CN113841894A - 黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法和在抗氧化和抗衰老产品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及黑果枸杞花青素提取物及其产品和应用技术领域，具体涉及黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法和应用，具体通过提取、高速离心和陶瓷膜过滤、有机膜脱胶和浓缩、模拟移动床色谱分离、低温浓缩、冷冻干燥及冻干粉制备几个步骤制得。本发明的制备方法适合工业化生产，且花青素含量高、回收率高、产品色泽好，无外源性酸性物质残留。制备的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉具有较强抗氧化和抗衰老保健功效，其通过提高血清中SOD及LPO的活力和降低血清中MDA的活力有效清除人体内产生的自由基，减少自由基对人体的危害，改善免疫功能，达到延缓衰老的效果；可用于抗氧化、抗衰老及提高免疫力功能的食品和保健食品。

Description

黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法和在抗氧化和抗 衰老产品中的应用
技术领域
本发明涉及黑果枸杞花青素提取物及其产品和应用技术领域，具体涉及黑黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法和在抗氧化和抗衰老产品中的应用。
背景技术
自由基是人体生命活动的代谢产物，它的产生和消除处于动态平衡是人体最健康的状态。但是随着众多因素的出现引发了人体代谢紊乱，导致体内自由基过剩，自由基的自由流动可随时攻击细胞，导致蛋白质变性、酶失活、DNA受损，使细胞的成分、结构和功能遭到破坏，导致人体衰老以及产生各种疾病。在这种情况下就需要补充外源性的抗氧化物质清除过剩的自由基，维持体内自由基的动态平衡，对于保护人体健康具有重要意义。
衰老是在增龄过程中多因素协同引起的机体免疫功能下降、细胞结构、器官功逐步衰退的一种不可逆转的自然现象，分为生理性衰老和病理性衰老两种类型。大量研究表明，机体免疫功能下降、自由基堆积与衰老密切相关。免疫系统可有效的保护机体免受其他物质损害，从根本上参与了机体老化的整个过程；而具有高度活性的自由基能与体内的核酸、脂质等发生反应生成氧化物或过氧化物，进而引起细胞膜通透性改变，细胞形态、功能和代谢随之变化，从而引起细胞的衰老和死亡。因此，减少体内自由基产生、增强机体免疫力能够有效的延缓衰老。我国老年人口占世界老年人口总数的1/4，老年人的生活及健康问题已经成为社会问题。针对老年群体的保健和治疗药物需求日益增加，寻找安全、有效延缓衰老的活性成分具有十分重要的意义。
黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)，藏药中又称为“旁玛”，是茄科枸杞属多年生灌木，其生命力强，能耐盐、耐寒、抗旱，主要分布于我国青海、新疆、宁夏、西藏、陕西北部、甘肃等地。黑果枸杞被收载于《晶珠本草》《四部医典》等藏医药经典著作中，其味甘、性平、清心热，是一种药食两用植物。黑果枸杞中富含花青素(花色苷)和生物碱成分，花青素成分具有抗炎、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、保护视力等多种生理功能，是一种天然的抗氧化剂和自由基清除剂，在医药、食品、保健品、化妆行业中开发应用前景广阔。生物碱成分研究极少，除少数分析测定研究外，其成分和活性的研究基本属于空白。
ZL201010542518.X“抗氧化黑果枸杞提取物制备方法”，公开了一种将黑果枸杞鲜果用水浸提、胶体磨研磨、高压均质技术、微滤陶瓷膜除杂、大孔树脂分离及喷雾干燥或冷冻干燥制备黑果枸杞提取物的方法，获得的提取物抗过氧化自由基(ORAC)值≥5000u moleTE/g；ZL201610548250.8“一种提取黑果枸杞花色苷的方法”，公开了一种将黑果枸杞粉用乙醇溶液混合提取、膜处理、大孔树脂纯化、减压浓缩、干燥得到黑果枸杞花色苷的制备方法；ZL201510279123.8“黑枸杞花青素在制备化妆品中的应用及含有黑枸杞花青素的化妆品”，公开了一种将黑果枸杞干果采用超声提取、大孔树脂吸附分离纯化、减压浓缩、冷冻干燥制备黑枸杞花青素的方法，发明的护肤品由黑枸杞花青素加辅料VE、左旋VC、马齿苋提取物、柠檬酸、柠檬酸钠、燕麦多肽中的一种或多种制得，具有良好的抗衰作用。
ZL201010542518.X“抗氧化黑果枸杞提取物制备方法”，公开了一种将黑果枸杞鲜果用水浸提、胶体磨研磨、高压均质技术、微滤陶瓷膜除杂、大孔树脂分离及喷雾干燥或冷冻干燥制备黑果枸杞提取物的方法，获得的提取物抗过氧化自由基(ORAC)值≥5000u moleTE/g；ZL201610548250.8“一种提取黑果枸杞花色苷的方法”，公开了一种将黑果枸杞粉用乙醇溶液混合提取、膜处理、大孔树脂纯化、减压浓缩、干燥得到黑果枸杞花色苷的制备方法；ZL201510279123.8“黑枸杞花青素在制备化妆品中的应用及含有黑枸杞花青素的化妆品”，公开了一种将黑果枸杞干果采用超声提取、大孔树脂吸附分离纯化、减压浓缩、冷冻干燥制备黑枸杞花青素的方法，发明的护肤品由黑枸杞花青素加辅料VE、左旋VC、马齿苋提取物、柠檬酸、柠檬酸钠、燕麦多肽中的一种或多种制得，具有良好的抗衰作用。
现有方案黑果枸杞花青素的提取分离纯化多采用水或乙醇提取和大孔树脂吸附纯化，加工处理过程大都采用酸性乙醇溶液提取和洗脱，因此整个提取、分离纯化、浓缩、干燥过程都无法脱除加入的外源酸性物质，所得产品中含有大量的酸，导致花青素的颜色为暗红色(中性状态下花青素为蓝紫色)，花青素活性降低，同时生产过程由于酸性腐蚀，导致产品增加了重金属铬污染的风险。胶体磨研磨、高压均质、超微粉碎、超声波-微波反应提取、仿生提取和超声波辅助提取等前处理、提取设备昂贵，实施产业化较为困难。另外喷雾干燥工艺的高温导致花青素分解或失活，此工艺不适合黑果枸杞花青素的生产。有关黑果枸杞抗氧化和抗衰老活性的研究多为复合物，或只进行抗氧化研究，或只进行抗衰老研究。单一用明确其中花青素和生物碱化学成分的黑果枸杞提取物进行抗氧化和抗衰老作用研究未见报道。
发明内容
基于上述技术问题，本发明的目的在于提供黑黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法和在抗氧化和抗衰老产品中的应用。
本发明保护黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将黑果枸杞干果粉碎加5～10倍体积去离子水浸泡、搅拌提取3～5次，得到粗黑果枸杞汁；或者黑果枸杞鲜果破碎、榨汁，残渣再每次加水榨汁提取，反复3次，合并滤液得粗黑果枸杞汁；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速15000～20000r/min的离心机离心除杂，然后过50～200nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为50000～100000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为300～5000的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到黑果枸杞精细花青素分离液；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在10～50℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液；
步骤6，冷冻干燥：将步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，直接冷冻干燥得到黑枸杞花青素提取物；
步骤7，冻干粉制备：在步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，添加辅料后搅拌混匀，再冷冻干燥得到黑果枸杞花青素冻干粉。
进一步的，所述步骤4中模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：非极性大孔吸附树脂：D101、D101b、DA-201、DM-301、DM-11、HPD-100、HPD-450、HPD-750、D1400、D1300、D3520、D4006、D4020、HP-20、H-103、H107、X-5、ADS-5、ADS-8、BS-55、BS-65、BS-80、NKA-2及NKA-9；弱极性大孔树脂：AB-8、DM130、D860021、DS-401、BS-30、CAD-40及CAD-45；极性大孔树脂：ADS-F8、ADS-21、ADS-7、ADS-17、BS-75、BS-45、S-8、NKA-2及NKA-9中的任意一种或者几种，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1～2倍，流速为1～3BV/h；解吸剂为5～90％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的2～4倍，流速1～3BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h。
进一步的，所述步骤6中采用冷冻干燥机在-50～-70℃条件下冷冻干燥得到黑果枸杞花青素提取物。
进一步的，所述步骤7中所添加辅料为淀粉、麦芽糊精、低聚果糖、低聚半乳糖、乳糖、菊粉、β-环糊精、无水葡萄糖、聚葡萄糖、乳粉、柠檬酸钙、木糖醇、山梨糖醇、D-甘露糖醇中的一种，再采用冷冻干燥机，在-50～-70℃条件下，冷冻干燥得到黑果枸杞花青素冻干粉。
本发明还保护上述方法制备的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉，其中，所述黑枸杞花青素提取物及冻干粉中的含有以下一种或几种的或全部的化学成分为：N-trans-sinapoyltyramine、(E)-N-(4-Acetamidobutyl)-2-[4,5-dihydroxy-2-[3-[2-(4-hydroxyphenyl)ethylamino]-3-oxopropyl]-phenyl]-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)prop-2-enamide、(1S,2R)-N3-(4-Acetamidobutyl)-1-(3,4-dihydroxy-phenyl)-7-hydroxy-N2-(4-hydroxyphenethyl)-6,8-dimethoxy-1,2-dihydro-naphthalene-2,3-dicarboxamide、petunidin3-O-[6-O-(4-O-(4-O-trans-(β-D-glucopyranoside)-p-coumaroyl)-α-L-rhamnopyranosyl)-β-D-glucopyranoside]-5-O-[β-D-glucopyranoside]]、N,N-dihydrocaffeoylspermidine、N-caffeoyl-N-hydrocaffeoylspermidine、N-hydrocaffeoyl-N-caffeoylspermidine、petunidin-3-O-(6-O-p-coumaryl)-rutinoside-5-O-glucoside、Malvidin-3-O-rutinoside(cis-p-coumaroyl)-5-O-gIucoside、petunidin-3-O-rutinoside(caffeoyl)-5-O-glucoside和malvidin-3-O-rutinoside(cis-p-coumaroyl)-5-O-gIucoside；
所述化学成分的结构式依次为：
Figure BDA0003329199800000071
进一步的，所述黑果枸杞花青素提取物及冻干粉中花青素含量为0.1～90％，总生物碱含量为0.1～90％。
本发明还保护上述制备方法制备的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉在抗氧化和抗衰老产品的应用；所述的抗氧化和抗衰老产品为食品或保健食品，具体将黑果枸杞花青素提取物和/或冻干粉作为有效成分，按食品科学上可接受的任何载体制成各类食品或保健食品。
进一步的，所述食品或保健食品的剂型为粉剂或者片剂。
进一步的，所述食品为黑果枸杞花青素固体饮料、所述保健食品为黑果枸杞花青素压片糖果。
相比于现有的技术，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉制备方法适合工业化生产，且制备过程绿色、无污染，制备得到的提取物和冻干粉中花青素含量高，回收率高、无需添加外源酸，完全保持了黑果枸杞花青素的天然属性，产品色泽好，且脱除了原料中的重金属和农药残留等有害物质。本发明提供的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉具有较强的抗氧化和抗衰老保健功效，其通过提高血清中SOD的活力和降低血清中MDA及LPO的活力有效清除人体内产生的自由基，减少自由基对人体的危害，改善免疫功能，达到延缓衰老的效果；可用于抗氧化、抗衰老及提高免疫力功能的食品和保健食品。
附图说明
图1为本发明制备的11种黑果枸杞花青素提取物的化学成分结构图；
图2为本发明实施例1所得黑果枸杞花青素提取物的HPLC图；
图3为本发明实施例1所得黑果枸杞花青素提取物的HPLC/MS-MS分析离子流图；
图4为本发明实施例1所得黑果枸杞花青素提取物模拟移动床分离图；
图5为本发明黑果枸杞花青素提取物对半乳糖诱导衰老小鼠骨髓细胞增殖数的影响。
图中，Normal空白对照组，Control半乳糖衰老模型组，A黑果枸杞花青素提取物1g生药/kg剂量组，B黑果枸杞花青素提取物2g生药/kg剂量组，C黑果枸杞花青素提取物5g生药/kg剂量组，*P<0.05，**P<0.01。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中所用黑果枸杞原料由青海金麦杞生物科技有限公司提供，采购于青海省格尔木市。
试验设备：CSJ-20粗碎机(江阴方圆机械制造有限公司)，ZD-LZ-1.5榨汁机(中德食品机械靖江有限公司)，提取设备(浙江温兄机械阀业有限公司)，GQ105B管式离心机(上海浦东天本离心机械有限公司)，PTSX40蝶式离心机(宜兴市华鼎机械有限公司)，SMB-H-08-A模拟移动床(汉邦科技有限公司)，GLZ-1B冷冻干燥机(上海浦东冷冻干燥设备有限公司)，SCIENTZ-10冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，ZPSX压片机(上海祥顺制药机械有限公司)，NJP-300全自动胶囊填充机(瑞安市天宏制药机械有限公司)。
实验仪器：UV1780紫外-可见光分光光度计(日本岛津公司)，MY-20手持式组织研磨器(上海净信)，Spectra Max190酶标仪(美国MD公司)，台式高速冷冻离心机(Eppendorf5424R)，Heracell 150iCO2培养箱(Thermo)，Spectra Max190酶标仪(美国MD公司)，L500-A型台式离心机(湖南湘仪)。
实验试剂：黑果枸杞花青素提取物和冻干粉(青海金麦杞生物科技有限公司提供)，DPPH(美国sigma公司)，抗坏血酸素(VC)、吩嗪硫酸甲酯(PMS)均购自阿拉丁；还原型辅酶Ⅰ(NADH)、硝基四氮唑蓝(NBT)均购自碧云天；30％H2O2、硫酸铁、水杨酸均购自天津大茂试剂公司；生理盐水(河北天成药业股份有限公司产品)；过氧化脂质(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成工程研究所)；MTT、D-半乳糖(美国sigma公司)；胎牛血清(BI公司)；1640细胞培养基(美国Gibco公司)。
动物：昆明小鼠，SPF级，西安交通大学医学部实验动物中心提供，许可证号：SCXK(陕)2018-0001。
实施例1
黑果枸杞花青素提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将30Kg黑果枸杞干果粉碎后，投入200L提取设备中，加5～10倍体积的去离子水浸泡、搅拌提取3～5次，得到粗黑果枸杞汁；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速20000r/min的高速离心机离心除杂，然后过50nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁约800L；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为50000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加3～5倍体积的纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为300的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液15L左右；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到250L黑果枸杞精细花青素分离液；其中，模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：HPD-100：DM130：ADS-21＝2:2:1混合树脂，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1.5倍，流速为2BV/h；解吸剂为30～60％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的3倍，流速1～2BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在10℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液约25Kg；
步骤6，冷冻干燥：将步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，采用冷冻干燥机在-50～-70℃条件下，直接冷冻干燥得到黑果枸杞花青素提取物约1.2Kg。
pH示差法测定上述黑果枸杞花青素提取物中花青素含量为56.0％，分光光度法测定总生物碱含量为5.5％。
黑果枸杞花青素提取物对有机自由基(DPPH·)的清除能力为92.9％，对超氧阴离子(·O2-)自由基清除能力为86.6％，对羟自由基(·OH)清除能力为96.3％。
经HPLC-MS/MS分析，黑果枸杞花青素提取物中含化学成分1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11，结构式详见附图1。
实施例2
黑果枸杞花青素提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将32Kg黑果枸杞干果粉碎后，投入200L提取设备中，加5～10倍体积的去离子水浸泡、搅拌提取3～5次，得到粗黑果枸杞汁；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速20000r/min的高速离心机离心除杂，然后过100nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁约800L；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为100000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加3～5倍体积的纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为5000的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液15L左右；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到260L黑果枸杞精细花青素分离液；其中，模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：AB-8大孔树脂，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1.5倍，流速为2BV/h；解吸剂为30～60％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的3倍，流速1～2BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在50℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液约22Kg；
步骤6，冷冻干燥：将步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，采用冷冻干燥机在-50～-70℃条件下，直接冷冻干燥得到黑果枸杞花青素提取物约0.69Kg。
pH示差法测定上述黑果枸杞花青素提取物中花青素含量为88.6％，分光光度法测定总生物碱含量为0.12％。
黑果枸杞花青素提取物对有机自由基(DPPH·)的清除能力为92.9％，对超氧阴离子(·O2-)自由基清除能力为86.6％，对羟自由基(·OH)清除能力为96.3％。
经HPLC-MS/MS分析，黑果枸杞花青素提取物中含化学成分4、8、9、10和11，结构式详见附图1。
实施例3
黑果枸杞花青素提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将35Kg黑果枸杞干果粉碎后，投入200L提取设备中，加5～10倍体积的去离子水浸泡、搅拌提取3～5次，得到粗黑果枸杞汁；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速20000r/min的高速离心机离心除杂，然后过200nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁约870L；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为50000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加3～5倍体积的纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为1000及以下的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液17L左右；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到280L黑果枸杞精细花青素分离液；其中，模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：AB-8：NKA-9＝1:1混合树脂，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1.5倍，流速为2BV/h；解吸剂为20～50％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的3倍，流速1～2BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在20℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液约26Kg；
步骤6，冷冻干燥：将步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，采用冷冻干燥机在-50～-70℃条件下，直接冷冻干燥得到黑果枸杞花青素提取物约1.26Kg。
pH示差法测定上述黑果枸杞花青素提取物中花青素含量为32.6％，分光光度法测定总生物碱含量为18.2％。
黑果枸杞花青素提取物对有机自由基(DPPH·)的清除能力为82.3％，对超氧阴离子(·O2-)自由基清除能力为75.6％，对羟自由基(·OH)清除能力为82.9％。
经HPLC-MS/MS分析，黑果枸杞花青素提取物中含化学成分1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11，结构式详见附图1。
实施例4
黑果枸杞花青素提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将150Kg黑果枸杞鲜果破碎、榨汁，残渣再每次加200L水榨汁提取，反复3次，合并滤液得粗黑果枸杞汁约750L；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速15000r/min的蝶式离心机离心除杂，然后过50nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁约850L；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为50000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加3～5倍体积的纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为5000的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液13L左右；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到180L黑果枸杞精细花青素分离液；其中，模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：DS-401：BS-75＝1:2混合树脂，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1.5倍，流速为2BV/h；解吸剂为15～45％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的3倍，流速1～2BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在25℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液约15Kg；
步骤6，冷冻干燥：将步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，采用冷冻干燥机在-50～-70℃条件下，直接冷冻干燥得到黑果枸杞花青素提取物约0.46Kg。
pH示差法测定上述黑果枸杞花青素提取物中花青素含量为15.2％，分光光度法测定总生物碱含量为75.6％。
黑果枸杞花青素提取物对有机自由基(DPPH·)的清除能力为77.8％，对超氧阴离子(·O2-)自由基清除能力为66.5％，对羟自由基(·OH)清除能力为82.3％。
经HPLC-MS/MS分析，黑果枸杞花青素提取物中含化学成分1、2、3、4、5、6、7、8、9、10和11，结构式详见附图1。
实施例5
黑果枸杞花青素提取物的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将180Kg黑果枸杞鲜果破碎、榨汁，残渣再每次加200L水榨汁提取，反复3次，合并滤液得粗黑果枸杞汁约830L；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速15000r/min的蝶式离心机离心除杂，然后过50nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁约950L；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为50000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加3～5倍体积的纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为5000的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液18L左右；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到80L黑果枸杞精细花青素分离液；其中，模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：NKA-2树脂，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1.5倍，流速为2BV/h；解吸剂为5～25％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的3倍，流速1～2BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在30℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液约8Kg；
步骤6，冷冻干燥：将步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，采用冷冻干燥机在-50～-70℃条件下，直接冷冻干燥得到黑果枸杞花青素提取物约0.22Kg。
pH示差法测定上述黑果枸杞花青素提取物中花青素含量为3.2％，分光光度法测定总生物碱含量为89.2％。
黑果枸杞花青素提取物对有机自由基(DPPH·)的清除能力为62.8％，对超氧阴离子(·O2-)自由基清除能力为56.5％，对羟自由基(·OH)清除能力为72.6％。
经HPLC-MS/MS分析，黑果枸杞花青素提取物中含化学成分1、2、3、4、5、6、7、8和10，结构式详见附图1。
实施例6
黑果枸杞花青素冻干粉的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将40Kg黑果枸杞干果粉碎后，投入200L提取设备中，加5～10倍体积的去离子水浸泡、搅拌提取3～5次，得到粗黑果枸杞汁；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速20000r/min的高速离心机离心除杂，然后过50nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁约960L；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为50000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加3～5倍体积的纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为5000的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液20L左右；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到320L黑果枸杞精细花青素分离液；其中，模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：HP750：D860021：ADS-7＝1：1：1混合树脂，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1.5倍，流速为2BV/h；解吸剂为20～50％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的3倍，流速1～2BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在35℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液约28Kg；
步骤6，冻干粉制备：在步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，添加10Kg乳糖后搅拌混匀，得花青素乳糖混合液约38Kg，再采用冷冻干燥机，在-50～-70℃条件下，冷冻干燥得到黑果枸杞花青素冻干粉约12.5Kg。
pH示差法测定上述黑果枸杞花青素冻干粉中花青素含量为8.6％，分光光度法测定总生物碱含量为1.8％。
黑果枸杞花青素冻干粉对有机自由基(DPPH·)的清除能力为75.4％，对超氧阴离子(·O2-)自由基清除能力为65.6％，对羟自由基(·OH)清除能力为68.5％。
经HPLC-MS/MS分析，黑果枸杞花青素提取物中含化学成分1、2、3、4、5、6、7、8、9和10，结构式详见附图1。
实施例7
黑果枸杞花青素冻干粉的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将200Kg黑果枸杞鲜果破碎、榨汁，残渣再每次加220L水榨汁提取，反复3次，合并滤液得粗黑果枸杞汁约900L；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速15000r/min的蝶式离心机离心除杂，然后过50nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁约950L；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为50000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加3～5倍体积的纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为5000的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液22L左右；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到120L黑果枸杞精细花青素分离液；其中，模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：CAD-40：BS-45＝1:1混合树脂，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1.5倍，流速为2BV/h；解吸剂为15～40％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的3倍，流速1～2BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在40℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液约22Kg；
步骤6，冻干粉制备：在步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，添加15Kg低聚果糖后搅拌混匀，得花青素低聚果糖混合液约37Kg，再采用冷冻干燥机，在-50～-70℃条件下，冷冻干燥得到黑果枸杞花青素冻干粉约16.5Kg。
pH示差法测定上述黑果枸杞花青素提取物中花青素含量为5.5％，分光光度法测定总生物碱含量为3.2％。
黑果枸杞花青素提取物对有机自由基(DPPH·)的清除能力为70.6％，对超氧阴离子(·O2-)自由基清除能力为61.2％，对羟自由基(·OH)清除能力为65.8％。
经HPLC-MS/MS分析，黑果枸杞花青素提取物中含化学成分1、2、3、4、5、6、7、8、9和10，结构式详见附图1。
实施例8
黑果枸杞花青素提取物对半乳糖衰老诱导小鼠体征行为的影响。
采用半乳糖诱导衰老小鼠实验模型
选取健康的雌性昆明小鼠30只，体重20±2g，随机分组，分别为空白对照组、半乳糖衰老模型对照组、黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组，共5组，每组6只。空白对照组颈背部皮下注射生理盐水，半乳糖衰老模型对照组、黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组均按照100mg/kg·d的剂量颈背部皮下注射D-半乳糖，连续注射8周造模。造模同时黑果枸杞冻干粉1、2、5g生药/kg剂量组按照剂量灌胃给药8周，空白对照组颈背部皮下注射生理盐水，半乳糖衰老小鼠模型对照组生理盐水灌胃8周。观察并记录小鼠体征行为的变化。数据均以
Figure BDA0003329199800000211
表示，以SPSS16.0软件进行数据统计分析，采用t检验进行组间比较。
实验结果
造模前小鼠情况良好，半乳糖诱导衰老小鼠造模8周后，半乳糖衰老模型对照组小鼠进毛色暗淡无光泽，易脱落，皮肤弹性差，食量明显减少，精神萎靡嗜睡，喜扎堆，四肢无力，易于抓取，呈现明显的衰老体征。黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组小鼠与之相比有不同程度的改善，其中黑枸杞花青素5g生药/kg剂量组小鼠改善程度最为明显，表现为精神正常，活动力较旺盛，毛色亮白，不易于抓取。
表1黑果枸杞花青素提取物对半乳糖诱导衰老小鼠体重的影响
Figure BDA0003329199800000221
注：与正常对照组比较：ΔΔΔP<0.001；与模型对照组比较：＊P<0.05，＊＊＊P<0.001.
结果表明，与空白对照组相比，半乳糖衰老模型对照组小鼠的体重增长缓慢，黑果枸杞花青素1、2.5、5g生药/kg剂量组小鼠的体重比半乳糖衰老模型对照组小鼠有不同程度的增加，但仍低于正常对照组。表明黑果枸杞花青素提取物具有明显的抗衰老作用。
实施例9
黑果枸杞花青素提取物对半乳糖诱导衰老小鼠血清中SOD、GSH-Px及MDA活性的影响
采用半乳糖诱导衰老小鼠实验模型
选取健康的雌性昆明小鼠30只，体重(20±2)g，随机分组，分别为空白对照组、半乳糖衰老模型对照组、黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组，共5组，每组6只。空白对照组颈背部皮下注射生理盐水，半乳糖衰老模型对照组、黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组均按照100mg/kg·d的剂量颈背部皮下注射D-半乳糖，连续注射8周造模。造模同时黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组按照剂量灌胃给药8周，空白对照组颈背部皮下注射生理盐水，半乳糖衰老小鼠模型对照组生理盐水灌胃8周。末次给药后停食不停水，次日眼眶取血，于4℃下3000r/min离心10min后吸取上清液，采用试剂盒测定血清中SOD、GSH-Px及MDA值。
数据均以
Figure BDA0003329199800000231
表示，以SPSS16.0软件进行数据统计分析，采用t检验进行组间比较。
实验结果
SOD和GSH-Px是机体重要的自由基清除剂，随着年龄的增长，活性逐渐下降，其活性的高低可以反映机体的衰老程度。结果表明，与空白对照组相比，半乳糖衰老模型对照组小鼠血清中SOD和GSH-Px活力显著下降(P<0.001)，MDA含量显著升高(P<0.001)；与半乳糖衰老模型对照组相比，黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组小鼠血清中SOD和GSH-Px活力显著上升(P<0.05)，MDA含量显著下降(P<0.05)。表明黑果枸杞花青素能有效提高衰老小鼠血清中自由基清除剂SOD和GSH-Px活力，降低自由基代谢产物MDA的活性，从而具有一定的抗衰老作用。
表2黑果枸杞花青素对半乳糖诱导衰老小鼠血清中SOD、GSH-Px及MDA活性的影响
Figure BDA0003329199800000241
注：与正常对照组比较：ΔΔP<0.001，ΔΔΔP<0.0001；与模型对照组比较：＊P<0.05，＊＊P<0.005，＊＊＊P<0.0001.
实施例10
黑果枸杞花青素对半乳糖诱导衰老小鼠组织器官中LPO、SOD、GSH-Px及MDA活性的影响
采用半乳糖诱导衰老小鼠实验模型
取健康的雌性昆明小鼠30只，体重(20±2)g，随机分组，分别为空白对照组、半乳糖衰老模型对照组、黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组，共5组，每组6只。空白对照组颈背部皮下注射生理盐水，半乳糖衰老模型对照组、黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组均按照100mg/kg·d的剂量颈背部皮下注射D-半乳糖，连续注射8周造模。造模同时黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组按照剂量灌胃给药8周，空白对照组颈背部皮下注射生理盐水，半乳糖衰老小鼠模型对照组生理盐水灌胃8周。末次给药后停食不停水，次日眼眶取血后脱颈处死，在冰上迅速取出大脑和肝脏，用冷的生理盐水冲洗，冰浴匀浆制成悬浮液，4℃下3000r/min离心15分钟，去除沉淀取匀浆液。采用试剂盒测定组织器官中LPO、SOD、GSH-Px及MDA值。数据均以
Figure BDA0003329199800000251
表示，以SPSS16.0软件进行数据统计分析，采用t检验进行组间比较。
实验结果
表3黑果枸杞花青素提取物对半乳糖诱导衰老小鼠脑组织中LPO、SOD及MDA活性的影响
Figure BDA0003329199800000252
注：与正常对照组比较：ΔP<0.001，ΔΔP<0.0005，ΔΔΔP<0.0001；与模型对照组比较：＊P<0.05，＊＊P<0.005，＊＊＊P<0.0001.
表4黑果枸杞花青素提取物对半乳糖诱导衰老小鼠肝脏中SOD、GSH-Px及MDA活性的影响
Figure BDA0003329199800000253
Figure BDA0003329199800000261
注：与正常对照组比较：ΔP<0.001，ΔΔP<0.0005，ΔΔΔP<0.0001；与模型对照组比较：＊P<0.05，＊＊P<0.005.
结果表明，与空白对照组相比，半乳糖衰老模型对照组小鼠脑组织\肝组织中SOD活力显著下降(P<0.0001)，GSH-Px、LPO和MDA含量显著升高(P<0.001)；与半乳糖衰老模型对照组相比，黑果枸杞花青素提取物1g生药/kg剂量组小鼠脑组织中LPO、SOD及MDA无明显变化，肝组织中GSH-Px、SOD及MDA无明显变化；黑枸杞花青素提取物2g生药/kg剂量组对小鼠脑组织中SOD无明显变化，LPO和MDA含量下降(P<0.05)，肝组织中GSH-Px、SOD含量上升(P<0.05)，MDA含量下降(P<0.05)；黑果枸杞花青素提取物5g生药/kg剂量组小鼠脑组织中SOD活力明显上升(P<0.05)，LPO和MDA含量明显下降(P<0.005)，肝组织中GSH-Px、SOD含量显著上升(P<0.005)，MDA含量显著下降(P<0.005)。表明黑果枸杞花青素提取物能降低衰老小鼠机体组织中的脂质过氧化程度，提高机体清除自由基的能力，对延缓衰老起到一定积极的作用。
实施例11
黑果枸杞花青素提取物对半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的影响采用半乳糖诱导衰老小鼠实验模型
选取健康的雌性昆明小鼠30只，体重(20±2)g，随机分组，分别为空白对照组、半乳糖衰老模型对照组、黑果枸杞花青素1、2、5g生药/kg剂量组，共5组，每组6只。空白对照组颈背部皮下注射生理盐水，半乳糖衰老模型对照组、黑果枸杞花青素提取物1、2、5g生药/kg剂量组均按照100mg/kg·d的剂量颈背部皮下注射D-半乳糖，连续注射8周造模。造模同时黑果枸杞花青素提取物1、2、5g生药/kg剂量组按照剂量灌胃给药8周，空白对照组颈背部皮下注射生理盐水，半乳糖衰老小鼠模型对照组生理盐水灌胃8周。给药结束后脱颈处死，取胸腺及脾脏称重测定脏器系数，脏器指数＝脏器重量(mg)/动物体重(g)；无菌取小鼠双侧股骨上段，用Hanks液冲洗后剪开两端，冲洗出骨髓细胞，常温下1000r/min离心10min，弃上清。显微镜下细胞计数，用1640完全培养基调细胞浓度至2×106/ml，取100ul加入96孔细胞培养板中，3复孔，置37℃、5％CO2培养箱培养72h。每孔加入20ul 5％MTT，继续培养4h后，每孔加150ul DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测量各孔的OD值，以OD值代表小鼠骨髓细胞增殖能力。数据以
Figure BDA0003329199800000271
表示，以SPSS16.0软件进行数据统计分析，采用t检验进行组间比较。
实验结果
表5黑果枸杞花青素提取物对半乳糖诱导衰老小鼠免疫器官脏器系数的影响
Figure BDA0003329199800000272
注：与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01.
结果表明，与空白对照组相比，半乳糖衰老模型对照组小鼠胸腺脏器系数和脾脏脏器系数略有降低，但无统计学意义；与半乳糖衰老模型对照组相比，黑果枸杞花青素1g生药/kg剂量组小鼠胸腺脏器系数和脾脏脏器系数无明显变化；黑果枸杞花青素提取物2g生药/kg剂量小鼠脾脏脏器系数明显上升(P<0.05)，胸腺脏器系数无明显变化；黑果枸杞花青素提取物5g生药/kg剂量组小鼠胸腺脏器系数(P<0.01)和脾脏脏器系数(P<0.05)明显上升。
黑果枸杞花青素提取物对半乳糖诱导衰老小鼠骨髓细胞增殖数的影响(详见附图5)。Normal空白对照组，Control半乳糖衰老模型组，A黑果枸杞花青素提取物1g生药/kg剂量组，B黑果枸杞花青素提取物2g生药/kg剂量组，C黑果枸杞花青素提取物5g生药/kg剂量组，*P<0.05，**P<0.01。
结果表明，与空白对照组相比，半乳糖衰老模型对照组小鼠骨髓细胞增殖能力明显下降(P<0.05)；半乳糖衰老模型对照组相比，黑果枸杞花青素提取物1g生药/kg剂量组小鼠骨髓细胞增殖能力无明显变化；黑果枸杞花青素提取物2、5g生药/kg剂量小鼠骨髓细胞增殖能力明显上升(P<0.05，P<0.01)。
胸腺和脾脏是机体重要的免疫器官，胸腺指数与脾脏指数的变化能反应机体免疫系统功能状况；骨髓成为主要的造血器官，骨髓细胞的增殖能力与免疫功能密切相关。上述结果表明黑果枸杞花青素提取物能够增强机体免疫功能，延缓衰老。
实施例12
一种黑果枸杞花青素固体饮料食品
实施例6制备得到的黑果枸杞花青素冻干粉中加入20％麦芽糊精、0.3％羧甲基纤维素钠、5％蔗糖或木糖醇，用CH-200槽型混合机混匀，以常规方法制粒，即得黑果枸杞花青素固体饮料。
实施例13
一种黑果枸杞花青素压片糖果保健食品
实施例6制备得到的黑果枸杞花青素冻干粉中加入20％麦芽糖醇或木糖醇或阿巴斯甜或甜菊糖苷、15％微晶纤维素和5％硬质酸镁，用CH-200槽型混合机混匀，干法制粒，再用十冲头压片机(ZPSX)进行压片处理(压力40-60KN)，得到压片糖果。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
步骤1，提取过程：将黑果枸杞干果粉碎加5～10倍体积去离子水浸泡、搅拌提取3～5次，得到粗黑果枸杞汁；或者黑果枸杞鲜果破碎、榨汁，残渣再每次加水榨汁提取，反复3次，合并滤液得粗黑果枸杞汁；
步骤2，高速离心和陶瓷膜过滤：将步骤1得到粗黑果枸杞汁，先用转速15000～20000r/min的离心机离心除杂，然后过50～200nm陶瓷膜澄清，得澄清黑果枸杞汁；
步骤3，有机膜脱胶和浓缩：将步骤2得到的澄清黑果枸杞汁，过截留分子量为50000～100000的超滤有机膜脱除果胶、蛋白及多糖大分子物质，加纯水清洗，收集流出液，再用截留分子量为300～5000的超滤有机膜脱水浓缩，得膜浓缩液；
步骤4，模拟移动床色谱分离：将步骤3得到膜浓缩液加入模拟移动床色谱进行分离，得到黑果枸杞精细花青素分离液；
步骤5，低温浓缩：将步骤4所得的黑果枸杞精细花青素分离液，回收乙醇，并在10～50℃，真空度为-0.06MPa条件下，进行真空低温浓缩，得到黑果枸杞花青素浓缩液；
步骤6，冷冻干燥：将步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，直接冷冻干燥得到黑果枸杞花青素提取物；
步骤7，冻干粉制备：在步骤5所得的黑果枸杞花青素浓缩液，添加辅料后搅拌混匀，再冷冻干燥得到黑果枸杞花青素冻干粉。
2.根据权利要求1所述的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法，其特征在于：所述步骤4中模拟移动床分离方法为：模拟移动床色谱填充的吸附剂为：非极性大孔吸附树脂：D101、D101b、DA-201、DM-301、DM-11、HPD-100、HPD-450、HPD-750、D1400、D1300、D3520、D4006、D4020、HP-20、H-103、H107、X-5、ADS-5、ADS-8、BS-55、BS-65、BS-80、NKA-2及NKA-9；弱极性大孔树脂：AB-8、DM130、D860021、DS-401、BS-30、CAD-40及CAD-45；极性大孔树脂：ADS-F8、ADS-21、ADS-7、ADS-17、BS-75、BS-45、S-8、NKA-2及NKA-9中的任意一种或者几种，吸附区流速1～2BV/h；水洗区为纯化水，其用量为树脂体积的1～2倍，流速为1～3BV/h；解吸剂为5～90％的乙醇溶液，其用量是树脂体积的2～4倍，流速1～3BV/h；树脂再生溶剂为95％乙醇溶液，用量是树脂的1倍；流速2～3BV/h。
3.根据权利要求1所述的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法，其特征在于：所述步骤6中采用冷冻干燥机在-50～-70℃条件下冷冻干燥得到黑果枸杞花青素提取物。
4.根据权利要求1所述的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的制备方法，其特征在于：所述步骤7中所添加辅料为淀粉、麦芽糊精、低聚果糖、低聚半乳糖、乳糖、菊粉、β-环糊精、无水葡萄糖、聚葡萄糖、乳粉、柠檬酸钙、木糖醇、山梨糖醇、D-甘露糖醇中的一种，再采用冷冻干燥机，在-50～-70℃条件下，冷冻干燥得到黑果枸杞花青素冻干粉。
5.黑果枸杞花青素提取物及冻干粉，其特征在于：如权利要求1-4任意一项所述的方法制备的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉，其中，所述黑枸杞花青素提取物及冻干粉中的含有以下一种或几种的或全部的化学成分为：N-trans-sinapoyltyramine、(E)-N-(4-Acetamidobutyl)-2-[4,5-dihydroxy-2-[3-[2-(4-hydroxyphenyl)ethylamino]-3-oxopropyl]-phenyl]-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)prop-2-enamide、(1S,2R)-N3-(4-Acetamidobutyl)-1-(3,4-dihydroxy-phenyl)-7-hydroxy-N2-(4-hydroxyphenethyl)-6,8-dimethoxy-1,2-dihydro-naphthalene-2,3-dicarboxamide、petunidin3-O-[6-O-(4-O-(4-O-trans-(β-D-glucopyranoside)-p-coumaroyl)-α-L-rhamnopyranosyl)-β-D-glucopyranoside]-5-O-[β-D-glucopyranoside]]、N,N-dihydrocaffeoylspermidine、N-caffeoyl-N-hydrocaffeoylspermidine、N-hydrocaffeoyl-N-caffeoylspermidine、petunidin-3-O-(6-O-p-coumaryl)-rutinoside-5-O-glucoside、Malvidin-3-O-rutinoside(cis-p-coumaroyl)-5-O-gIucoside、petunidin-3-O-rutinoside(caffeoyl)-5-O-glucoside和malvidin-3-O-rutinoside(cis-p-coumaroyl)-5-O-gIucoside；
所述化学成分的结构式依次为：
Figure FDA0003329199790000041
6.根据权利要求5所述的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉，其特征在于：所述黑果枸杞花青素提取物及冻干粉中花青素含量为0.1～90％，总生物碱含量为0.1～90％。
7.黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的应用，其特征在于：如权利要求1-4任意一项所述的方法制备的黑果枸杞花青素提取物及冻干粉在抗氧化和抗衰老产品中的应用，所述的抗氧化和抗衰老产品为食品或保健食品，具体将黑果枸杞花青素提取物和/或冻干粉作为有效成分，按食品科学上可接受的任何载体制成各类食品或保健食品。
8.根据权利要求7所述黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的应用，其特征在于：所述食品或保健食品的剂型为粉剂或者片剂。
9.根据权利要求7或8所述黑果枸杞花青素提取物及冻干粉的应用，其特征在于：所述食品为黑果枸杞花青素固体饮料、所述保健食品为黑果枸杞花青素压片糖果。
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