技术相结合，设备简单，用工少，省水肥，成本低，尤其是对于猪笼草这种亚热食虫植物，面临野生资源短缺的问题，可不受季节、地理环境的限制，从而在许多地区进行推广。
3.本发明繁殖速度快效率高。如果按侧芽培养方法推算，周期为4-5个月，繁殖系数为3。每个侧芽一年可继代三次，可生产出9株商品苗，如果按侧芽生成丛生芽推算，从接种到丛生芽出现，周期为4-5个月，繁殖系数为5-10，每个芽一年可继代三次，一年可生产出15-30株商品苗。与猪笼草传统繁殖方式相比，大大提高了繁殖速度。
具体实施方式
下面叙述本发明的实施例：
第一步：猪笼草试管苗快繁体系的建立：
第一条途径：选择生长健壮且无病虫害的侧芽、顶芽或潜伏芽的枝条切取后流水冲洗，然后用75％的酒精处理30秒，0.1％的新洁尔灭处理10分钟，0.1％的升汞处理15分钟，最后用无菌水冲洗3-4遍，将消毒后的外植体接种在以下培养基中：
1)1/3MS+BA 0.1ppm+NAA 0.1ppm
2)1/3MS+BA 2.0ppm+NAA 0.1ppm
3)1/3MS+BA 6.0ppm+NAA 0.1ppm这三种培养基中含琼脂7.0g/l，蔗糖20g/l，PH＝5.8，每100毫升三角瓶装40毫升培养基，每瓶接种2-3个外植体，外界因子为温度25±2℃，每天光照10-12个小时，光强5000LUX，经过4-5个月培养，在2)号培养基上外植体株高可达4-5厘米，并生有3-4个侧芽，而在1)号培养基上则表现只长高而无侧芽萌发，在3)号培养基上则表现生长缓慢。将新生侧芽切割继代，每隔3-4个月可继代一次，增殖率为3。
第二条途径：将第一条途径中消毒后的侧芽接种在1/2LS+BA1.0ppm+IBA 0.1ppm(含琼脂7.0g/l，蔗糖30g/l，PH＝5.8，以下同)。每瓶接种2-3个外植体，首先做黑暗预处理6周，温度为21-28℃，然后转移至1/2LS+BA 0.1ppm+NAA 0.1ppm的培养基上，置于2000-3000LUX光照条件下培养，经过三个月培养就可发丛生芽，叶片平均长0.5厘米，芽丛每3-4个月可继代一次，增殖率为5-10。
生根培养：将株高2-3厘米的健壮试管苗，从分化培养基移至生根培养基上(1/3MS+NAA 0.1ppm或1/3MS+NAA 0.1ppm+活性炭0.5g/l)，经过6-7周培养，可发现从苗基生出平均1厘米长的3-5条小根。少量活性炭可提高生根率。
第二步：无土栽培：
选用100％草炭的培养基质，经常规消毒灭菌后装于花盆中，选择生根的壮苗，经练苗过渡2-3周后，移栽至花盆中，温度要控制在15-28℃，湿度保持在60-80％，经过3-4个月的培养，可长成具有5-6片叶、侏高10-13厘米，带有2-3个小笼子的可销售的商品苗；在此期间，保持培养基质湿润，也可少量施肥。
Claims (5)
1.一种猪笼草工厂化快繁方法，其特征在于包括组培试管苗的快繁过程和无土栽培过程，所述组培试管苗的快繁过程包括：1)猪笼草外植体的采集准备为：选择生长健壮且无病虫害的盆栽猪笼草为母株，在其叶腋处，施用25-50ppm的BA，每隔3-7天施用一次，大约经过30-40天后，母株每节腋芽陆续生出并长大，可供随时采集；2)猪笼草外植体的采集为选择芽长约0.5-1.5厘米、生长健壮且无病虫害的顶芽、侧芽或带潜伏芽的枝条为外植体，流水冲洗；3)外植体的消毒、接种，即将选定的外植体进行浸泡、消毒和冲洗后，接种在1/3MS+BA 0.1-6ppm+NAA 0.1-5ppm或1/2LS+BA 0.1-6ppm+IBA 0.1-2ppm的培养基上；4)外植体的脱分化诱导，即接种在1/2LS+BA 0.1-6ppm+IBA 0.1-2ppm的培养基上，黑暗预处理6周，温度21-28℃；然后转移至1/2LS+BA 0.1-6ppm+NAA 0.1-2ppm培养基上，置于光下培养，光照为2000-3000LUX，温度为21-28℃，再经三个月的培养，可产生丛生芽；将丛生芽切割培养，芽丛每三至四个月继代一次，增殖率为5-10；5)外植体的再分化及试管苗的继代，即接种在1/3MS+BA 0.1-6ppm+NAA 0.1-5ppm培养基上的外植体经过4-5个月的培养，株高可达4-5厘米，生3-4个侧芽；将新生侧芽切割、转接，每隔三至四个月继代一次，增殖率为3；6)试管苗的生根，即将株高2-3厘米、具有3-4片叶的健壮试管苗从分化培养基移至1/3MS+NAA 0.1-2ppm培养基中进行生根，加少量活性炭；大约6周后基部即可生出3-5条根；
所述无土栽培过程包括：(1)草炭基质消毒：采用100％的草炭作为基质，PH值在5.4-5.8，将100％草炭置于培养瓶中，1.1千克每平方厘米高压灭菌20分钟；(2)无菌苗过渡，即选择已生根的无菌苗，转移至上述草炭基质中进入继续无菌培养期：2-3周，湿度缓慢降低；在以后的培养中，湿度保持在60％--80％光照保持在5000LUX；(3)经上述过渡的试管苗暴露到外界环境中，并控制湿度和温度：湿度保持在60％--80％，温度控制在15-28℃；(4)经过3-4个月的培养，可长成具有5-6片叶，株高10-13厘米，带有两个小笼子的可销售的商品苗；在此期间，保持培养基质湿润，可少量施肥。
2.根据权利要求1所述的一种猪笼草工厂化快繁方法，其特征在于所述的组培试管苗的快繁过程中，外植体采集的最佳时期为春秋两季，侧芽一般为0.1％新洁尔灭处理10分钟，升汞处理15分钟。
3.根据权利要求2所述的一种猪笼草工厂化快繁方法，其特征在于所述的组培试管苗的快繁过程中，外植体的采集、准备过程中，施用BA的最佳浓度为25ppm，喷施前用盐酸将BA溶液的PH调至5.4-5.8。
4.根据权利要求3所述的一种猪笼草工厂化快繁方法，其特征在于所述的组培试管苗的快繁过程中所涉及的外植体脱分化的最佳培养基为1/2LS+BA1ppm+IBA 0.1ppm，所需的环境因子为黑暗处理，温度21-28℃；丛生芽继代的最佳培养基为1/2LS+BA 0.1ppm+NAA 0.1ppm，光照为2000-3000LUX，温度为21-28℃。
5.根据权利要求4所述的一种猪笼草工厂化快繁方法，其特征在于所述的组培试管苗的快繁过程中所涉及的侧芽再分化的最佳培养基为1/3MS+BA2ppm+NAA 0.1ppm和1/3MS+BA 0.1ppm+NAA 0.1ppm，所需的环境因子为：温度25±2℃，每天光照10-12个小时，光强为5000LUX。
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