CN113874373A - 用于治疗乙型肝炎的治疗方法 - Google Patents

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纳格拉杰·玛尼
科内利斯·A·赖恩布兰德
迈克尔·J·索菲娅
埃米莉·P·悌
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Abstract

本发明提供可用于治疗乙型肝炎和丁型肝炎的治疗组合和治疗方法。

Description

用于治疗乙型肝炎的治疗方法
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2019年3月20日提交的美国申请序列号62/821,099、2019年3月28日提交的美国申请序列号62/825,517和2019年9月13日提交的美国申请序列号62/900,185的优先权权益，所述申请以引用的方式并入本文。
背景技术
乙型肝炎病毒(缩写为“HBV”)是嗜肝DNA病毒家族的成员。病毒颗粒(有时称为病毒粒子)包括外部脂质包膜和由蛋白质构成的二十面体核蛋白壳核心。核蛋白壳包裹病毒DNA和具有逆转录酶活性的DNA聚合酶。外部包膜含有嵌入的蛋白质，所述蛋白质参与易感细胞(通常是肝脏肝细胞)的病毒结合和进入所述细胞中。除感染性病毒颗粒之外，缺乏核心的丝状和球状体还可见于受感染个体的血清中。这些颗粒没有感染性并且由脂质和形成病毒粒子的表面的一部分的蛋白质构成，所述蛋白质称作表面抗原(HBsAg)，并且在病毒生命周期中过量产生。
HBV基因组由环状DNA构成，但这是不寻常的，因为DNA并非完全双链的。全长链的一端连结至病毒DNA聚合酶。基因组的长度为3020-3320个核苷酸(对于全长链)和1700-2800个核苷酸(对于较短链)。负有义链(非编码)与病毒mRNA互补。病毒DNA见于细胞感染之后不久的核中。存在四个已知由基因组编码的基因，称作C、X、P和S。核心蛋白由基因C编码(HBcAg)，并且其起始密码子在上游框内AUG起始密码子之前，核前蛋白由所述上游框内AUG起始密码子产生。通过核前蛋白的蛋白水解加工产生HBeAg。DNA聚合酶由基因P编码。基因S是编码表面抗原(HBsAg)的基因。HBsAg基因是一个长开放阅读框，但含有三个框内“起始”(ATG)密码子，其将基因分成三个部分：前S1、前S2和S。因为有多个起始密码子，产生称作大、中和小的三种不同尺寸的多肽。由基因X编码的蛋白质的功能尚未完全清楚，但它与肝癌的发展相关。HBV复制是一个复杂过程。虽然复制发生在肝脏中，但病毒会扩散至血液中，其中病毒蛋白和针对其的抗体见于受感染的人体中。HBV的结构、复制和生物学在D.Glebe和C.M.Bremer,Seminars in Liver Disease,第33卷,第2期,第103-112页(2013)中进行综述。
人类感染HBV可引起肝脏的感染性炎性疾病。受感染的受试者可能多年不会出现症状。据估计，约有三分之一的世界人口在其生命中的某个时刻受到感染，其中包括3.5亿慢性携带者。
病毒通过暴露于感染性血液或体液进行传播。围产期感染也可以是主要感染途径。急性疾病造成肝脏炎症、呕吐、黄疸和可能死亡。慢性乙型肝炎最终可导致肝硬化和肝癌。
虽然大多数感染HBV的人通过免疫系统的作用清除了感染，但一些受感染的人经历侵袭性感染过程(暴发性肝炎)；而另一些人则长期感染，从而增加他们患肝病的机会。目前有几种药物经批准用于治疗HBV感染，但受感染的个体对这些药物的反应取得不同程度的成功，并且这些药物中没有一种能清除受感染者体内的病毒。
丁型肝炎病毒(HDV)是一种小的环状包膜RNA病毒，其仅可在乙型肝炎病毒(HBV)存在下繁殖。具体而言，HDV需要HBV表面抗原蛋白来繁殖自身。与HBV单独感染相比，HBV与HDV同时感染会导致更严重的并发症。这些并发症包括在急性感染中发生肝功能衰竭的可能性更大，并迅速进展为肝硬化，而在慢性感染中发展出肝癌的几率增加。与乙型肝炎病毒组合，丁型肝炎在所有肝炎感染中死亡率最高。HDV的传播途径类似于HBV。感染主要局限于HBV感染高危人群，特别是注射吸毒者和接受凝血因子浓缩物的人群。
因此，对于用于治疗动物(例如人类)的HBV感染以及用于治疗动物(例如人类)的HBV/HDV感染的组合物和方法存在持续需要。
发明内容
本发明提供可用于治疗诸如HBV和HDV的病毒感染的治疗组合和治疗方法。本文提供的实施例公开使用具有不同抗HBV作用机制的剂进行组合研究的结果。因此，本发明的某些实施例提供本文所述的组合。
具体实施方式
本文描述可用于治疗诸如HBV和HDV的病毒感染的治疗组合和治疗方法。一个实施方案提供改善感染了HBV的人受试者的HBV感染的至少一种症状的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)向所述人受试者施用GalNAc-siRNA缀合物，其中所述缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分；以及
(b)向所述受试者施用至少一种选自由以下组成的组的抗HBV剂：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在某些实施方案中，所述方法包括向受试者施用RNA去稳定剂。
在某些实施方案中，所述方法包括向受试者施用衣壳抑制剂。
在某些实施方案中，所述方法包括向受试者施用逆转录酶抑制剂。
在某些实施方案中，所述方法包括向受试者施用免疫刺激剂。
在某些实施方案中，所述方法包括向受试者施用cccDNA形成抑制剂。
在某些实施方案中，所述方法包括向受试者施用靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在某些实施方案中，皮下施用GalNAc-siRNA缀合物。
在某些实施方案中，经口施用步骤(b)的抗HBV剂。
在某些实施方案中，以丸剂形式经口施用步骤(b)的抗HBV剂。
在某些实施方案中，逆转录酶抑制剂是核苷类似物HBV逆转录酶抑制剂。
在某些实施方案中，GalNAc-siRNA缀合物是如实施方案1-4中所述的式(V)的化合物或其盐。
在某些实施方案中，RNA去稳定剂是如实施方案1-4中所述的式(VI)的化合物或其盐。
在某些实施方案中，衣壳抑制剂是如实施方案1-4中所述的式(VII)的化合物或其盐。
在某些实施方案中，免疫刺激剂是聚乙二醇化干扰素(PEG-IFN)。
在某些实施方案中，免疫刺激剂是聚乙二醇化干扰素α2a(PEG-IFNα2a)。
在某些实施方案中，逆转录酶抑制剂是富马酸替诺福韦艾拉酚胺(tenofoviralafenamide fumarate)(TAF)。
在某些实施方案中，GalNAc-siRNA缀合物系步骤(b)的抗HBV剂同时施用。
在某些实施方案中，GalNAc-siRNA缀合物与步骤(b)的抗HBV剂依序施用。
在某些实施方案中，GalNAc-siRNA缀合物在施用步骤(b)的抗HBV剂之前施用。
在某些实施方案中，GalNAc-siRNA缀合物在施用步骤(b)的抗HBV剂之后施用。
在某些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用至少一种另外的治疗剂。
一个实施方案提供改善感染了HDV的人受试者的HDV感染的至少一种症状的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)向人受试者施用GalNAc-siRNA缀合物，其中缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分；和
(b)向受试者施用至少一种选自由以下组成的组的抗HBV剂：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
还提供GalNAc-siRNA缀合物与至少一种抗HBV剂的组合改善人受试者的HBV感染的至少一种症状的用途，其中缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分，并且至少一种抗HBV剂选自由以下组成的组：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
还提供GalNAc-siRNA缀合物与至少一种抗HBV剂的组合治疗人受试者的HBV感染的用途，其中缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分，并且至少一种抗HBV剂选自由以下组成的组：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
还提供GalNAc-siRNA缀合物与至少一种抗HBV剂的组合治疗人受试者的HDV感染的用途，其中所述缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分，并且至少一种抗HBV剂选自由以下组成的组：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000061
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000062
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯(tenofovirdisoproxil fumarate)、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦(entecavir)；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和至少三种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000071
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000072
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在另一个实施方案中，本发明提供一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000073
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000074
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
所述药盒以组合形式治疗或预防病毒感染，诸如乙型肝炎。
在另一个实施方案中，本发明提供一种药盒，其包含至少三种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000081
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000082
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
所述药盒以组合形式治疗或预防病毒感染，诸如乙型肝炎。
在另一个实施方案中，本发明提供一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000083
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000091
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
所述药盒以组合形式治疗或预防病毒感染，诸如丁型肝炎。
在另一个实施方案中，本发明提供一种药盒，其包含至少三种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000092
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000093
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
所述药盒以组合形式治疗或预防病毒感染，诸如丁型肝炎。
在另一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000101
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000102
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在另一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗动物的乙型肝炎的方法，其包括向所述动物施用至少三种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000103
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000111
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在另一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗动物的丁型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000112
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000113
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在另一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗动物的丁型肝炎的方法，其包括向所述动物施用至少三种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000121
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000122
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
某些实施方案还提供至少两种选自由以下组成的组的剂的组合：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000123
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000124
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸，
所述组合用于治疗动物的乙型肝炎或丁型肝炎。
某些实施方案还提供一种组合在制造用于治疗动物的乙型肝炎或丁型肝炎的药剂中的用途，所述组合由至少两种选自由以下组成的组的剂组成：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240000131
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240000132
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
施用呈药学上可接受的酸或碱盐形式的化合物可以是适当的。药学上可接受的盐的实例是与形成生理学上可接受的阴离子的酸形成的有机酸加成盐，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。还可形成合适的无机盐，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。
可使用本领域众所周知的标准程序，例如通过将充分碱性的化合物诸如胺与提供生理学上可接受的阴离子的合适酸进行反应来获得药学上可接受的盐。还可制备羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)或碱土金属(例如钙)盐。
逆转录酶抑制剂
在某些实施方案中，逆转录酶抑制剂是核苷类似物。
在某些实施方案中，逆转录酶抑制剂是核苷类似物逆转录酶抑制剂(NARTI或NRTI)。
在某些实施方案中，逆转录酶抑制剂是HBV聚合酶的核苷类似物抑制剂。
在某些实施方案中，逆转录酶抑制剂是核苷酸类似物逆转录酶抑制剂(NtARTI或NtRTI)。
在某些实施方案中，逆转录酶抑制剂是HBV聚合酶的核苷酸类似物抑制剂。
术语逆转录酶抑制剂包括但不限于：恩替卡韦(ETV)、克拉夫定、替比夫定、拉米夫定、阿德福韦、替诺福韦、替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺(TAF)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)、阿德福韦酯(adefovir dipovoxil)、(1R,2R,3R,5R)-3-(6-氨基-9H-9-嘌呤基)-2-氟-5-(羟基甲基)-4-亚甲基环戊烷-1-醇(描述于美国专利第8,816,074号中)、恩曲他滨、阿巴卡韦、艾夫他滨(elvucitabine)、更昔洛韦、洛布卡韦、泛昔洛韦、喷昔洛韦和氨多索韦(amdoxovir)。
术语逆转录酶抑制剂包括但不限于：逆转录酶抑制剂是恩替卡韦(ETV)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)或替诺福韦艾拉酚胺(TAF)。
术语逆转录酶抑制剂包括但不限于恩替卡韦、拉米夫定和(1R,2R,3R,5R)-3-(6-氨基-9H-9-嘌呤基)-2-氟-5-(羟基甲基)-4-亚甲基环戊烷-1-醇。
术语逆转录酶抑制剂包括但不限于上述逆转录酶抑制剂的共价结合的氨基磷酸酯或磷酰胺酯部分或如例如美国专利号8,816,074、US 2011/0245484A1和US 2008/0286230A1中所述。
术语逆转录酶抑制剂包括但不限于包含氨基磷酸酯部分的核苷酸类似物，诸如((((1R,3R,4R,5R)-3-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-5-羟基-2-亚甲基环戊基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-(D或L)-丙氨酸甲酯和((((1R,2R,3R,4R)-3-氟-2-羟基-5-亚甲基-4-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)环戊基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-(D或L)-丙氨酸甲酯。还包括其单独的非对应体，包括例如((R)-(((1R,3R,4R,5R)-3-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-5-羟基-2-亚甲基环戊基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-(D或L)-丙氨酸甲酯和((S)-(((1R,3R,4R,5R)-3-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-4-氟-5-羟基-2-亚甲基环戊基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-(D或L)-丙氨酸甲酯。
术语逆转录酶抑制剂包括但不限于磷酰胺酯部分，诸如替诺福韦艾拉酚胺，以及描述于US 2008/0286230 A1中的那些。用于制备含有活性物质的立体选择性氨基磷酸酯或磷酰胺酯的方法描述于例如美国专利号8,816,074以及US 2011/0245484 A1和US 2008/0286230A1中。
衣壳抑制剂
如本文所述，术语“衣壳抑制剂”包括能够直接或间接地抑制衣壳蛋白的表现和/或功能的化合物。例如，衣壳抑制剂可包括但不限于抑制衣壳装配、诱导非衣壳聚合物形成、促进过度衣壳装配或误导衣壳装配、影响衣壳稳定化和/或抑制RNA的衣壳化的任何化合物。衣壳抑制剂还包括抑制复制过程期间一个或多个下游事件(例如，病毒DNA合成、松弛环状DNA(rcDNA)向核中的转运、共价闭合环状DNA(cccDNA)形成、病毒成熟、出芽和/或释放等)中的衣壳功能的任何化合物。例如，在某些实施方案中，抑制剂可检测地抑制衣壳蛋白的表达水平或生物活性，如例如使用本文所述的测定所测量。在某些实施方案中，抑制剂将rcDNA和病毒生命周期的下游产物的水平抑制了至少5％、至少10％、至少20％、至少50％、至少75％或至少90％。
术语衣壳抑制剂包括WO 2018/172852中所述的化合物，所述专利文件特别地以引用的方式整体并入。
术语衣壳抑制剂还包括国际专利申请公布号WO2013006394、WO2014106019和WO2014089296中所描述的化合物，包括以下化合物：
Figure BDA0003364356240000161
术语衣壳抑制剂还包括化合物Bay-41-4109(参见国际专利申请公布号WO/2013/144129)、AT-61(参见国际专利申请公布号WO/1998/33501；和King,RW等人,AntimicrobAgents Chemother.,1998,42,12,3179–3186)、DVR-01和DVR-23(参见国际专利申请公布号WO 2013/006394；和Campagna,MR等人,J.of Virology,2013,87,12,6931)及其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003364356240000171
术语衣壳抑制剂还包括化合物：
Figure BDA0003364356240000172
及其药学上可接受的盐(参见WO 2018/172852)。
在某些实施方案中，衣壳抑制剂是下式的化合物或其盐：
Figure BDA0003364356240000173
其中以下定义适用：
R1选自由下列各基组成的组：任选地取代的苯基、任选地取代的苄基、任选地取代的杂芳基和-(CH2)(任选地取代的杂芳基)；
R2在每次出现时独立地选自由H和C1-C6烷基组成的组；
R3选自由下列各基组成的组：-N(R2)C(＝O)OR6、H、-OH、-OR6、-NH2、-NHR6、-NR6R6、-OC(＝O)OR6、-OC(＝O)N(R2)R6、-NR7C(＝O)N(R6)(R7)、-N(R2)C(＝O)R6、-NR2S(＝O)1-2R6、任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、-CH2C(＝O)OH、-CH2C(＝O)NR6R6、-N(R2)C(＝O)(CH2)1-2R6、NR2S(＝O)2N(R6)(R7)和-NR2C(＝O)C(＝O)N(R6)(R7)；
R4是H或C1-C6烷基，或
R3和R4组合以形成＝O或-C(＝O)NR6a-C(＝O)-NR6a-；
R5a选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R5b选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R5c独立地选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R6在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的苯基和任选地取代的杂芳基；
R6a在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的苯基和任选地取代的杂芳基；
R7在每次出现时独立地选自由H和任选地取代的C1-C6烷基组成的组；
或者，若R6和R7结合至同一N原子，则R6和R7任选地与它们所结合至的N原子组合以形成任选地取代的3-7元杂环基；并且
R8选自由H和C1-C6烷基组成的组。
在某些实施方案中，R6或R6a在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：-(CH2)1-3-(任选地取代的杂芳基)、-(CH2)1-3-(任选地取代的杂环基)和-(CH2)1-3-(任选地取代的芳基)。
在某些实施方案中，任选地取代的烷基、任选地取代的杂环基或任选地取代的环烷基在每次出现时独立地任选地被至少一个选自由下列各基组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、卤基、-ORa、任选地取代的苯基、任选地取代的杂芳基、任选地取代的杂环基、-N(Ra)C(＝O)Ra、-C(＝O)NRaRa和-N(Ra)(Ra)，其中Ra在每次出现时独立地是H、任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的芳基或任选地取代的杂芳基，或者两个Ra基团与它们所结合至的N组合以形成杂环。
在某些实施方案中，任选地取代的芳基或任选地取代的杂芳基在每次出现时独立地任选地被至少一个选自由下列各基组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、C1-C6卤烷基、C1-C6卤烷氧基、卤基、-CN、-ORb、-N(Rb)(Rb)、-NO2、-S(＝O)2N(Rb)(Rb)、酰基和C1-C6烷氧羰基，其中Rb在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在某些实施方案中，任选地取代的芳基或任选地取代的杂芳基在每次出现时独立地任选地被至少一个选自由下列各基组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、C1-C6卤烷基、C1-C6卤烷氧基、卤基、-CN、-ORc、-N(Rc)(Rc)和C1-C6烷氧羰基，其中Rc在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在某些实施方案中，R1选自由下列各基组成的组：任选地取代的苯基、任选地取代的苄基和-(CH2)(任选地取代的杂芳基)，其中所述苯基、苄基或杂芳基任选地被至少一个选自由下列各基组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、卤基、C1-C3卤烷基和-CN。
在某些实施方案中，R1选自由下列各基组成的组：3,4-二氟苯基、3,5-二氟苯基、2,4,5-三氟苯基、3,4,5-三氟苯基、3,4-二氯苯基、3-氯-4-氟苯基、4-氯-3-氟苯基、4-氯-3-甲基苯基、3-氯-4-甲基苯基、4-氟-3-甲基苯基、3-氟-4-甲基苯基、4-氯-3-甲氧苯基、3-氯-4-甲氧苯基、4-氟-3-甲氧苯基、3-氟-4-甲氧苯基、苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、3-三氟甲基-4-氟苯基、4-三氟甲基-3-氟苯基、3-氰基苯基、4-氰基苯基、3-氰基-4-氟苯基、4-氰基-3-氟苯基、3-二氟甲基-4-氟苯基、4-二氟甲基-3-氟苯基、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基、2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基、苄基、3-氟苄基、4-氟苄基、3-氯苄基、4-氯苄基、2-吡啶基、4-甲基-2-吡啶基、5-甲基-2-吡啶基、6-甲基-2-吡啶基、3-吡啶基、2-甲基-3-吡啶基、3-甲基-3-吡啶基、4-吡啶基、2-甲基-4-吡啶基和6-甲基-4-吡啶基。
在某些实施方案中，R2在每次出现时独立地选自由H和甲基组成的组。
在某些实施方案中，R3选自由下列各基组成的组：-NH2；-OH；-NH(吡啶基)；-NH(嘧啶基)；-NH(吡啶基-嘧啶基)；-NH(吡咯并[2,3-d]嘧啶基)；-NHS(＝O)2(C1-C6烷基)；-NHS(＝O)2(C3-C6环烷基)；-NHS(＝O)2(CH2)0-3吡啶基；-NHS(＝O)2(苄基)；-NHS(＝O)2(吡唑基)；-NHS(＝O)2(吗啉基)；-NHS(＝O)2NH(C1-C6烷基)；-NHS(＝O)2NH(C3-C6环烷基)；-NHS(＝O)2NH(CH2)0-3吡啶基；-NHS(＝O)2NH(苄基)；-NHS(＝O)2NH(吡唑基)；-NHS(＝O)2NH(吗啉基)；-NHC(＝O)(C1-C6烷基)；-NHC(＝O)(C3-C8环烷基)；-NHC(＝O)(C1-C6卤烷基)；-NHC(＝O)(吡唑基)；-NHC(＝O)(噻唑基)；-NHC(＝O)(噁唑基)；-NHC(＝O)(吡啶基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(吡啶基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(吡嗪基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(嘧啶基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(喹啉基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(异噁唑基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(噁唑基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(噁二唑基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(三唑基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(噻唑基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(咪唑基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(吡唑基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(哌啶基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(氧代哌啶基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(吡咯烷基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(氧代吡咯烷基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(四氢呋喃基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(四氢吡喃基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(2-氧代噁唑啶基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(吗啉基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(硫代吗啉基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(1-氧化-硫代吗啉基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(1,1-二氧化-硫代吗啉基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(氧代氮杂环丁基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)；-NHC(＝O)(CH2)1-3C(＝O)-(吡咯烷-1-基)；-NHC(＝O)O(C1-C6烷基)；-NHC(＝O)O(C3-C8环烷基)；-NHC(＝O)O(C1-C6卤烷基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(吡啶基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(吡嗪基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(嘧啶基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(喹啉基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(异噁唑基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(噁唑基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(噁二唑基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(三唑基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(噻唑基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(咪唑基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(吡唑基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(哌啶基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(氧代哌啶基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(吡咯烷基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(氧代吡咯烷基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(四氢呋喃基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(四氢吡喃基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(2-氧代噁唑啶基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(吗啉基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(硫代吗啉基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(1-氧化-硫代吗啉基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(1,1-二氧化-硫代吗啉基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(氧代氮杂环丁基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)；-NHC(＝O)O(CH2)1-3C(＝O)-(吡咯烷-1-基)；-NHC(＝O)NH(C1-C6烷基)；-NHC(＝O)NH(C3-C8环烷基)；-NHC(＝O)NH(C1-C6卤烷基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(吡啶基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(吡嗪基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(嘧啶基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(喹啉基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(异噁唑基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(噁唑基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(噁二唑基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(三唑基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(噻唑基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(咪唑基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(吡唑基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(哌啶基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(氧代哌啶基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(吡咯烷基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(氧代吡咯烷基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(四氢呋喃基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(四氢吡喃基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(2-氧代噁唑啶基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(吗啉基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(硫代吗啉基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(1-氧化-硫代吗啉基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(1,1-二氧化-硫代吗啉基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(氧代氮杂环丁基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)；-NHC(＝O)NH(CH2)1-3C(＝O)-(吡咯烷-1-基)；-C(＝O)NHC(＝O)NH-；-C(＝O)N(C1-C6烷基)C(＝O)NH-；-C(＝O)N((CH2)1-3吡啶基)CONH-；其中所述烷基、环烷基、杂芳基、杂环基、芳基或苄基任选地独立地被至少一个选自由下列各基组成的组的基团取代：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤烷基、C1-C6卤烷氧基、-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、卤素、-OH、-CN、苯氧基、-NHC(＝O)H、-NHC(＝O)C1-C6烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHC1-C6烷基、-C(＝O)N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、四氢吡喃基、吗啉基、-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH2OH、-C(＝O)NHCH3、-C(＝O)CH2OMe或其N-氧化物。
在某些实施方案中，R4是H或CH3。
在某些实施方案中，R5a、R5b和R5c独立地选自由下列各基组成的组：H、F和Cl。
在某些实施方案中，R5a、R5b和R5c中的一个是F，并且其余两个是H。
在某些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000221
在某些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000222
在某些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
O-甲基,N-(S)-(4-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3,4-二氟苯基)-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-叔丁基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(S)-(7-氟-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-7-氟-N-(4-氟-3-甲基苯基)-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-1-氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-((R)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-1-甲基-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(7-氟-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(6-吗啉代吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-1-甲基-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(6-甲氧吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(嘧啶-2-基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(6-(二甲氨基)吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((5-甲氧基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((4-(吡啶-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
2-(((((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)-4,4-二氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯；
O-(4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-乙酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-2-((((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)吡啶1-氧化物；
O-(S)-1-(吡啶-2-基)乙基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(S)-吡咯烷-2-基甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3,3,3-三氟丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(R)-5-氧代吡咯烷-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(6-甲基吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基,O-(吡啶-2-基甲基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(2-甲氧基乙酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-氟丙酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-1-乙酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-吡嗪-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-嘧啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(4-氯吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-羟基-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-异噁唑-3-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-(吡啶-2-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2,2-二氟乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-嘧啶-4-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2,2,2-三氟乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基,N-甲基氨基甲酸酯；
N-(S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基,O-(吡啶-2-基甲基)碳酸酯；
O-噻唑-5-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-噻唑-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-噁唑-4-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-噁唑-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-噁唑-5-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-(1H-咪唑-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(吡啶-2-基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺；
O-2-苯氧乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((1-甲基-1H-吡唑)-3-磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-2-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)嘧啶-4-羧酰胺；
O-2-(4-甲基噻唑-5-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(5-甲氧吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-1-(2,2,2-三氟乙基)吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(5-氟吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-(1H-吡唑-4-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-甲氧乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-四氢呋喃-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-四氢-2H-吡喃-4-基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3-甲氧丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)吡啶羧酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)噻唑-5-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(甲基磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(2-N-吗啉代乙酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)烟酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)异烟酰胺；
(S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基甲基碳酸酯；
O-噻唑-4-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3-(1H-咪唑-1-基)丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氰基-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)噻唑-2-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环丙烷磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)噁唑-5-羧酰胺；
O-环戊基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(2-氧代-噁唑烷-5-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-(1H-吡唑-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(3-氟吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-吗啉-3-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(4-甲氧吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-羟乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-四氢呋喃-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(2-羟基乙酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-(吡啶-3-基)脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-(吡啶-4-基)脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(噻唑-2-基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-2-(哌啶-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-(二氟甲基)-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-(吡啶-2-基甲基)脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(6-氰基吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-喹啉-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(5-甲基吡嗪-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-吗啉代乙基-N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-[顺式-4-羟基环己基]-N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3-羟丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-[反式-4-羟基环己基]-N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-乙酰氨基乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-丙酰氨基-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((4-甲氧基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((4-甲基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((2-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((6-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(S)-5-氧代吡咯烷-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((2-(吡啶-2-基)乙基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(R)-四氢呋喃-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙酰胺)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(5-氰基吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(3-甲基吡嗪-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-乙酰基哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-(2-羟基乙酰基)哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-(甲基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1,1-二氧化硫代吗啉-3-基)甲基-N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环丙烷羧酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-((S)-吗啉-3-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(S)-四氢呋喃-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((2-甲氧乙基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(苯基磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(吡啶-2-磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1-(2-甲氧乙酰基)哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((5-羟基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺
O-(1H-吡唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(嘧啶-4-基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((7-(4-甲氧苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-((R)-6-氧代哌啶-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(R)-6-氧代哌啶-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(S)-6-氧代哌啶-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(3-环丙基脲基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-((S)-6-氧代哌啶-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(4-氧代氮杂环丁-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-1-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-甲基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环丙烷磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-吡啶-2-基甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-1-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((环丙基甲基)磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((苯基甲基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-环丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((N-甲基氨磺酰基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(吗啉-4-磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-环丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((N-甲基氨磺酰基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1,3,4-噁二唑-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(乙基磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(丙基磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(4-氯-3-氟苯基)-7-氟-1-((2-甲基丙基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((N-异丙基氨磺酰基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((1-甲基乙基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环戊烷磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环己烷磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((N-环丙基氨磺酰基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((N-环丙基氨磺酰基)氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
((1-(甲基-d3)-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基-d2(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-(3-((((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基磷酸；
(S)-(3-((((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基磷酸；
O-(S)-2-氰基乙基,N-4-(3-氯-4-氟苯基氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸酯；
O-(S)-3-氰基丙基,N-4-(3-氯-4-氟苯基氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7'-氟-2,5-二氧代-2',3'-二氢螺[咪唑烷-4,1'-茚]-4'-羧酰胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7'-氟-2,5-二氧代-1-(吡啶-2-基甲基)-2',3'-二氢螺[咪唑烷-4,1'-茚]-4'-羧酰胺；
N-(3-氯-4-氟-苯基)-7'-氟-1-甲基-2,5-二氧代-螺[咪唑烷-4,1'-茚满]-4'-羧酰胺；
(S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
或其盐。
在某些实施方案中，衣壳抑制剂是下式的化合物或其盐：
Figure BDA0003364356240000301
其中以下定义适用：
-X1-X2-选自由下列各基组成的组：-CH2CH2-*、-CH2CH(CH3)-*、-CH2C(CH3)2-*、-CH(CH3)CH2-*、-C(CH3)2CH2-*、-CH2CHF-*、-CH2CF2-*、-OCH2-*、-SCH2-*、-CH2NR6a-*和-CH2CH(OR6a)-*，其中标记为“*”的单键介于-X1-X2-与X3之间；
X3是C，或X3与R3和R4组合以形成-S(＝O)2-；
X4是N或C(R5a)，
X5是N或C(R5b)，
X6是N或C(R5c)，
其中X4、X5和X6中的0-1个是N；
R1选自由下列各基组成的组：任选地取代的苯基、任选地取代的苄基、任选地取代的杂芳基和-(CH2)(任选地取代的杂芳基)；
R2在每次出现时独立地选自由H和C1-C6烷基组成的组；
R3选自由下列各基组成的组：-N(R2)C(＝O)OR6、H、-OH、-OR6、-NH2、-NHR6、-NR6R6、-OC(＝O)OR6、-OC(＝O)N(R2)R6、-NR7C(＝O)N(R6)(R7)、-N(R2)C(＝O)R6、-NR2S(＝O)1-2R6、任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、-CH2C(＝O)OH、-CH2C(＝O)NR6R6、-N(R2)C(＝O)(CH2)1-2R6、NR2S(＝O)2N(R6)(R7)和-NR2C(＝O)C(＝O)N(R6)(R7)；
R4是H或C1-C6烷基，
或R3与R4组合以形成＝O或-C(＝O)NR6a-C(＝O)-NR6a-；
R5a选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R5b选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R5c独立地选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R6在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的苯基和任选地取代的杂芳基；
R6a在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的苯基和任选地取代的杂芳基；
R7在每次出现时独立地选自由H和任选地取代的C1-C6烷基组成的组；
或者，若R6和R7结合至同一N原子，则R6和R7任选地与它们所结合至的N原子组合以形成任选地取代的3-7元杂环；
R8选自由H和C1-C6烷基组成的组。
在某些实施方案中，衣壳抑制剂是下式的化合物或其盐：
Figure BDA0003364356240000321
其中以下定义适用：
-X1-X2-选自由下列各基组成的组：-CH2CH2-*、-CH2CH(CH3)-*、-CH2C(CH3)2-*、-CH(CH3)CH2-*、-C(CH3)2CH2-*、-CH2CHF-*、-CH2CF2-*、-OCH2-*、-SCH2-*和-CH2CH(OR2)-*，其中标记为“*”的单键介于-X1-X2-与-CR3R4-之间；
R1选自由下列各基组成的组：任选地取代的苯基、任选地取代的苄基、任选地取代的杂芳基和-(CH2)(任选地取代的杂芳基)；
R2在每次出现时独立地选自由H和C1-C6烷基组成的组；
R3选自由下列各基组成的组：H、-OH、-OR6、-NH2、-NHR6、-NR6R6、-OC(＝O)OR6、-OC(＝O)N(R2)R6、-N(R2)C(＝O)OR6-NR7C(＝O)N(R6)(R7)、-N(R2)C(＝O)R6、-NR2S(＝O)2R6、任选地取代的芳基、任选地取代的杂芳基、-CH2C(＝O)OH、-CH2C(＝O)NR6R6、-N(R2)C(＝O)(CH2)0-2R6、NR2S(＝O)2N(R6)(R7)和-NR2C(＝O)C(＝O)N(R6)(R7)；
R4是H或C1-C6烷基，或R3与R4组合以形成＝O；
R5a选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R5b选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R5c选自由下列各基组成的组：H、卤基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6氨基烷基、C1-C6卤烷氧基和C1-C6卤烷基；
R6在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的苯基和任选地取代的杂芳基；
R7在每次出现时独立地选自由H和任选地取代的C1-C6烷基组成的组；
或者，若R6和R7结合至同一N原子，则R6和R7任选地与它们所结合至的N原子组合以形成任选地取代的3-7元杂环；
R8选自由H和C1-C6烷基组成的组。
在某些实施方案中，R5a、R5b和R5c中的至少一个是H。
在某些实施方案中，化合物是：
Figure BDA0003364356240000341
在某些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000342
在某些实施方案中，化合物至少部分被氘化。
在某些实施方案中，化合物是前药。
在某些实施方案中，化合物包含连接至杂原子的-(CRR)-O-P(＝O)(OR)2基团或其盐，其中R在每次出现时独立地是H和C1-C6烷基。
在某些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
O-甲基,N-(S)-(4-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；(S)-N-(3,4-二氟苯基)-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(7-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯；N-(3,4-二氟苯基)-3-(3-甲基脲基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-羧酰胺；
O-((R)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-叔丁基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(S)-(7-氟-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-7-氟-N-(4-氟-3-甲基苯基)-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-1-氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(7-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-((R)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-氧代-2-(吡咯烷-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(7-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(7-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(7-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(7-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(7-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-1-甲基-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(7-氟-4-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(6-吗啉代吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-1-甲基-5-氧代吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(6-甲氧吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(嘧啶-2-基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-甲基,N-((1R,2R)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2-羟基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-2-羟基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(6-(二甲氨基)吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((5-甲氧基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((4-(吡啶-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-吡啶-2-基甲基,N-((1R,2R)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2-羟基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(4-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2-羟基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(3,4-二氟苯基)-2-羟基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；2-(((((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)-4,4-二氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯；
O-甲基,N-(7-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-4-氟-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
O-(4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(7-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-4-氟-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-((1R,2R)-4-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-2-羟基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-乙酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(7-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-4-氟-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(7-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-4-氟-2,3-二氢苯并[b]噻吩-3-基)氨基甲酸酯；
(S)-2-((((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)吡啶1-氧化物；
O-(S)-1-(吡啶-2-基)乙基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(S)-吡咯烷-2-基甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3,3,3-三氟丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(R)-5-氧代吡咯烷-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(6-甲基吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基,O-(吡啶-2-基甲基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(2-甲氧基乙酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-氟丙酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-1-乙酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-吡嗪-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-嘧啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(4-氯吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-羟基-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-异噁唑-3-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-(吡啶-2-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2,2-二氟乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-嘧啶-4-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2,2,2-三氟乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基,N-甲基氨基甲酸酯；
N-(S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基,O-(吡啶-2-基甲基)氨基甲酸酯；
O-噻唑-5-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-噻唑-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-噁唑-4-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-噁唑-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-噁唑-5-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-(1H-咪唑-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(吡啶-2-基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺；
O-2-苯氧乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-5-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((1-甲基-1H-吡唑)-3-磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-2-((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基)嘧啶-4-羧酰胺；
O-2-(4-甲基噻唑-5-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(5-甲氧吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-1-(2,2,2-三氟乙基)吡咯烷-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(5-氟吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-(1H-吡唑-4-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-甲氧基乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-四氢呋喃-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-四氢-2H-吡喃-4-基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3-甲氧基丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)吡啶羧酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)噻唑-5-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(甲基磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(2-N-吗啉基乙酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)烟酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)异烟酰胺；
O-甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基甲基碳酸酯；
O-噻唑-4-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3-(1H-咪唑-1-基)丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氰基-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)噻唑-2-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环丙烷磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)噁唑-5-羧酰胺；
O-甲基,N-((1R,2R)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-环戊基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(2-氧代-噁唑烷-5-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-(1H-吡唑-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(3-氟吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((R)-吗啉-3-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(4-甲氧吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-羟乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-((S)-四氢呋喃-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(2-羟基乙酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-(吡啶-3-基)脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-(吡啶-4-基)脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(噻唑-2-基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-2-(哌啶-1-基)乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-(二氟甲基)-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-(吡啶-2-基甲基)脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(6-氰基吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-喹啉-2-基甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(5-甲基吡嗪-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-吗啉代乙基-N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-[顺式-4-羟基环己基]-N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-3-羟丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-[反式-4-羟基环己基]-N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-2-乙酰氨基乙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-丙酰氨基-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((4-甲氧基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((4-甲基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((2-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((6-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(1R,2R)-N-(3-氯-4-氟苯基)-2-甲氧基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(S)-5-氧代吡咯烷-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((2-(吡啶-2-基)乙基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(R)-四氢呋喃-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙酰胺)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(5-氰基吡啶-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(3-甲基吡嗪-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-乙酰基哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-(2-羟基乙酰基)哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-(甲基氨基甲酰基)哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1,1-二氧化硫代吗啉-3-基)甲基-N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-((1R,2R)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环丙烷甲酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-((S)-吗啉-3-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(S)-四氢呋喃-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((2-甲氧基乙基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(苯基磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(吡啶-2-磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1-(2-甲氧乙酰基)哌啶-4-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((5-羟基嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺
O-甲基,N-(7-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-4-氟-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-4-氟-3-(3-甲基脲基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-羧酰胺；
O-吡啶-2-基甲基,N-(7-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-4-氟-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯；
O-(1H-吡唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(3-((1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基)脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(嘧啶-4-基氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((7-(4-甲氧苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-((R)-6-氧代哌啶-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(R)-6-氧代哌啶-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(S)-6-氧代哌啶-3-基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(4-氟-7-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯；
4-氟-N-(4-氟-3-甲基苯基)-3-(3-甲基脲基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-羧酰胺；
O-吡啶-2-基甲基,N-(4-氟-7-((4-氟-3-甲基苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-3-(环丙烷磺酰氨基)-4-氟-2,3-二氢苯并呋喃-7-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(3-环丙基脲基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,2,7-三氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-2,2,7-三氟-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-((S)-6-氧代哌啶-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(4-氧代氮杂环丁-2-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-1-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-甲基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环丙烷磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-吡啶-2-基甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-1-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,2,7-三氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((环丙基甲基)磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((苯基甲基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-环丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((N-甲基氨磺酰基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(吗啉-4-磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-环丙基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((N-甲基氨磺酰基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-(1,3,4-噁二唑-2-基)甲基,N-(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(乙基磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-(丙基磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(4-氯-3-氟苯基)-7-氟-1-((2-甲基丙基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2-甲氧基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((N-异丙基氨磺酰基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-((1-甲基乙基)磺酰氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环戊烷磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-(环己烷磺酰氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-3,3-二甲基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((N-环丙基氨磺酰基)氨基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-((N-环丙基氨磺酰基)氨基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-甲基,N-(4-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(3,4-二氟苯基)-7-氟-2-甲氧基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-吡啶-2-基甲基,N-(4-((3,4-二氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯
O-吡啶-2-基甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
O-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基,N-((S)-4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,2-二甲基-1-(3-甲基脲基)-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
((1-(甲基-d3)-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲基-d2(S)-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
(S)-(3-((((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)甲基磷酸；
(S)-(3-((((4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酰基)氧基)甲基)-1H-吡唑-1-基)甲基磷酸；
O-(S)-2-氰基乙基,N-4-(3-氯-4-氟苯基氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸酯；
O-(S)-3-氰基丙基,N-4-(3-氯-4-氟苯基氨基甲酰基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-1-基氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7'-氟-2,5-二氧代-2',3'-二氢螺[咪唑啶-4,1'-茚]-4'-羧酰胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7'-氟-2,5-二氧代-1-(吡啶-2-基甲基)-2',3'-二氢螺[咪唑啶-4,1'-茚]-4'-羧酰胺；
N-(3-氯-4-氟-苯基)-7'-氟-1-甲基-2,5-二氧代-螺[咪唑啶-4,1'-茚满]-4'-羧酰胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-甲基脲基)-6,7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-4-羧酰胺；
O-甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-6,7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-基)氨基甲酸酯；
O-吡啶-2-基甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-6,7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-基)氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(环丙烷磺酰氨基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-4-羧酰胺；
O-(吡啶-2-基甲基)-N-[(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-6,7-二氢-5H-环戊[c]吡啶-7-基)]氨基甲酸酯；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢苯并[b]噻吩-4-羧酰胺1,1-二氧化物；
N-(3-氯-4-氟苯基)-2,3-二氢苯并[b]噻吩-4-羧酰胺1,1-二氧化物；
2-(叔丁基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-4-羧酰胺1,1-二氧化物；
N-(3-氯-4-氟苯基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-4-羧酰胺-1,1-二氧化物；
N-(3-氯-4-氟苯基)-2-(2-羟乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-4-羧酰胺1,1-二氧化物；
N-(3-氯-4-氟苯基)-2-甲基-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-4-羧酰胺1,1-二氧化物；
N-(3-氯-4-氟苯基)-2-异丙基-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-4-羧酰胺1,1-二氧化物’
N-(3-氯-4-氟苯基)-2-环丙基-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-4-羧酰胺1,1-二氧化物；
(S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-2,3-二氢-1H-茚-4-羧酰胺；
O-甲基,N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-7-氟-3,3-二甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯；
或其盐。
cccDNA形成抑制剂
共价闭合环状DNA(cccDNA)在病毒rcDNA的细胞核中产生并充当病毒mRNA的转录模板。如本文所述，术语“cccDNA形成抑制剂”包括能够直接或间接地抑制cccDNA的形成和/或稳定性的化合物。例如，cccDNA形成抑制剂可包括但不限于抑制衣壳拆卸、rcDNA进入核中和/或rcDNA向cccDNA的转化的任何化合物。例如，在某些实施方案中，抑制剂可检测地抑制cccDNA的形成和/或稳定性，如例如使用本文所述的测定所测量。在某些实施方案中，抑制剂将cccDNA的形成和/或稳定性抑制了至少5％、至少10％、至少20％、至少50％、至少75％或至少90％。
术语cccDNA形成抑制剂包括国际专利申请公布号WO2013130703中所描述的化合物，包括以下化合物：
Figure BDA0003364356240000441
术语cccDNA形成抑制剂包括但不限于美国专利申请公布号US 2015/0038515 A1中总体和具体地描述的那些。术语cccDNA形成抑制剂包括但不限于1-(苯磺酰基)-N-(吡啶-4-基甲基)-1H-吲哚-2-羧酰胺；1-苯磺酰基-吡咯烷-2-甲酸(吡啶-4-基甲基)-酰胺；2-(2-氯-N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-4-(三氟甲基)苯基磺酰氨基)-N-(吡啶-4-基甲基)乙酰胺；2-(4-氯-N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-N-(吡啶-4-基甲基)乙酰胺；2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-4-(三氟甲基)苯基磺酰氨基)-N-(吡啶-4-基甲基)乙酰胺；2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-4-甲氧苯基磺酰氨基)-N-(吡啶-4-基甲基)乙酰胺；2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-N-((1-甲基哌啶-4-基)甲基)乙酰胺；2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-N-(哌啶-4-基甲基)乙酰胺；2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-N-(吡啶-4-基甲基)丙酰胺；2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-N-(吡啶-3-基甲基)乙酰胺；2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-N-(嘧啶-5-基甲基)乙酰胺；2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-N-(嘧啶-4-基甲基)乙酰胺；2-(N-(5-氯-2-氟苯基)苯基磺酰氨基)-N-(吡啶-4-基甲基)乙酰胺；2-[(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-(4-氟-苯磺酰基)-氨基]-N-吡啶-4-基甲基-乙酰胺；2-[(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-(甲苯-4-磺酰基)-氨基]-N-吡啶-4-基甲基-乙酰胺；2-[苯磺酰基-(2-溴-5-三氟甲基-苯基)-氨基]-N-吡啶-4-基甲基-乙酰胺；2-[苯磺酰基-(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-氨基]-N-(2-甲基-苯并噻唑-5-基)-乙酰胺；2-[苯磺酰基-(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-氨基]-N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苄基]-乙酰胺；2-[苯磺酰基-(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-氨基]-N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苄基]-乙酰胺；2-[苯磺酰基-(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-氨基]-N-苄基-乙酰胺；2-[苯磺酰基-(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-氨基]-N-吡啶-4-基甲基-乙酰胺；2-[苯磺酰基-(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-氨基]-N-吡啶-4-基甲基-丙酰胺；2-[苯磺酰基-(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-氨基]-N-吡啶-4-基甲基-乙酰胺；4(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-N-(吡啶-4-基-甲基)丁酰胺；4-((2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-乙酰氨基)-甲基)-1,1-二甲基哌啶-1-鎓氯化物；4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-N-(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-苯羧酰胺；4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-N-(2-甲基-1H-吲哚-5-基)-苯羧酰胺；4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-N-(2-甲基-1H-吲哚-5-基)-苯羧酰胺；4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-N-(2-甲基-苯并噻唑-5-基)-苯羧酰胺；4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-N-(2-甲基-苯并噻唑-6-基)-苯羧酰胺；4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-N-(2-甲基-苯并噻唑-6-基)-苯羧酰胺；4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-N-吡啶-4-基甲基-苯羧酰胺；N-(2-氨基乙基)-2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-乙酰胺；N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)-N-(2-(3,4-二氢-2,6-萘啶-2(1H)-基)-2-氧代乙基)苯磺酰胺；N-苯并噻唑-6-基-4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-苯羧酰胺；N-苯并噻唑-6-基-4-(苄基-甲基-氨磺酰基)-苯羧酰胺；(2-(2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)乙酰氨基)-乙基)氨基甲酸叔丁酯；和4-((2-(N-(2-氯-5-(三氟甲基)苯基)苯基磺酰氨基)-乙酰氨基)-甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯和任选它们的组合。
sAg分泌抑制剂/RNA去稳定剂
如本文所述，术语“sAg分泌抑制剂”包括能够直接或间接地抑制载有亚病毒颗粒的sAg(S、M和/或L表面抗原)和/或含有病毒颗粒的DNA从受HBV感染的细胞中分泌的化合物。如本文所用，“sAg分泌抑制剂”也称为“RNA去稳定剂”，并且这些术语可互换使用。例如，在某些实施方案中，抑制剂可侦测地抑制sAg的分泌，如例如使用本领域已知或本文所述的测定(例如ELISA测定)或通过蛋白质印迹所测量。在某些实施方案中，抑制剂将sAg的分泌抑制了至少5％、至少10％、至少20％、至少50％、至少75％或至少90％。在某些实施方案中，抑制剂将患者中sAg的血清含量减少了至少5％、至少10％、至少20％、至少50％、至少75％或至少90％。
术语RNA去稳定剂包括WO 2018/085619中所描述的化合物，所述专利文件特别地以引用的方式整体并入。
术语sAg分泌抑制剂包括美国专利号8,921,381中所描述的化合物以及美国专利申请公布号2015/0087659和2013/0303552中所描述的化合物。例如，所述术语包括化合物PBHBV-001和PBHBV-2-15及其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003364356240000471
术语sAg分泌抑制剂/RNA去稳定剂还包括化合物：
Figure BDA0003364356240000472
及其药学上可接受的盐(参见WO 2018/085619)。
在某些实施方案中，sAg分泌抑制剂/RNA去稳定剂是下式的化合物或其盐：
Figure BDA0003364356240000473
其中以下定义适用：
R1选自由下列各基组成的组：H；卤基；-OR8；-C(R9)(R9)OR8；-C(＝O)R8；-C(＝O)OR8；-C(＝O)NH-OR8；-C(＝O)NHNHR8；-C(＝O)NHNHC(＝O)R8；-C(＝O)NHS(＝O)2R8；-CH2C(＝O)OR8；-CN；-NH2；-N(R8)C(＝O)H；-N(R8)C(＝O)R10；-N(R8)C(＝O)OR10；-N(R8)C(＝O)NHR8；-NR9S(＝O)2R10；-P(＝O)(OR8)2；-B(OR8)2；2,5-二氧代-吡咯烷-1-基；2H-四唑-5-基；3-羟基-异噁唑-5-基；1,4-二氢-5-氧代-5H-四唑-1-基；任选地被C1-C6烷基取代的吡啶-2-基；任选地被C1-C6烷基取代的嘧啶-2-基；(吡啶-2-基)甲基；(嘧啶-2-基)甲基；(嘧啶-2-基)氨基；双-(嘧啶-2-基)-氨基；5-R8-1,3,4,-噻二唑-2-基；5-硫酮基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-基；1H-1,2,4-三唑-5-基；1,3,4-噁二唑-2-基；1,2,4-噁二唑-5-基和3-R10-1,2,4-噁二唑-5-基；
R2选自由下列各基组成的组：＝O、＝NR9、＝N(OR9)和＝N(NR9R9)；
或R1和R2组合以形成＝N-O-C(＝O)-或＝N-N(R9)-C(＝O)-，其中＝N基团结合至标记为“*”的环碳原子；
X1选自由CR6I和N组成的组，X2选自由CR6II和N组成的组，X3选自由CR6III和N组成的组，X4选自由CR6IV和N组成的组，或者X3和X4或X1和X2组合以形成-S-；
其中选自由X1、X2、X3和X4组成的组的1-2个取代基是N；如果环中的相邻碳原子被-OH取代，那么其各自(若存在)任选地被C1-C6烷基烷基化；
R6I、R6II、R6III和R6IV独立地选自由下列各基组成的组：H、卤基、-CN、吡咯烷基、任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C1-C6烯基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的杂环基、-OR、C1-C6卤烷氧基、-N(R)(R)、-NO2、-S(＝O)2N(R)(R)、酰基和C1-C6烷氧羰基，
其中R在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、C1-C6烷基、R’-取代的C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、任选地取代的(C1-C6烷氧基)-C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基，
其中R’在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-NHC(＝O)OtBu、-N(C1-C6烷基)C(＝O)OtBu、或5或6元杂环基，其任选地是N-连结的；
或X2是CR6II，X3是CR6III，并且R6II与R6III组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：-O(CHF)O-、-O(CF2)O-、-O(CR9R9)O-、-O(CH2)(CH2)O-和-O(CH2)(CR11R11)(CH2)O-；
R7选自由下列各基组成的组：H、OH、卤基、C1-C6烷氧基和任选地取代的C1-C6烷基；
R8选自由下列各基组成的组：H、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
R9在每次出现时独立地选自由H和C1-C6烷基组成的组；
R10选自由任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的苯基组成的组；并且，
R11在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、烷氧基-C1-C6烷基和烷氧基-C1-C6烷氧基，其中结合至同一碳原子的两个R11基团不同时是OH；或者两个R11基团与它们所结合至的碳原子组合以形成选自由C＝O、C＝CH2和氧杂环丁烷-3,3-二基组成的组的部分。
在某些实施方案中，烷基或环烷基在每次出现时独立地任选地被至少一个选自由下列各基组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、卤基、-OR”、苯基和-N(R”)(R”)，其中R”在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在某些实施方案中，芳基或杂芳基在每次出现时独立地任选地被至少一个选自由下列各基组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、C1-C6卤烷基、C1-C6卤烷氧基、卤基、-CN、-OR、-N(R”)(R”)、-NO2、-S(＝O)2N(R”)(R”)、酰基和C1-C6烷氧羰基，其中R”在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在某些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000501
在某些实施方案中，R1选自由下列各基组成的组：任选地取代的三唑基、任选地取代的噁二唑基、-C(＝O)OH、-C(＝O)OMe、-C(＝O)OEt、-C(＝O)O-nPr、-C(＝O)O-iPr、-C(＝O)O-环戊基和-C(＝O)O-环己基。
在某些实施方案中，R2选自由下列各基组成的组：O、N(OH)、N(Me)、N(OMe)和N(NH2)。
在某些实施方案中，R3和R3’各自独立地选自由下列各基组成的组：H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、羟基甲基、2-羟基-乙基、2-甲氧基-乙基、甲氧甲基和2-甲基-1-甲氧基-丙-2-基。
在某些实施方案中，以下至少一个适用：R3是H，R3’是异丙基；R3是H，R3’是叔丁基；R3是甲基，R3’是异丙基；R3是甲基，R3’是叔丁基；R3是甲基，R3’是甲基；R3是甲基，R3’是乙基；并且R3是乙基，R3’是乙基。\
在某些实施方案中，R3和R3不是H。
在某些实施方案中，R3/R3’组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：C1-C6烷二基、-(CH2)nO(CH2)n-、-(CH2)nNR9(CH2)n-、-(CH2)nS(CH2)n-、-(CH2)nS(＝O)(CH2)n-和-(CH2)nS(＝O)2(CH2)n-，其中n在每次出现时独立地选自由1和2组成的组并且其中每个二价基团任选地被至少一个C1-C6烷基或卤基取代。
在某些实施方案中，当存在时，R6I、R6II、R6III和R6IV独立地选自由下列各基组成的组：H、F、Cl、Br、I、CN、氨基、甲氨基、二甲氨基、甲氧基乙基氨基、吡咯烷基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、2-甲氧基-乙氧基、2-羟基-乙氧基、3-甲氧基-丙-1-基、3-羟基-丙-1-基、3-甲氧基-丙-1-氧基、3-羟基-丙-1-氧基、4-甲氧基-丁-1-基、4-羟基-丁-1-基、4-甲氧基-丁-1-氧基、4-羟基-丁-1-氧基、2-羟基-乙氧基、3-羟基-丙-1-基、4-羟基-丁-1-基、3-羟基-2,2-二甲基-丙-1-氧基、环丙基甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、2-(2-卤乙氧基)-乙氧基、2-(N-吗啉代)-乙基、2-(N-吗啉代)-乙氧基、3-(N-吗啉代)-丙-1-基、3-(N-吗啉代)-丙-1-氧基、4-(N-吗啉代)-丁-1-基、4-(N-吗啉代)-丁1-氧基、2-氨基-乙基、2-(NHC(＝O)OtBu)-乙基、2-氨基-乙氧基、2-(NHC(＝O)OtBu)-乙氧基、3-氨基-丙-1-基、3-(NHC(＝O)OtBu)-丙-1-基、3-氨基-丙-1-氧基、3-(NHC(＝O)OtBu)-丙-1-氧基、4-氨基-丁-1-基、4-(NHC(＝O)OtBu)-丁-1-基、4-氨基-丁-1-氧基和4-(NHC(＝O)OtBu)-丁-1-氧基。
在某些实施方案中，X1是CH或N。
在某些实施方案中，X4是CH。
在某些实施方案中，X2是CR6II，R6II不是H，X3是CR6III，并且R6III不是H。
在某些实施方案中，X1是N，X2是CR6II，X3是CR6III，并且X4是CH，并且以下中的一者适用：R6II是甲氧基，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是氯，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是环丙基，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是甲氧基，R6III是甲氧基；R6II是氯，R6III是甲氧基；并且R6II是环丙基，R6III是甲氧基。
在某些实施方案中，X2是CR6II，X3是CR6III，并且R6II和R6III组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：-O(CHF)O-、-O(CF2)O-、-O(CR9R9)O-、-O(CH2)(CH2)O-和-O(CH2)(CR11R11)(CH2)O。
在某些实施方案中，R7选自由下列各基组成的组：H、甲基、乙基和氟。
在某些实施方案中，sAg分泌抑制剂/RNA去稳定剂是下式的化合物或其盐：
Figure BDA0003364356240000521
其中以下定义适用：
Y选自由CHR5和O组成的组；
R5在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
R1选自由下列各基组成的组：H；卤基；-OR8；-C(R9)(R9)OR8；-C(＝O)R8；-C(＝O)OR8；-C(＝O)NH-OR8；-C(＝O)NHNHR8；-C(＝O)NHNHC(＝O)R8；-C(＝O)NHS(＝O)2R8；-CH2C(＝O)OR8；-CN；-NH2；-N(R8)C(＝O)H；-N(R8)C(＝O)R10；-N(R8)C(＝O)OR10；-N(R8)C(＝O)NHR8；-NR9S(＝O)2R10；-P(＝O)(OR8)2；-B(OR8)2；2,5-二氧代-吡咯烷-1-基；2H-四唑-5-基；3-羟基-异噁唑-5-基；1,4-二氢-5-氧代-5H-四唑-1-基；任选地被C1-C6烷基取代的吡啶-2-基；任选地被C1-C6烷基取代的嘧啶-2-基；(吡啶-2-基)甲基；(嘧啶-2-基)甲基；(嘧啶-2-基)氨基；双-(嘧啶-2-基)-氨基；5-R8-1,3,4,-噻二唑-2-基；5-硫酮基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-基；1H-1,2,4-三唑-5-基；1,3,4-噁二唑-2-基；1,2,4-噁二唑-5-基和3-R10-1,2,4-噁二唑-5-基；
R2选自由下列各基组成的组：＝O、＝NR9、＝N(OR9)和＝N(NR9R9)；
或R1和R2组合以形成＝N-O-C(＝O)-或＝N-N(R9)-C(＝O)-，其中＝N基团结合至标记为“*”的环碳原子；
R3、R3’、R4和R4’各自独立地选自由下列各基组成的组：H、烷基取代的氧杂环丁烷基、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
或选自由R3/R3’、R4/R4’和R3/R4组成的组的一对组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：C1-C6烷二基、-(CH2)nO(CH2)n-、-(CH2)nNR9(CH2)n-、-(CH2)nS(CH2)n-、-(CH2)nS(＝O)(CH2)n-和-(CH2)nS(＝O)2(CH2)n-，其中n在每次出现时独立地选自由1和2组成的组并且每个二价基团任选地被至少一个C1-C6烷基或卤基取代；
X1选自由CR6I和N组成的组，X2选自由CR6II和N组成的组，X3选自由CR6III和N组成的组，X4选自由CR6IV和N组成的组，或者X3和X4或X1和X2组合以形成-S-；
其中选自由X1、X2、X3和X4组成的组的0-2个取代基是N；如果环中的相邻碳原子被-OH取代，那么其各自(若存在)任选地被C1-C6烷基烷基化；
R6I、R6II、R6III和R6IV独立地选自由下列各基组成的组：H、卤基、-CN、吡咯烷基、任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C1-C6烯基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的杂环基、-OR、C1-C6卤烷氧基、-N(R)(R)、-NO2、-S(＝O)2N(R)(R)、酰基和C1-C6烷氧羰基，
其中R在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、C1-C6烷基、R’-经取代的C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、任选地取代的(C1-C6烷氧基)-C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基，
其中R’在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-NHC(＝O)OtBu、-N(C1-C6烷基)C(＝O)OtBu、或5或6元杂环基，其任选地是N-连结的；
或X2是CR6II，X3是CR6III，并且R6II与R6III组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：-O(CHF)O-、-O(CF2)O-、-O(CR9R9)O-、-O(CH2)(CH2)O-和-O(CH2)(CR11R11)(CH2)O-；
R7选自由下列各基组成的组：H、OH、卤基、C1-C6烷氧基和任选地取代的C1-C6烷基。
R8选自由下列各基组成的组：H、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
R9在每次出现时独立地选自由H和C1-C6烷基组成的组；
R10选自由任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的苯基组成的组；并且，
R11在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、烷氧基-C1-C6烷基和烷氧基-C1-C6烷氧基，其中结合至同一碳原子的两个R11基团不同时是OH；或者两个R11基团与它们所结合至的碳原子组合以形成选自由C＝O、C＝CH2和氧杂环丁烷-3,3-二基组成的组的部分。
在某些实施方案中，烷基或环烷基在每次出现时独立地任选地被至少一个选自由下列各基组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、卤基、-OR”、苯基和-N(R”)(R”)，其中R”在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在某些实施方案中，芳基或杂芳基在每次出现时独立地任选地被至少一个选自由下列各基组成的组的取代基取代：C1-C6烷基、C1-C6卤烷基、C1-C6卤烷氧基、卤基、-CN、-OR、-N(R”)(R”)、-NO2、-S(＝O)2N(R”)(R”)、酰基和C1-C6烷氧羰基，其中R”在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基或C3-C8环烷基。
在某些实施方案中，化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000551
Figure BDA0003364356240000561
在某些实施方案中，R1选自由下列各基组成的组：任选地取代的三唑基、任选地取代的噁二唑基、-C(＝O)OH、-C(＝O)OMe、-C(＝O)OEt、-C(＝O)O-nPr、-C(＝O)O-iPr、-C(＝O)O-环戊基和-C(＝O)O-环己基。
在某些实施方案中，R2选自由下列各基组成的组：O、N(OH)、N(Me)、N(OMe)和N(NH2)。
在某些实施方案中，R3与R3’和R4与R4’各自独立地选自由下列各基组成的组：H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、羟基甲基、2-羟基-乙基、2-甲氧基-乙基、甲氧甲基和2-甲基-1-甲氧基-丙-2-基。
在某些实施方案中，以下至少一个适用：R3是H，R3’是异丙基；R3是H，R3’是叔丁基；R3是甲基，R3’是异丙基；R3是甲基，R3’是叔丁基；R3是甲基，R3’是甲基；R3是甲基，R3’是乙基；并且R3是乙基，R3’是乙基。
在某些实施方案中，R3和R3’不是H。
在某些实施方案中，R4和R4’是H。
在某些实施方案中，R3/R3’组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：C1-C6烷二基、-(CH2)nO(CH2)n-、-(CH2)nNR9(CH2)n-、-(CH2)nS(CH2)n-、-(CH2)nS(＝O)(CH2)n-和-(CH2)nS(＝O)2(CH2)n-，其中n在每次出现时独立地选自由1和2组成的组并且其中每个二价基团任选地被至少一个C1-C6烷基或卤基取代。
在某些实施方案中，R6I、R6II、R6III和R6IV(当存在时)独立地选自由下列各基组成的组：H、F、Cl、Br、I、CN、氨基、甲氨基、二甲氨基、甲氧基乙基氨基、吡咯烷基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、2-甲氧基-乙氧基、2-羟基-乙氧基、3-甲氧基-丙-1-基、3-羟基-丙-1-基、3-甲氧基-丙-1-氧基、3-羟基-丙-1-氧基、4-甲氧基-丁-1-基、4-羟基-丁-1-基、4-甲氧基-丁-1-氧基、4-羟基-丁-1-氧基、2-羟基-乙氧基、3-羟基-丙-1-基、4-羟基-丁-1-基、3-羟基-2,2-二甲基-丙-1-氧基、环丙基甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、2-(2-卤乙氧基)-乙氧基、2-(N-吗啉代)-乙基、2-(N-吗啉代)-乙氧基、3-(N-吗啉代)-丙-1-基、3-(N-吗啉代)-丙-1-氧基、4-(N-吗啉代)-丁-1-基、4-(N-吗啉代)-丁1-氧基、2-氨基-乙基、2-(NHC(＝O)OtBu)-乙基、2-氨基-乙氧基、2-(NHC(＝O)OtBu)-乙氧基、3-氨基-丙-1-基、3-(NHC(＝O)OtBu)-丙-1-基、3-氨基-丙-1-氧基、3-(NHC(＝O)OtBu)-丙-1-氧基、4-氨基-丁-1-基、4-(NHC(＝O)OtBu)-丁-1-基、4-氨基-丁-1-氧基和4-(NHC(＝O)OtBu)-丁-1-氧基。
在某些实施方案中，X1是CH或N。
在某些实施方案中，X4是CH。
在某些实施方案中，X2是CR6II，R6II不是H，X3是CR6III，并且R6III不是H。
在某些实施方案中，X1是CH，X2是CR6II，X3是CR6III，并且X4是CH，并且以下中的一者适用：R6II是甲氧基，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是氯，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是异丙基，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是甲氧基，R6III是甲氧基；R6II是氯，R6III是甲氧基；并且R6II是环丙基，R6III是甲氧基。
在某些实施方案中，X1是N，X2是CR6II，X3是CR6III，并且X4是CH，并且以下中的一者适用：R6II是甲氧基，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是氯，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是环丙基，R6III是3-甲氧基-丙氧基；R6II是甲氧基，R6III是甲氧基；R6II是氯，R6III是甲氧基；并且R6II是环丙基，R6III是甲氧基。
在某些实施方案中，X2是CR6II，X3是CR6III，并且R6II和R6III组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：-O(CHF)O-、-O(CF2)O-、-O(CR9R9)O-、-O(CH2)(CH2)O-和-O(CH2)(CR11R11)(CH2)O。
在某些实施方案中，R7选自由下列各基组成的组：H、甲基、乙基和氟。
在某些实施方案中，sAg分泌抑制剂/RNA去稳定剂选自由式(I)、(II)和(III)的化合物或其盐组成的组，其中对于式(I)、(II)和(III)的化合物，以下定义适用：
R1选自由下列各基组成的组：H；卤基；-OR8；-C(R9)(R9)OR8；-C(＝O)R8；-C(＝O)OR8；-C(＝O)NH-OR8；-C(＝O)NHNHR8；-C(＝O)NHNHC(＝O)R8；-C(＝O)NHS(＝O)2R8；-CH2C(＝O)OR8；-CN；-NH2；-N(R8)C(＝O)H；-N(R8)C(＝O)R10；-N(R8)C(＝O)OR10；-N(R8)C(＝O)NHR8；-NR9S(＝O)2R10；-P(＝O)(OR8)2；-B(OR8)2；2,5-二氧代-吡咯烷-1-基；2H-四唑-5-基；3-羟基-异噁唑-5-基；1,4-二氢-5-氧代-5H-四唑-1-基；任选地被C1-C6烷基取代的吡啶-2-基；任选地被C1-C6烷基取代的嘧啶-2-基；(吡啶-2-基)甲基；(嘧啶-2-基)甲基；(嘧啶-2-基)氨基；双-(嘧啶-2-基)-氨基；5-R8-1,3,4,-噻二唑-2-基；5-硫酮基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-基；1H-1,2,4-三唑-5-基；1,3,4-噁二唑-2-基；1,2,4-噁二唑-5-基和3-R10-1,2,4-噁二唑-5-基；
R2选自由下列各基组成的组：＝O、＝NR9、＝N(OR9)和＝N(NR9R9)；
或R1和R2组合以形成＝N-O-C(＝O)-或＝N-N(R9)-C(＝O)-，其中＝N基团结合至标记为“*”的环碳原子；
X1选自由CR6I和N组成的组，X2选自由CR6II和N组成的组，X3选自由CR6III和N组成的组，X4选自由CR6IV和N组成的组，或者X3和X4或X1和X2组合以形成-S-；
其中选自由X1、X2、X3和X4组成的组的0-2个取代基是N；如果环中的相邻碳原子被-OH取代，那么其各自(若存在)任选地被C1-C6烷基烷基化；
R6I、R6II、R6III和R6IV独立地选自由下列各基组成的组：H、卤基、-CN、吡咯烷基、任选地取代的C1-C6烷基、任选地取代的C1-C6烯基、任选地取代的C3-C8环烷基、任选地取代的杂环基、-OR、C1-C6卤烷氧基、-N(R)(R)、-NO2、-S(＝O)2N(R)(R)、酰基和C1-C6烷氧羰基，
其中R在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、C1-C6烷基、R’-取代的C1-C6烷基、C1-C6羟烷基、任选地取代的(C1-C6烷氧基)-C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基，
其中R’在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：-NH2、-NH(C1-C6烷基)、-N(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)、-NHC(＝O)OtBu、-N(C1-C6烷基)C(＝O)OtBu、或5或6元杂环基，其任选地是N-连结的；
或X2是CR6II，X3是CR6III，并且R6II与R6III组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：-O(CHF)O-、-O(CF2)O-、-O(CR9R9)O-、-O(CH2)(CH2)O-和-O(CH2)(CR11R11)(CH2)O-；
R7选自由下列各基组成的组：H、OH、卤基、C1-C6烷氧基、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
R8选自由下列各基组成的组：H、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
R9在每次出现时独立地选自由H和C1-C6烷基组成的组；
R10选自由任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的苯基组成的组；并且，
R11在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、烷氧基-C1-C6烷基和烷氧基-C1-C6烷氧基，其中结合至同一碳原子的两个R11基团不同时是OH；或者两个R11基团与它们所结合至的碳原子组合以形成选自由C＝O、C＝CH2和氧杂环丁烷-3,3-二基组成的组的部分；
(a)其中式(I)的化合物是
Figure BDA0003364356240000601
其中在(I)中：
键a是单键或双键，其中：
(i)如果键a是单键，那么：
Y是C(＝O)，并且M选自由C(R4)(R4’)和NR8组成的组，或
Y选自由下列各基组成的组：CHR5、O、S、S(＝O)、S(＝O)2和NR5，且M为C(R4)(R4’)，
其中如果Y选自由CHR5、O和NR5组成的组，那么R4和R4’任选地彼此组合以形成＝O；或
Y是CH，M是C(R4)(R4’)，R4’是CH2，并且Y与R4’形成单键以产生环丙基；
(ii)如果键a是双键，那么Y选自由CR5和N组成的组，M是C(R4)(R4’)，并且R4’不存在；
R3、R3’、R4和R4’各自独立地选自由下列各基组成的组：H、烷基取代的氧杂环丁烷基、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
或选自由R3/R3’、R4/R4’和R3/R4组成的组的一对组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：C1-C6烷二基、-(CH2)nO(CH2)n-、-(CH2)nNR9(CH2)n-、-(CH2)nS(CH2)n-、-(CH2)nS(＝O)(CH2)n-和-(CH2)nS(＝O)2(CH2)n-，其中n在每次出现时独立地选自由1和2组成的组并且每个二价基团任选地被至少一个C1-C6烷基或卤基取代；
R5在每次出现时独立地选自由下列各基组成的组：H、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
(b)其中式(II)的化合物是
Figure BDA0003364356240000611
其中在(II)中：
R3和R3’各自独立地选自由下列各基组成的组：H、烷基取代的氧杂环丁烷基、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
或者R3与R3’组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：C1-C6烷二基、-(CH2)nO(CH2)n-、-(CH2)nNR9(CH2)n-、-(CH2)nS(CH2)n-、-(CH2)nS(＝O)(CH2)n-和-(CH2)nS(＝O)2(CH2)n-，其中n在每次出现时独立地选自由1和2组成的组并且每个二价基团任选地被至少一个C1-C6烷基或卤基取代；
(c)式(III)的化合物是：
Figure BDA0003364356240000612
其中在(III)中：
R3和R3’各自独立地选自由下列各基组成的组：H、烷基取代的氧杂环丁烷基、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
或者R3与R3’组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：C1-C6烷二基、-(CH2)nO(CH2)n-、-(CH2)nNR9(CH2)n-、-(CH2)nS(CH2)n-、-(CH2)nS(＝O)(CH2)n-和-(CH2)nS(＝O)2(CH2)n-，其中n在每次出现时独立地选自由1和2组成的组并且每个二价基团任选地被至少一个C1-C6烷基或卤基取代；
并且
式(III)的化合物选自由以下组成的组：
式(IIIa)的化合物
Figure BDA0003364356240000621
其中选自由X1、X2、X3和X4组成的组的1-2个取代基是N；
式(IIIb)的化合物
Figure BDA0003364356240000622
其中以下至少一个适用：R1不是-C(＝O)OR8，R2不是＝O；
式(IIIc)的化合物
Figure BDA0003364356240000623
其中X3和X4或X1和X2组合以形成-S-；
式(IIId)的化合物
Figure BDA0003364356240000624
其中X2是CR6II，X3是CR6III，并且R6II和R6III组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：-O(CHF)O-、-O(CF2)O-、-O(CR9R9)O-、-O(CH2)(CH2)O-和-O(CH2)(CR11R11)(CH2)O-；并且
式(IIIe)的化合物
Figure BDA0003364356240000631
其中R3和R3’各自独立地选自由下列各基组成的组：H、烷基取代的氧杂环丁烷基、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基，或者R3和R3’组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：C1-C6烷二基、-(CH2)nO(CH2)n-、-(CH2)nNR9(CH2)n-、-(CH2)nS(CH2)n-、-(CH2)nS(＝O)(CH2)n-和-(CH2)nS(＝O)2(CH2)n-，其中n在每次出现时独立地选自由1和2组成的组，并且每个二价基团任选地被至少一个C1-C6烷基或卤基取代。
在某些实施方案中，式(I)的化合物是式(Ia)的化合物：
Figure BDA0003364356240000632
其中在(Ia)中：
Y选自由CHR5和O组成的组；并且
R3、R3’、R4和R4’各自独立地选自由下列各基组成的组：H、烷基取代的氧杂环丁烷基、任选地取代的C1-C6烷基和任选地取代的C3-C8环烷基；
或选自由R3/R3’、R4/R4’和R3/R4组成的组的一对组合以形成选自由下列各基组成的组的二价基团：C1-C6烷二基、-(CH2)nO(CH2)n-、-(CH2)nNR9(CH2)n-、-(CH2)nS(CH2)n-、-(CH2)nS(＝O)(CH2)n-和-(CH2)nS(＝O)2(CH2)n-，其中n在每次出现时独立地选自由1和2组成的组，并且每个二价基团任选地被至少一个C1-C6烷基或卤基取代。
在某些实施方案中，式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000641
在某些实施方案中，式(Ia)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000642
Figure BDA0003364356240000651
在某些实施方案中，式(II)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000652
Figure BDA0003364356240000661
在某些实施方案中，式(III)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000662
在某些实施方案中，sAg分泌抑制剂/RNA去稳定剂选自以下化合物或其盐：
Figure BDA0003364356240000671
Figure BDA0003364356240000681
Figure BDA0003364356240000691
Figure BDA0003364356240000701
Figure BDA0003364356240000711
Figure BDA0003364356240000721
Figure BDA0003364356240000731
Figure BDA0003364356240000741
Figure BDA0003364356240000751
Figure BDA0003364356240000761
Figure BDA0003364356240000771
Figure BDA0003364356240000781
Figure BDA0003364356240000791
Figure BDA0003364356240000792
Figure BDA0003364356240000801
Figure BDA0003364356240000802
Figure BDA0003364356240000811
Figure BDA0003364356240000821
Figure BDA0003364356240000831
Figure BDA0003364356240000841
Figure BDA0003364356240000851
Figure BDA0003364356240000861
Figure BDA0003364356240000871
Figure BDA0003364356240000881
Figure BDA0003364356240000891
Figure BDA0003364356240000901
Figure BDA0003364356240000911
免疫刺激剂
术语“免疫刺激剂”包括能够调节免疫反应(例如，刺激免疫反应(例如佐剂))的化合物。术语免疫刺激剂包括聚肌苷酸:聚胞苷酸(聚I:C)和干扰素。
术语免疫刺激剂包括IFN基因(STING)和白介素的刺激物的激动剂。术语还包括HBsAg释放抑制剂、TLR-7激动剂(GS-9620、RG-7795)、T细胞刺激剂(GS-4774)、RIG-1抑制剂(SB-9200)和SMAC模拟物(Birinapant)。术语免疫刺激剂还包括抗PD-1抗体及其片段。
siRNA缀合物
适用于实践本文所提供的方法的缀合物描述于以下专利文件中：美国专利号8,828,956；WO 2016/077321；WO 2017/177326；和WO 2018/191278。以上专利文件各自特别地以引用的方式整体并入。
在某些实施方案中，缀合物的siRNA选自以下siRNA序列。应理解，对siRNA编号和SEQ ID NO的以下提及是相对于对siRNA缀合物分子(例如GalNAc-siRNA缀合物)的提及而定义的。
化学修饰的HBV siRNA双链体
Figure BDA0003364356240000921
Figure BDA0003364356240000931
Figure BDA0003364356240000941
2’-O-甲基核苷酸＝小写体；2’-氟核苷酸＝大写体；
硫代磷酸酯接头＝s；未修饰＝大写体
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240000942
其中以下定义适用：
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
或其盐。
在某些实施方案中，
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB和C1-8烷基，所述C1-8烷基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240000961
其中：
B是–N-或-CH-；
L2是任选地被羟基或卤基取代的C1-4亚烷基-O-；并且
n是0、1、2、3、4、5、6或7。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000962
其中Q是–L1-R1；并且
R’是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240000971
Figure BDA0003364356240000981
Figure BDA0003364356240000991
Figure BDA0003364356240001001
在某些实施方案中，环A选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001011
其中：
每个R’独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代；
用*标记的化合价连接至L1或如果L1不存在，则连接至R1；并且
用**标记的化合价连接至L2或如果L2不存在，则连接至R2。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含2-4个糖。
在某些实施方案中，R1具有下式：
Figure BDA0003364356240001021
其中：
B1是包含约1至约20个原子的三价基团并共价地键合至L1、T1和T2。
B2是包含约1至约20个原子的三价基团并共价地键合至T1、T3和T4；
B3是包含约1至约20个原子的三价基团并共价地键合至T2、T5和T6；
T1不存在或是连结基团；
T2不存在或是连结基团；
T3不存在或是连结基团；
T4不存在或是连结基团；
T5不存在或是连结基团；并且
T6不存在或是连结基团。
在某些实施方案中，每个糖独立地选自：
Figure BDA0003364356240001031
其中：
X是NR3，并且Y选自-(C＝O)R4、-SO2R5和-(C＝O)NR6R7；或X是-(C＝O)-并且Y是NR8R9；
R3是氢或(C1-C4)烷基；
R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)卤烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，所述基团任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基；
R10是-OH、-NR8R9或–F；并且
R11是-OH、-NR8R9、-F或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基。
在某些实施方案中，每个糖独立地选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001032
Figure BDA0003364356240001041
在某些实施方案中，每个糖独立地是：
Figure BDA0003364356240001042
在某些实施方案中，T3、T4、T5和T6各自独立地选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001043
其中：
n＝1、2、3。
B1是CH；
B2选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001044
并且
B3选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001051
在某些实施方案中，核酸是寡核苷酸，并且缀合物是
Figure BDA0003364356240001052
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001053
其中以下定义适用：
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
或其盐。
在某些实施方案中，
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB和C1-8烷基，所述C1-8烷基任选地被一或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在某些实施方案中，R1是–C(H)(3-p)(L3-糖)p，
其中每个L3独立地是连结基团；
p是1、2或3；并且
糖是单糖或双糖。
在某些实施方案中，糖是：
Figure BDA0003364356240001071
其中：
X是NR3，并且Y选自-(C＝O)R4、-SO2R5和-(C＝O)NR6R7；或X是-(C＝O)-并且Y是NR8R9；
R3是氢或(C1-C4)烷基；
R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)卤烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，所述基团任选地被一或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基；
R10是-OH、-NR8R9或–F；并且
R11是-OH、-NR8R9、-F或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基。
在某些实施方案中，糖选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001081
在某些实施方案中，糖是：
Figure BDA0003364356240001082
在某些实施方案中，每个L3独立地是具有0至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，每个L3独立地是具有1至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L3是：
Figure BDA0003364356240001091
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001092
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001093
其中：
G是–NH或–O-；
RC是氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)卤烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷酰基、(C3-C20)环烷基、(C3-C20)杂环、芳基、杂芳基、单糖、双糖或三糖；并且其中所述环烷基、杂环、芳基、杂芳基和糖任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羧基、羟基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基。
在某些实施方案中，RC是：
Figure BDA0003364356240001101
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001102
在某些实施方案中，RC是：
Figure BDA0003364356240001111
在某些实施方案中，G是–NH-。
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001112
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001113
其中各RD独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C6)烷基、(C9-C20)烷基甲硅烷基、(RW)3Si-、(C2-C6)烯基、四氢吡喃基、(C1-C6)烷酰基、苯甲酰基、芳基(C1-C3)烷基、TMTr(三甲氧基三苯甲基)、DMTr(二甲氧基三苯甲基)、MMTr(单甲氧基三苯甲基)和Tr(三苯甲基)；并且
每个RW独立地选自由(C1-C4)烷基和芳基组成的组。
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至14个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1通过-NH-、-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝O)-NH-、-NH-(C＝O)-、-(C＝O)-O-、-NH-(C＝O)-NH-或–NH-(SO2)-连接至R1。
在某些实施方案中，L2通过-O-连接至R2。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001131
在某些实施方案中，L2是–CH2-O-或–CH2-CH2-O-。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001132
其中：每个D独立地选自由
Figure BDA0003364356240001133
和–N＝组成的组。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001134
Figure BDA0003364356240001141
其中：
Q1是氢且Q2是R2；或Q1是R2且Q2是氢；并且
Z是–L1-R1。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001151
其中：各D独立地选自由
Figure BDA0003364356240001152
和–N＝组成的组；并且
每个m独立地是1或2。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001153
其中：
Q1是氢且Q2是R2；或Q1是R2且Q2是氢；并且
Z是–L1-R1。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001154
其中：
E是–O-或-CH2-；
n选自由0、1、2、3和4组成的组；并且
n1和n2各自独立地选自由0、1、2和3组成的组。
在某些实施方案中，缀合物是选自由以下组成的组的缀合物：
Figure BDA0003364356240001161
其中：Z是–L1-R1。
在某些实施方案中，-A-L2-R2部分是：
Figure BDA0003364356240001162
其中：
Q1是氢且Q2为R2；或Q1是R2且Q2是氢；并且
每个q独立地是0、1、2、3、4或5。
在某些实施方案中，R2是寡核苷酸。
在某些实施方案中，R2是siRNA。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001171
在某些实施方案中，R1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001181
其中：
RS是
Figure BDA0003364356240001182
n是2、3或4；并且
x是1或2。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001191
在某些实施方案中，A不存在、是苯基、吡咯烷基或环戊基。
在某些实施方案中，L2是任选地被羟基取代的C1-4亚烷基-O-。
在某些实施方案中，L2是–CH2O-、-CH2CH2O-或-CH(OH)CH2O-。
在某些实施方案中，每个RA独立地是羟基或任选地被羟基取代的C1-8烷基。
在某些实施方案中，每个RA独立地选自由羟基、甲基和–CH2OH组成的组。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001192
其中：
B是–N-或-CH-；
L2是任选地被羟基或卤基取代的C1-4亚烷基-O-；并且
n是0、1、2、3、4、5、6或7。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001201
其中Q是–L1-R1；并且
R’是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001202
其中Q是–L1-R1。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001211
Figure BDA0003364356240001221
Figure BDA0003364356240001231
Figure BDA0003364356240001241
Figure BDA0003364356240001251
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001252
其中以下定义适用：
R1d选自：
Figure BDA0003364356240001261
Xd是C2-10亚烷基；
nd是0或1；
R2d是核酸；并且
R3d是H或保护基。
在某些实施方案中，R1d是：
Figure BDA0003364356240001271
在某些实施方案中，R1d是：
Figure BDA0003364356240001272
在某些实施方案中，Xd是C8亚烷基。
在某些实施方案中，nd是0。
在某些实施方案中，R2d是siRNA。
在某些实施方案中，R3d是H。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001281
其中以下定义适用：
R1d选自：
Figure BDA0003364356240001282
Xd是C2-8亚烷基；
nd是0或1；
Pg1是H或合适的保护基；并且
R3d是H或保护基。
在某些实施方案中，Pg1是TMTr(三甲氧基三苯甲基)、DMTr(二甲氧基三苯甲基)、MMTr(单甲氧基三苯甲基)或Tr(三苯甲基)。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001291
Figure BDA0003364356240001301
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001302
其中以下定义适用：
R1是H或合成活化基团；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
各RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001311
其中以下定义适用：
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是H或合成活化基团；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001321
其中：
B是–N-或-CH-；
L2是任选地被羟基或卤基取代的C1-4亚烷基-O-；并且
n是0、1、2、3、4、5、6或7。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001322
其中：
Q是–L1-R1；并且
R’是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001331
其中：Q是–L1-R1。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001332
其中以下定义适用：
B是–N-或-CH-；
L1不存在或是连结基团；
L2是任选地被羟基或卤基取代的C1-4亚烷基-O-；
n是0、1、2、3、4、5、6或7；
R1是H或合成活化基团；并且
R2是H或合成活化基团。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001341
其中Q是–L1-R1；
L1不存在或是连结基团；
R’是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代；
R1是H或合成活化基团；并且
R2是H或合成活化基团。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001342
Figure BDA0003364356240001351
其中：
Q是–L1-R1；
L1不存在或是连结基团；
R1是H或合成活化基团；并且
R2是H或合成活化基团。
在某些实施方案中，R1是H或可衍生自DCC、HOBt、EDC、BOP、PyBOP或HBTU的合成活化基团。
在某些实施方案中，R2是H、乙酸盐、三氟甲磺酸盐、甲磺酸盐或琥珀酸盐。
在某些实施方案中，R1是可衍生自DCC、HOBt、EDC、BOP、PyBOP或HBTU的合成活化基团。
在某些实施方案中，R2是乙酸盐、三氟甲磺酸盐、甲磺酸盐或琥珀酸盐。
在某些实施方案中，L1是具有5至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-、-NH-、-NH-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-或–S-置换。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001352
其中以下定义适用：
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
B是二价的并且选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001361
其中：
每个R’独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代；
用*标记的化合价连接至L1或如果L1不存在，则连接至R1；并且
用**标记的化合价连接至L2或如果L2不存在，则连接至R2；
或其盐。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含2-8个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含2-4个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含3-8个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含3-6个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含3-4个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含3个糖。.
在某些实施方案中，靶向配体R1包含4个糖。
在某些实施方案中，并且因为其可适用于缀合物定义中的任何一个，所以靶向部分R1具有下式：
Figure BDA0003364356240001371
其中：
B1是包含约1至约20个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
B2是包含约1至约20个原子的三价基团并且共价地键合至T1、T3和T4；
B3是包含约1至约20个原子的三价基团并且共价地键合至T2、T5和T6；
T1不存在或是连结基团；
T2不存在或是连结基团；
T3不存在或是连结基团；
T4不存在或是连结基团；
T5不存在或是连结基团；并且
T6不存在或是连结基团。
在某些实施方案中，每个糖独立地选自：
Figure BDA0003364356240001381
其中：
X是NR3，并且Y选自-(C＝O)R4、-SO2R5和-(C＝O)NR6R7；或X是-(C＝O)-且Y是NR8R9；
R3是氢或(C1-C4)烷基；
R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)卤烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，所述基团任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基；
R10是-OH、-NR8R9或–F；并且
R11是-OH、-NR8R9、-F或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基。
在某些实施方案中，每个糖独立地选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001391
在某些实施方案中，每个糖独立地是：
Figure BDA0003364356240001392
在某些实施方案中，T1与T2中的一个不存在。
在某些实施方案中，T1与T2都不存在。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至50个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至20个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至50个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，或其盐，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-或-NRX-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代(＝O)的取代基取代。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至20个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-置换并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代(＝O)的取代基取代。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至20个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-置换并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代(＝O)的取代基取代。
在某些实施方案中，T3、T4、T5和T6中的至少一个是：
Figure BDA0003364356240001411
其中：
n＝1、2、3。
在某些实施方案中，T3、T4、T5和T6各自独立地选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001412
其中：
n＝1、2、3。
在某些实施方案中，T1与T2中的至少一个是甘氨酸
在某些实施方案中，T1与T2各自是甘氨酸。
在某些实施方案中，B1是包含1至15个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B1为包含1至10个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B1包含(C1-C6)烷基
在某些实施方案中，B1包含C3-8环烷基。
在某些实施方案中，B1包含甲硅烷基。
在某些实施方案中，B1包含D-或L-氨基酸。
在某些实施方案中，B1包含糖。
在某些实施方案中，B1包含磷酸基。
在某些实施方案中，B1包含膦酸基。
在某些实施方案中，B1包含芳基。
在某些实施方案中，B1包含苯环。
在某些实施方案中，B1是苯环。
在某些实施方案中，B1是CH。
在某些实施方案中，B1包含杂芳基。
在某些实施方案中，B1是：
Figure BDA0003364356240001421
在某些实施方案中，B2是包含1至15个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B2是包含1至10个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B2包含(C1-C6)烷基
在某些实施方案中，B2包含C3-8环烷基。
在某些实施方案中，B2包含甲硅烷基。
在某些实施方案中，B2包含D-或L-氨基酸。
在某些实施方案中，B2包含糖。
在某些实施方案中，B2包含磷酸基。
在某些实施方案中，B2包含膦酸基。
在某些实施方案中，B2包含芳基。
在某些实施方案中，B2包含苯环。
在某些实施方案中，B2是苯环。
在某些实施方案中，B2是CH。
在某些实施方案中，B2包含杂芳基。
在某些实施方案中，B2选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001431
在某些实施方案中，B3是包含1至15个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B3是包含1至10个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B3包含(C1-C6)烷基
在某些实施方案中，B3包含C3-8环烷基。
在某些实施方案中，B3包含甲硅烷基。
在某些实施方案中，B3包含D-或L-氨基酸。
在某些实施方案中，B3包含糖。
在某些实施方案中，B3包含磷酸基。
在某些实施方案中，B3包含膦酸基。
在某些实施方案中，B3包含芳基。
在某些实施方案中，B3包含苯环。
在某些实施方案中，B3是苯环。
在某些实施方案中，B3是CH。
在某些实施方案中，B3包含杂芳基。
在某些实施方案中，B3选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001441
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001451
在某些实施方案中，L1通过选自由以下组成的组的键连接至B1：-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝O)-NH-、-NH-(C＝O)、-(C＝O)-O-、-NH-(C＝O)-NH-或–NH-(SO2)-。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001452
在某些实施方案中，L2通过-O-连接至R2。
在某些实施方案中，L2是任选地被羟基取代的C1-4亚烷基-O-。
在某些实施方案中，L2通过-O-连接至R2。
在某些实施方案中，L2不存在。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001461
Figure BDA0003364356240001471
Figure BDA0003364356240001481
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001482
Figure BDA0003364356240001491
或其盐。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001492
其中以下定义适用：
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是双链siRNA分子；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
或其盐。
在某些实施方案中，
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是双链siRNA分子；
环A不存在、为3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB和C1-8烷基，所述C1-8烷基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在某些实施方案中，R1是–C(H)(3-p)(L3-糖)p，
其中每个L3独立地是连结基团；
p是1、2或3；并且
糖是单糖或双糖。
在某些实施方案中，糖是：
Figure BDA0003364356240001511
其中：
X是NR3，并且Y选自-(C＝O)R4、-SO2R5和-(C＝O)NR6R7；或X是-(C＝O)-且Y是NR8R9；
R3是氢或(C1-C4)烷基；
R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)卤烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，所述基团任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基；
R10是-OH、-NR8R9或–F；并且
R11是-OH、-NR8R9、-F或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基。
在某些实施方案中，糖选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001512
Figure BDA0003364356240001521
在某些实施方案中，糖是：
Figure BDA0003364356240001522
在某些实施方案中，每个L3独立地是具有0至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，各L3独立地是具有1至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L3是：
Figure BDA0003364356240001531
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001532
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001533
其中：
G是–NH-或–O-；
RC是氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)卤烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C6)烷酰基、(C3-C20)环烷基、(C3-C20)杂环、芳基、杂芳基、单糖、双糖或三糖；并且其中所述环烷基、杂环、芳基、杂芳基和糖任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羧基、羟基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基。
在某些实施方案中，RC是：
Figure BDA0003364356240001541
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001542
在某些实施方案中，RC是：
Figure BDA0003364356240001543
在某些实施方案中，G是–NH-。
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001544
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240001551
其中每个RD独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C6)烷基、(C9-C20)烷基甲硅烷基、(RW)3Si-、(C2-C6)烯基、四氢吡喃基、(C1-C6)烷酰基、苯甲酰基、芳基(C1-C3)烷基、TMTr(三甲氧基三苯甲基)、DMTr(二甲氧基三苯甲基)、MMTr(单甲氧基三苯甲基)和Tr(三苯甲基)；并且
每个RW独立地选自由(C1-C4)烷基和芳基组成的组。
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至14个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1通过-NH-、-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝O)-NH-、-NH-(C＝O)-、-(C＝O)-O-、-NH-(C＝O)-NH-或–NH-(SO2)-连接至R1。
在某些实施方案中，L2通过-O-连接至R2。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001561
在某些实施方案中，L2是–CH2-O-或–CH2-CH2-O-。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001571
其中：
每个D独立地选自由
Figure BDA0003364356240001572
和–N＝组成的组。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001573
Figure BDA0003364356240001581
其中：
Q1是氢且Q2是R2；或Q1是R2且Q2是氢；并且
Z是–L1-R1。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001582
其中：
每个D独立地选自由
Figure BDA0003364356240001583
和–N＝组成的组；并且
每个m独立地是1或2。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001584
其中：
Q1是氢且Q2为R2；或Q1是R2且Q2是氢；并且
Z是–L1-R1。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001591
其中：
E是–O-或-CH2-；
n选自由0、1、2、3和4组成的组；并且
n1和n2各自独立地选自由0、1、2和3组成的组。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001592
其中：Z是–L1-R1。
在某些实施方案中，-A-L2-R2部分是：
Figure BDA0003364356240001601
其中：
Q1是氢且Q2是R2；或Q1是R2且Q2是氢；并且
每个q独立地是0、1、2、3、4或5。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001602
Figure BDA0003364356240001611
在某些实施方案中，R1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001612
Figure BDA0003364356240001621
其中：
RS是
Figure BDA0003364356240001622
n是2、3或4；并且
x是1或2。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001623
在某些实施方案中，A不存在、是苯基、吡咯烷基或环戊基。
在某些实施方案中，L2是任选地被羟基取代的C1-4亚烷基-O-。
在某些实施方案中，L2是–CH2O-、-CH2CH2O-或-CH(OH)CH2O-。
在某些实施方案中，每个RA独立地是羟基或任选地被羟基取代的C1-8烷基。
在某些实施方案中，每个RA独立地选自由羟基、甲基和–CH2OH组成的组。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001631
其中：
B是–N-或-CH-；
L2是任选地被羟基或卤基取代的C1-4亚烷基-O-；并且
n是0、1、2、3、4、5、6或7。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001641
其中Q是–L1-R1；并且
R’是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001642
其中Q是–L1-R1。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001651
Figure BDA0003364356240001661
Figure BDA0003364356240001671
Figure BDA0003364356240001681
及其药学上可接受的盐，其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001691
其中：
R1d选自：
Figure BDA0003364356240001692
Xd是C2-10亚烷基；
nd是0或1；
R2d是双链siRNA分子；并且
R3d是H或保护基。
在某些实施方案中，R1d是：
Figure BDA0003364356240001701
在某些实施方案中，R1d是：
Figure BDA0003364356240001702
在某些实施方案中，Xd是C8亚烷基。
在某些实施方案中，nd是0。
在某些实施方案中，R3d是H。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001711
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001721
其中以下定义适用：
R1是H或合成活化基团；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是双链siRNA分子；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
或其盐。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001731
其中：
B是–N-或-CH-；
L2是任选地被羟基或卤基取代的C1-4亚烷基-O-；并且
n是0、1、2、3、4、5、6或7。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001732
其中：
Q是–L1-R1；并且
R’是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001741
其中：Q是–L1-R1。
在某些实施方案中，R1是H或可衍生自DCC、HOBt、EDC、BOP、PyBOP或HBTU的合成活化基团。
在某些实施方案中，R1是可衍生自DCC、HOBt、EDC、BOP、PyBOP或HBTU的合成活化基团。
在某些实施方案中，L1是具有5至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-、-NH-、-NH-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-或–S-置换。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240001742
其中以下定义适用：
R1是靶向配体；
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是双链siRNA分子；
B是二价的并且选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001751
其中：
每个R’独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代；
用*标记的化合价连接至L1或如果L1不存在，则连接至R1；并且
用**标记的化合价连接至L2或如果L2不存在，则连接至R2；
或其盐。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含2-8个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含2-4个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含3-8个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含3-6个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含3-4个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含3个糖。
在某些实施方案中，靶向配体R1包含4个糖。
在某些实施方案中，靶向部分R1具有下式：
Figure BDA0003364356240001761
其中：
B1是包含约1至约20个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
B2是包含约1至约20个原子的三价基团并且共价地键合至T1、T3和T4；
B3是包含约1至约20个原子的三价基团并且共价地键合至T2、T5和T6；
T1不存在或是连结基团；
T2不存在或是连结基团；
T3不存在或是连结基团；
T4不存在或是连结基团；
T5不存在或是连结基团；并且
T6不存在或是连结基团。
在某些实施方案中，每个糖独立地选自：
Figure BDA0003364356240001771
其中：
X是NR3，并且Y选自-(C＝O)R4、-SO2R5和-(C＝O)NR6R7；或X是-(C＝O)-且Y是NR8R9；
R3是氢或(C1-C4)烷基；
R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)卤烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，所述基团任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基；
R10是-OH、-NR8R9或–F；并且
R11是-OH、-NR8R9、-F或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基。
在某些实施方案中，每个糖独立地选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001781
在某些实施方案中，每个糖独立地是：
Figure BDA0003364356240001782
在某些实施方案中，T1与T2中的一个不存在。
在某些实施方案中，T1与T2都不存在。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至50个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至20个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至50个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，或其盐，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-或-NRX-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代(＝O)的取代基取代。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至20个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-置换并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代(＝O)的取代基取代。
在某些实施方案中，T1、T2、T3、T4、T5和T6各自独立地不存在或是具有1至20个碳原子的分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-置换并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代(＝O)的取代基取代。
在某些实施方案中，T3、T4、T5和T6中的至少一个是：
Figure BDA0003364356240001801
其中：
n＝1、2、3。
在某些实施方案中，T3、T4、T5和T6各自独立地选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001802
其中：
n＝1、2、3。
在某些实施方案中，T1与T2中的至少一个是甘氨酸。
在某些实施方案中，T1与T2各自是甘氨酸。
在某些实施方案中，B1是包含1至15个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B1是包含1至10个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B1包含(C1-C6)烷基
在某些实施方案中，B1包含C3-8环烷基。
在某些实施方案中，B1包含甲硅烷基。
在某些实施方案中，B1包含D-或L-氨基酸。
在某些实施方案中，B1包含糖。
在某些实施方案中，B1包含磷酸基。
在某些实施方案中，B1包含膦酸基。
在某些实施方案中，B1包含芳基。
在某些实施方案中，B1包含苯环。
在某些实施方案中，B1是苯环。
在某些实施方案中，B1是CH。
在某些实施方案中，B1包含杂芳基。
在某些实施方案中，B1选自
Figure BDA0003364356240001811
在某些实施方案中，B2是包含1至15个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B2是包含1至10个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B2包含(C1-C6)烷基。
在某些实施方案中，B2包含C3-8环烷基。
在某些实施方案中，B2包含甲硅烷基。
在某些实施方案中，B2包含D-或L-氨基酸。
在某些实施方案中，B2包含糖。
在某些实施方案中，B2包含磷酸基。
在某些实施方案中，B2包含膦酸基。
在某些实施方案中，B2包含芳基。
在某些实施方案中，B2包含苯环。
在某些实施方案中，B2是苯环。
在某些实施方案中，B2是CH。
在某些实施方案中，B2包含杂芳基。
在某些实施方案中，B2选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001821
在某些实施方案中，B3是包含1至15个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B3是包含1至10个原子的三价基团并且共价地键合至L1、T1和T2。
在某些实施方案中，B3包含(C1-C6)烷基。
在某些实施方案中，B3包含C3-8环烷基。
在某些实施方案中，B3包含甲硅烷基。
在某些实施方案中，B3包含D-或L-氨基酸。
在某些实施方案中，B3包含糖。
在某些实施方案中，B3包含磷酸基。
在某些实施方案中，B3包含膦酸基。
在某些实施方案中，B3包含芳基。
在某些实施方案中，B3包含苯环。
在某些实施方案中，B3是苯环。
在某些实施方案中，B3是CH。
在某些实施方案中，B3包含杂芳基。
在某些实施方案中，B3选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001831
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001841
在某些实施方案中，L1通过选自由以下组成的组的键连接至B1：-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝O)-NH-、-NH-(C＝O)、-(C＝O)-O-、-NH-(C＝O)-NH-或–NH-(SO2)-。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240001842
在某些实施方案中，L2通过-O-连接至R2。
在某些实施方案中，L2是任选地被羟基取代的C1-4亚烷基-O-。
在某些实施方案中，L2通过-O-连接至R2。
在某些实施方案中，L2不存在。
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240001851
Figure BDA0003364356240001861
Figure BDA0003364356240001871
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001872
Figure BDA0003364356240001881
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是GalNAc缀合物：
A-B-C
其中A是靶向配体；
B是任选的接头；并且
C是siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001882
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001891
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001892
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001901
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001902
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001911
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001912
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001921
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001922
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001931
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001932
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001941
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001942
其中R2是双链siRNA分子。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001951
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001952
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001961
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001962
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001971
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001981
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240001991
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240002001
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240002002
其中以下定义适用：
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
或其盐。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240002011
Figure BDA0003364356240002021
其中以下定义适用：
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
环A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
各RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
RB是氢或保护基；并且
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
或其盐。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240002022
Figure BDA0003364356240002031
其中以下定义适用：
L1不存在或是连结基团；
L2不存在或是连结基团；
R2是核酸；
B是二价的并且选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240002032
其中：
每个R’独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代；
用*标记的化合价连接至L1或如果L1不存在，则连接至R1；并且
用**标记的化合价连接至L2或如果L2不存在，则连接至R2；
或其盐。
在某些实施方案中，L1和L2独立地是具有1至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240002041
在某些实施方案中，L1通过选自由以下组成的组的键连接至B1：-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝O)-NH-、-NH-(C＝O)、-(C＝O)-O-、-NH-(C＝O)-NH-或–NH-(SO2)-。
在某些实施方案中，L1选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240002051
在某些实施方案中，L2通过-O-连接至R2。
在某些实施方案中，L2是任选地被羟基取代的C1-4亚烷基-O-。
在某些实施方案中，L2不存在。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240002052
其中R2是核酸。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240002061
其中R2是核酸。
在某些实施方案中，缀合物是
Figure BDA0003364356240002062
其中R2是核酸。
在某些实施方案中，缀合物是下式的缀合物：
Figure BDA0003364356240002063
其中以下定义适用：
R1是糖；
L1是具有0至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个选自氧代(＝O)和卤基的取代基取代；
B是5-10元芳基或5-10元杂芳基，所述5-10元芳基或5-10元杂芳基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C3-C6)环烷基和(C3-C6)环烷基(C1-C6)烷基；
L2是具有0至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个碳原子任选地被-O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或-S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个选自氧代(＝O)和卤基的取代基取代；
R2是糖；
L3不存在或是连结基团；
A不存在、是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
每个RA独立地选自由下列各基组成的组：氢、羟基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORa、C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基；其中所述C1-10烷基C2-10烯基和C2-10炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和C1-3烷氧基的基团取代；
n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
L4不存在或是连结基团；
R3是核酸；
Ra是氢、保护基、至固体载体的共价键、或至结合至固体载体的连结基团L5的键；并且
L5是连结基团；
或其盐。
在某些实施方案中，A不存在。
在某些实施方案中，A是3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基。
在某些实施方案中，B是5-10元芳基。
在某些实施方案中，B是萘基或苯基。
在某些实施方案中，B是苯基。
在某些实施方案中，基团：
Figure BDA0003364356240002081
是：
Figure BDA0003364356240002082
在某些实施方案中，B是5-10元杂芳基。
在某些实施方案中，B是吡啶基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、咪唑基、噻唑基、二噁唑基或噁唑基。
在某些实施方案中，基团：
Figure BDA0003364356240002091
是：
Figure BDA0003364356240002092
在某些实施方案中，基团：
Figure BDA0003364356240002093
是：
Figure BDA0003364356240002094
在某些实施方案中，L1是具有0至20个碳原子的二价、未分支、饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个选自氧代(＝O)和卤基的取代基取代。
在某些实施方案中，L1是具有0至12个碳原子的二价、未分支、饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-、-NRX-C(＝O)-或-C(＝O)-NRX-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基。
在某些实施方案中，L1是：
–C(＝O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-，
–C(＝O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-，
–C(＝O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-或
–C(＝O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-。
在某些实施方案中，L2是具有0至20个碳原子的二价、未分支、饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个选自氧代(＝O)和卤基的取代基取代。
在某些实施方案中，L2是具有0至12个碳原子的二价、未分支、饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-、-NRX-C(＝O)-或-C(＝O)-NRX-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基。
在某些实施方案中，L2是：
–C(＝O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-，
–C(＝O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-，
–C(＝O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-或
–C(＝O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-。
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240002111
其中：
X是NR20且Y选自-(C＝O)R21、-SO2R22和-(C＝O)NR23R24；或X是-(C＝O)-且Y是NR25R26；或X为-NR37R38且Y不存在
R20是氢或(C1-C4)烷基；
R21、R22、R23、R24、R25和R26各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；
R27是-OH、-NR25R26或-F；
R28是-OH、-NR25R26或-F；
R29是-OH、-NR25R26、-F、-N3、-NR35R36或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、芳基和(C1-C4)烷氧基，其中任何(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基任选地被一个或多个独立地选自由卤基组成的组的基团取代，并且其中任何芳基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、硝基、氰基、氨基、(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C8)烷酰基、(C1-C8)烷氧羰基、(C1-C8)烷酰氧基和(C3-C6)环烷基，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C8)烷酰基、(C1-C8)烷氧羰基、(C1-C8)烷酰氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；
每个R35和R36独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由卤基和(C1-C4)烷氧基组成的组的基团取代；或R35和R36与它们所连接至的氮一起形成5-6元杂芳环，所述杂芳环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、芳基和(C3-C6)环烷基，其中任何芳基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个基团R39取代；
R37和R38各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C8)烷酰基、(C1-C8)烷氧羰基、(C1-C8)烷酰氧基和(C3-C6)环烷基，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C8)烷酰基、(C1-C8)烷氧羰基、(C1-C8)烷酰氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；或R37和R38与它们所连接至的氮一起形成5-8元杂环，所述5-8元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、氧代(＝O)、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基，其中任何(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基任选地被一个或多个独立地选自卤基的基团取代；并且
每个R39独立地选自由(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基组成的组，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自卤基的基团取代。
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240002121
Figure BDA0003364356240002131
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240002132
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240002133
在某些实施方案中，R1是：
Figure BDA0003364356240002134
Figure BDA0003364356240002141
在某些实施方案中，R2是：
Figure BDA0003364356240002142
其中：
X是NR20且Y选自-(C＝O)R21、-SO2R22和-(C＝O)NR23R24；或X是-(C＝O)-且Y是NR25R26；或X是-NR37R38且Y不存在
R20是氢或(C1-C4)烷基；
R21、R22、R23、R24、R25和R26各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；
R27是-OH、-NR25R26或-F；
R28是-OH、-NR25R26或-F；
R29是-OH、-NR25R26、-F、-N3、-NR35R36或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、芳基和(C1-C4)烷氧基，其中任何(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基任选地被一个或多个独立地选自由卤基组成的组的基团取代，并且其中任何芳基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、硝基、氰基、氨基、(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C8)烷酰基、(C1-C8)烷氧羰基、(C1-C8)烷酰氧基和(C3-C6)环烷基，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C8)烷酰基、(C1-C8)烷氧羰基、(C1-C8)烷酰氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；
每个R35和R36独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由卤基和(C1-C4)烷氧基组成的组的基团取代；或R35和R36与它们所连接至的氮一起形成5-6元杂芳环，所述杂芳环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、芳基和(C3-C6)环烷基，其中任何芳基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个基团R39取代；
每个R37和R38独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C8)烷酰基、(C1-C8)烷氧羰基、(C1-C8)烷酰氧基和(C3-C6)环烷基，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C8)烷酰基、(C1-C8)烷氧羰基、(C1-C8)烷酰氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基；或R37和R38与它们所连接至的氮一起形成5-8元杂环，所述5-8元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、氧代(＝O)、(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基，其中任何(C1-C4)烷基和(C1-C4)烷氧基任选地被一个或多个独立地选自卤基的基团取代；并且
每个R39独立地选自由(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基组成的组，其中任何(C1-C8)烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自卤基的基团取代。
在某些实施方案中，R2是：
Figure BDA0003364356240002161
在某些实施方案中，R2是：
Figure BDA0003364356240002162
在某些实施方案中，R2是：
Figure BDA0003364356240002163
在某些实施方案中，R2是：
Figure BDA0003364356240002164
Figure BDA0003364356240002171
在某些实施方案中，L3是具有0至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L3是具有1至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L3是具有1至300个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中碳原子中的一个或多个任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个卤基或氧代(＝O)取代。
在某些实施方案中，L3是：
Figure BDA0003364356240002181
在某些实施方案中，L3通过-NH-、-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝O)-NH-、-NH-(C＝O)-、-(C＝O)-O-、-NH-(C＝O)-NH-或–NH-(SO2)-连接至B。
在某些实施方案中，L4是具有0至50个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L4是具有1至20个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自下列各基的取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)环烷基、(C1-C6)烷酰基、(C1-C6)烷酰氧基、(C1-C6)烷氧羰基、(C1-C6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代(＝O)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
在某些实施方案中，L4是具有1至300个碳原子的二价、分支或未分支、饱和或不饱和烃链，其中碳原子中的一个或多个任选地被–O-、-NRX-、-NRX-C(＝O)-、-C(＝O)-NRX-或–S-置换，并且其中RX是氢或(C1-C6)烷基，并且其中所述烃链任选地被一个或多个卤基或氧代(＝O)取代。
在某些实施方案中，L4通过-O-连接至R2。
在某些实施方案中，基团：
Figure BDA0003364356240002191
选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240002192
其中
每个R’独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代。
在某些实施方案中，基团：
Figure BDA0003364356240002201
选自由下列各基组成的组：
Figure BDA0003364356240002202
其中：
每个R’独立地是C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中所述C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基任选地被卤基或羟基取代；
用*标记的化合价连接至L3；并且
用**标记的化合价连接至R3。
在某些实施方案中，基团：
Figure BDA0003364356240002203
是：
Figure BDA0003364356240002211
在某些实施方案中，缀合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240002212
Figure BDA0003364356240002221
Figure BDA0003364356240002231
Figure BDA0003364356240002241
Figure BDA0003364356240002251
其中：R3是核酸；或其盐。
除非另有说明，否则术语“烷基”单独或作为另一取代基的一部分时意指具有所示碳原子数目的直链或支链烃基(即，C1-8意指1至8个碳)。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。术语“烯基”是指具有一个或多个双键的不饱和烷基。类似地，术语“炔基”是指具有一个或多个三键的不饱和烷基。此类不饱和烷基的实例包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基、以及高级同系物和异构物。
术语“亚烷基”单独或作为另一取代基的一部分时意指衍生自烷烃(包括直链和支链烷烃)的二价基团，如-CH2CH2CH2CH2-和-CH(CH3)CH2CH2-所例示。
术语“环烷基”、“碳环的”或“碳环”是指具有3至20个总环原子数的烃环系统(例如，3-20元环烷基是具有3至20个环原子的环烷基，或C3-20环烷基是具有3-20个碳原子的环烷基)，并且对于3-5元环烷基，是完全饱和的或具有不超过一个在环顶点之间的双键并且对于6元环烷基或更高级的环烷基，是完全饱和的或具有不超过两个在环顶点之间的双键。如本文所用，“环烷基”、“碳环的”或“碳环”还意在指双环、多环和螺环烃环系统，诸如例如双环[2.2.1]庚烷、蒎烷、双环[2.2.1]辛烷、金刚烷、降冰片烯、螺环C5-12烷烃等。如本文所用，术语“烯基”、“炔基”、“环烷基”、“碳环”和“碳环的”意在包括其单卤化和多卤化变体。
术语“杂环烷基”、“杂环的”或“杂环”是指具有3-20个总环原子的饱和或部分不饱和环系统基团(例如，3-20元杂环烷基是具有3-20个环原子的杂环烷基，C2-19杂环烷基是具有3-10个环原子的杂环烷基，其中2-19个环原子是碳)，其含有1至10个选自N、O和S的杂原子作为环原子，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。除非另有说明，否则“杂环烷基”、“杂环的”或“杂环”可以是单环、双环、螺环或多环环系统。“杂环烷基”、“杂环的”或“杂环”的非限制性实例包括吡咯烷、哌啶、N-甲基哌啶、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑啶酮、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、哌啶、嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮、1,4-二噁烷、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环(quinuclidine)、托烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷、(1s,4s)-2-氮杂双环[2.2.2]辛烷、(1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.2]辛烷等。“杂环烷基”、“杂环的”或“杂环”基团可通过一个或多个环碳或杂原子连接至分子的其余部分。“杂环烷基”、“杂环的”或“杂环”可包括其单卤化和多卤化变体。
术语“烷氧基”和“烷硫基”以其常规意义使用并且是指那些经由氧原子(“氧基”)或硫基连接至分子的其余部分的烷基，并且进一步包括其单卤化和多卤化变体。
除非另有说明，否则术语“卤基”或“卤素”单独或作为另一取代基的一部分时意指氟、氯、溴或碘原子。术语“(卤基)烷基”意在包括“烷基”与“卤烷基”取代基两者。另外，术语“卤烷基”意在包括单卤烷基和多卤烷基。例如，术语“C1-4卤烷基”意在包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、二氟甲基等。
术语“芳基”意指具有6-14个碳原子的碳环芳族基团，无论是否稠合至一个或多个基团。除非另有说明，否则芳基的实例包括苯基、萘基、联苯等。
术语“杂芳基”是指含有1至5个选自N、O和S的杂原子的芳环，其中氮和硫原子任选地被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接至分子的其余部分。杂芳基的实例包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲嗪基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻噁唑基(benzothiaxolyl)、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等。
术语糖包括单糖、双糖和三糖。所述术语包括葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖和核糖以及去氧糖，诸如脱氧核糖和氨基糖，诸如半乳糖胺。糖衍生物可如国际专利申请公布号WO96/34005和WO 97/03995中所述方便地制备。糖可方便地通过醚键、硫醚键(例如S-糖苷)、胺氮(例如N-糖苷)或碳-碳键(例如C-糖苷)连接至化合物的其余部分。在一个实施方案中，糖可方便地通过醚键连接至化合物的其余部分。在一个实施方案中，术语糖包括下式的基团：
Figure BDA0003364356240002271
其中：
X是NR3，并且Y选自-(C＝O)R4、-SO2R5和-(C＝O)NR6R7；或X是-(C＝O)-且Y是NR8R9；
R3是氢或(C1-C4)烷基；
R4、R5、R6、R7、R8和R9各自独立地选自由下列各基组成的组：氢、(C1-C8)烷基、(C1-C8)卤烷基、(C1-C8)烷氧基和(C3-C6)环烷基，所述基团任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基；
R10是-OH、-NR8R9或–F；并且
R11是-OH、-NR8R9、-F或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由下列各基组成的组的基团取代：卤基、羟基、羧基、氨基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤烷基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)卤烷氧基。在另一个实施方案中，糖可选自由以下组成的组：
Figure BDA0003364356240002281
在另一个实施方案中，糖可以是：
Figure BDA0003364356240002282
在某些实施方案中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 1。在某些实施方案中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 2。在下文所述的实验中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 2。siRNA缀合物的一个实例在下文中提供，在某些实施方案中，其包括siRNA 1，并且在其他实施方案中，其包括siRNA 2。
Figure BDA0003364356240002291
Figure BDA0003364356240002292
寡聚核苷酸
所述寡聚核苷酸可以被设计以靶向HBV基因组的一个或多个基因和/或转录物。此类siRNA分子的实例是本文的表A、B和C中所阐述的siRNA分子。在某些实施方案中，siRNA分子及其组合是WO 2016/054421或WO 2017/019891中所描述的那些。
术语靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸还包括Arrowhead-ARC-520(参见美国专利号8,809,293；以及Wooddell CI等人,Molecular Therapy,2013,21,5,973–985)。
术语靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸还包括分离的双链siRNA分子，其各自包括有义股和与有义股杂交的反义股。siRNA靶向HBV基因组的一个或多个基因和/或转录物。
术语“乙型肝炎病毒”(缩写为HBV)是指正肝病毒属(Orthohepadnavirus)的病毒种类，其是嗜肝DNA病毒家族的一部分并且能够在人类中引起肝脏炎症。
术语“丁型肝炎病毒”(缩写为HDV)是指D型肝炎病毒科(Deltaviridae)的病毒种类，其能够在人类中引起肝脏炎症。
如本文所用，术语“小干扰RNA”或“siRNA”是指当siRNA与靶基因或序列在同一细胞中时能够减少或抑制所述靶基因或序列的表达(例如，通过介导与siRNA序列互补的mRNA的降解或抑制其转译)的双链RNA(即双链体RNA)。siRNA可与靶基因或序列具有实质性或完全一致性，或可包含错配区域(即错配基序)。在某些实施方案中，siRNA的长度可为约19-25个(双链体)核苷酸，并且长度优选为约20-24、21-22或21-23个(双链体)核苷酸。siRNA双链体可包含具有约1至约4个核苷酸或约2至约3个核苷酸的3’突出端和5’磷酸末端。siRNA的实例包括但不限于由两个单独的链分子组装而成的双链多核苷酸分子，其中一条链是有义链且另一条链是互补反义链。
siRNA优选以化学方式合成。siRNA还可通过用大肠杆菌RNase III或Dicer酶裂解更长的dsRNA(例如，长度大于约25个核苷酸的dsRNA)而产生。这些酶将dsRNA加工成生物活性siRNA(参见，例如Yang等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,99:9942-9947(2002)；Calegari等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,99:14236(2002)；Byrom等人,Ambion TechNotes,10(1):4-6(2003)；Kawasaki等人,Nucleic Acids Res.,31:981-987(2003)；Knight等人,Science,293:2269-2271(2001)；以及Robertson等人,J.Biol.Chem.,243:82(1968))。dsRNA的长度优选为至少50个核苷酸至约100、200、300、400或500个核苷酸。dsRNA的长度可长达1000、1500、2000、5000个核苷酸或更长。dsRNA可编码整个基因转录物或部分基因转录物。在某些情况下，siRNA可由质粒编码(例如，转录为自动地折叠成具有发夹环的双链体的序列)。
短语“抑制靶基因的表达”是指siRNA沉默、减少或抑制靶基因(例如，HBV基因组内的基因)的表达的能力。为了检查基因沉默的程度，将测试样品(例如，来自表达靶基因所关注的有机体的生物样品或在表达靶基因的培养物中的细胞样品)与沉默、减少或抑制靶基因的表达的siRNA接触。将测试样品中的靶基因的表达与未与siRNA接触的对照样品(例如，来自表达靶基因所关注的有机体的生物样品或在表达靶基因的培养物中的细胞样品)中的靶基因的表达相比。对照样品(例如，表达靶基因的样品)可赋予100％的值。在具体实施方案中，当测试样品相对于对照样品(例如，仅缓冲液、靶向不同基因的siRNA序列、错义siRNA序列等)的值是约100％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％、80％、79％、78％、77％、76％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或0％时，实现靶基因表达的沉默、抑制或减少。合适的测定包括但不限于使用本领域技术人员已知的技术诸如例如斑点印迹、Northern印迹、原位杂交、ELISA、免疫沉淀、酶功能以及本领域技术人员已知的表型测定对蛋白质或mRNA水平的检查。治疗核酸诸如siRNA的“有效量”或“治疗有效量”是足以产生期望作用的量，所述作用是例如与在不存在siRNA下检测到的正常表达水平相比靶序列表达的抑制。在具体实施方案中，当相对于对照(例如，仅缓冲液、靶向不同基因的siRNA序列、错义siRNA序列等)在siRNA下获得的值是约100％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％、80％、79％、78％、77％、76％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或0％时，实现靶基因或靶序列表达的抑制。用于测量靶基因或靶序列的表达的合适测定包括但不限于使用本领域技术人员已知的技术诸如斑点印迹、Northern印迹、原位杂交、ELISA、免疫沉淀、酶功能以及熟习此项技术者已知的表型测定对蛋白质或mRNA水准的检查。
如本文所用，术语“核酸”是指含有呈单链或双链形式的至少两个核苷酸(即脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)的聚合物并包括DNA和RNA。“核苷酸”含有糖脱氧核糖(DNA)或核糖(RNA)、碱基和磷酸基。核苷酸通过磷酸基连接在一起。“碱基”包括嘌呤和嘧啶，其进一步包括天然化合物腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、肌苷和天然类似物；以及嘌呤和嘧啶的合成衍生物，其包括但不限于放置新反应基团诸如但不限于胺、醇、硫醇、羧酸酯和卤烷的修饰。核酸包括含有已知核苷酸类似物或修饰的主链残基或键的核酸，其是合成的、天然存在的和非天然存在的，并且其具有与参考核酸相似的结合特性。此类类似物和/或修饰的残基的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、膦酸甲酯、手性膦酸甲酯、2’-O-甲基核糖核苷酸和肽-核酸(PNA)。另外，核酸可包括一个或多个UNA部分。
术语“核酸”包括任何寡核苷酸或多核苷酸，其中含有至多60个核苷酸的片段一般称为寡核苷酸，并且更长的片段称为多核苷酸。脱氧核糖寡核苷酸由5-碳糖(称为脱氧核糖)在此糖的5’和3’碳处共价地接合至磷酸组成，由此形成交替未分支聚合物。DNA可呈以下形式：例如反义分子、质粒DNA、预凝聚DNA、PCR产物、载体、表达盒、嵌合序列、染色体DNA或这些基团的衍生物和组合。核糖寡核苷酸由相似重复结构组成，其中5-碳糖是核糖。RNA可呈以下形式：例如小干扰RNA(siRNA)、Dicer酶-底物dsRNA、小发夹RNA(shRNA)、不对称干扰RNA(aiRNA)、微小RNA(miRNA)、mRNA、tRNA、rRNA、tRNA、病毒RNA(vRNA)和它们的组合。因此，术语“多核苷酸”和“寡核苷酸”是指由天然存在的碱基、糖和糖间(主链)键组成的核苷酸或核苷单体的聚合物或寡聚物。术语“多核苷酸”和“寡核苷酸”还包括包含非天然存在的单体或其功能相似的部分的聚合物或寡聚物。此类修饰的或取代的寡核苷酸通常因为以下特性而优于天然形式：诸如增强的细胞摄取、降低的免疫原性和在核酸酶存在下提高的稳定性。
除非另外指出，否则特定核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如简并密码子取代)、等位基因、直向同源物、SNP和互补序列以及明确指示的序列。具体而言，简并密码子取代可通过产生其中一个或多个所选(或所有)密码子的第三位被混合碱基和/或去氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer等人,Nucleic Acid Res.,19:5081(1991)；Ohtsuka等人,J.Biol.Chem.,260:2605-2608(1985)；Rossolini等人,Mol.Cell.Probes,8:91-98(1994))。
“分离的”或“纯化的”DNA分子或RNA分子是与其天然环境分开存在的DNA分子或RNA分子。分离的DNA分子或RNA分子可以纯化的形式存在或可在非天然环境诸如基因转基因宿主细胞中存在。例如，“分离的”或“纯化的”核酸分子或其生物活性部分实质上不含其他细胞物质或当通过重组技术产生时的培养基，或实质上不含当以化学方式合成时的化学前体或其他化学品。在一个实施方案中，“分离的”核酸不含在核酸所来源于的有机体的基因组DNA中天然地位于核酸侧翼的序列(即，位于核酸的5′和3′端处的序列)。例如，在各种实施方案中，分离的核酸分子可含有小于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核苷酸序列，所述核苷酸序列在核酸所来源于的细胞的基因组DNA中天然地位于核酸分子侧翼。
术语“基因”是指包含产生多肽或前体多肽所必需的部分长度或全长编码序列的核酸(例如DNA或RNA)序列。
如本文所用，“基因产物”是指诸如RNA转录物或多肽的基因产物。
术语“未锁定的核碱基类似物”(缩写为“UNA”)是指其中核糖环的C2'与C3'原子没有共价连结的无环核碱基。术语“未锁定的核碱基类似物”包括具有鉴定为结构A的以下结构的核碱基类似物：
结构A
Figure BDA0003364356240002341
其中R是羟基，并且碱基是任何天然或非天然碱基，诸如腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)和胸腺嘧啶(T)。UNA包括在美国专利序列号8,314,227中鉴定为无环2’-3’-断-核苷酸单体的分子。
术语“脂质”是指一组有机化合物，其包括但不限于脂肪酸酯且特征在于不溶于水，但可溶于许多有机溶剂。通常将脂质分成至少三种类别：(1)“简单脂质”，其包括脂肪和油以及蜡；(2)“复合脂质”，其包括磷脂和糖脂；以及(3)“衍生脂质”，诸如类固醇。
术语“脂质颗粒”包括可用于将治疗核酸(例如siRNA)递送至所关注的靶位点(例如细胞、组织、器官等)的脂质制剂。在优选的实施方案中，脂质颗粒通常由阳离子脂质、非阳离子脂质和防止颗粒聚集的任选偶联脂质形成。包括核酸分子(例如siRNA分子)的脂质颗粒称为核酸-脂质颗粒。通常，核酸完全封装在脂质颗粒内，从而保护核酸免于酶促降解。
在某些情况下，核酸-脂质颗粒非常适用于全身应用，因为它们在静脉内(i.v.)注射后可表现出延长的循环寿命，它们可聚集在远端部位(例如，与施用部位在物理上分离的部位)，并且它们可介导在这些远端部位处的靶基因表达的沉默。核酸可与凝聚剂复合并且封装在如PCT公布号WO 00/03683中所阐述的脂质颗粒内，所述专利的公开内容出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
术语“盐”包括任何阴离子与阳离子的复合物，诸如在阳离子脂质与一个或多个阴离子之间形成的复合物。阴离子的非限制性实例包括无机和有机阴离子，例如氢化物、氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、草酸盐(例如半草酸盐)、磷酸盐、膦酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐、硝酸盐、亚硝酸盐、氮化物、亚硫酸氢盐、硫化物、亚硫酸盐、硫酸氢盐、硫酸盐、硫代硫酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、甲酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、丙烯酸盐、聚丙烯酸盐、富马酸盐、马来酸盐、衣康酸盐、羟乙酸盐、葡萄糖酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、惕各酸盐(tiglate)、抗坏血酸盐、水杨酸盐、聚甲基丙烯酸盐、高氯酸盐、氯酸盐、亚氯酸盐、次氯酸盐、溴酸盐、次溴酸盐、碘酸盐、烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、砷酸盐、亚砷酸盐、铬酸盐、重铬酸盐、氰化物、氰酸盐、硫氰酸盐、氢氧化物、过氧化物、高锰酸盐和它们的混合物。在具体实施方案中，本文所公开的阳离子脂质的盐是结晶盐。
如本文所用，术语“水溶液”是指完全或部分由水构成的组合物。
如本文所用，“远端部位”是指物理上分离的部位，不仅限于相邻的毛细血管床，还包括遍及有机体广泛分布的部位。
关于核酸-脂质颗粒呈“血清稳定”意指颗粒在暴露于血清或核酸酶测定之后没有显著降解，血清或核酸酶测定将显著地降解游离DNA或RNA。合适的测定包括例如标准血清测定、DNAse测定或RNAse测定。
如本文所用，“全身递送”是指引起活性剂诸如siRNA在有机体内的广泛生物分布的脂质颗粒的递送。一些施用技术可实现某些剂(而非其他)的全身递送。全身递送意指将有用(优选治疗)量的剂暴露于身体的大部分。为了获得广泛的生物分布，一般需要血液寿命能够使所述剂在到达施用部位远端的疾病部位之前不会快速降解或清除(诸如通过首先经过器官(肝、肺等)或通过快速的非特异性细胞结合)。脂质颗粒的全身递送可通过本领域已知的任何手段(包括例如静脉内、皮下和腹膜内)来进行。在一个优选实施方案中，脂质颗粒的全身递送是通过静脉内递送。
如本文所用，“局部递送”是指活性剂诸如siRNA直接向有机体内的靶部位的递送。例如，可通过直接注射至疾病部位、其他靶部位或靶器官诸如肝脏、心脏、胰脏、肾脏等中来局部递送剂。
如本文所用，术语“病毒颗粒负荷”是指存在于体液诸如血液中的病毒颗粒(例如HBV和/或HDV)的数量的量度。例如，颗粒负荷可表示为每毫升例如血液的病毒颗粒的数量。颗粒负荷测试可使用基于核酸扩增的测试以及基于非核酸的测试(参见，例如Puren等人,The Journal of Infectious Diseases,201:S27-36(2010))来进行。
在某些实施方案中，术语“动物”是指哺乳动物。术语“哺乳动物”是指任何哺乳动物种类，诸如人类、小鼠、大鼠、狗、猫、仓鼠、豚鼠、兔、家畜等。
表A
Figure BDA0003364356240002361
Figure BDA0003364356240002371
寡核苷酸(诸如表B中阐述的有义和反义RNA链)与靶多核苷酸序列特异性杂交或互补。如本文所用，术语“可特异性杂交”和“互补”指示有足够程度的互补性，使得在DNA或RNA靶标与寡核苷酸之间存在稳定和特异性的结合。应理解，寡核苷酸不必与其靶核酸序列100％互补才能特异性杂交。在优选实施方案中，寡核苷酸在以下情况下可特异性杂交：当寡核苷酸与靶序列的结合干扰靶序列的正常功能以致使其效用或表达丧失时，并且存在足够程度的互补性以避免在需要特异性结合的条件下(即，在体内测定或治疗性治疗的情况下在生理条件下，或在体外测定的情况下在进行测定的条件下)寡核苷酸与非靶序列的非特异性结合。因此，寡核苷酸与其所靶向或特异性杂交的基因区域或mRNA序列相比可包括1、2、3或更多个碱基取代。
表B.
Figure BDA0003364356240002381
表C.
Figure BDA0003364356240002382
Figure BDA0003364356240002391
rN＝碱基N的RNA
mN＝碱基N的2'O-甲基修饰
xN＝碱基N的未锁定的核苷类似物部分
在某些实施方案中，治疗组合包括使用选自由以下组成的组的两个不同双链siRNA分子：1m、2m、3m、4m、5m、6m、7m、8m、9m、10m、11m、12m、13m、14m、15m。siRNA 1m至15m的双因素siRNA组合是：1m-2m；1m-3m；1m-4m；1m-5m；1m-6m；1m-7m；1m-8m；1m-9m；1m-10m；1m-11m；1m-12m；1m-13m；1m-14m；1m-15m；2m-3m；2m-4m；2m-5m；2m-6m；2m-7m；2m-8m；2m-9m；2m-10m；2m-11m；2m-12m；2m-13m；2m-14m；2m-15m；3m-4m；3m-5m；3m-6m；3m-7m；3m-8m；3m-9m；3m-10m；3m-11m；3m-12m；3m-13m；3m-14m；3m-15m；4m-5m；4m-6m；4m-7m；4m-8m；4m-9m；4m-10m；4m-11m；4m-12m；4m-13m；4m-14m；4m-15m；5m-6m；5m-7m；5m-8m；5m-9m；5m-10m；5m-11m；5m-12m；5m-13m；5m-14m；5m-15m；6m-7m；6m-8m；6m-9m；6m-10m；6m-11m；6m-12m；6m-13m；6m-14m；6m-15m；7m-8m；7m-9m；7m-10m；7m-11m；7m-12m；7m-13m；7m-14m；7m-15m；8m-9m；8m-10m；8m-11m；8m-12m；8m-13m；8m-14m；8m-15m；9m-10m；9m-11m；9m-12m；9m-13m；9m-14m；9m-15m；10m-11m；10m-12m；10m-13m；10m-14m；10m-15m；11m-12m；11m-13m；11m-14m；11m-15m；12m-13m；12m-14m；12m-15m；13m-14m；13m-15m；以及14m-15m。
在某些实施方案中，治疗组合包括使用选自由以下组成的组的三种不同双链siRNA分子：1m、2m、3m、4m、5m、6m、7m、8m、9m、10m、11m、12m、13m、14m、15m。siRNA 1m至15m的三因子siRNA组合是：1m-2m-3m；1m-2m-4m；1m-2m-5m；1m-2m-6m；1m-2m-7m；1m-2m-8m；1m-2m-9m；1m-2m-10m；1m-2m-11m；1m-2m-12m；1m-2m-13m；1m-2m-14m；1m-2m-15m；1m-3m-4m；1m-3m-5m；1m-3m-6m；1m-3m-7m；1m-3m-8m；1m-3m-9m；1m-3m-10m；1m-3m-11m；1m-3m-12m；1m-3m-13m；1m-3m-14m；1m-3m-15m；1m-4m-5m；1m-4m-6m；1m-4m-7m；1m-4m-8m；1m-4m-9m；1m-4m-10m；1m-4m-11m；1m-4m-12m；1m-4m-13m；1m-4m-14m；1m-4m-15m；1m-5m-6m；1m-5m-7m；1m-5m-8m；1m-5m-9m；1m-5m-10m；1m-5m-11m；1m-5m-12m；1m-5m-13m；1m-5m-14m；1m-5m-15m；1m-6m-7m；1m-6m-8m；1m-6m-9m；1m-6m-10m；1m-6m-11m；1m-6m-12m；1m-6m-13m；1m-6m-14m；1m-6m-15m；1m-7m-8m；1m-7m-9m；1m-7m-10m；1m-7m-11m；1m-7m-12m；1m-7m-13m；1m-7m-14m；1m-7m-15m；1m-8m-9m；1m-8m-10m；1m-8m-11m；1m-8m-12m；1m-8m-13m；1m-8m-14m；1m-8m-15m；1m-9m-10m；1m-9m-11m；1m-9m-12m；1m-9m-13m；1m-9m-14m；1m-9m-15m；1m-10m-11m；1m-10m-12m；1m-10m-13m；1m-10m-14m；1m-10m-15m；1m-11m-12m；1m-11m-13m；1m-11m-14m；1m-11m-15m；1m-12m-13m；1m-12m-14m；1m-12m-15m；1m-13m-14m；1m-13m-15m；1m-14m-15m；2m-3m-4m；2m-3m-5m；2m-3m-6m；2m-3m-7m；2m-3m-8m；2m-3m-9m；2m-3m-10m；2m-3m-11m；2m-3m-12m；2m-3m-13m；2m-3m-14m；2m-3m-15m；2m-4m-5m；2m-4m-6m；2m-4m-7m；2m-4m-8m；2m-4m-9m；2m-4m-10m；2m-4m-11m；2m-4m-12m；2m-4m-13m；2m-4m-14m；2m-4m-15m；2m-5m-6m；2m-5m-7m；2m-5m-8m；2m-5m-9m；2m-5m-10m；2m-5m-11m；2m-5m-12m；2m-5m-13m；2m-5m-14m；2m-5m-15m；2m-6m-7m；2m-6m-8m；2m-6m-9m；2m-6m-10m；2m-6m-11m；2m-6m-12m；2m-6m-13m；2m-6m-14m；2m-6m-15m；2m-7m-8m；2m-7m-9m；2m-7m-10m；2m-7m-11m；2m-7m-12m；2m-7m-13m；2m-7m-14m；2m-7m-15m；2m-8m-9m；2m-8m-10m；2m-8m-11m；2m-8m-12m；2m-8m-13m；2m-8m-14m；2m-8m-15m；2m-9m-10m；2m-9m-11m；2m-9m-12m；2m-9m-13m；2m-9m-14m；2m-9m-15m；2m-10m-11m；2m-10m-12m；2m-10m-13m；2m-10m-14m；2m-10m-15m；2m-11m-12m；2m-11m-13m；2m-11m-14m；2m-11m-15m；2m-12m-13m；2m-12m-14m；2m-12m-15m；2m-13m-14m；2m-13m-15m；2m-14m-15m；3m-4m-5m；3m-4m-6m；3m-4m-7m；3m-4m-8m；3m-4m-9m；3m-4m-10m；3m-4m-11m；3m-4m-12m；3m-4m-13m；3m-4m-14m；3m-4m-15m；3m-5m-6m；3m-5m-7m；3m-5m-8m；3m-5m-9m；3m-5m-10m；3m-5m-11m；3m-5m-12m；3m-5m-13m；3m-5m-14m；3m-5m-15m；3m-6m-7m；3m-6m-8m；3m-6m-9m；3m-6m-10m；3m-6m-11m；3m-6m-12m；3m-6m-13m；3m-6m-14m；3m-6m-15m；3m-7m-8m；3m-7m-9m；3m-7m-10m；3m-7m-11m；3m-7m-12m；3m-7m-13m；3m-7m-14m；3m-7m-15m；3m-8m-9m；3m-8m-10m；3m-8m-11m；3m-8m-12m；3m-8m-13m；3m-8m-14m；3m-8m-15m；3m-9m-10m；3m-9m-11m；3m-9m-12m；3m-9m-13m；3m-9m-14m；3m-9m-15m；3m-10m-11m；3m-10m-12m；3m-10m-13m；3m-10m-14m；3m-10m-15m；3m-11m-12m；3m-11m-13m；3m-11m-14m；3m-11m-15m；3m-12m-13m；3m-12m-14m；3m-12m-15m；3m-13m-14m；3m-13m-15m；3m-14m-15m；4m-5m-6m；4m-5m-7m；4m-5m-8m；4m-5m-9m；4m-5m-10m；4m-5m-11m；4m-5m-12m；4m-5m-13m；4m-5m-14m；4m-5m-15m；4m-6m-7m；4m-6m-8m；4m-6m-9m；4m-6m-10m；4m-6m-11m；4m-6m-12m；4m-6m-13m；4m-6m-14m；4m-6m-15m；4m-7m-8m；4m-7m-9m；4m-7m-10m；4m-7m-11m；4m-7m-12m；4m-7m-13m；4m-7m-14m；4m-7m-15m；4m-8m-9m；4m-8m-10m；4m-8m-11m；4m-8m-12m；4m-8m-13m；4m-8m-14m；4m-8m-15m；4m-9m-10m；4m-9m-11m；4m-9m-12m；4m-9m-13m；4m-9m-14m；4m-9m-15m；4m-10m-11m；4m-10m-12m；4m-10m-13m；4m-10m-14m；4m-10m-15m；4m-11m-12m；4m-11m-13m；4m-11m-14m；4m-11m-15m；4m-12m-13m；4m-12m-14m；4m-12m-15m；4m-13m-14m；4m-13m-15m；4m-14m-15m；5m-6m-7m；5m-6m-8m；5m-6m-9m；5m-6m-10m；5m-6m-11m；5m-6m-12m；5m-6m-13m；5m-6m-14m；5m-6m-15m；5m-7m-8m；5m-7m-9m；5m-7m-10m；5m-7m-11m；5m-7m-12m；5m-7m-13m；5m-7m-14m；5m-7m-15m；5m-8m-9m；5m-8m-10m；5m-8m-11m；5m-8m-12m；5m-8m-13m；5m-8m-14m；5m-8m-15m；5m-9m-10m；5m-9m-11m；5m-9m-12m；5m-9m-13m；5m-9m-14m；5m-9m-15m；5m-10m-11m；5m-10m-12m；5m-10m-13m；5m-10m-14m；5m-10m-15m；5m-11m-12m；5m-11m-13m；5m-11m-14m；5m-11m-15m；5m-12m-13m；5m-12m-14m；5m-12m-15m；5m-13m-14m；5m-13m-15m；5m-14m-15m；6m-7m-8m；6m-7m-9m；6m-7m-10m；6m-7m-11m；6m-7m-12m；6m-7m-13m；6m-7m-14m；6m-7m-15m；6m-8m-9m；6m-8m-10m；6m-8m-11m；6m-8m-12m；6m-8m-13m；6m-8m-14m；6m-8m-15m；6m-9m-10m；6m-9m-11m；6m-9m-12m；6m-9m-13m；6m-9m-14m；6m-9m-15m；6m-10m-11m；6m-10m-12m；6m-10m-13m；6m-10m-14m；6m-10m-15m；6m-11m-12m；6m-11m-13m；6m-11m-14m；6m-11m-15m；6m-12m-13m；6m-12m-14m；6m-12m-15m；6m-13m-14m；6m-13m-15m；6m-14m-15m；7m-8m-9m；7m-8m-10m；7m-8m-11m；7m-8m-12m；7m-8m-13m；7m-8m-14m；7m-8m-15m；7m-9m-10m；7m-9m-11m；7m-9m-12m；7m-9m-13m；7m-9m-14m；7m-9m-15m；7m-10m-11m；7m-10m-12m；7m-10m-13m；7m-10m-14m；7m-10m-15m；7m-11m-12m；7m-11m-13m；7m-11m-14m；7m-11m-15m；7m-12m-13m；7m-12m-14m；7m-12m-15m；7m-13m-14m；7m-13m-15m；7m-14m-15m；8m-9m-10m；8m-9m-11m；8m-9m-12m；8m-9m-13m；8m-9m-14m；8m-9m-15m；8m-10m-11m；8m-10m-12m；8m-10m-13m；8m-10m-14m；8m-10m-15m；8m-11m-12m；8m-11m-13m；8m-11m-14m；8m-11m-15m；8m-12m-13m；8m-12m-14m；8m-12m-15m；8m-13m-14m；8m-13m-15m；8m-14m-15m；9m-10m-11m；9m-10m-12m；9m-10m-13m；9m-10m-14m；9m-10m-15m；9m-11m-12m；9m-11m-13m；9m-11m-14m；9m-11m-15m；9m-12m-13m；9m-12m-14m；9m-12m-15m；9m-13m-14m；9m-13m-15m；9m-14m-15m；10m-11m-12m；10m-11m-13m；10m-11m-14m；10m-11m-15m；10m-12m-13m；10m-12m-14m；10m-12m-15m；10m-13m-14m；10m-13m-15m；10m-14m-15m；11m-12m-13m；11m-12m-14m；11m-12m-15m；11m-13m-14m；11m-13m-15m；11m-14m-15m；12m-13m-14m；12m-13m-15m；12m-14m-15m；以及13m-14m-15m。
三种不同siRNA的其他组合包括例如67m-68m-69m、67m-68m-73m、67m-69m-71m、67m-70m-73m、67m-71m-73m、67m-72m-73m、68m-69m-70m、68m-69m-73m、68m-70m-72m、68m-71m-73m；68m-72m-73m、69m-70m-71m、69m-70m-73m、69m-71m-73m、69m-72m-73m、70m-71m-72m、70m-71m-73m、70m-72m-73m、71m-72m-73m。
产生siRNA分子
siRNA可以若干形式提供，包括例如一个或多个分离的小干扰RNA(siRNA)双链体、较长的双链RNA(dsRNA)或从DNA质粒中的转录盒转录而来的siRNA或dsRNA。在一些实施方案中，siRNA可酶促产生或通过部分/总有机合成产生，并且修饰的核糖核苷酸可通过体外酶促或有机合成引入。在某些情况下，以化学方式制备每个链。合成RNA分子的方法是本领域已知的，例如如Verma和Eckstein(1998)中所述或如本文所述的化学合成方法。
用于分离RNA、合成RNA、杂交核酸、制作和筛选cDNA文库以及执行PCR的方法是本领域众所周知的(参见，例如Gubler和Hoffman,Gene,25:263-269(1983)；Sambrook等人,上述；Ausubel等人,上述)，PCR方法也是众所周知的(参见，美国专利号4,683,195和4,683,202；PCR Protocols:A Guide to Methods and Applications(Innis等人编,1990))。表达文库也是熟习本领域技术人员众所周知的。公开一般方法的另外的基础本文包括Sambrook等人,Molecular Cloning,A Laboratory Manual(第2版1989)；Kriegler,Gene Transferand Expression:A Laboratory Manual(1990)；和Current Protocols in MolecularBiology(Ausubel等人编,1994)。这些参考文献的公开内容出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
siRNA通常以化学方式合成。包含siRNA分子的寡核苷酸可使用本领域已知的多种技术中的任一种来合成，诸如以下文献中所述的那些方法：Usman等人,J.Am.Chem.Soc.,109:7845(1987)；Scaringe等人,Nucl.Acids Res.,18:5433(1990)；Wincott等人,Nucl.Acids Res.,23:2677-2684(1995)；以及Wincott等人,Methods Mol.Bio.,74:59(1997)。寡核苷酸的合成利用常见的核酸保护和偶合基团，诸如在5’-端处的二甲氧基三苯甲基和在3’-端处的亚磷酰胺。作为非限制性实例，小规模合成可使用0.2μmol规模方案在Applied Biosystems合成器上进行。或者，0.2μmol规模的合成可在来自Protogene(PaloAlto,CA)的96孔板合成器上进行。然而，较大或较小规模的合成亦在所述范围内。用于寡核苷酸合成的合适的试剂、用于RNA脱保护的方法和用于RNA纯化的方法是本领域技术人员已知的。
siRNA分子可由两种不同寡核苷酸组装，其中一个寡核苷酸包含siRNA的有义链并且另一个包含siRNA的反义链。例如，每条链可单独地合成并且在合成和/或脱保护之后通过杂交或连接接合在一起。
含有治疗核酸的载剂系统
脂质颗粒
脂质颗粒可包含一个或多个siRNA(例如，表A、B或C中所述的siRNA分子)、阳离子脂质、非阳离子脂质和抑制颗粒聚集的缀合脂质。在一些实施方案中，siRNA分子完全封装在脂质颗粒的脂质部分内以使得脂质颗粒中的siRNA分子在水溶液中抵抗核酸酶降解。在其他实施方案中，本文所述的脂质颗粒实质上对诸如人类的哺乳动物无毒。
siRNA双因素和三因子组合适用于例如治疗人类的HBV和/或HDV感染和改善与HBV感染和/或HDV感染相关的至少一种症状。
在某些实施方案中，关于包括封装在脂质颗粒内的siRNA混合物的使用的方法，将不同siRNA分子共封装在同一脂质颗粒中。
在某些实施方案中，关于包括封装在脂质颗粒内的siRNA混合物的使用的方法，将存在于混合物中的siRNA种类的每个类型封装在其自己的颗粒中。
在某些实施方案中，关于包括封装在脂质颗粒内的siRNA混合物的使用的方法，将一些siRNA种类共封装在同一颗粒中，而其他siRNA种类封装在不同颗粒中。
两种或更多种剂的调配和施用
应理解，剂可在单一制剂中一起调配或者它们可单独调配并且因此，同时或依序地单独施用。在一个实施方案中，当依序(例如在不同时间)施用剂时，可施用所述剂以使得它们的生物效应重叠(即，每个剂在单一给定时间产生生物效应)。
可根据所选的剂，采用任何可接受的施用途径，进行剂的调配和施用。例如，合适的途径包括但不限于经口、舌下、含服、局部、经皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内和鼻内，并且如果若需要局部治疗，包括病灶内施用。在一个实施方案中，可经口施用本文所鉴定的小分子剂。在另一个实施方案中，可通过注射(例如至血管诸如静脉中)或皮下施用寡聚核苷酸。在一些实施方案中，向有需要的受试者经口施用一种或多种剂(例如以丸剂形式)，并且通过注射或皮下施用一种或多种寡聚核苷酸。
通常，例如以脂质纳米颗粒制剂形式静脉内施用靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸，然而，本发明不限于包含寡聚核苷酸的静脉内制剂或静脉内施用寡聚核苷酸的治疗方法。
剂可通过在环境温度下在适当的pH值下并且在所需纯度下与生理学上可接受的载剂(即在所用剂量和浓度下对接受者无毒的载剂)混合来单独调配。制剂的pH值主要取决于化合物的具体用途和浓度，但范围通常可在约3至约8内。剂通常将以固体组合物保存，但冻干的制剂或水溶液也可接受。
包含剂的组合物可以符合良好医疗实践的方式调配、给药和施用。在本上下文中考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、单独患者的临床状况、病症原因、施用部位、施用方法、施用计划和开业医生已知的其他因素。
剂可以任何方便的施用形式施用，例如片剂、散剂、胶囊、溶液、分散体、混悬液、糖浆、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳液、贴剂等。此类组合物可含有药物制剂中的常规组分，例如稀释剂、载剂、pH值调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性剂。如果需要胃肠外施用，那么组合物将是无菌的并且呈适用于注射或输注的溶液或混悬液形式。
合适的载剂和赋形剂是本领域技术人员众所周知的并且详细描述于例如Ansel,Howard C.等人,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.等人Remington:The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；以及Rowe,Raymond C.Handbook of PharmaceuticalExcipients.Chicago,Pharmaceutical Press,2005中。制剂还可包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化物质、遮光剂、助滑剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、调味剂、稀释剂和其他已知添加剂以提供精致的药物外观或有助于药物产品(即药剂)的制造。
所述剂通常至少以达到期望生物效应的水平给药。因此，有效给药方案将至少给药达到期望生物效应的最小量或生物有效剂量，然而，所述剂量不应过高以致于不可接受的副作用超过生物效应的益处。因此，有效给药方案将给药不超过最大耐受剂量(“MTD”)。最大耐受剂量定义为产生可接受的剂量限制性毒性(“DLT”)发生率的最高剂量。引起不可接受的DLT发生率的剂量被视为非耐受的。通常，在1期临床试验中确定对于具体计划的MTD。这些通常在患者中通过以下操作进行：在啮齿动物中(以mg/m2为基础)以1/10严重中毒剂量(“STD10”)的安全初始剂量开始，并且以三个患者为一组积累患者，根据修饰的斐波那契序列(Fibonacci sequence)递增剂量，其中递增步骤越高，相对增量越少(例如，剂量增加100％、65％、50％、40％并且此后增加30％至35％)。以三个患者为一组继续剂量递增直至达到非耐受剂量。产生可接受的DLT发生率的下一个较低剂量水平被视为MTD。
所施用的剂的量将取决于所用具体剂、所治疗的HBV株、患者的年龄、体重和状况、以及临床医师的判断，但一般将介于每天约0.2至2.0克之间。
药盒
一个实施方案提供一种药盒。所述药盒可包含含有组合的容器。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可由多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器可装有有效治疗病状的组合，并且可具有无菌存取口(例如，所述容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉输液袋或小瓶)。
所述药盒可进一步包含在容器上或与容器相关联的标签或包装插页。术语“包装插页”用于指代通常包括在治疗剂的商业包装中的说明，其含有关于适应症、用法、剂量、施用、禁忌症的信息和/或关于使用此类治疗剂的警告。在一个实施方案中，标签或包装插页指示治疗剂可用于治疗病毒感染，诸如乙型肝炎。
在某些实施方案中，药盒适用于递送固体口服形式的治疗剂，诸如片剂或胶囊。这样的药盒优选包括许多个单位剂量。此类药盒可包括卡片，卡片上的剂量按照它们的预期使用顺序排列。此类药盒的一个实例是“泡罩包装”。泡罩包装是包装工业中众所周知的并且广泛用于包装药物单位剂型。如果需要，则可提供记忆辅助工具，例如以呈数字、字母或其他标记的形式，或者用日历插入，在治疗计划中指定可以施用剂量的天数。
根据另一个实施方案，药盒可包含(a)第一容器，其中含有一种剂；和(b)第二容器，其中含有第二剂。可选地或另外地，药盒可进一步包含第三容器，所述第三容器包含药学上可接受的缓冲液，诸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。其可进一步包括商业和用户角度期望的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、滤器、针头和注射器。
药盒可进一步包含用于施用治疗剂的指导。例如，药盒可进一步包含用于向有需要的患者同时、依序或单独施用治疗剂的指导。
在某些其他实施方案中，药盒可包含用于容纳单独的组合物的容器，诸如分隔瓶或分隔箔包，然而，单独的组合物也可容纳在单一未分隔的容器内。在某些实施方案中，药盒包含用于施用单独的治疗剂的指导。当单独的治疗剂优选以不同剂型(例如经口和胃肠外)以不同给药时间间隔施用时或当处方医师需要滴定组合的单独的治疗剂时，药盒形式尤其有利。
某些实施方案
在一个实施方案中，本发明的方法排除一种治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用协同有效量的i)共价闭合环状DNA的形成抑制剂和ii)核苷或核苷酸类似物。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物排除包含以下各物作为唯一活性乙型肝炎治疗剂的组合物：i)共价闭合环状DNA的形成抑制剂和ii)核苷或核苷酸类似物。
在一个实施方案中，本发明的药盒排除包含以下各物作为唯一乙型肝炎剂的药盒：i)共价闭合环状DNA的形成抑制剂和ii)核苷或核苷酸类似物。
在一个实施方案中，本发明的方法排除一种治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用i)一种或多种靶向乙型肝炎病毒的siRNA和ii)逆转录酶抑制剂。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物排除包含以下各物作为唯一活性乙型肝炎治疗剂的组合物：i)一种或多种靶向乙型肝炎病毒的siRNA和ii)逆转录酶抑制剂。
在一个实施方案中，本发明的药盒排除包含以下各物作为唯一乙型肝炎剂的药盒：i)一种或多种靶向乙型肝炎病毒的siRNA和ii)逆转录酶抑制剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；
e)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；和
f)免疫刺激剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种组合，其由至少两种选自由以下组成的组的剂组成：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；
e)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；和
f)免疫刺激剂
所述组合用于治疗动物的乙型肝炎。
如本文所用，术语“组合”是指至少两种剂的同时或依序施用。对于同时施用，至少两种剂可存在于单一组合物中或可以是单独的(例如，可通过相同或不同途径施用)。
在一个实施方案中，本发明提供一种组合，其由至少两种选自由以下组成的组的剂组成：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂，
所述组合用于治疗动物的乙型肝炎。
在一个实施方案中，本发明提供一种组合在制造用于治疗动物的乙型肝炎的药剂中的用途，所述组合由至少两种选自由以下组成的组的剂组成：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；
e)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；和
f)免疫刺激剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种组合在制造用于治疗动物的乙型肝炎的药剂中的用途，所述组合由至少两种选自由以下组成的组的剂组成：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗动物的丁型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；
e)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；和
f)免疫刺激剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗动物的丁型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂。
在另一个实施方案中，本发明提供一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；
e)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；和
f)免疫刺激剂。在某些实施方案中，药盒以组合形式用于治疗或预防病毒感染，诸如乙型肝炎。在某些实施方案中，药盒以组合形式用于治疗或预防病毒感染，诸如丁型肝炎。
在一个实施方案中，本发明提供一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂。
在另一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；
e)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；和
f)免疫刺激剂。
在另一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和至少一种选自由以下组成的组的另外的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包含靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和至少一种选自由以下组成的组的另外的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂。
在一个实施方案中，本发明提供一种药盒，其包含靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和至少一种选自由以下组成的组的另外的剂：
a)逆转录酶抑制剂；
b)衣壳抑制剂；
c)cccDNA形成抑制剂；
d)sAg分泌抑制剂；和
e)免疫刺激剂。
本发明的某些实施方案提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002551
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002561
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
本发明的某些实施方案提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002562
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002563
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
限制条件是药物组合物中的剂中的至少一种是衣壳抑制剂或RNA去稳定剂。
本发明的某些实施方案提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)化合物(1)：
Figure BDA0003364356240002571
b)化合物(2)：
Figure BDA0003364356240002572
c)选自由以下组成的组的化合物：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在某些实施方案中，药物组合物包含至少三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。在某些实施方案中，药物组合物包含如本文所述的寡聚核苷酸3m、6m和12m。在某些实施方案中，寡聚核苷酸包含在脂质纳米颗粒制剂内。
在某些实施方案中，药物组合物包含以下两种剂的组合中的一种：
RNA去稳定剂和衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和RNA去稳定剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；衣壳抑制剂和逆转录酶抑制剂；或
RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂。
在某些实施方案中，所述药物组合物包含以下两种剂的组合中的一种：
RNA去稳定剂和衣壳抑制剂；
寡聚核苷酸3m、6m和12m的组合和衣壳抑制剂；
衣壳抑制剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
衣壳抑制剂和替诺福韦艾拉酚胺；
衣壳抑制剂和恩替卡韦；
RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
RNA去稳定剂和恩替卡韦。
在某些实施方案中，药物组合物包含RNA去稳定剂(化合物2)和衣壳抑制剂(化合物1)。
在某些实施方案中，药物组合物包含寡聚核苷酸3m、6m和12m的组合和衣壳抑制剂(化合物1)。
在某些实施方案中，药物组合物包含衣壳抑制剂(化合物1)和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，药物组合物包含衣壳抑制剂(化合物1)和替诺福韦艾拉酚胺。
在某些实施方案中，药物组合物包含衣壳抑制剂(化合物1)和恩替卡韦。
在某些实施方案中，药物组合物包含RNA去稳定剂(化合物2)与富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，药物组合物包含RNA去稳定剂(化合物2)和替诺福韦艾拉酚胺。
在某些实施方案中，药物组合物包含RNA去稳定剂(化合物2)和恩替卡韦。
在某些实施方案中，药物组合物包含以下三种剂的组合中的一种：
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂；
衣壳抑制剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；或
RNA去稳定剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂。
在某些实施方案中，药物组合物包含以下三种剂的组合中的一种：
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和恩替卡韦。
在某些实施方案中，药物组合物包含衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，药物组合物包含衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和替诺福韦艾拉酚胺。
在某些实施方案中，药物组合物包含衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和恩替卡韦。
本发明的某些实施方案提供一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002601
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002602
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
所述药盒以组合形式用于治疗或预防病毒感染，诸如乙型肝炎。
本发明的某些实施方案提供一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002611
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002612
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
限制条件是药盒中的至少一种剂是衣壳抑制剂或RNA去稳定剂，所述药盒以组合形式用于治疗或预防病毒感染，诸如乙型肝炎。
本发明的某些实施方案提供一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)化合物(1)：
Figure BDA0003364356240002613
b)化合物(2)：
Figure BDA0003364356240002621
c)选自由以下组成的组的化合物：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
所述药盒以组合形式用于治疗或预防病毒感染，诸如乙型肝炎。
本发明的某些实施方案提供一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002622
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002623
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
所述药盒以组合形式用于治疗或预防病毒感染，诸如丁型肝炎。
在某些实施方案中，药盒包含至少三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。在某些实施方案中，药盒包含如本文所述的寡聚核苷酸3m、6m和12m。在某些实施方案中，寡聚核苷酸包含在脂质纳米颗粒制剂内。
在某些实施方案中，药盒包含以下两种剂的组合中的一种：
RNA去稳定剂与衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和RNA去稳定剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
衣壳抑制剂和逆转录酶抑制剂；或
RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂。
在某些实施方案中，药盒包含以下两种剂的组合中的一种：
RNA去稳定剂和衣壳抑制剂；
寡聚核苷酸3m、6m和12m的组合和衣壳抑制剂；
衣壳抑制剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
衣壳抑制剂和替诺福韦艾拉酚胺；
衣壳抑制剂和恩替卡韦；
RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
RNA去稳定剂和恩替卡韦。
在某些实施方案中，药盒包含RNA去稳定剂(化合物2)和衣壳抑制剂(化合物1)。
在某些实施方案中，药盒包含寡聚核苷酸3m、6m和12m的组合和衣壳抑制剂(化合物1)。
在某些实施方案中，药盒包含衣壳抑制剂(化合物1)和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，药盒包含衣壳抑制剂(化合物1)和替诺福韦艾拉酚胺。
在某些实施方案中，药盒包含衣壳抑制剂(化合物1)与恩替卡韦。
在某些实施方案中，药盒包含RNA去稳定剂(化合物2)和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，药盒包含RNA去稳定剂(化合物2)和替诺福韦艾拉酚胺。
在某些实施方案中，药盒包含RNA去稳定剂(化合物2)和恩替卡韦。
在某些实施方案中，药盒包含以下三种剂的组合中的一种：
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂；
衣壳抑制剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；或
RNA去稳定剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂。
在某些实施方案中，药盒包含以下三种剂的组合中的一种：
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和恩替卡韦。
在某些实施方案中，药盒包含衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，药盒包含衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和替诺福韦艾拉酚胺；或
在某些实施方案中，药盒包含衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和恩替卡韦。
本发明的某些实施方案提供一种治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002651
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002652
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
本发明的某些实施方案提供一种治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002661
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002662
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸，
限制条件是向动物施用的剂中的至少一种是衣壳抑制剂或RNA去稳定剂。
本发明的某些实施方案提供一种治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)化合物(1)：
Figure BDA0003364356240002663
b)化合物(2)：
Figure BDA0003364356240002671
c)选自由以下组成的组的化合物：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
本发明的某些实施方案提供一种治疗动物的丁型肝炎的方法，所述方法包括向动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002672
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002673
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在某些实施方案中，向动物施用至少三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。在某些实施方案中，向动物施用如本文所述的寡聚核苷酸3m、6m和12m。在某些实施方案中，寡聚核苷酸包含在脂质纳米颗粒制剂内。
在某些实施方案中，经口施用至少一种剂。在某些实施方案中，经口施用至少两种剂。在某些实施方案中，静脉内施用至少一种寡聚核苷酸。
在某些实施方案中，向动物施用以下两种剂的组合中的一种：
RNA去稳定剂和衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和RNA去稳定剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
衣壳抑制剂和逆转录酶抑制剂；或
RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂。
在某些实施方案中，向动物施用以下两种剂的组合中的一种：
RNA去稳定剂和衣壳抑制剂；
寡聚核苷酸3m、6m和12m的组合和衣壳抑制剂；
衣壳抑制剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
衣壳抑制剂和替诺福韦艾拉酚胺；
衣壳抑制剂和恩替卡韦；
RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
RNA去稳定剂和恩替卡韦。
在某些实施方案中，向动物施用RNA去稳定剂(化合物2)和衣壳抑制剂(化合物1)。
在某些实施方案中，向动物施用寡聚核苷酸3m、6m和12m的组合和衣壳抑制剂(化合物1)。
在某些实施方案中，向动物施用衣壳抑制剂(化合物1)和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，向动物施用衣壳抑制剂(化合物1)和替诺福韦艾拉酚胺。
在某些实施方案中，向动物施用衣壳抑制剂(化合物1)和恩替卡韦。
在某些实施方案中，向动物施用RNA去稳定剂(化合物2)和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，向动物施用RNA去稳定剂(化合物2)和替诺福韦艾拉酚胺。
在某些实施方案中，向动物施用RNA去稳定剂(化合物2)和恩替卡韦。
在某些实施方案中，向动物施用以下三种剂的组合中的一种：
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂；
衣壳抑制剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；或
RNA去稳定剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂。
在某些实施方案中，向动物施用以下三种剂的组合中的一种：
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
衣壳抑制剂、RNA去稳定剂和恩替卡韦。
在某些实施方案中，向动物施用衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和富马酸替诺福韦二吡呋酯。
在某些实施方案中，向动物施用衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和替诺福韦艾拉酚胺。
在某些实施方案中，向动物施用衣壳抑制剂(化合物1)、RNA去稳定剂(化合物2)和恩替卡韦。
某些实施方案还提供至少两种选自由以下组成的组的剂的组合：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002701
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002702
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸，
所述组合用于治疗动物的乙型肝炎或丁型肝炎。
某些实施方案还提供一种组合在制造用于治疗动物的乙型肝炎或丁型肝炎的药剂中的用途，所述组合由至少两种选自由以下组成的组的剂组成：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure BDA0003364356240002711
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure BDA0003364356240002712
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
在某些实施方案中，组合是本文所述的组合。
治疗剂的组合治疗乙型肝炎的能力可使用本领域众所周知知的药理学模型确定。治疗剂的组合治疗丁型肝炎的能力可使用本领域众所周知的药理学模型确定。
本发明现将通过以下非限制性实施例来说明。应理解，所述实施例集合内的化合物和表的编号可特别针对那些实施例集合。
实施例1-4
用于人原代肝细胞(PHH)中的组合研究的材料和方法描述于以下实施例1-4中。
PHH
低温保存的PHH(批次IKB)购自BioreclamationIVT
测试物品
化合物(V)、(VI)和(VII)由Arbutus Biopharma生产。聚乙二醇化IFN-α2a和TAF是商购获得的。有关化合物的信息示于表1中。
表1.有关测试物品的信息
Figure BDA0003364356240002721
感染性病毒原液
D型HBV由HepG2DE19培养上清液浓缩。有关病毒的信息示于表2中。
表2.有关HBV病毒原液的信息
Figure BDA0003364356240002722
Figure BDA0003364356240002731
*GE＝HBV基因组当量
试剂
研究中使用的主要试剂是QIAamp 96 DNA Blood Kit(QIAGEN#51162)、FastStartUniversal Probe Master(Roche#04914058001)、CellTiter-Glo(Promega#G7573)与HBsAgELISA药盒(Antu#CL 0310)、和Lipofectamine 3000(ThermoFisher#L3000015)。
仪器
研究中使用的主要仪器是BioTek Synergy 2,SpectraMax(Molecular Devices)和7900HT Fast Real-Time PCR System(ABI)。
研究程序
人原代肝细胞的接种
将PHH解冻并以1.32×105个细胞/孔的密度接种至48孔板中。将PHH接种日期定义为第0天。
HBV感染
在第1天用400HBV GE/HBV基因型D型HBV细胞感染PHH。
PHH的培养和处理
在第0天，细胞接种之后6-8小时，用含有转染试剂的培养基连续稀释式(V)的化合物以得到26.55×(对于单一化合物剂量反应研究)或265.5×(对于双重组合研究)的最终测试浓度。进一步用培养基稀释测试物品至最终测试浓度。
在第2天，用DMSO连续稀释式(VI)和(VII)的化合物以及TAF以得到100×的最终测试浓度。在培养基中连续稀释PEG-IFNα2a以得到100×的最终测试浓度。进一步用培养基100倍稀释所有测试物品。DMSO在培养基中的最终浓度为2％。
EC50值的测定
以7个浓度、3倍稀释、一式三份测试化合物。
双重组合研究
在5×5矩阵、一式三份板上进行四个双因素组合。转染试剂存在于所有孔中。每1或2天更新含有物品的培养基。
在第8天通过CellTiter Glo测定对细胞毒性的测定
在第8天，收集培养上清液，并且将CellTiter-Glo工作溶液添加至细胞板中。在室温下培育所述板10分钟。将溶解产物转移至96孔黑色板中。在BioTek Synergy2SpectraMax上测量发光信号。用下式计算细胞活力百分比：
活力％＝(样品的原始数据–空白的平均值)/(培养基对照的平均值-空白的平均值)×100
通过qPCR对培养上清液中的HBV DNA的定量
用QIAamp 96DNA Blood Kit(Qiagen-51162)分离第8天收获的培养上清液中的DNA。对于每个样品，将100μl每种培养上清液用于提取DNA。用180μl AE洗脱DNA。使用表3中所示的引物和探针，通过定量PCR量化培养上清液中的HBV DNA。用下式计算HBV DNA的抑制百分比：
HBV DNA的抑制％＝[1-样品值/培养基对照的平均值]×100。
表3.引物/探针信息
引物R GACAAACGGGCAACATACCTT
引物F GTGTCTGCGGCGTTTTATCA
探针 5’FAM CCTCTKCATCCTGCTGCTATGCCTCATC 3’TAMRA
通过ELISA对培养上清液中的HBsAg的测量
使用HBsAg/ELISA药盒(Autobio)，根据手册测量第8天收获的培养上清液中的HBsAg。用PBS稀释样品以得到在标准曲线范围内的信号。用下式计算HBsAg的抑制百分比：
HBsAg的抑制％＝[1-样品的HBsAg数量/DMSO对照的HBV数量]×100
组合作用的分析
使用MacSynergy II软件(Prichard and Shipman,1992)分析双重组合研究的结果。组合作用以99.9％置信区间计算为协同/拮抗体积，并且根据MacSynergy II指南解释结果，如下：
<25＝不显著的协同/拮抗
25-50＝微小但显著的协同/拮抗
50-100＝中等协同/拮抗
>100＝强协同/拮抗
～1000＝可能误差
式(V)的化合物
式(V)的化合物是siRNA剂，其作用于所有HBV RNA转录物，使得能够抑制HBV复制并抑制包括HBsAg的所有病毒抗原。高亲合力N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)部分介导化合物靶向肝细胞，即HBV感染部位。式(V)的化合物描述于2018年10月18日公开的国际公布号WO2018/191278(国际申请号PCT/US2018/026918)中。
在某些实施方案中，GalNAc部分具有以下结构：
Figure BDA0003364356240002761
在某些实施方案中，siRNA缀合物的siRNA是siRNA 1。在某些实施方案中，siRNA缀合物的siRNA是siRNA 2。在下文所述的实验中，siRNA缀合物的siRNA是siRNA 2。式(V)的化合物描述于下文中，其中siRNA缀合物的siRNA是siRNA 2。
Figure BDA0003364356240002762
Figure BDA0003364356240002771
聚乙二醇化干扰素α2a(IFNα2a)：
此剂购自商业来源：
Figure BDA0003364356240002772
小分子化合物
表4：结构
Figure BDA0003364356240002773
有关以下小分子化合物的信息：
化合物 小瓶ID 分子量 重量
VII 1ACGJ 461.85 10.2mg
VI 1A45C 402.45 17.7mg
有关市售TAF的信息：
化合物 供应商 目录编号 原液浓度
TAF SelleckChem S7856-01 20mM
实施例1.式(V)与(VI)化合物的体外组合
研究目标
为了确定式(V)化合物(靶向HBV基因组并抑制HBV DNA、HBsAg和HBeAg以及HBx的产生的GalNAc-缀合的siRNA)与式(VI)化合物(抑制HBV DNA、HBsAg和HBeAg的HBV RNA稳定性的小分子抑制剂)的双药物组合在细胞培养模型系统中使用感染HBV的人原代肝细胞在体外是否是相加性、协同性或拮抗性的。
结果和结论
将式(VI)化合物(在3倍稀释系列中4.00μM至0.05μM的浓度范围和5点滴定)与式(V)化合物(在3倍稀释系列中3.0μg/mL至0.04μg/mL的浓度范围和5点滴定)组合在两个独立实验试验的每个中在三个复制板上进行测试。在单独或组合形式的式(V)化合物或式(VI)化合物治疗下观察到的HBV DNA和HBsAg的平均抑制％以及3个重复的标准偏差示于如下所示的表5A、5B、6A和6B中。在较早实验中确定式(V)化合物和式(VI)化合物的EC50值并示于表7中。
当将双抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值进行比较时，组合作用从针对HBsAg抑制的相加性(没有显著协同或拮抗)至针对HBV DNA抑制的相加性至微小协同，按照MacSynergy II分析，在99.9％置信区间下，并且使用Prichard和Shipman(1992)描述的解释标准(表7)。通过显微镜术或CellTiter-Glo测定未观察到细胞活力的显著抑制。
表5A.实验1：在式(V)和(VI)化合物的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240002791
Figure BDA0003364356240002801
表5B.实验2：在式(V)和(VI)化合物的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240002802
Figure BDA0003364356240002811
表6A.实验1：在式(V)和(VI)化合物的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240002812
Figure BDA0003364356240002821
表6B.实验2：在式(V)和(VI)化合物的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240002831
Figure BDA0003364356240002841
表7：在PHH细胞培养系统中式(V)和(VI)化合物的体外组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240002842
*在99.9％置信区间下
#在较早的独立实验中测定
实施例2.式(V)与(VII)化合物的体外组合
研究目标
为了确定式(V)化合物(靶向HBV基因组并抑制HBV DNA、HBsAg与HBeAg、和HBx的产生的GalNAc-缀合的siRNA)和式(VII)化合物(抑制HBV衣壳组装的小分子抑制剂)的双药物组合在细胞培养模型系统中使用感染HBV的人原代肝细胞在体外是否是相加性、协同性或拮抗性的。
结果和结论
将式(VII)化合物(在3倍稀释系列中4.00μM至0.05μM的浓度范围和5点滴定)与式(V)化合物(在3倍稀释系列中3.0μg/mL至0.04μg/mL的浓度范围和5点滴定)组合在两个独立实验性试验中的每一个中在三个复制板上进行测试。在单独或组合形式的式(V)或式(VII)化合物治疗下观察到的HBV DNA和HBsAg的平均抑制％以及3个重复的标准偏差示于如下所示的表8A、8B、9A和9B中。在较早实验中测定式(V)和(VII)化合物的EC50值并示于表10中。
当将双抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值进行比较时，组合作用从针对HBsAg抑制的相加性(没有显著协同或拮抗)至针对HBV DNA抑制的相加性至强协同，按照MacSynergy II分析并使用Prichard和Shipman(1992)描述的解释标准(表10)。通过显微镜术或CellTiter-Glo测定未观察到细胞活力的显著抑制。
表8A.实验1：在式(V)和(VII)化合物的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240002851
Figure BDA0003364356240002861
表8B.实验2：在式(V)和(VII)化合物的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240002871
Figure BDA0003364356240002881
表9A.实验1：在式(V)和(VII)化合物的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240002882
Figure BDA0003364356240002891
表9B.实验2：在式(V)和(VII)化合物的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240002892
Figure BDA0003364356240002901
表10：在PHH细胞培养系统中式(V)和(VII)化合物的体外组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240002902
Figure BDA0003364356240002911
*在99.9％置信区间下
#在较早的独立实验中测定
实施例3.式(V)的化合物和PEG-IFNα2a的体外组合
研究目标
为了确定式(V)化合物(靶向HBV基因组并抑制HBV DNA、HBsAg与HBeAg、和HBx的产生的GalNAc-缀合的siRNA)和聚乙二醇化干扰素α2a(PEG-IFNα2a，一种激活肝细胞中的先天性免疫途径的抗病毒细胞因子，并且在临床上用于治疗慢性乙型肝炎)的双药物组合在细胞培养模型系统中使用感染HBV的人原代肝细胞在体外是否是相加性、协同性或拮抗性的。
结果和结论
将PEG-IFNα2a(在3倍稀释系列中80.0IU/mL至0.99IU/mL的浓度范围和5点滴定)与式(V)化合物(在3倍稀释系列中3.0μg/mL至0.04μg/mL的浓度范围和5点滴定)组合在两个独立实验性试验中的每一个中在三个复制板上进行测试。在单独或组合形式的PEG-IFNa2a或式(V)化合物治疗下观察到的HBV DNA和HBsAg的平均抑制％、3个复制板的标准偏差％、平均相加性抑制％和协同/拮抗体积示于如下所示的表11A、11B、12A和12B中。在较早实验中确定PEG-IFNα2a和式(V)化合物的EC50值并示于表13中。
当将双抑制剂组合的观测值与通过计算协同/拮抗体积由相加性相互作用所预期的值行比较时，发现组合作用是针对HBsAg和HBV DNA抑制的相加性(没有显著协同或拮抗)，按照MacSynergy II分析并使用Prichard和Shipman(1992)描述的解释标准(表13)。通过显微镜术或CellTiter-Glo测定未观察到细胞活力的显著抑制。
表11A.实验1：在式(V)的化合物和PEG-IFNα2a的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240002921
Figure BDA0003364356240002931
表11B.实验2：在式(V)的化合物和PEG-IFNα2a的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240002932
Figure BDA0003364356240002941
表12A.实验1：在式(V)的化合物和PEG-IFNα2a的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240002942
Figure BDA0003364356240002951
表12B.实验2：在式(V)的化合物和PEG-IFNα2a的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240002952
Figure BDA0003364356240002961
表13：在PHH细胞培养系统中PEG-IFNα2a和(V)化合物的体外组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240002971
*在99.9％置信区间下
#在较早的独立实验中测定
实施例4.式(V)的化合物和TAF的体外组合
研究目标
为了确定式(V)化合物(靶向HBV基因组并抑制HBV DNA、HBsAg与HBeAg、和HBx的产生的GalNAc-缀合的siRNA)和富马酸替诺福韦艾拉酚胺(TAF，一种抑制HBV逆转录酶的核苷类似物，并且在临床上用于治疗慢性乙型肝炎)的双药物组合在细胞培养模型系统中使用感染HBV的人原代肝细胞在体外是否为相加性、协同性或拮抗性的。
结果和结论
将TAF(在3倍稀释系列中1.000nM至0.012nM的浓度范围和5点滴定)与式(V)化合物(在3倍稀释系列中3.0μg/mL至0.04μg/mL的浓度范围和5点滴定)组合在两个独立实验性试验中的每一个中在三个复制板上进行测试。在单独或组合形式的TAF或式(V)化合物治疗下观察到的HBV DNA和HBsAg的平均抑制％和3个重复的标准偏差示于如下所示的表14A、14B、15A和15B中。在较早实验中测定TAF和式(V)化合物的EC50值并示于表16中。
当将双抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值进行比较时，组合作用的范围从针对HBsAg抑制的相加性(没有显著协同或拮抗)至针对HBVDNA抑制的相加性至中等协同，按照MacSynergy II分析并使用Prichard和Shipman(1992)描述的解释标准(表16)。通过显微镜术或CellTiter-Glo测定未观察到细胞活力的显著抑制。
表14A.实验1：在式(V)化合物和TAF的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240002981
Figure BDA0003364356240002991
表14B.实验2：在式(V)化合物和TAF的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240002992
Figure BDA0003364356240003001
表15A.实验1：在式(V)化合物和TAF的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240003011
Figure BDA0003364356240003021
表15B.实验2：在式(V)化合物和TAF的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240003022
Figure BDA0003364356240003031
表16：在PHH细胞培养系统中式(V)化合物和TAF的体外组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240003032
*在99.9％置信区间下
#在较早的独立实验中测定
实施例5-14
以下化合物在实施例中提及。化合物1和2可使用已知程序(参见，例如WO 2018/085619和WO 2018/172852)制备。
Figure BDA0003364356240003041
实施例5-8
体外双重组合研究目标：
为了确定HBV pgRNA衣壳化的小分子抑制剂(化合物1)与HBV聚合酶的核苷(酸)类似物抑制剂恩替卡韦(ETV)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)或替诺福韦艾拉酚胺(TAF)和SIRNA-NP(一种siRNA制剂，其旨在促进所有病毒mRNA转录物和病毒抗原的有效敲除)的双药物组合在HBV细胞培养物模型系统中在体外是否是相加性、协同性或拮抗性的。
SIRNA-NP的组合物：
SIRNA-NP是靶向HBV基因组的三种siRNA的混合物的脂质纳米颗粒制剂。以下脂质纳米颗粒(LNP)制剂在本文所报告的实验中用于递送HBV siRNA。表中所示的值是摩尔百分比。缩写DSPC意指二硬脂酰磷脂酰胆碱。
PEG(20000)-C-DMA 阳离子脂质 胆固醇 DSPC
1.6 54.6 32.8 10.9
阳离子脂质具有以下结构：
Figure BDA0003364356240003051
三种siRNA的序列如下所示。
Figure BDA0003364356240003052
在HepDE19细胞实验方案中的体外双重剂组合：
使用Prichard和Shipman 1990的方法(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)进行体外双重剂组合研究。HepDE19细胞培养系统是HepG2(人肝癌)来源的细胞系，其在CMV Tet-关闭启动子系统的控制下支持HBV DNA复制和cccDNA形成(Guo等人2007.J Virol 81:12472-84)。将HepDE19(50,000个细胞/孔)铺于补充有具有四环素(1μg/mL)的10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的DMEM/F12培养基中的96孔胶原蛋白包被的组织培养物处理的微量滴定板中并且在37℃和5％CO2下在湿润的培育箱中培育隔夜。第二天，将细胞转入不含四环素的新鲜培养基中并且在37℃和5％CO2下培育4小时。将细胞转入新鲜培养基中并用抑制剂A和抑制剂B在跨其相应EC50值的浓度范围下处理。将抑制剂在100％DMSO(化合物1、ETV、TDF和TAF)或生长培养基(SIRNA-NP)中稀释并且测定中的最终DMSO浓度≤0.5％。将两种抑制剂单独地以及以棋盘方式组合测试，以便将抑制剂A的每个浓度与抑制剂B的每个浓度组合来确定它们对rcDNA产生的抑制的组合作用。在每个实验中每个浓度组合存在四个重复。将板在37℃和5％CO2下在湿润的培育箱中培育7天。使用具有HBV特异性定制探针集(基因型D ayw)的Quantigene 2.0bDNA测定试剂盒(Affymetrix,Santa Clara,CA)并根据制造商说明书测量存在于孔中的rcDNA的水平，并且使用发光板读数器来读取并且将由各孔产生的相对发光单位(RLU)数据计算为未经处理的对照孔的抑制％，并且使用MacSynergy II程序进行分析以便使用Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)所建立的解释指南来确定所述组合是否是协同性、相加性或拮抗性的，如下：在99％CI(55％邦费洛尼调整的)下，协同体积<25μM2％(对数体积<2)＝可能不显著；在99％CI(55％邦费洛尼调整的)下，25-50μM2％(对数体积>2且<5)＝微小但显著；在99％CI(55％邦费洛尼调整的)下，50-100μM2％(对数体积>5且<9)＝中等，在体内可以是重要的；在99％CI(55％邦费洛尼调整的)下超过100μM2％(对数体积>9)＝强协同，在体内可能很重要；体积接近1000μM2％(对数体积>90)＝异常高的，核对数据。每个实验重复至少三次，并且计算单独测定的平均值和标准偏差以推导出结论。同时在每个实验中，使用复制板一式三份评估抑制剂组合对细胞活力的作用，使用Cell-Titer Glo试剂(Promega,Madison,WI)，按照制造商说明书将三份抑制剂组合用于确定ATP含量作为细胞活力的量度。
结果和结论：
实施例5：在HepDE19细胞中化合物1和恩替卡韦(ETV)的体外双重组合：
将化合物1(在2倍稀释系列中1.25μM至0.005μM的浓度范围和9点滴定或在3倍稀释系列中0.6μM至0.007μM的浓度范围和5点滴定)与ETV(分别地，在3倍稀释系列中0.025μM至0.0003μM的浓度范围和5点滴定或在2倍稀释系列中0.050μM至0.0002μM的浓度范围和9点滴定范围)组合进行测试。来自3个独立实验中的每一个，在单独或组合形式的化合物1或ETV治疗下观察到的rcDNA量的平均抑制％和至少3个重复的标准偏差示于表1A-1C中。化合物1和ETV的平均EC50值示于表5中。基于平均协同和拮抗体积来确定所述组合是否是相加性、协同性或拮抗性的。当将双抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值(在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼调整)进行比较时，按照MacSynergyII分析并使用以上Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res14:181-205)描述的解释标准，发现所述组合是相加性的(表5)。
实施例6：在HepDE19细胞中化合物1和富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)的体外双重组合：
将化合物1(在2倍稀释系列中1.25μM至0.005μM的浓度范围和9点滴定或在3倍稀释系列中0.6μM至0.007μM的浓度范围和5点滴定)与TDF(分别地，在3倍稀释系列中0.750μM至0.009μM的浓度范围和5点滴定或在2倍稀释系列中2.5μM至0.01μM的浓度范围和9点滴定范围)组合进行测试。来自3个独立实验中的每一个，在单独或组合形式的化合物1或TDF治疗下观察到的rcDNA量的平均抑制％和4个重复的标准偏差示于表2A-2C中。化合物1和TDF的平均EC50值示于表5中。基于平均协同与拮抗体积来确定所述组合是否是相加性、协同性或拮抗性的。当将双抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值(在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼调整)进行比较时，按照MacSynergy II分析并使用以上Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)描述的解释标准，发现所述组合是相加性的(表5)。
实施例7：在HepDE19细胞中化合物1和替诺福韦艾拉酚胺(TAF)的体外双重组合：
将化合物1(在2倍稀释系列中1.25μM至0.005μM在浓度范围和9点滴定或在3倍稀释系列中0.6μM至0.007μM的浓度范围和5点滴定)与TAF(分别地，在3倍稀释系列中0.18μM至0.002μM的浓度范围和5点滴定或在2倍稀释系列中0.32μM至0.001μM的浓度范围和9点滴定范围)组合进行测试。来自4个独立实验中的每一个，在单独或组合形式的化合物1或TAF治疗下观察到的rcDNA量的平均抑制％和至少3个重复的标准偏差示于表3A-3D中。化合物1和TAF的平均EC50值示于表5中。基于平均协同与拮抗体积来确定所述组合是否是相加性、协同性或拮抗性的。当将双抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值(在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼调整)进行比较时，按照MacSynergy II分析并使用以上Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)描述的解释标准，发现所述组合是中等协同性的(表5)。
实施例8：在HepDE19细胞中化合物1和SIRNA-NP的体外双重组合：
将化合物1(在2倍稀释系列中1.25μM至0.005μM的浓度范围和9点滴定或在3倍稀释系列中0.6μM至0.007μM的浓度范围和5点滴定)与SIRNA-NP(分别地，在3倍稀释系列中0.009μg/mL至0.0001μg/mL的浓度范围和5点滴定或在2倍稀释系列中0.016μg/mL至0.00006μM的浓度范围和9点滴定范围)组合进行测试。来自4个独立实验中的每一个，在单独或组合形式的化合物1或SIRNA-NP治疗下观察到的rcDNA量的平均抑制％和4个重复的标准偏差示于表4A-4C中。化合物1和SIRNA-NP的平均EC50值示于表5中。基于平均协同与拮抗体积来确定所述组合是否是相加性、协同性或拮抗性的。当将双抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值(在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼调整)进行比较时，按照MacSynergy II分析并使用以上Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)描述的解释标准，发现所述组合是相加性的(表5)。
表1A：在HepDE19细胞中化合物1和恩替卡韦(ETV)的体外组合：实验1
Figure BDA0003364356240003091
Figure BDA0003364356240003101
表1B：在HepDE19细胞中化合物1和恩替卡韦(ETV)的体外组合：实验2
Figure BDA0003364356240003102
Figure BDA0003364356240003111
表1C：在HepDE19细胞中化合物1和恩替卡韦(ETV)的体外组合：实验3
Figure BDA0003364356240003121
Figure BDA0003364356240003131
表2A：在HepDE19细胞中化合物1和富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)的体外组合：实验1
Figure BDA0003364356240003132
Figure BDA0003364356240003141
表2B：在HepDE19细胞中化合物1和富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)的体外组合：实验2
Figure BDA0003364356240003142
Figure BDA0003364356240003151
表2C：在HepDE19细胞中化合物1和富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)的体外组合：实验3
Figure BDA0003364356240003152
Figure BDA0003364356240003161
Figure BDA0003364356240003171
表3A：在HepDE19细胞中化合物1和替诺福韦艾拉酚胺(TAF)的体外组合：实验1
Figure BDA0003364356240003172
Figure BDA0003364356240003181
表3B：在HepDE19细胞中化合物1和替诺福韦艾拉酚胺(TAF)的体外组合：实验2
Figure BDA0003364356240003182
Figure BDA0003364356240003191
表3C：在HepDE19细胞中化合物1和替诺福韦艾拉酚胺(TAF)的体外组合：实验3
Figure BDA0003364356240003192
Figure BDA0003364356240003201
Figure BDA0003364356240003211
表3D：在HepDE19细胞中化合物1和替诺福韦艾拉酚胺(TAF)的体外组合：实验4
Figure BDA0003364356240003212
Figure BDA0003364356240003221
表4A：在HepDE19细胞中化合物1和SIRNA-NP的体外组合：实验1
Figure BDA0003364356240003222
Figure BDA0003364356240003231
表4B：在HepDE19细胞中化合物1和SIRNA-NP的体外组合：实验2
Figure BDA0003364356240003232
Figure BDA0003364356240003241
表4C：在HepDE19细胞中化合物1和SIRNA-NP的体外组合：实验3
Figure BDA0003364356240003251
Figure BDA0003364356240003261
表5：使用bDNA测定在采用rcDNA定量的HepDE19细胞培养系统中的体外组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240003262
注释：SIRNA-NP EC50值以μg/mL表示；括号中的值是平均值的标准偏差。在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼校正来确定这些值。n值是指独立测定数量。
实施例9-11
体外三重组合研究目标：
为了确定HBV pgRNA衣壳化的小分子抑制剂(化合物1)与HBV RNA去稳定剂(化合物2)和HBV聚合酶的核苷(酸)类似物抑制剂恩替卡韦(ETV)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)或替诺福韦艾拉酚胺(TAF)的三药组合在HBV细胞培养模型系统中在体外是否是相加性、协同性或拮抗性的。
在HepG 2.2.15细胞中体外三重剂组合：实验方案：
使用Prichard和Shipman 1990(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.AntiviralRes 14:181-205)的方法进行体外三重剂组合研究。HepG2.2.15细胞系衍生自具有组成型HBV(基因型D，血清型ayw)表达的HepG2细胞(Sells MA,Chen ML,Acs G.1987.Proc NatlAcad Sci U S A 84:1005-9)。将HepG 2.2.15(10,000个细胞/孔)铺于补充有10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素+200mg G418/L的RPMI 1640培养基中的96孔胶原蛋白包被的组织培养物处理的微量滴定板中并且在37℃和5％CO2下在湿润的培育箱中培育隔夜。第二天，将细胞用化合物1和化合物2在跨其相应EC50值的浓度范围下处理。将抑制剂在100％DMSO(化合物1、化合物2、ETV、TDF和TAF)中稀释并且测定中的最终DMSO浓度≤0.5％。以棋盘方式进行三重组合研究，以便化合物1的每个浓度与化合物2的每个浓度在固定浓度(包括具有0浓度的组)的第三剂(ETV、TDF或TAF)存在下组合以确定它们的组合对抑制培养上清液中rcDNA产生的作用。对于每个单浓度的第三剂，存在化合物1+化合物2的每个浓度组合的四个重复。将板在37℃和5％CO2下在湿润的培育箱中培育7天。使用具有HBV特异性定制探针集(基因型D ayw)的Quantigene 2.0bDNA测定试剂盒(Affymetrix,Santa Clara,CA)并根据制造商说明书测量存在于培养上清液中的rcDNA的水平，并且使用发光板读数器来读取并且将由各孔产生的相对发光单位(RLU)数据计算为未经处理的对照孔的抑制％，并且使用MacSynergy II程序进行分析以便使用Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)所建立的解释指南来确定所述组合是否是协同性、相加性或拮抗性的，如下：在99％CI(55％邦费洛尼调整的)下，协同体积<25μM2％(对数体积<2)＝可能不显著；在99％CI(55％邦费洛尼调整的)下，25-50μM2％(对数体积>2且<5)＝微小但显著；在99％CI(55％邦费洛尼调整的)下，50-100μM2％(对数体积>5且<9)＝中等，在活体内可以是重要的；在99％CI(55％邦费洛尼调整的)下，超过100μM2％(对数体积>9)＝强协同，在体内可能很重要；体积接近1000μM2％(对数体积>90)＝异常高的，核对数据。同时在每个实验中，一式三份评估抑制剂组合对细胞活力的作用，使用Cell-Titer Glo试剂(Promega,Madison,WI)，按照制造商说明书将三份抑制剂组合用于确定ATP含量作为细胞活力的量度。
体外三重组合研究的结果和结论：
实施例9：在HepG 2.2.15细胞中化合物1+化合物2和恩替卡韦(ETV)的体外三重组合：
将化合物1(在3倍稀释系列中0.405μM至0.005μM的浓度范围和5点滴定)与化合物2(在2倍稀释系列中0.005μM至0.00002μM的浓度范围和9点滴定)组合在不同固定浓度的ETV(在3倍稀释系列中0.0003μM至0.0009μM的浓度范围，包括0μM ETV浓度，双重组合组)下进行测试。在不同浓度的ETV下，在单独或三重组合形式的化合物1或化合物2下观察到的rcDNA量的平均抑制％和标准偏差示于表6A-6E中。基于平均协同与拮抗体积来确定所述组合是否是相加性、协同性或拮抗性的。当将双重和三重抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值(在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼调整)进行比较时，按照MacSynergy II分析并使用以上Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)描述的解释标准，发现所述组合是相加性的(表9)。
实施例10：在HepG 2.2.15细胞中化合物1+化合物2+替诺福韦艾拉酚胺(TAF)的体外三重组合：
将化合物1(在3倍稀释系列中0.405μM至0.005μM的浓度范围和5点滴定)与化合物2(在2倍稀释系列中0.027μM至0.0001μM的浓度范围和9点滴定)组合在不同固定浓度的TAF(在3倍稀释系列中0.003μM至0.100μM的浓度范围，包括0μM TAF浓度，双重组合组)下进行测试。在不同浓度的TAF下，在单独或三重组合形式的化合物1或化合物2下观察到的rcDNA量的平均抑制％和标准偏差示于表7A-7E中。基于平均协同与拮抗体积来确定所述组合是否是相加性、协同性或拮抗性的。当将双重和三重抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值(在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼调整)进行比较时，按照MacSynergy II分析并使用以上Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)描述的解释标准，发现所述组合是相加性的(表10)。
实施例11：在HepG 2.2.15细胞中化合物1+化合物2+富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)的体外三重组合：
将化合物1(在3倍稀释系列中0.405μM至0.005μM的浓度范围和5点滴定)与化合物2(在2倍稀释系列中0.027μM至0.0001μM的浓度范围和9点滴定)组合在不同固定浓度的TDF(在3倍稀释系列中0.010μM至0.100μM的浓度范围，包括0μM TDF浓度，双重组合组)下进行测试。在不同浓度的TDF下，在单独或三重组合形式的化合物1或化合物2下观察到的rcDNA量的平均抑制％和标准偏差示于表8A-8D中。基于平均协同与拮抗体积来确定所述组合是否是相加性、协同性或拮抗性的。当将双重和三重抑制剂组合的观测值与针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值(在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼调整)进行比较时，按照MacSynergy II分析并使用以上Prichard和Shipman(Prichard MN,Shipman C,Jr.1990.Antiviral Res 14:181-205)描述的解释标准，发现所述组合是相加性的(表11)。
表6A：在0μM ETV存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)：
Figure BDA0003364356240003301
Figure BDA0003364356240003311
表6B：在0.0003μM ETV存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003312
Figure BDA0003364356240003321
表6C：在0.001μM ETV存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003322
Figure BDA0003364356240003331
Figure BDA0003364356240003341
表6D：在0.003μM ETV存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003342
Figure BDA0003364356240003351
表6E：在0.009μM ETV存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003352
Figure BDA0003364356240003361
表7A：在0μM TAF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)：
Figure BDA0003364356240003362
Figure BDA0003364356240003371
表7B：在0.003μM TAF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003381
Figure BDA0003364356240003391
表7C：在0.010μM TAF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003392
Figure BDA0003364356240003401
表7D：在0.030μM TAF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003402
Figure BDA0003364356240003411
表7E：在0.100μM TAF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003412
Figure BDA0003364356240003421
Figure BDA0003364356240003431
表8A：在0μM TDF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)：
Figure BDA0003364356240003432
Figure BDA0003364356240003441
表8B：在0.010μM TDF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003442
Figure BDA0003364356240003451
表8C：在0.030μM TDF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003461
Figure BDA0003364356240003471
表8D：在0.100μM TDF存在下化合物1和化合物2的体外组合(HepG 2.2.15细胞培养模型)
Figure BDA0003364356240003472
Figure BDA0003364356240003481
表9：使用bDNA测定在采用rcDNA定量的HepG2.2.15细胞培养系统中化合物1+化合物2+ETV的体外三重组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240003482
Figure BDA0003364356240003491
注释：在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼校正来确定这些值。
表10：使用bDNA测定在采用rcDNA定量的HepG2.2.15细胞培养系统中化合物1+化合物2+TAF的体外三重组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240003492
注释：在99％置信区间下，伴有55％邦费洛尼校正来确定这些值。
表11：使用bDNA测定在采用rcDNA定量的HepG2.2.15细胞培养系统中化合物1+化合物2+TDF的体外三重组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240003493
Figure BDA0003364356240003501
实施例12：包含化合物(1)、化合物(2)和TDF的组合的评价
将乙型肝炎病毒(HBV)的小鼠模型用于评估小分子HBV RNA去稳定剂和HBV衣壳化小分子抑制剂作为独立治疗、彼此组合以及与批准的核苷(酸)类似物化合物组合的抗HBV作用。
HBV RNA去稳定剂(化合物(2))具有以下结构：
Figure BDA0003364356240003502
HBV衣壳化抑制剂(化合物(1))具有以下结构：
Figure BDA0003364356240003503
存在许多批准用于治疗慢性乙型肝炎感染的核苷(酸)类似物并且其作用模式是抑制HBV聚合酶/逆转录酶。在此研究中，特别利用富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)作为此类药物的一个实例。
Figure BDA0003364356240003511
在第-7天，经由流体动力学注射(HDI；快速注射1.6mL至尾静脉中)向NOD.CB17-Prkdcscid/J小鼠施用10微克质粒pHBV1.3(基于Guidotti,L.等人,Journal of Virology,1995,69(10):6158–6169中提供的详情来构建)。此质粒携带HBV基因组(基因型D，血清型ayw)的1.3倍过长拷贝，当表达时，其生成乙型肝炎病毒颗粒，包括HBV DNA和HBsAg。作为治疗的抗HBV作用的读出，评估血清HBV DNA和血清HBsAg。在使用先前公开的引物和探针序列(Tanaka,Y.等人,Journal of Medical Virology,2004,72:223-229)进行总DNA提取之后，使用定量PCR测定测量小鼠中的血清HBV DNA浓度。使用市售ELISA试剂盒(HBsAg EIA 3.0480Test Kit,Bio-Rad)测量小鼠中的血清HBsAg浓度。
用RNA去稳定剂治疗动物如下：第0天开始，在整个研究期间以每天一次的频率向动物经口施用10mg/kg剂量的RNA去稳定剂，总共7个剂量。用衣壳化抑制剂治疗动物如下：第0天开始，在整个研究期间以每天一次的频率向动物经口施用100mg/kg剂量的衣壳化抑制剂，总共7个剂量。用核苷(酸)类似物治疗动物如下：第0天开始，在整个研究期间以每天一次的频率向动物经口施用0.4mg/kg剂量的核苷(酸)类似物，总共7个剂量。将RNA去稳定剂、衣壳化抑制剂和核苷(酸)类似物各自溶于相同的共溶剂制剂中用于施用，并且向阴性对照动物单独施用共溶剂制剂。为了计算治疗特异性作用，将所治疗的组与阴性对照(媒介物治疗)动物相比较。
通过在第-1天(在研究治疗阶段之前)、第4天和第7天收集血液并分析其血清HBVDNA和HBsAg含量来确定这些治疗的作用。表12示出了治疗组平均(n＝7或8；±平均值标准误差)血清HBV DNA浓度，表示为与阴性对照相比的对数减少，呈第-1天基线的百分比。表13示出了治疗组平均(n＝7或8；±平均值标准误差)血清HBsAg浓度，表示为与阴性对照相比的对数减少，呈第-1天基线的百分比。
研究结果如下：1.符合理解药物的作用机制，治疗组合产生比任何单独的单一剂更大的病毒复制(由血清HBV DNA生物标志物表示)减少，并且来自三重组合的平均减少大于任何双重组合。2.减少病毒蛋白产生(由血清HBsAg生物标志物表示)的作用是由RNA去稳定剂引起的，并且当RNA去稳定剂与衣壳抑制剂或核苷(酸)类似物组合或与两种剂一起组合施用时不会被拮抗。
表12.单独地且以双重和三重组合形式每天一次经口施用RNA去稳定剂、衣壳化抑制剂和核苷(酸)类似物之后在HBV感染小鼠模型中血清HBV DNA的减少。
Figure BDA0003364356240003521
表13.单独地且以双重和三重组合形式每天一次经口施用RNA去稳定剂、衣壳化抑制剂和核苷(酸)类似物之后在HBV感染小鼠模型中血清HBsAg的减少。
Figure BDA0003364356240003531
实施例13-14：包含化合物(2)和ETV或化合物2和TAF的组合的评价
体外组合研究目标：
化合物(2)是特异性地使HBV RNA(pgRNA和sRNA)不稳定的小分子。因此，HBV蛋白诸如乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)以及HBV DNA复制也受化合物(2)的抑制。然而，核苷类似物抑制剂恩替卡韦(ETV)和替诺福韦艾拉酚胺(TAF)仅靶向HBV DNA复制。因此，将HepG2.2.15细胞系用于确定组合治疗中的两种化合物(HBV RNA去稳定剂和HBV DNA抑制剂)是否将在体外产生协同、拮抗或相加作用。
小分子化学结构：
Figure BDA0003364356240003532
体外组合实验方案：
使用Prichard和Shipman(Prichard MN和Shipman C Jr.,Antiviral Research,1990,14(4-5),181-205；以及Prichard MN等人,MacSynergy II)的方法进行体外组合研究。HepG2.2.15细胞培养系统是衍生自人肝胚细胞瘤HepG2细胞的细胞系，已如先前Sells等人(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,1987.第84卷:1005–1009)中所述用adw2亚型HBV基因组对其进行稳定转染。HepG2.2.15细胞分泌Dane样病毒颗粒，产生HBV DNA并产生病毒蛋白、HBeAg和HBsAg。
对于这些组合研究，核苷类似物ETV和TAF将称为抑制剂A，而HBV RNA去稳定剂、化合物(2)称作抑制剂B。这些剂的EC50值示于表16中。虽然可在这些抑制剂存在下确定HBVDNA、RNA和蛋白质的抑制，但使用分支DNA测定，因为所述测定能够定量地测量HBV DNA的水平。
HBV DNA的检测。分支DNA测定(bDNA)用于确定化合物组合对HBV DNA的作用。如上所述将HepG2.2.15(10,000个细胞/孔)在加补充剂的DMEM培养基中培养。第二天，向细胞补充新鲜的培养基，接着添加抑制剂A和B，两者都溶于100％DMSO中。在37℃下，在不补充培养基或化合物下培育微量滴定细胞板持续总共6天。连续稀释跨越的浓度范围对应于各化合物的EC50值。除化合物的组合测试之外，还单独地测试抑制剂A和B。
在溶解中进行蛋白酶K消化之后，使用具有HBV特异性定制探针集(基因型D ayw；DF-10739)的Quantigene 2.0bDNA测定试剂盒(Affymetrix,Santa Clara,CA)且根据制造商说明书测量存在于抑制剂处理的上清液孔中的bDNA水平。使用Victor发光板读数器(PerkinElmer Model 1420多标记计数器)读取板并且将由各孔生成的RLU数据计算为未经处理的对照孔的抑制％。使用MacSynergy II程序(Prichard MN,Shipman C Jr.AntiviralResearch,1990.第14(4-5)卷:181-205；Prichard MN、Aseltine KR和Shipman,C.MacSynergy II.University of Michigan 1992)，使用由Prichard和Shipman组合模型建立的解释指南分析数据，以便使用由Prichard和Shipman所建立的解释指南确定所述组合是否是协同性、相加性或拮抗性的，如下：在95％CI下，协同体积<25μM2％(对数体积<2)＝可能不显著；25-50(对数体积>2且<5)＝微小但显著；50-100(对数体积>5且<9)＝中等，在体内可以是重要的；超过100(对数体积>9)＝强协同，在体内可能很重要；体积接近1000(对数体积>90)＝异常高的，核对数据。在Microsoft Excel中使用XL-Fit模块分析来自经单一化合物处理的细胞的RLU数据，以便使用4参数曲线拟合算法确定EC50值。
实施例13：化合物(2)和ETV的体外组合：
将ETV(在半对数中0.1μM至0.000015μM的浓度范围，3.16倍稀释系列和9点滴定)与化合物(2)(在半对数中0.01μM至0.0001μM的浓度范围，3.16倍稀释系列和5点滴定)组合来测试。用每个测定一式两份完成组合结果，每个测定由4个技术重复组成。根据Prichard和Shipman得到的协同与拮抗体积的测量值和解释示于表16中。此组合的抗病毒活性示于表14a中；协同与拮抗体积示于表14b中。此组合的协同活性示于表14d中。在此测定系统中，所述组合造成HBV bDNA的中等协同抑制。通过显微镜术或Cell-Titer Glo测定未观察到细胞活力或增殖的显著抑制(表14c)。
表14a.化合物(2)和ETV组合的抗病毒活性：
平均抑制百分比对比阴性对照(n＝4个样品/数据点)
Figure BDA0003364356240003551
Figure BDA0003364356240003561
表14b.化合物(2)和ETV组合的MacSynergy体积计算：99.99％置信区间(邦费洛尼调整96％)
Figure BDA0003364356240003562
表14c.化合物(2)和ETV组合的细胞毒性：平均细胞活力百分比对比对照
Figure BDA0003364356240003563
表14d.化合物(2)和ETV组合的抗病毒活性：
相加性抑制百分比对比阴性对照(n＝4个样品/数据点)
Figure BDA0003364356240003571
实施例14：化合物(2)和TAF的体外组合：
将化合物(2)(在半对数中0.01μM至0.000015μM的浓度范围，3.16倍稀释系列和5点滴定)与TAF(在半对数中2.0uM至0.0002uM的浓度范围，3.16倍稀释系列和9点滴定)组合来测试。用每个测定一式两份完成组合结果，每个测定由4个技术重复组成。根据Prichard和Shipman得到的协同与拮抗体积的测量值和解释示于表16中。此组合的抗病毒活性示于表15a中；协同与拮抗体积示于表15b中。此组合的相加性抑制活性示于表15d中。在此测定系统中，所述组合造成HBV DNA的相加性抑制。通过显微镜术或Cell-Titer Glo测定未观察到细胞活力或增殖的显著抑制(表15c)。
表15a.化合物(2)和TAF组合的抗病毒活性：
平均抑制百分比对比阴性对照(n＝4个样品/数据点)
Figure BDA0003364356240003572
Figure BDA0003364356240003581
表15b.化合物(2)和TAF组合的MacSynergy体积计算：99.99％置信区间(邦费洛尼调整96％)
Figure BDA0003364356240003582
Figure BDA0003364356240003591
表15c.化合物(2)与TAF组合的细胞毒性：平均细胞活力百分比对比对照
Figure BDA0003364356240003592
表15d.化合物(2)和TAF组合的抗病毒活性：
相加性抑制百分比对比阴性对照(n＝4个样品/数据点)
Figure BDA0003364356240003601
表16.在采用bDNA定量的HepG2.2.15细胞培养系统中的体外组合研究的结果汇总表：
Figure BDA0003364356240003602
*在99.9％置信区间下
实施例15-17
对于以下实施例15-17，使用类似于国际专利申请公布号WO2018/191278中所述的程序制备式(I)的化合物，其中siRNA是所述的siRNA 2(化合物1)。恩替卡韦购自BidePharmatech Ltd.(目录号BD127328WG0127328-160902001)。富马酸替诺福韦二吡呋酯购自Shanghai Titan Scientific Co.,Ltd(目录号P1131909)
在某些实施方案中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 1。在某些实施方案中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 2。在下文所述的实验中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 2。式(1)的化合物描绘于下文中，其中siRNA缀合物的siRNA是siRNA 2。
Figure BDA0003364356240003611
Figure BDA0003364356240003612
实施例15：在人原代肝细胞中的组合研究
PHH
低温保存的PHH(批次QBU)购自Bioreclamation IVT
感染性病毒原液
D基因型HBV由HepG2DE19培养上清液浓缩。有关感染性病毒原液的信息示于下表中。
Figure BDA0003364356240003621
*GE＝HBV基因组当量
试剂
研究中使用的主要试剂是QIAamp 96DNA Blood Kit(QIAGEN#51162)、FastStartUniversal Probe Master(Roche#04914058001)、CellTiter-Glo(Promega#G7573)与HBsAgELISA试剂盒(Antu#CL 0310)、和Lipofectamine 3000Transfection Kit(invitrogen#L3000-015)。
仪器
研究中使用的主要仪器是BioTek Synergy 2,SpectraMax(Molecular Devices)和7900HT Fast Real-Time PCR System(ABI)。
人原代肝细胞的接种
将PHH解冻并以1.32×105个细胞/孔的密度接种至48孔板中。将PHH接种日期定义为第0天。
HBV感染
在第1天用400HBV GE/D型HBV细胞感染PHH。
PHH的培养和处理
在第0天，细胞接种之后6-8小时，用含有转染试剂的培养基在3倍稀释系列中连续稀释化合物1以得到26.55×(对于单化合物剂量反应研究)或265.5×(对于双重组合研究)的最终测试浓度。进一步用培养基稀释测试物品至最终测试浓度。
在第2天，用DMSO连续稀释测试物品TDF和ETV以得到100×的最终测试浓度。进一步用培养基100倍稀释所有测试物品。DMSO在培养基中的最终浓度为2％。
EC50值的测定
在3倍稀释系列中以6或7个浓度在一式三份样品中测试化合物1、ETV和TDF。
双重组合研究
在5×5矩阵、一式三份板上进行四个双因素组合。转染试剂存在于所有孔中。在第0天仅转染化合物1一次，并且每1或2天更新含有DMSO、ETV或TDF的培养基。
在第8天通过CellTiter Glo测定对细胞毒性的测定
在第8天，收集培养上清液，并且将CellTiter-Glo工作溶液添加至细胞板中。在室温下培育所述板10分钟。将溶解产物转移至96孔黑色板中。在BioTek Synergy2SpectraMax上测量发光信号。用下式计算细胞活力百分比：
活力％＝(样品的原始数据–空白的平均值)/(培养基对照的平均值-空白的平均值)×100
通过qPCR对培养上清液中的HBV DNA的定量
用QIAamp 96DNA Blood Kit(Qiagen-51162)分离第8天收获的培养上清液中的DNA。对于每个样品，将100μl每种培养上清液用于提取DNA。用180μl AE洗脱DNA。使用充分确认且常用的程序，通过定量PCR量化培养上清液中的HBV DNA。用下式计算HBV DNA的抑制百分比：
HBV DNA的抑制％＝[1-样品值/培养基对照的平均值]×100。
通过ELISA对培养上清液中的HBsAg的测量
使用HBsAg/ELISA试剂盒(Autobio)，根据手册测量第8天收获的培养上清液中的HBsAg。用PBS以4倍稀释样品，得到在标准曲线范围内的信号。用下式计算HBsAg的抑制百分比：
HBsAg的抑制％＝[1-样品的HBsAg数量/DMSO对照的HBV数量]×100
组合作用的分析
使用MacSynergy II软件(Prichard and Shipman,1992)分析双重组合研究的结果。组合作用以99.9％置信区间计算为协同/拮抗体积，并且根据MacSynergy II指南解释结果，如下：
<25＝不显著的协同/拮抗
25-50＝微小但显著的协同/拮抗
50-100＝中等协同/拮抗-在体内可以是重要的
>100＝强协同/拮抗–在体内可能很重要
实施例16：化合物1和ETV的体外组合
研究目标：
为了确定化合物1和恩替卡韦(ETV)的双药物组合在细胞培养模型系统中使用感染HBV的人原代肝细胞在体外是否是相加性、协同性或拮抗性的。
结果和结论：
将ETV(在3倍稀释系列中0.07nM至0.00086nM的浓度范围和5点滴定)与化合物1(在3倍稀释系列中1.0ng/mL至0.012ng/mL的浓度范围和5点滴定)组合在两个独立实验性试验中的每一个中在三个复制板上进行测试。在单独或组合形式的ETV或式(I)化合物治疗下HBV DNA和HBsAg的平均抑制％和3个重复的标准偏差示于如下所示的表2A、2B、2C和2D中。在较早实验中测定ETV和化合物1的EC50值并示于表3中。
当将双抑制剂组合的观测值与由针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值相比时，组合作用的范围从针对HBV DNA抑制的相加性(没有显著协同或拮抗)至针对HBsAg抑制的协同性，按照MacSynergy II分析并使用Prichard和Shipman(1992)所述的解释标准(表2E)。通过显微镜术或CellTiter-Glo测定未观察到细胞活力的显著抑制。
表2A.在化合物1和ETV的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240003651
Figure BDA0003364356240003661
表2B.在化合物1和ETV的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240003671
表2C.在化合物1和ETV的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240003681
表2D.在化合物1和ETV的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240003691
Figure BDA0003364356240003701
表2E：在PHH细胞培养系统中化合物1和ETV的体外组合研究的结果汇总表
Figure BDA0003364356240003702
*在99.9％置信区间下
#在较早的独立实验中测定
实施例17：化合物1和TDF的体外组合
研究目标：
为了确定化合物1和富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)的双药物组合在细胞培养模型系统中使用感染HBV的人原代肝细胞在体外是否是相加性、协同性或拮抗性的。
结果和结论：
将TDF(在3倍稀释系列中10nM至0.123nM的浓度范围和5点滴定)与化合物1(在3倍稀释系列中1.0ng/mL至0.012ng/mL的浓度范围和5点滴定)组合在两个独立实验性试验中的每一个中在三个复制板上进行测试。在单独或组合形式的TDF或化合物1治疗下HBV DNA和HBsAg的平均抑制％和3个重复的标准偏差示于如下所示的表3A、3B、3C和3D中。在较早实验中测定TDF和化合物1的EC50值并示于表3E中。
当将双抑制剂组合的观测值与由针对以上浓度范围的相加性相互作用所预期的值相比时，组合作用的范围从针对HBV DNA抑制的相加性(没有显著协同或拮抗)至针对HBsAg抑制的协同性，按照MacSynergy II分析并使用Prichard和Shipman(1992)所述的解释标准(表3)。通过显微镜术或CellTiter-Glo测定未观察到细胞活力的显著抑制。
表3A.在化合物1和TDF的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240003711
Figure BDA0003364356240003721
表3B.在化合物1和TDF的体外组合中对HBV DNA的作用
Figure BDA0003364356240003722
Figure BDA0003364356240003731
表3C.在化合物1和TDF的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240003732
Figure BDA0003364356240003741
表3D.在化合物1和TDF的体外组合中对HBsAg的作用
Figure BDA0003364356240003742
Figure BDA0003364356240003751
表3E：在PHH细胞培养系统中化合物1和TDF的体外组合研究的结果汇总表
Figure BDA0003364356240003761
*在99.9％置信区间下
#在较早的独立实验中测定
实施例18
将乙型肝炎病毒(HBV)的小鼠模型用于评估靶向HBV的GalNAc-siRNA(N-乙酰半乳糖胺缀合的短干扰RNA)和HBV衣壳化小分子抑制剂彼此组合以及与批准的核苷(酸)类似物化合物组合的抗HBV作用。评价三种抗HBV剂的相对抑制活性并且作为独立治疗、以所有可能的双重组合形式和以三重组合形式进行比较。
HBV GalNAc-siRNA具有以下结构。在某些实施方案中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 1。在某些实施方案中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 2。在下文所述的实验中，siRNA缀合物的siRNA是下文的siRNA 2。式(1)的化合物描绘于下文中，其中siRNA缀合物的siRNA是siRNA 2。
Figure BDA0003364356240003771
Figure BDA0003364356240003772
HBV衣壳化的抑制剂具有以下结构：
Figure BDA0003364356240003773
存在许多批准用于治疗慢性乙型肝炎感染的核苷(酸)类似物并且其作用模式是抑制HBV聚合酶/逆转录酶。在此研究中，利用富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)作为此类药物的一个实例。
Figure BDA0003364356240003781
在治疗开始之前，经由静脉内注射向C57BL/6小鼠施用携带HBV基因组(血清型Ayw，基因型D)的1.3倍过长拷贝的腺相关病毒(AAV)载体的1×1011个病毒基因组。此病毒载体的引入造成在其他HBV产物中HBV DNA和HBV表面抗原(HBsAg)的表达。使用定量聚合酶链反应(QPCR)测定测量小鼠中的血清HBV DNA水平，使用酶联免疫吸附测定(ELISA)测量小鼠的血清和肝脏中的HBsAg，并且使用ELISA测量抗HBsAg抗体。基于可检测的抗HBsAg抗体的缺乏以及血清HBV DNA和HBsAg水平将动物分选(随机化)至各组中，以便a)确认所有动物均表达两种标记，和b)平均血清HBV DNA和平均血清HBsAg值在开始治疗之前4-7天在各组之间类似。
如下用靶向HBV的siRNA治疗动物：分别在第0天和第28天，皮下施用3mg/kgsiRNA，在整个研究期间总共两个剂量。如下用仅媒介物对照、HBV衣壳化抑制剂和/或TDF治疗动物：从第0天开始并且在第41天结束，经口施用每日剂量100mg/kg的衣壳化抑制剂和/或1mg/kg TDF，在整个研究期间总共42个剂量。
通过在第0天(治疗前)和第14天收集少量血液并且在第42天收集末梢血来确定对血清HBV DNA的治疗效果。由第42天收集的末梢样品来确定对血清和肝脏中的HBsAg的治疗效果。
表1示出了组平均(n＝6；±平均标准误差)血清HBV DNA浓度，表示为log10个拷贝/微升。表2示出了组平均(n＝6；±平均标准误差)血清HBsAg浓度，表示为log10 IU/mL；和肝脏HBsAg浓度，表示为log10 IU/mg肝脏蛋白质。经测量低于测定定量下限(LLOQ)的任何个体动物样品均报告为LLOQ值。
数据表明，当同时施用不同药物作用机制的剂(siRNA、衣壳化抑制剂、核苷(酸)类似物)时，抗HBV作用更大。三种剂在一起的组合比任何单独的单一治疗(对于TDF，最大0.73log10减小)或两种剂的任何组合(对于siRNA加TDF，最大1.92log10减小)产生更大的HBV DNA抑制(从第0天至第42天，有-2.23log10减小)。HBsAg抑制发生在包括HBV siRNA剂的所有治疗方案中，虽然与其他两种剂的组合并未明显改变血清中的抗HBsAg作用，但三重组合方案确实造成肝脏HBsAg的最大减小(对比对照组1有-1.78log10减少，而单独siRNA有-1.36log10减少)。
表1.单独地且以双重和三重组合形式每4周皮下施用靶向HBV的GalNAc-siRNA、每天一次经口施用HBV衣壳化抑制剂和/或每天一次经口施用核苷(酸)类似物TDF之后HBV感染小鼠模型中的血清HBV DNA。
Figure BDA0003364356240003791
表2.单独地且以双重和三重组合形式每4周皮下施用靶向HBV的GalNAc-siRNA、每天一次经口施用HBV衣壳化抑制剂和/或每天一次经口施用核苷(酸)类似物TDF之后HBV感染小鼠模型中的血清和肝脏HBsAg。
Figure BDA0003364356240003792
Figure BDA0003364356240003801
所有出版物、专利和专利文件均以引用的方式并入本文，如同其单独以引用的方式并入一样。本发明已参照各种特定和优选实施方案和技术进行描述。但应理解，可在本发明的精神和范围内对其进行许多改变和修改。

Claims (55)

1.一种改善感染了HBV的人受试者的HBV感染的至少一种症状的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)向所述人受试者施用GalNAc-siRNA缀合物，其中所述缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分；以及
(b)向所述受试者施用至少一种选自由以下组成的组的抗HBV剂：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用RNA去稳定剂。
3.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用衣壳抑制剂。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用逆转录酶抑制剂。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用免疫刺激剂。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用cccDNA形成抑制剂。
7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中皮下施用所述GalNAc-siRNA缀合物。
9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中经口施用步骤(b)的所述抗HBV剂。
10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中以丸剂形式经口施用步骤(b)的所述抗HBV剂。
11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述逆转录酶抑制剂是核苷类似物HBV逆转录酶抑制剂。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述GalNAc-siRNA缀合物是如实施例1-4中所述的式(V)的化合物或其盐。
13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述RNA去稳定剂是如实施例1-4中所述的式(VI)的化合物或其盐。
14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述衣壳抑制剂是如实施例1-4中所述的式(VII)的化合物或其盐。
15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述免疫刺激剂是聚乙二醇化干扰素(PEG-IFN)。
16.如权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述免疫刺激剂是聚乙二醇化干扰素α2a(PEG-IFNα2a)。
17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述逆转录酶抑制剂是富马酸替诺福韦艾拉酚胺(TAF)。
18.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述逆转录酶抑制剂是富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)。
19.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述逆转录酶抑制剂是恩替卡韦(ETV)。
20.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其包括施用恩替卡韦和富马酸替诺福韦二吡呋酯
21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述GalNAc-siRNA缀合物与步骤(b)的所述抗HBV剂同时施用。
22.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述GalNAc-siRNA缀合物与步骤(b)的所述抗HBV剂依序施用。
23.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述GalNAc-siRNA缀合物在施用步骤(b)的所述抗HBV剂之前施用。
24.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述GalNAc-siRNA缀合物在施用步骤(b)的所述抗HBV剂之后施用。
25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用至少一种另外的治疗剂。
26.一种改善感染了HDV的人受试者的HDV感染的至少一种症状的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)向所述人受试者施用GalNAc-siRNA缀合物，其中所述缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分；以及
(b)向所述受试者施用至少一种选自由以下组成的组的抗HBV剂：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
27.GalNAc-siRNA缀合物与至少一种抗HBV剂的组合用于改善人受试者的HBV感染的至少一种症状的用途，其中所述缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分，并且所述至少一种抗HBV剂选自由以下组成的组：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
28.GalNAc-siRNA缀合物与至少一种抗HBV剂的组合用于治疗人受试者的HBV感染的用途，其中所述缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分，并且所述至少一种抗HBV剂选自由以下组成的组：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
29.GalNAc-siRNA缀合物与至少一种抗HBV剂的组合用于治疗人受试者的HDV感染的用途，其中所述缀合物的siRNA部分靶向HBV基因组的一部分，并且所述至少一种抗HBV剂选自由以下组成的组：RNA去稳定剂；衣壳抑制剂；逆转录酶抑制剂；免疫刺激剂；cccDNA形成抑制剂；和靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
30.一种用于治疗动物的乙型肝炎的方法，所述方法包括向所述动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure FDA0003364356230000041
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure FDA0003364356230000042
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺及恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
31.如权利要求30所述的方法，其中向所述动物施用至少三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
32.如权利要求31所述的方法，其中向所述动物施用寡聚核苷酸3m、6m和12m。
33.如权利要求30至32中任一项所述的方法，其中经口施用至少一种剂。
34.如权利要求30至33中任一项所述的方法，其中静脉内施用至少一种寡聚核苷酸。
35.如权利要求30所述的方法，其中向所述动物施用以下两种剂的组合中的一种：
所述RNA去稳定剂和所述衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述RNA去稳定剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂和逆转录酶抑制剂；或
所述RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂。
36.如权利要求30所述的方法，其中向所述动物施用以下两种剂的组合中的一种：
所述RNA去稳定剂和所述衣壳抑制剂；
包含三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述衣壳抑制剂的组合，其中所述寡聚核苷酸是3m、6m和12m；
所述衣壳抑制剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述衣壳抑制剂和替诺福韦艾拉酚胺；
所述衣壳抑制剂和恩替卡韦；
所述RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
所述RNA去稳定剂和恩替卡韦。
37.如权利要求30所述的方法，其中向所述动物施用以下三种剂的组合中的一种：
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；或
所述RNA去稳定剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂。
38.如权利要求30所述的方法，其中向所述动物施用以下三种剂的组合中的一种：
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和恩替卡韦。
39.一种药盒，其包含至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure FDA0003364356230000071
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure FDA0003364356230000072
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺及恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；
所述药盒以组合形式使用来治疗或预防乙型肝炎。
40.如权利要求39所述的药盒，其包含至少三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
41.如权利要求40所述的药盒，其包含寡聚核苷酸3m、6m和12m。
42.如权利要求39所述的药盒，其包含以下两种剂的组合中的一种：
所述RNA去稳定剂和所述衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述RNA去稳定剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂和逆转录酶抑制剂；或
所述RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂。
43.如权利要求39所述的药盒，其包含以下两种剂的组合中的一种：
所述RNA去稳定剂和所述衣壳抑制剂；
包含三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述衣壳抑制剂的组合，其中所述寡聚核苷酸是3m、6m和12m；
所述衣壳抑制剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述衣壳抑制剂和替诺福韦艾拉酚胺；
所述衣壳抑制剂和恩替卡韦；
所述RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
所述RNA去稳定剂和恩替卡韦。
44.如权利要求39所述的药盒，其包含以下三种剂的组合中的一种：
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；或
所述RNA去稳定剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂。
45.如权利要求39所述的药盒，其包含以下三种剂的组合中的一种：
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和恩替卡韦。
46.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载剂和至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure FDA0003364356230000091
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure FDA0003364356230000092
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
47.如权利要求46所述的药物组合物，其包含至少三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
48.如权利要求47所述的药物组合物，其包含寡聚核苷酸3m、6m和12m。
49.如权利要求46所述的药物组合物，其包含以下两种剂的组合中的一种：
所述RNA去稳定剂和所述衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述衣壳抑制剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述RNA去稳定剂；
至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂和逆转录酶抑制剂；或
所述RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂。
50.如权利要求46所述的药物组合物，其包含以下两种剂的组合中的一种：
所述RNA去稳定剂和所述衣壳抑制剂；
包含三种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和所述衣壳抑制剂的组合，其中所述寡聚核苷酸是3m、6m及12m；
所述衣壳抑制剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述衣壳抑制剂和替诺福韦艾拉酚胺；
所述衣壳抑制剂和恩替卡韦；
所述RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
所述RNA去稳定剂和恩替卡韦。
51.如权利要求46所述的药物组合物，其包含以下三种剂的组合中的一种：
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂；
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸；或
所述RNA去稳定剂、至少一种靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸和逆转录酶抑制剂。
52.如权利要求46所述的药物组合物，其包含以下三种剂的组合中的一种：
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和富马酸替诺福韦二吡呋酯；
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和替诺福韦艾拉酚胺；或
所述衣壳抑制剂、所述RNA去稳定剂和恩替卡韦。
53.一种组合，其由至少两种选自由以下组成的组的剂组成：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure FDA0003364356230000121
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure FDA0003364356230000122
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸，
所述组合用于治疗动物的乙型肝炎。
54.一种组合在制造用于治疗动物的乙型肝炎的药剂中的用途，所述组合由至少两种选自由以下组成的组的剂组成：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure FDA0003364356230000123
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure FDA0003364356230000124
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
55.一种用于治疗动物的丁型肝炎的方法，所述方法包括向所述动物施用至少两种选自由以下组成的组的剂：
a)衣壳抑制剂，其中所述衣壳抑制剂是：
Figure FDA0003364356230000131
b)RNA去稳定剂，其中所述RNA去稳定剂是：
Figure FDA0003364356230000132
c)选自由以下组成的组的逆转录酶抑制剂：富马酸替诺福韦二吡呋酯、替诺福韦艾拉酚胺和恩替卡韦；以及
d)靶向乙型肝炎基因组的寡聚核苷酸。
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