CN113827553B - 用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶及其制备方法 - Google Patents
用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113827553B CN113827553B CN202111213582.8A CN202111213582A CN113827553B CN 113827553 B CN113827553 B CN 113827553B CN 202111213582 A CN202111213582 A CN 202111213582A CN 113827553 B CN113827553 B CN 113827553B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- zinc phthalocyanine
- situ gel
- injection administration
- intratumoral injection
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 169
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 166
- 239000011701 zinc Substances 0.000 title claims abstract description 166
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 166
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 title claims abstract description 80
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 78
- 238000002347 injection Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 239000007924 injection Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 title claims abstract description 39
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 82
- 229940113116 polyethylene glycol 1000 Drugs 0.000 claims description 34
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 claims description 29
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 8
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 claims description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 7
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 3
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 13
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 7
- 238000009826 distribution Methods 0.000 abstract description 5
- 238000009513 drug distribution Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 abstract description 3
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract description 2
- 208000007578 phototoxic dermatitis Diseases 0.000 abstract description 2
- 231100000018 phototoxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 28
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 16
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 11
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 11
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 10
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 8
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 6
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 6
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 5
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical group C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 5
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 229940109328 photofrin Drugs 0.000 description 5
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 5
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 5
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 3
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 3
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 229920006322 acrylamide copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- DTPCFIHYWYONMD-UHFFFAOYSA-N decaethylene glycol Polymers OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO DTPCFIHYWYONMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000216 gellan gum Substances 0.000 description 3
- 235000010492 gellan gum Nutrition 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N Doxorubicin hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MWWSFMDVAYGXBV-RUELKSSGSA-N 0.000 description 2
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229960002918 doxorubicin hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 2
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011521 systemic chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- UZFPOOOQHWICKY-UHFFFAOYSA-N 3-[13-[1-[1-[8,12-bis(2-carboxyethyl)-17-(1-hydroxyethyl)-3,7,13,18-tetramethyl-21,24-dihydroporphyrin-2-yl]ethoxy]ethyl]-18-(2-carboxyethyl)-8-(1-hydroxyethyl)-3,7,12,17-tetramethyl-22,23-dihydroporphyrin-2-yl]propanoic acid Chemical compound N1C(C=C2C(=C(CCC(O)=O)C(C=C3C(=C(C)C(C=C4N5)=N3)CCC(O)=O)=N2)C)=C(C)C(C(C)O)=C1C=C5C(C)=C4C(C)OC(C)C1=C(N2)C=C(N3)C(C)=C(C(O)C)C3=CC(C(C)=C3CCC(O)=O)=NC3=CC(C(CCC(O)=O)=C3C)=NC3=CC2=C1C UZFPOOOQHWICKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 208000000208 Wet Macular Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 201000007983 brain glioma Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 210000003194 forelimb Anatomy 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000258 photobiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229960004293 porfimer sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶及其制备方法，属于药物制剂技术领域，本发明在有机溶剂中加入一种聚乙二醇修饰的甾醇作为表面活性剂，制备一种高载药浓度的酞菁锌胶束，并进一步制备一种温度刺激响应的、含高浓度酞菁锌的瘤内注射给药在位凝胶。本发明涉及的凝胶具有延长递送系统和治疗成分在瘤内滞留时间的效果，经瘤内注射后在病灶部位滞留，局部药物浓度高、全身药物分布少，可有效增强治疗作用，最大程度避免酞菁锌在体内广泛分布可能引起的全身光毒性。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶及其制备和应用。
背景技术
光动力学疗法(Photodynamic therapy，PDT)是一种联合利用光敏剂、光和氧分子，通过光动力学反应选择性地治疗恶性病变(如实体肿瘤和癌前病变)和良性病变(如湿性老年性黄斑变性、感染等疾病)的疗法。
在特定波长光源的辐照下，潴留在病灶部位的基态光敏剂(S0)吸收光子的能量，激发跃迁到第一激发态(S1)，这些激发态光敏剂分子通过体系间窜越跃迁到激发三重态(T1)，处在激发三重态的光敏剂分子可以和基态氧分子(3O2)发生能量交换产生具有生物毒性的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)或自由基等活性物质，其中单线态氧(1O2)是光动力学反应的主要毒性物质。1O2可以氧化其周围的生物分子，造成不可逆的损伤，从而达到治疗目的。根据作用靶位不同，PDT抗肿瘤作用机制可分为破坏血管、杀伤肿瘤组织和细胞，以及诱发机体免疫应答等不同机制。
目前，1988年，由Roswell Park Cancer Institute研制的卟啉型光敏剂Photofrin(Porfimer sodium)已经在光动力学治疗领域得到有限的应用。在很多国家，Photofrin被用来治疗癌症，但Photofrin有很多缺陷：(1)成分复杂；(2)来源困难；(3)体内滞留时间长，毒副作用大；(4)选择性差；(5)波长大于600nm以上可见光区吸收弱，病人接受治疗后必须在暗室避光1～2月。这些弱点极大限制了Photofrin在光动力学治疗中的应用。
随着欧洲各国对卟啉类成分的认可，光动力学治疗的前景非常乐观。在Photofrin之后，又开发出第二代光敏剂。与第一代光敏剂相比较，第二代光敏剂不仅在更长的可见光区有更强的吸收，单线态氧产率与寿命比第一代光敏剂也大得多；但缺点是，光敏剂在肿瘤组织中的选择性和富集能力有限。而第三代光敏剂则增加了对肿瘤细胞的靶向性。在这些光敏剂中，酞菁类化合物及其衍生物因在近红外区有强吸收，表现出强的光动力学特性，是具有潜在前景的光敏剂。
酞菁锌(Zinc phthalocyanine，ZnPc)是酞菁类的光动力学物质，因其分子间π-堆砌作用(π-stacking)而在水或常见有机溶剂中难溶解，π-堆砌相互作用导致的酞菁锌在水中易聚集严重削弱其光生物活性，因此，目前酞菁锌在临床治疗领域的应用受到极大限制。为了克服酞菁锌在水性介质中溶解度低和易聚集相关的缺点，目前在光动力学治疗研究中通常采用的递送方式包括：①合成酞菁锌的水溶性衍生物；②以纳米结构载体包载酞菁锌或其衍生物，如脂质体、环糊精包合物、聚合物胶束或聚合物纳米胶囊等。
通常，酞菁锌水溶性衍生物的溶解性依然有限；而用表面活性剂作为载体材料，可制备稳定的载酞菁锌纳米胶束体系，从而增强其溶解性，便于采用常规的静脉注射、或局部注射给药途径。有很多研究采用小分子或高分子表面活性剂胶束为载体获得在水性介质中稳定的酞菁锌胶束溶液，并将其用于肿瘤光动力学治疗。而用高分子表面活性剂构成聚合物胶束，则具有适宜的粒径和更好的稳定性。
胶束中的酞菁锌分子能够在光照射下产生单线态氧(1O2)，1O2诱导细胞凋亡，从而能杀伤肿瘤细胞。与传统的肿瘤手术治疗、放化疗等，肿瘤的光动力学治疗具有明显的优势：(i)属于非手术和微创；(ii)不产生恶心呕吐等副作用；(iii)显示高选择性，仅杀伤肿瘤细胞；(iv)可以适用于受常规治疗的老年患者；(v)治疗中使用的光敏剂(PS)药物对肝脏和肾脏无毒性。与抗肿瘤药物合并用药时，光照射下产生单线态氧(1O2)能导致胶束快速解离和抗肿瘤药物在生理条件下释放和发挥治疗作用，而过量的1O2具有协同治疗作用。
瘤内治疗(intratumoral therapy)/瘤内注射(intratumoral injection)是将治疗用活性成分直接递送至肿瘤内的一种肿瘤治疗方式。这种给药方式避开了静脉注射给药的全身分布和血浆、组织清除等效应，能更有效地实现定位药物递送和肿瘤治疗，病灶部位高药物浓度、而全身药物分布低，可有效地实现减毒和增效作用。目前，瘤内注射的抗肿瘤药在黑色素瘤、前列腺癌、肺癌、脑胶质瘤等多种实体肿瘤的治疗中得到研究和应用，如Amgen公司的瘤内注射修饰I型单纯疱疹病毒已获批准用于皮肤癌的免疫治疗。
瘤内注射治疗剂的优势与恶性实体肿瘤的病理生理特征有关，恶性实体肿瘤系统化疗的疗效大多不理想且全身不良反应严重，而瘤内注射因治疗成分在肿瘤局部高浓度而全身分布少、治疗的针对性强，可能成为治疗肿瘤的有效手段。尽管目前抗肿瘤成分的瘤内注射治疗方式还无法取代传统的系统化疗方式，但作为一种替代的治疗手段，缓释型抗肿瘤药物瘤内注射将得到进一步的发展，且可作为结合手术治疗的辅助治疗。如通过立体定向穿刺取得标本进行肿瘤体外培养，借助化疗药物的敏感试验后选用适当的缓释型药物植入瘤体内，或可取得更理想的治疗效果。光动力学治疗剂联合应用抗肿瘤药物瘤内注射给药，可望发挥协同治疗作用。
原位凝胶是指在给药过程为低黏度溶液状态，而在给药部位的生理或物理条件(温度、离子等)刺激下转变为半固体凝胶态的一种药物递送系统，其中温度刺激响应的在位凝胶在药物递送领域的应用价值更高。酞菁锌的水溶性较弱，将酞菁锌胶束分散在适宜的原位凝胶中，不仅能进一步改善制剂的稳定性，同时具有给药方便、药物局部滞留和起效时间长、全身分布少等优点，有利于降低全身不良反应，增加疗效。
发明内容
本发明的目的在于有机溶剂中加入一种聚乙二醇修饰的甾醇作为表面活性剂，制备一种高载药浓度的酞菁锌胶束，并进一步制备一种含高浓度酞菁锌的瘤内注射给药在位凝胶。这种温度刺激响应的酞菁锌在位凝胶，在室温条件下为溶液，而瘤内注射后在体温条件下转变为凝胶，具有延长递送系统和治疗成分在瘤内滞留时间的效果，经瘤内注射后在病灶部位滞留，局部药物浓度高、全身药物分布少，有效增强治疗作用，最大程度避免酞菁锌在体内广泛分布可能引起的全身光毒性。
本发明所述的用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶由酞菁锌、可用于注射给药的有机溶剂、非离子型表面活性剂、水，以及空白在位凝胶组成。
所述的用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶的制备方法，具体技术方案如下：
(1)将一种甾醇类非离子型表面活性剂溶于可用于注射给药的有机溶剂中；
(2)将酞菁锌加入到步骤(1)中得到的溶液中，超声溶解；
(3)将步骤(2)的含有酞菁锌的溶液加入到含有非离子型表面活性剂及在位凝胶的水溶液中稀释，制得所述的酞菁锌在位凝胶。
如有必要，将制得的酞菁锌在位凝胶置截留分子量3000～5000的透析袋内、低温条件下以纯化水透析。
上述用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶的制备方法，其中：
所述步骤(1)～步骤(3)中，所述的非离子型表面活性剂为脱氧胆酸钠、胆固醇-聚乙二醇1000、脱氧胆酸-聚乙二醇500、脱氧胆酸-聚乙二醇1000、脱氧胆酸-聚乙二醇2000或植物甾醇-聚乙二醇1000，优选为脱氧胆酸-聚乙二醇1000。
所述步骤(1)中，所述的非离子型表面活性剂在有机溶剂中的浓度为0.5～10％(w/v)，如浓度为2％(w/v)，表示2mg非离子型表面活性剂溶于100ml有机溶剂中，优选浓度为1～5％(w/v)，根据需要适当增加可以溶解更多酞菁锌；
所述的可用于注射给药的有机溶剂为N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜或两种有机溶剂的混合溶剂，优选为N-甲基吡咯烷酮。
所述步骤(2)中，酞菁锌与有机溶剂的质量体积比为(1～30):1(w/v)，优选为(5～20):1(w/v)。
所述步骤(3)中，将步骤(2)的酞菁锌溶液加入到含有非离子型表面活性剂的水溶液中，则得到酞菁锌胶束；
所述的非离子型表面活性剂在酞菁锌溶液中的浓度为0.1～10％(w/v)，优选为1～5％(w/v)；
所述的空白在位凝胶为温度响应的凝胶，其中所用的胶凝材料为普朗尼克F127、去乙酰结冷胶、聚(N-取代基丙烯酰胺)共聚物、聚乳酸-聚乙二醇共聚物或聚己内酯-聚乙二醇共聚物；制得的酞菁锌在位凝胶中有机溶剂的最终浓度不超过15％(v/v)，优选为不超过3～10％(v/v)；制得的酞菁锌在位凝胶中，每1毫升在位凝胶中含酞菁锌0.01～2.5mg，优选为0.1～1mg。
酞菁锌溶液与在位凝胶水溶液混合、滤过、透析等操作需低温操作(低于室温)，以免操作过程发生溶液-凝胶转变。
以上操作均需避光。
可在医学影像技术辅助下，用普通注射器将上述方法制得的用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶单点或多点注射到身体浅表部位得实体肿瘤内，用特定波长的红外光照射肿瘤局部，发挥光动力学治疗作用。
本发明所选的有机溶剂为安全性高的可注射药用溶剂，最终的酞菁锌在位凝胶中可保留部分有机溶剂，或者可以通过透析方法将有机溶剂全部或部分除去。N-甲基吡咯烷酮或二甲基甲酰胺一般认为注射给药安全性更高、且我们发现其对酞菁锌的溶解度也更高。
由于酞菁锌在上述有机溶剂中的溶解度仍然有限，经过筛选发现，加入某些表面活性剂可提高酞菁锌的溶解度。本发明所述的酞菁锌胶束溶液中的表面活性剂可以是脱氧胆酸钠、胆固醇-聚乙二醇1000、脱氧胆酸-聚乙二醇500、脱氧胆酸-聚乙二醇1000、脱氧胆酸-聚乙二醇2000或植物甾醇-聚乙二醇1000，其中脱氧胆酸-聚乙二醇1000增加酞菁锌溶解度的作用最明显。
酞菁锌-阴离子型表面活性剂-有机溶剂体系构成的酞菁锌溶液，在与水性介质混合或对水透析的过程，很快析出沉淀，无法形成稳定的酞菁锌胶束溶液。较高分子质量的聚乙二醇修饰的甾醇类非离子型表面活性剂则可以与酞菁锌形成相对稳定的胶束溶液，因此，聚乙二醇修饰的甾醇类非离子型表面活性剂、可注射给药的有机溶剂和凝胶水溶液，是制备本发明所述的酞菁锌在位凝胶必须的组成成分，其各组分间比例与技术方案提供的比例相同。
本发明中，每1毫升酞菁锌在位凝胶中含酞菁锌0.01～2.5mg，优选为0.1～1mg。这一浓度远高于大多数文献报道的非水溶性酞菁锌制剂的浓度，可满足临床治疗的要求。更高浓度时，因容易析出或聚集，其稳定性不易保证。
本发明选择温度响应型在位凝胶作为酞菁锌胶束的载体，考虑到给药方式为注射给药，需选择生物可降解或可吸收和生物相容性胶凝材料，可以是普朗尼克F127、去乙酰结冷胶、聚(N-取代基丙烯酰胺)共聚物。普朗尼克F127同时也是一种非离子型高分子表面活性剂，以其为胶凝剂，可进一步增加稳定性。
温度响应型在位凝胶低于室温条件下呈低黏度的溶液状态，可经0.22μm孔径微孔滤膜过滤以满足注射给药制剂的无菌要求，避免热灭菌可能引起的胶束破坏，药物不稳定、析出或聚集等对制剂稳定性的不利影响。
酞菁锌是一种第二代光敏剂，本发明所述的包含高浓度酞菁锌胶束的在位凝胶，可直接注射到瘤内，红外线贴近肿瘤部位照射，用于肿瘤光动力学治疗。
本发明与已有技术相比具有以下优点：
1、以聚乙二醇修饰的甾醇类作为表面活性剂，优选N-甲基吡咯烷酮为有机溶剂，获得高浓度的酞菁锌溶液，保证了最终制剂中酞菁锌浓度满足临床应用，同时胶束粒径小、稳定。
2、采用温度响应型在位凝胶为载体，瘤内注射给药，酞菁锌主要滞留在肿瘤局部，光照后在肿瘤局部产生光动力学治疗作用，可有效减少全身不良反应低。
附图说明
图1为瘤内注射酞菁锌在位凝胶后荷B16黑色素瘤C57/BL小鼠肿瘤体积增长率曲线。
图2为瘤内注射酞菁锌在位凝胶后荷B16黑色素瘤C57/BL小鼠体重变化率曲线。
具体实施方式
实施例1
称取酞菁锌5mg，加入含有二甲基亚砜1ml的试管中，室温下超声振荡2分钟，转移至离心管中10000转/分钟离心5分钟，观察溶液呈浅蓝色，离心管底部有沉淀。
实施例2
称取酞菁锌5mg，加入含有二甲基甲酰胺1ml的试管中，室温下超声振荡2分钟，转移至离心管中10000转/分钟离心5分钟，观察溶液呈浅蓝色，离心管底部有沉淀。
实施例3
称取酞菁锌5mg，加入含有N-甲基吡咯烷酮1ml的试管中，室温下超声振荡2分钟，转移至离心管中10000转/分钟离心5分钟，观察溶液呈深蓝色，离心管底部无沉淀。
由上述实验可知，酞菁锌在N-甲基吡咯烷酮中有良好的溶解度。
实施例4
称取酞菁锌10mg，加入含有N-甲基吡咯烷酮1ml的试管中，室温下超声振荡2分钟，转移至离心管中10000转/分钟离心5分钟，观察溶液呈深蓝色，离心管底部有少量沉淀。
实施例5
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸钠的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，转移至离心管中10000转/分钟离心5分钟，观察溶液呈深蓝色，离心管底部有少量沉淀。
实施例6
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，转移至离心管中10000转/分钟离心5分钟，观察溶液呈深蓝色，离心管底部无沉淀。
实施例7
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，转移至离心管中10000转/分钟离心5分钟，观察溶液呈深蓝色，离心管底部无沉淀。
实施例8
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)植物甾醇-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，转移至离心管中10000转/分钟离心5分钟，观察溶液呈深蓝色，离心管底部无沉淀。
实施例9
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸钠的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液0.5ml缓慢加入9.5ml含有2％(w/v)脱氧胆酸钠的水中，观察溶液外观，呈乳光胶束溶液，样品溶液用去离子水稀释后动态光散射法测定粒径为32.3±1.2nm，放置24小时后出现浑浊。
实施例10
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液0.5ml缓慢加入9.5ml含有2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水中，观察溶液外观，呈乳光胶束溶液，样品溶液用去离子水稀释后动态光散射法测定粒径为28.5±1.7nm，长期放置稳定，无浑浊。
实施例11
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)植物甾醇-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液0.5ml缓慢加入9.5ml含有2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水中，观察溶液外观，呈乳光胶束溶液，样品溶液用去离子水稀释后动态光散射法测定粒径为24.3±0.6nm，长期放置稳定，无浑浊。
实施例12
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液0.5ml缓慢加入9.5ml含有2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水中，观察溶液外观，呈乳光胶束溶液，样品溶液用去离子水稀释后动态光散射法测定粒径为18.8±0.7nm，长期放置稳定，无浑浊。
实施例13
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇500的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液0.5ml缓慢加入9.5ml含有2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水中，观察溶液外观，呈乳光胶束溶液，样品溶液用去离子水稀释后动态光散射法测定粒径为21.3±2.1nm，4℃放置7天出现浑浊。
实施例14
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇2000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液0.5ml缓慢加入9.5ml含有2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水中，观察溶液外观，呈乳光胶束溶液，样品溶液用去离子水稀释后动态光散射法测定粒径为29.7±0.8nm，4℃放置14天出现浑浊。
实施例15
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液缓慢滴加至19ml含有25％(w/v)普朗尼克F127、2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水溶液中，0.22μm微孔滤膜过滤后得ZnPc在位凝胶，外观呈淡蓝至乳白色半透明状态，长期放置(大于21天)未出现浑浊现象。升温后凝胶体积无变化。
实施例16
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液缓慢滴加至19ml含有5％(w/v)去乙酰结冷胶、2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水溶液中，0.22μm微孔滤膜过滤后得ZnPc在位凝胶，外观呈乳白色半透明状，升温后凝胶体积无变化，放置7天后出现浑浊。
实施例17
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液缓慢滴加至19ml含有10％(w/v)聚(N-取代基丙烯酰胺)共聚物、2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水溶液中，0.22μm微孔滤膜过滤后得ZnPc在位凝胶，外观呈乳白色半透明状，温度升高凝胶相体积收缩，部分溶剂和酞菁锌胶束溶液被挤压到凝胶网络外。放置14天后出现浑浊。
实施例18
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液缓慢滴加至19ml含有10％(w/v)聚乳酸-聚乙二醇共聚物、2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水溶液中，0.22μm微孔滤膜过滤后得ZnPc在位凝胶，外观呈乳白色半透明状，温度升高凝胶相体积收缩，部分溶剂和酞菁锌胶束溶液被挤压到凝胶网络外。放置9天后出现浑浊。
实施例19
称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。将上述酞菁锌溶液缓慢滴加至19ml含有10％(w/v)聚己内酯-聚乙二醇共聚物、2％(w/v)胆固醇-聚乙二醇1000的水溶液中，0.22μm微孔滤膜过滤后得ZnPc在位凝胶，外观呈乳白色半透明状，温度升高凝胶相体积收缩，部分溶剂和酞菁锌胶束溶液被挤压到凝胶网络外。放置20天后出现浑浊。
实施例20
瘤内注射酞菁锌在位凝胶的光动力学药效研究
样品制备(避光、无菌操作)：
(1)稀释液：25％普朗尼克F127水溶液，0.22μm微孔滤膜过滤，滤液分装，密闭冷藏放置。
(2)酞菁锌在位凝胶溶液：称取酞菁锌10mg，加入含有2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000的N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。快速搅拌下，上述溶液滴加至25％(w/v)普朗尼克F127水溶液19.0ml中，0.22μm微孔滤膜过滤，即得(0.5mg/ml酞菁锌)。取0.5mg/ml酞菁锌在位凝胶溶液3.4ml，加稀释液6.6ml，混匀(0.17mg/ml酞菁锌)。取0.17mg/ml酞菁锌在位凝胶溶液2.9ml，加稀释液7.1ml，混匀(0.05mg/ml酞菁锌)。
(3)阿霉素在位凝胶溶液：称取8mg阿霉素，超声溶解于25％(w/v)F127水溶液2ml(4mg/ml盐酸阿霉素)。
(4)空白在位凝胶溶液：2％(w/v)脱氧胆酸-聚乙二醇1000加入到N-甲基吡咯烷酮1ml试管中，室温下超声振荡2分钟，酞菁锌全部溶解。快速搅拌下，上述溶液滴加至25％(w/v)普朗尼克F127水溶液19.0ml中，0.22μm微孔滤膜过滤，即得(相当于酞菁锌0.5mg/ml)。
(5)酞菁锌溶液：取0.5mg/ml酞菁锌在位凝胶溶液3.4ml，加注射用水6.6ml，混匀(0.17mg/ml酞菁锌)。
细胞培养和黑色素瘤模型的建立：
B16细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，置于CO2培养箱(37℃，5％CO2，相对湿度95％条件)培养，每2～3天传代一次，取对数生长期细胞进行实验。胰蛋白酶消化对数生长期B16细胞，加入培养基终止消化，以1000min/r离心5min，PBS洗涤细胞3次。取10μL细胞悬液进行计数，计数后用PBS调整细胞浓度为8×106/mL。拔去C57/BL小鼠右前肢外侧鼠毛，面积约4cm2。75％酒精消毒皮肤，皮内注射B16细胞悬液0.1mL/只。小鼠自由饮水，正常饮食。观察肿瘤出现时间、成瘤率和肿瘤体积。游标卡尺测量肿瘤的长径(a)和短径(b)，按下式计算肿瘤体积(TV)。肿瘤体积(TV)＝a×b2/2。
动物分组和给药：
瘤体积达到200cm3左右时，按体积从大到小排列，进行蛇形分组分为七组，每组5只。
一组：在位凝胶空白对照组：空白在位凝胶溶液
二组：酞菁锌在位凝胶低剂量组：0.05mg/ml酞菁锌在位凝胶溶液，1μg/鼠，光照
三组：酞菁锌在位凝胶中剂量组：0.17mg/ml酞菁锌在位凝胶溶液，3.4μg/鼠，光照
四组：酞菁锌在位凝胶高剂量组：0.5mg/ml酞菁锌在位凝胶溶液，10μg/鼠，光照
五组：酞菁锌溶液对照组：0.17mg/ml酞菁锌溶液，3.4μg/鼠，光照
六组：酞菁锌在位凝胶对照组：0.17mg/ml酞菁锌在位凝胶溶液，3.4μg/鼠，不光照
七组：阿霉素在位凝胶阳性对照组：4mg/ml盐酸阿霉素在位凝胶溶液，80μg/鼠，不光照
分组后标号、称体重，每组单次瘤内注射给药20μL，给药2h后靠近肿瘤部位皮肤照射红外光(300mW)5min，停2h，反复2次(有效照射时间10min)。第1、3、5、7、9、11、13、15天，同法照射，测量瘤体积、称量小鼠体重。
实验数据均以均值±标准误(Mean±SEM)表示，使用SPSS17.0统计分析软件和One-Way ANOVA进行数据处理。用LSD进行组间两两比较(当方差齐时)，用Dunnett’s T3进行组间两两比较(当方差不齐时)。P<0.05表示统计学检验有显著性差异。
结果：
各组小鼠体重增长率变化不大(图1)；在实验过程中，高剂量组体重增长率前5天明显升高，后10天体重比较稳定；与六组(不光照组)相比，三组(中剂量组)、七组(阿霉素组)在第7、9、15天体重增长率有显著性下降(P<0.05)；一组(空白对照组)、二组(低剂量组)、三组(中剂量组)、五组(酞菁锌溶液对照组)、七组(阿霉素组)体重增长率逐渐下降，在第9天达到最低，随后体重增长率又稳定升高，根据肿瘤生长特点，肿瘤给药后前9天增长速度相对缓慢，给药后体重有所下降，但给药9天后，肿瘤增长速度明显加快，根据剖瘤时鼠的形态观察及肿瘤称重发现，后期小鼠体重的增长主要源于肿瘤的增长；而且阳性药组的肿瘤增长率始终为负，且增长率最小，主要原因是体重下降是化疗药的副作用。给药第7天后，七组(阿霉素组)出现1只鼠死亡；给药第8天后，六组(不照光组)和七组(阿霉素组)均出现1只鼠死亡；第9天一组(空白组)和五组(酞菁锌溶液对照组)均出现1只鼠死亡，六组(不照光组)和七组(阿霉素组)均出现2只鼠死亡；第13天空白组出现1只鼠死亡，五组(溶液组)出现2只鼠死亡；
所有组的肿瘤体积从第9天后增长速度明显增高(图2)；与一组(空白对照组)相比，瘤内注射给药后七组(阿霉素组)从第5、7(P<0.05)，9、11、13、15(P<0.01)天，肿瘤体积均有明显降低，三组(中剂量组)在第5(P<0.05)、9、11、13、15(P<0.01)天的肿瘤体积有明显降低，二组(低剂量组)和五组(酞菁锌溶液对照组)在第11、13、15天的肿瘤体积有明显降低(P<0.01)，四组(高剂量组)在第13、15天的肿瘤体积有明显降低(P<0.01)；与六组(不照光组)相比，瘤内注射给药后三组(中剂量组)在第5(P<0.05)、7、9、11、13、15(P<0.01)天的肿瘤体积均有明显降低，四组(高剂量组)在5(P<0.05)、7(P<0.01)、9(P<0.05)、13、15(P<0.01)天的肿瘤体积均有明显降低，二组(低剂量组)在11、13、15(P<0.01)天的肿瘤体积均有明显降低，五组(酞菁锌溶液对照组)在9(P<0.05)，11、13、15(P<0.01)天的肿瘤体积均有明显降低；与五组(酞菁锌溶液对照组)相比，三组(中剂量组)和七组(阿霉素组)在15(P<0.01)天的肿瘤体积均有明显降低。给药光照组(二组、三组、四组)的抑瘤率依次是33.42％、56.95％、31.01％，五组(酞菁锌溶液对照组)的抑瘤率21.13％，七组(阿霉素组)的抑瘤率80.94％，六组(不照光组)的抑瘤率-1.42％。
上述实验结果显示，瘤内注射酞菁锌光动力学疗法对黑色素瘤能起到良好的抑制作用，而且中剂量组的抑制作用最强，红外光照射是起效的必要条件，酞菁锌在位凝胶的毒副作用小。
表1：瘤内注射酞菁锌在位凝胶15天后荷B16黑色素瘤C57/BL小鼠瘤重和抑瘤率结果
| 组别 | 瘤重(g) | 抑瘤率(％) |
| 一组(在位凝胶空白对照组) | 3.12±0.22 | - |
| 二组(酞菁锌在位凝胶低剂量组) | 2.08±0.16*# | 33.42 |
| 三组(酞菁锌在位凝胶中剂量组) | 1.34±0.07*# | 56.95 |
| 四组(酞菁锌在位凝胶高剂量组) | 2.15±0.16*# | 31.01 |
| 五组(酞菁锌溶液对照组) | 2.46±0.20*# | 21.13 |
| 六组(酞菁锌在位凝胶对照组) | 3.16±0.15 | -1.42 |
| 七组(阿霉素在位凝胶阳性对照组) | 0.59±0.16*# | 80.94 |
*P<0.05vs.空白对照组，#P<0.05vs.不光照组(中剂量)。
Claims (6)
1.一种用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶，其特征在于，其由酞菁锌、可用于注射给药的有机溶剂、非离子型表面活性剂、水，以及空白在位凝胶组成；
所述肿瘤为黑色素瘤；
所述的可用于注射给药的有机溶剂为N-甲基吡咯烷酮；
所述的非离子型表面活性剂为胆固醇-聚乙二醇1000、脱氧胆酸-聚乙二醇1000或植物甾醇-聚乙二醇1000；
所述的空白在位凝胶为温度响应的凝胶，其中所用的胶凝材料为普朗尼克F127；
该酞菁锌在位凝胶低于室温条件下呈低黏度的溶液状态，经0.22µm孔径微孔滤膜过滤满足无菌要求；
所述用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶中有机溶剂的终浓度不超过15%（v/v）；
每1毫升用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶中含酞菁锌0.01~2.5 mg。
2.根据权利要求1所述的用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶，其特征在于，在医学影像技术辅助下，用普通注射器将所述的瘤内注射给药的在位凝胶单点或多点注射到身体浅表部位的实体肿瘤内，用300mW的红外光照射肿瘤局部，发挥光动力学治疗作用，其中，瘤内注射酞菁锌光动力学疗法对黑色素瘤的抑制率为56.95%。
3.根据权利要求1所述的用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶，其特征在于，每1毫升用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶中含酞菁锌0.1~1 mg。
4.一种权利要求1~3任一项所述的用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将非离子型表面活性剂溶于可用于注射给药的有机溶剂中；非离子型表面活性剂在有机溶剂中的浓度为0.5~10%（w/v）；
（2）将酞菁锌加入到步骤（1）中得到溶液中，超声溶解；
（3）将步骤（2）的含有酞菁锌的溶液加入到含有非离子型表面活性剂及在位凝胶的水溶液中稀释，制得酞菁锌在位凝胶；非离子型表面活性剂在酞菁锌溶液中的浓度为0.1~10%（w/v）；
以上操作均需避光。
5.根据权利要求4所述的用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶的制备方法，其特征在于，将制得的酞菁锌在位凝胶置截留分子量3000~5000的透析袋内、低温条件下以纯化水透析。
6.根据权利要求4所述的用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，酞菁锌与有机溶剂的质量体积比为（1~30）:1。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111213582.8A CN113827553B (zh) | 2021-10-19 | 2021-10-19 | 用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111213582.8A CN113827553B (zh) | 2021-10-19 | 2021-10-19 | 用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113827553A CN113827553A (zh) | 2021-12-24 |
| CN113827553B true CN113827553B (zh) | 2024-03-22 |
Family
ID=78965263
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111213582.8A Active CN113827553B (zh) | 2021-10-19 | 2021-10-19 | 用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113827553B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115785721B (zh) * | 2022-09-23 | 2023-08-01 | 中国人民解放军国防科技大学 | 一种基于酞菁锌微胶囊的复合涂层 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110151990A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-08-23 | 福州大学 | 一种酞菁-温敏凝胶制剂及其制备方法 |
-
2021
- 2021-10-19 CN CN202111213582.8A patent/CN113827553B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110151990A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-08-23 | 福州大学 | 一种酞菁-温敏凝胶制剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 纳米胶束复合水凝胶包载锌酞菁用于光动力抗癌的研究;卢小鸾;中国优秀硕士学位论文全文库 工程科技Ⅰ辑(第04期);第B016-384页，尤其是摘要、第1.6.2.1-1.6.2.2节、第2.2.3.1-2.2.3.3节、第4.2.1节、第4.2.5节、第4.3节 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113827553A (zh) | 2021-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chu et al. | ROS‐responsive camptothecin prodrug nanoparticles for on‐demand drug release and combination of chemotherapy and photodynamic therapy | |
| KR102081666B1 (ko) | 암 치료용 약학 조성물 | |
| JP5972171B2 (ja) | 光力学的療法のためのヒト血清アルブミンをベースにしたナノ粒子キャリアシステム | |
| WO2015188570A1 (zh) | 一种白蛋白吲哚菁绿紫杉醇复合物及其制备方法与应用 | |
| CN111135296B (zh) | 一种白蛋白结合型吲哚菁绿抗肿瘤光热制剂及其制备方法 | |
| CN110215438B (zh) | 双载蒽环类药物及光敏剂介孔硅纳米粒的制备方法与应用 | |
| WO2017045192A1 (zh) | 靶向肿瘤的声、光动力载药纳米胶束及其制备方法和用途 | |
| CN109718207A (zh) | 化疗药-光敏剂共组装纳米粒及其构建 | |
| CA2699140A1 (en) | Nanoparticles for cancer sonodynamic and photodynamic therapy | |
| CN113663079B (zh) | 一种无载体自组装纳米粒子及其制备方法和应用 | |
| CN112999153A (zh) | 载化疗药物/光敏剂的纳米胶束及其制备方法和应用 | |
| CN113827553B (zh) | 用于肿瘤光动力学治疗的瘤内注射给药的酞菁锌在位凝胶及其制备方法 | |
| CN110448699B (zh) | 包含功能性多肽修饰七甲川花菁素类染料的肿瘤细胞核靶向载药纳米粒子及制备方法 | |
| CN107126561B (zh) | 一种可实现化疗和ptt/pdt联合治疗的抗肿瘤协同组合物及其应用 | |
| JPH0331283A (ja) | 安定な凍結乾燥したポリヘマトポルフイリンエーテル／エステル組成物 | |
| CN109675052B (zh) | 生物点击触发的高效靶向偶联物及其多元组合物、制备方法和应用 | |
| CN112546025A (zh) | 一种Ce6@CMCS-DSP-IPI549抗肿瘤纳米传递系统的制备方法 | |
| US10201609B2 (en) | Method for the production of a formulation of a hypericin salt | |
| CN113908276A (zh) | 一种光控释药纳米粒子及其制备方法和应用 | |
| CN103933568B (zh) | 一种水溶性竹红菌素plga纳米粒及其制备方法 | |
| Liu et al. | Multifunctional photo-responsive liposomes for tumor imaging and phototherapy to enhance the antitumor efficacy and reduce the hepatotoxicity of methotrexate | |
| Yang et al. | Combination of PEG‐b‐PAA Carrier and Efficient Cationic Photosensitizers for Photodynamic Therapy | |
| KR102525384B1 (ko) | 이중 약물이 봉입된 세포외 소포체의 제조방법 | |
| CN115282274B (zh) | 一种用于增强光动治疗的级联纳米放大器及其制备方法与应用 | |
| CN114470229B (zh) | 一种无载体双药自组装纳米粒的制备及用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |