CN113827502B - 肉苁蓉多糖在制备具有吸湿、保湿或舒缓功效的化妆品中的应用 - Google Patents

肉苁蓉多糖在制备具有吸湿、保湿或舒缓功效的化妆品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供肉苁蓉多糖在制备具有吸湿、保湿或舒缓功效的化妆品中的应用。所述肉苁蓉多糖的制备方法为：将肉苁蓉通过复合酶联合超声提取法进行提取，用乙醇使提取液沉淀至乙醇浓度为80％，得到沉淀为粗多糖，挥干乙醇，加水溶解，再加入乙醇进行纯化，得到醇沉肉苁蓉多糖；所述复合酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶。本发明认为这三种肉苁蓉多糖均具有一定的吸湿保湿功效，而50％和80％醇沉肉苁蓉多糖有舒缓功效，联合其抗衰老、抗氧化等生理活性，在化妆品领域具有一定的研究价值。

Description

肉苁蓉多糖在制备具有吸湿、保湿或舒缓功效的化妆品中的 应用
技术领域
本发明涉及肉苁蓉多糖在制备具有吸湿、保湿或舒缓功效的化妆品中的应用。
背景技术
肉苁蓉学名Cistanche deserticola Ma，为列当科肉苁蓉属的寄生植物，入药部位是其干燥带鳞片的肉质茎，最早记载于《神农本草经》，有养五脏、益精气之功效，被列为上品，是中医临床中常用的一味具有壮阳补益功效的名贵中药材。使用历史悠久，在我国古代《别医名录》(汉末)、《本草经集注》(南北朝)、《千金翼方》(唐朝)、《本草纲目》(明朝)等均有其记载，有“沙漠人参”的美誉，又名地精、金笋、大芸等。我国分布的肉苁蓉主要有五种，分别为荒漠肉苁蓉、沙苁蓉、盐生肉苁蓉、管花肉苁蓉和白花盐苁蓉，主要分布于内蒙古、新疆、甘肃、宁夏、青海等地。
肉苁蓉具有较多活性成分，其中最主要的为苯乙醇苷类和糖类。目前对肉苁蓉的研究大多都是针对苯乙醇总苷和肉苁蓉多糖展开。此外还有环烯醚萜苷类、氨基酸类、木质素类、和部分挥发性成分，但对这些成分的药理活性和功效的研究，目前还比较少见。
目前已有大量研究表明许多植物多糖均有抗氧化、抗衰老、降血糖血脂、免疫调节、抗辐射、美白和改善记忆等多种药理作用，植物多糖的研究应用在药品、食品、保健品和化妆品等领域均前景广阔，具有较高的研究价值。随着社会发展、生活方式的改变、审美的变化，人们对颜值的评判已成为评价一个人的重要指标，化妆品的开发利用也迎来了新的阶段，各种品牌与功效的化妆品在市场上层出不穷，好的化妆品可提升人的气质，改变颜值，劣质的化妆品则会起相反的作用，甚至危害使用者的身体健康，因此，化妆品的安全性与功效备受人们的重视。目前在绿色、环保的消费理念的刺激下，天然植物类消费品因无毒副作用、无污染、安全有效等特点深得消费者的青睐。
化妆品虽然品牌众多、种类丰富、功能各异，但都离不开吸湿保湿性。化妆品的吸湿保湿性能已是评价其品质优劣的重要指标之一。有研究显示人体的水分约占总体重的65％,婴儿体内的水分更是达到总体重的80％。皮肤角质层是人体的第一道防线，正常的皮肤角质层含水应量在10％到20％，这时的皮肤柔嫩细腻，光滑有弹性。人体皮肤角质层的水分含量不能低于10％，否则皮肤就会因缺水而干燥，严重时甚至会龟裂。保湿增加皮肤水分，为皮肤角质层补充充足的水分，同时避免水分的流失，使皮肤保持湿润柔软，在化妆品的开发中，吸湿保湿剂的研究已成为一个热门方向，选择更优质的吸湿保湿添加剂来提高人体皮肤的含水量，改善皮肤，以提高产品的竞争力。
肉苁蓉被誉为“沙漠人参”，有着非常宝贵的医疗价值，目前主要被运用于成中成药以及部分保健品。如今已有大量对肉苁蓉多糖免疫调节、抗疲劳、抗氧化、抗衰老、提高学习能力、抗肝损伤、抗病毒、抗肿瘤等众多药理作用的研究，但对其吸湿保湿性的研究却还未见到。本发明通过考察肉苁蓉多糖的吸湿与保湿性，联合其抗氧化、抗衰老等药理作用，探究肉苁蓉多糖运用于化妆品的潜力，以期拓展肉苁蓉在化妆品领域的应用于开发。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了肉苁蓉多糖在制备具有吸湿、保湿或舒缓功效的化妆品中的应用。
为了实现本发明的技术目的，本发明的技术方案如下：
本发明提供肉苁蓉多糖在制备具有吸湿、保湿或舒缓功效的化妆品中的应用。
可以用现有技术中的通用方法制备成含有肉苁蓉多糖的各种化妆品，比如霜膏、乳液、膜粉剂、啫喱剂、粉饼、水剂、气雾剂和喷雾剂等。本发明对上述各种化妆品的制备方法没有限制。
作为优选，所述肉苁蓉多糖的制备方法为：将肉苁蓉通过复合酶联合超声提取法进行提取，然后用乙醇沉淀得到粗多糖，再加入乙醇进行纯化，根据溶液中乙醇含量的不同，得到不同的醇沉肉苁蓉多糖；所述复合酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶。
作为优选，所述纤维素酶为2％，所述木瓜蛋白酶为2％，所述果胶酶为0.45％。
作为优选，所述复合酶提取的pH为5.2，温度为54.1℃，提取时间为2h。
作为优选，所述用乙醇沉淀是加入浓度为90％以上的乙醇直至溶液中乙醇浓度为80-85％。
作为优选，所述加入乙醇进行纯化是加入浓度为90％以上的乙醇，然后在溶液中乙醇浓度为30％-35％时收集沉淀出的肉苁蓉多糖；或
所述加入乙醇进行纯化是加入浓度为90％以上的乙醇，然后在溶液中乙醇浓度为50％-55％时收集沉淀出的肉苁蓉多糖；或
所述加入乙醇进行纯化是加入浓度为90％以上的乙醇，然后在溶液中乙醇浓度为80-85％时收集沉淀出的肉苁蓉多糖。
本发明还提供一种化妆品，其中具有吸湿、保湿或舒缓功效的成分包括上述的肉苁蓉多糖。
作为优选，所述具有吸湿、保湿功效的肉苁蓉多糖，是在粗多糖中加入乙醇进行纯化时，在溶液中乙醇浓度为30％、50％或80％时收集沉淀的肉苁蓉多糖。
作为优选，所述具有舒缓功效的肉苁蓉多糖，是在粗多糖中加入乙醇进行纯化时，在溶液中乙醇浓度为50％或80％时收集沉淀的肉苁蓉多糖。
本发明以沙漠肉苁蓉为原料，通过复合酶联合超声法提取肉苁蓉粗多糖，再通过醇沉法分别得到30％、50％和80％三种醇沉肉苁蓉多糖。以苯酚硫酸法测定多糖含量。分别在20℃时，相对湿度(RH)为43％和81％的环境下测定三种肉苁蓉多糖以及甘油的吸湿和保湿效果，研究结果表明，吸湿试验中，在相对湿度为43％环境中，三类肉苁蓉多糖以及甘油最大吸湿率分别为6.14％、5.50％、5.90％、25.30％，在相对湿度为81％的环境中，其最大吸湿率分别为15.69％、19.63％、17.74％、99.38％。保湿试验中，在RH43％环境下，三种肉苁蓉多糖以及甘油的保湿率分别为45.51％、30.31％、30.95、24.70％；在RH81％环境下，其保湿率分别为76.88％、78.83％、85.17％、100.27％。通过方差分析，按P≤0.05水准，肉苁蓉多糖和甘油吸湿率和保湿率的差异均有统计学意义，认为肉苁蓉多糖和甘油吸湿率和保湿率总体均数不全相等。本发明认为这三种肉苁蓉多糖均具有一定的吸湿保湿功效，而50％和80％醇沉肉苁蓉多糖有舒缓功效，联合其抗衰老、抗氧化等生理活性，在化妆品领域具有一定的研究价值。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施案例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为葡萄糖溶液标准曲线。
图2为各肉苁蓉多糖在RH43％(a)和RH81％(b)环境中的吸湿率随时间变化关系。
图3为各肉苁蓉多糖及甘油在不同RH下的保湿率。
图4为肉苁蓉多糖刺激性实验测试结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
本发明的肉苁蓉多糖的制备方法如下：
本发明通过复合酶联合超声提取法提取肉苁蓉多糖，具体操作方法为：称取适量脱酯的肉苁蓉粉末以及纤维素酶(2wt％，酶与酸水的重量百分比)、木瓜蛋白酶(2wt％，酶与酸水的重量百分比)、果胶酶(0.45wt％，酶与酸水的重量百分比)，按料液比1：10加酸水进行酶解提取，调节温度至54-54.5℃，置水浴锅中酶解1.5-2.5h，然后超声提取3次，每次超声提取25-35min，第一次超声提取液是酶解液，后两次超声提取时加入酸水，料液比均为1:10，过滤，合并滤液，用高速离心机将滤液离心，收集上清液。将上清液通过超旋转蒸发仪浓缩至原来体积的十分之一，搅拌的同时滴加90％以上乙醇使肉苁蓉多糖沉淀，直至乙醇浓度为80％时，静置12-20h，倒出滤液，收集沉淀出的肉苁蓉多糖，待乙醇挥发后，通过冻干保存，得到80％醇沉粗多糖。
溶液中乙醇浓度为80％时，能够将大部分的多糖沉淀完全。
将冻干保存的肉苁蓉多糖用适量水溶解，搅拌的同时滴加90％以上乙醇，分别在乙醇浓度为30％、50％、80％时收集沉淀出的肉苁蓉多糖，待乙醇挥发后冻干保存。
所述酸水为用柠檬酸将水调节pH至5.2。
上述料液比是指肉苁蓉粉末与酸水的重量比。
上述乙醇浓度均是使用酒精计在常温下测量得到的。
实施例1肉苁蓉多糖的吸湿保湿功效
(一)、试验材料及仪器
1.1实验材料
荒漠肉苁蓉(已除酯)。
1.2试验用酶及试剂
表1实验用酶及试剂
1.3实验仪器
表2提取肉苁蓉多糖所用的实验仪器
(二)、实验方法
2.1肉苁蓉多糖的制备
称取3200g脱酯的肉苁蓉粉末以及64g纤维素酶、64g木瓜蛋白酶、14.4g果胶酶，加入32000g酸水进行酶解提取，调节温度至54.1℃，置水浴锅中酶解2h，然后超声提取3次，每次超声提取30min，第一次超声时为酶解液，后两次超声提取时每次加入32000g的酸水，用六层纱布过滤，合并滤液，用高速离心机将滤液离心，收集上清液。将上清液通过超旋转蒸发仪浓缩至原来体积的十分之一，搅拌的同时滴加90％乙醇使肉苁蓉多糖沉淀，直至乙醇浓度为80％时，静置12h，倒出滤液，收集多糖，待乙醇挥发后，通过冻干保存。
所述酸水为用柠檬酸将水调节pH至5.2。
上述乙醇浓度均是使用酒精计在常温下测量得到的。
2.2肉苁蓉多糖的纯化
将冻干保存的肉苁蓉多糖用适量水溶解，搅拌的同时滴加90％乙醇，分别在乙醇浓度为30％、50％、80％时收集沉淀出的肉苁蓉多糖，待乙醇挥发后冻干保存。
上述乙醇浓度均是使用酒精计在常温下测量得到的。
2.3肉苁蓉多糖含量的测定
2.3.1葡萄糖标准曲线制作
称取分析纯葡萄糖25mg置于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容后，精密移取上述葡糖糖溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.2ml于10ml容量瓶中，用蒸馏水定容。分别取上述溶液2ml置于10ml试管中，加2ml苯酚(5％)、5ml浓硫酸，涡旋后静置15min,在490nm处测定吸光度。
葡萄糖标准曲线制作结果Y＝16.722X-0.0146(R2＝0.992)。
图1为葡萄糖溶液标准曲线。
表3葡萄糖标准曲线制作实验结果
2.3.2测定提取的肉苁蓉多糖含量
分别取纯化后的肉苁蓉多糖25mg于100ml容量瓶中。待完全溶解后用蒸馏水定容。取0.6ml上述溶液于10ml容量瓶中定容后同标准曲线制作方法操作，测定各肉苁蓉多糖在490nm处的吸光度值。
2.4吸湿性试验
准确称取步骤2.2制备的各醇沉肉苁蓉多糖粉末或甘油0.5g，各三份，在干燥皿中放置12h后置于温度为20℃，相对湿度(RH)为43％的药品稳定性试验箱中，分别于一段时间(1h、3h、6h、12h、24h、48h)后精确称量肉苁蓉多糖的质量。通过样品前后的质量差求肉苁蓉多糖的吸湿率，吸湿率＝(mn-m0)/m0×100％，式中mn为肉苁蓉多糖吸湿后的质量，m0为称量肉苁蓉多糖吸湿前质量。将肉苁蓉多糖继续放置于20℃，RH43％的药品稳定性试验箱中，直至饱和。
再准确称取步骤2.2制备的各醇沉肉苁蓉多糖粉末或甘油0.5g，各三份，同上述方法测定各肉苁蓉多糖在20℃、RH81％环境中的吸湿率。将肉苁蓉多糖继续放置于RH81％的药品稳定性试验箱中，直至饱和。
2.5保湿性试验
将步骤2.4中已在RH为43％饱和的各肉苁蓉多糖或甘油置于温度为20℃，RH43％的药品稳定性试验箱中，48h后精确称量其质量，计算保湿率，保湿率＝Hn/H0×100％，式中Hn为样品含水量，H0为48h后样品的含水量。
将药品稳定性试验箱的温度设为20℃，RH为81％，同上述方法测定已在RH为81％饱和的各肉苁蓉多糖或甘油在RH81％环境中的保湿率。
(三)、结果与分析
3.1肉苁蓉多糖提取结果与含量测定
表4肉苁蓉多糖含量测定结果
3.2肉苁蓉多糖的吸湿性
3.2.1肉苁蓉多糖在RH43％环境中的吸湿率
在不同乙醇浓度下获得的肉苁蓉多糖在温度20℃、相对湿度(RH)为43％的环境中吸湿的重量变化如表5所示，吸湿率随时间变化如图2中a图所示，可知三种肉苁蓉多糖均有一定的吸湿性，但相差不大，其中30％醇沉多糖吸湿性最佳，最大吸湿率达到6.14％。80％的醇沉多糖在1h时达到最大吸湿率5.90％，此后便开始下降。三种肉苁蓉多糖在24h时出现一次较大变化，推测可能是实验环境的影响导致其吸湿率发生较大变化。三种肉苁蓉多糖吸湿率并未达到理想的吸湿效果。由此推测肉苁蓉多糖在低湿度环境下吸湿率较差，不适于将其作为低湿度环境下的吸湿剂应用于化妆品。
表5肉苁蓉多糖及甘油吸湿重量随时间的变化
3.2.2肉苁蓉多糖在RH81％环境中的吸湿率
在温度为20℃、相对湿度为81％的环境中，三种肉苁蓉多糖的吸湿重量变化如表6所示：
表6肉苁蓉多糖甘油吸湿重量随时间的变化
吸湿率时间变化如图2中b图所示，三种肉苁蓉多糖及甘油相较于在RH43％环境下均有明显的增加，吸湿效果显著。其中甘油吸湿率达到99.28％，三种肉苁蓉多糖中，50％醇沉多糖吸湿效果最好，在3h时达到饱和，吸湿率为19.63％，其次为80％醇沉多糖，最大吸湿率为17.74％，30％醇沉多糖在3h时吸湿率达到最大值15.69％，在高湿度环境下，三种肉苁蓉多糖虽低于甘油，但亦具有一定的吸湿效果，有潜力成为传统吸湿剂的替代品。
图2为各肉苁蓉多糖在RH43％(a)和RH81％(b)环境中的吸湿率随时间变化关系。
肉苁蓉多糖和甘油在不同RH环境中的吸湿率方差分析结果如表7所示，在RH为43％与81％环境下，按α＝0.05水准肉苁蓉和甘油吸湿率的差异均有统计学意义，认为肉苁蓉多糖和甘油吸湿率总体均数不全相等，由图2可以看出，肉苁蓉多糖的吸湿率低于甘油。
表7肉苁蓉多糖和甘油在不同RH环境中的吸湿率方差分析结果
3.3肉苁蓉多糖的保湿性
在RH81％环境下已饱和的肉苁蓉多糖分别在温度为20℃，相对湿度(RH)为43％和81％的环境下的保湿率如表8所示，对肉苁蓉多糖和甘油进行方差分析结果如表9所示，在RH为43％与81％环境下，按α＝0.05水准肉苁蓉和甘油保湿率的差异均有统计学意义，认为肉苁蓉多糖和甘油保湿率总体均数不全相等。
表8肉苁蓉多糖在不同RH下的保湿率
表9肉苁蓉多糖和甘油在不同RH环境中的保湿率方差分析结果
在RH43％环境中，30％醇沉多糖保湿性最好，保湿率为45.51％，50％与80％的肉苁蓉保湿率相近，分别为30.31％和30.95％。三种肉苁蓉多糖及甘油的保湿性顺序为：30％醇沉多糖>50％醇沉多糖>80％醇沉多糖>甘油。在低湿度环境中，肉苁蓉多糖的保湿率优于甘油，在化妆品领域中具有一定的研究价值。在RH81％环境中，三种肉苁蓉多糖及甘油的保湿性顺序为：甘油>50％醇沉多糖>30％醇沉多糖>80％醇沉多糖。三种肉苁蓉多糖保湿率均在90％以上，说明肉苁蓉多糖在高湿度环境下虽略低于甘油，但亦具有良好的保湿效果，有潜力替代传统保湿剂应用于化妆品中。
图3为各肉苁蓉及甘油在不同RH下的保湿率。
实施例2肉苁蓉多糖成分舒缓功效(斑马鱼急性刺激性实验结果)
在前期保湿性质评价的基础上，本申请发明人继续参照广州开发区黄埔化妆品产业协会发布的《化妆品安全性实验(斑马鱼)实验方法》标准，对相关中药多糖成分的舒缓功效通过温和刺激性测试给予了评价。
(一)实验方法：化妆品温和刺激性的测定斑马鱼胚法
1本标准规定了评价化妆品温和刺激性的斑马鱼胚实验的方法原理及操作。本标准适用于化妆品(膏霜、乳液、凝胶、精华，等)及化妆品原料的温和刺激性评价。
2化妆品安全技术规范(2015版)QB/T1684-2015化妆品检验规则DB32/T3979-2021实验用斑马鱼饲育技术条件OECD236FishEmbryoAcuteToxicity(FET)Test。
3方法原理
使用24孔细胞培养板，在空白对照或阳性对照控制对照的条件下，将24hpf的斑马鱼胚胎置于不同的样品中，在体式显微镜下观察(5min内)，根据胚胎对受试样品的温和刺激性反应(胚胎的刺激摆动、凝结(死亡)情况)记录好鱼胚刺激摆动(卵黄囊位置的移动)的次数和鱼胚死亡(凝结)数量，表征样品的温和刺激性。
4生物模型
4.1成鱼采用性成熟、健康无畸形、产卵量高、产卵质量好的野生型斑马鱼zebrafish(Daniorerio)成鱼(4～18个月)进行产卵。成鱼的体长3～5cm，雄鱼体型修长，体色为柠檬色，腹部扁平。雌鱼体型丰满，腹部膨大、银亮，体色为银灰色。
4.2鱼胚实验鱼胚为处于24hpf时期发育正常的受精卵，实物鉴别参考<化妆品温和刺激性的测定斑马鱼胚法附录A>。
4.3鱼的养殖维护斑马鱼养殖及维护参考<化妆品温和刺激性的测定斑马鱼胚法附录F>。
5材料试剂
5.1材料
斑马鱼交配盒。胚胎收集器：100.0mm培养皿。细胞培养板：24孔细胞培养板：每孔容积3.5ml。塑料滴管：3.0ml，长约150.0mm。
5.2普通试剂除非另有说明，分析时使用符合国家标准的分析纯试剂。
氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、氯化钙(CaCl2·2H2O)、硫酸镁(MgSO4·7H2O)。
5.3对照组溶液
5.3.1空白对照组：标准稀释水。标准稀释水配置方法：精密称取17.2g氯化钠，0.76g氯化钾，2.9g氯化钙，4.9g硫酸镁，用蒸馏水或去离子水溶解并定容至1000ml，得到标准稀释水储备液。取以上标准稀释水储备液16.67ml，再用蒸馏水或去离子水稀释至1000ml即可。
5.3.2阳性对照组：十二烷基硫酸钠(SDS)标准储备溶液(5.0mg/ml)。
6实验过程
6.1胚胎准备
6.1.1斑马鱼配种时，产卵盒外缸预先加入2/3的养殖水，接着套入带有胚胎分离作用的内缸，插入挡板，隔开雌雄两鱼。于实验前一天晚上选取大于4个月的性成熟的待配种斑马鱼按照1：1或1：2的雌雄比置于带有挡板的产卵盒中过夜，避光。
6.1.2次日早晨打开光源，抽出产卵盒的挡板使之进行交配产卵。交配1h后，检查各缸成鱼产卵情况，用漏网勺收集斑马鱼交配产生的胚胎，养殖水冲洗置100.0mm培养皿中，平均每个培养皿胚胎数量不超过300枚。清除培养皿中的异物后，放入恒温培养箱里孵育。
6.2样品前处理参考化妆品温和刺激性的测定斑马鱼胚法附录D化妆品及原料前处理方法。
6.3实验方法
6.3.1实验过程在体视显微镜下用塑料滴管随机挑选24hpf发育正常的胚胎用于实验(此时的胚胎为体节期)。使用24孔细胞培养板为实验载体，每孔加入胚胎10～20枚。用塑料吸管吸干养殖水后，每孔加入1.0ml配制好的不同的受试样品液于上述24孔细胞培养板中，静置。各肉苁蓉多糖浓度组设置3个平行组，同时设置空白对照组或阳性对照组。于体视显微镜下(物镜2～3倍)观察(5min内)和记录胚胎刺激摆动(卵黄囊位置的移动)及凝结(死亡)的情况。
6.3.2判定标准测试终点和评价指标以胚胎凝结和5min为测试终点，表现形式为：胚胎刺激摆动，凝结(死亡)的任一情形。
6.3.3结果要求视频录像的画面中出现的鱼胚位于画面正中间，不损伤鱼胚使得鱼胚正常进行正式实验。
7计算结果
7.1分别记录及计算各组别中每个平行组的胚胎(24hpf)在5min内的累计刺激摆动次数、累计死亡率。累计死亡率％＝累计死亡胚胎数/胚胎总数×100％。
7.2使用GraphPadPrism8统计分析软件(或类似功能工具)对累计刺激摆动次数和累计死亡率进行统计分析，数值用均值±标准误(Mean±SEM)表示。
8质量控制
8.1空白对照试验空白对照试验结果符合下列要求，结果方有效。否则，应查明原因后重新进行试验：5min时间内，空白对照组斑马鱼胚胎死亡率≤10％。
8.2阳性对照5min时间内，阳性对照组斑马鱼胚胎死亡率﹥90％。
9废弃物处置试验用斑马鱼胚于2～8℃冰水中灭活处理后按一般废弃物处置。具有温和刺激性的样品、含有十二烷基硫酸钠(SDS)的废液按危险废物处置。
(二)实验结果
在刺激性测试当中，30％醇沉肉苁蓉多糖对于斑马鱼表现出刺激性，本实验重复3次(表10)。
图4为肉苁蓉多糖刺激性测试结果(图中各数值均为三组的平均值)。
其中，表10、表11和图4中的“肉30”是“肉苁蓉多糖30％”的简称，“肉50”是“肉苁蓉多糖50％”的简称，“肉80”是“肉苁蓉多糖80％”的简称。
表10刺激性测试结果(单位：次/分钟)
在温和刺激性实验中，通过方差分析，30％醇沉肉苁蓉多糖可以定义为轻度刺激(表11)。
表11刺激性测试结果方差分析
总结
肉苁蓉是我国传统中药，使用历史悠久，知名度高，其功效显著被广大使用者和中医药师所的认可，肉苁蓉多糖作为其主要活性成分，已经有大量对其抗氧化、抗衰老、防紫外线、抗菌、抗癌等生理活性的研究，与传统保湿剂相比，肉苁蓉多糖具有绿色健康、功效丰富，提取相对简单的特点。
在吸湿性试验中，温度为20℃，RH为43％时，三种肉苁蓉多糖以及甘油最大吸湿率分别为6.14％、5.50％、5.90％、25.30％，在RH为81％的环境中，其最大吸湿率分别为15.69％、19.63％、17.74％、99.38％；在保湿性试验中，RH43％环境下，三种肉苁蓉多糖以及甘油的保湿率分别为45.51％、30.31％、30.95、24.70％；RH81％环境下，其保湿率分别为76.88％、78.83％、85.17％、100.27％。本申请人认为三种肉苁蓉多糖均具备吸湿与保湿功效，其吸湿性弱于甘油，保湿性在低湿度环境下保湿性优于甘油。
通过温和刺激性测试研究表明，通过50％和80％醇沉得到的肉苁蓉的多糖具有舒缓功效。在保湿方面有一定的效果，而且主要成分不存在明显的刺激效应，结合上述中药材本身在健康保健方面的功效，有继续深入研究的价值。
以肉苁蓉多糖的吸湿保湿性为基础，联合其他生理活性，可设计一种新型的以肉苁蓉多糖为主要成分的天然化妆品，该化妆品具备保湿、美白、抗衰老、防晒等多重功效，比传统化妆品更具有竞争力。
实施例3肉苁蓉多糖的制备和纯化
称取1000g脱酯的肉苁蓉粉末以及20g纤维素酶、20g木瓜蛋白酶、4.5g果胶酶，加入10000g酸水进行酶解提取，调节温度至54.5℃，置水浴锅中酶解2.5h，然后超声提取3次，每次超声提取35min，第一次超声时的酶解液，后两次超声提取时每次加入10000g的酸水，用六层纱布过滤，合并滤液，用高速离心机将滤液离心，收集上清液。将上清液通过超旋转蒸发仪浓缩至原来体积的十分之一，搅拌的同时滴加90％乙醇使肉苁蓉多糖沉淀，直至乙醇浓度为80％时，静置20h，倒出滤液，收集多糖，待乙醇挥发后，通过冻干保存。
将冻干保存的肉苁蓉多糖用适量水溶解，搅拌的同时滴加90％乙醇，分别在乙醇浓度为30％、50％、80％时收集沉淀出的肉苁蓉多糖，待乙醇挥发后冻干保存。
所述酸水为用柠檬酸将水调节pH至5.2。
上述乙醇浓度均是使用酒精计在常温下测量得到的。
实施例4肉苁蓉多糖的制备和纯化
称取1000g脱酯的肉苁蓉粉末以及20g纤维素酶、20g木瓜蛋白酶、4.5g果胶酶，加入10000g酸水进行酶解提取，调节温度至54℃，置水浴锅中酶解1.5h，然后超声提取3次，每次超声提取25min，第一次超声时为酶解液，后两次超声提取时每次加入10000g的酸水，用纱布过滤，合并滤液，用高速离心机将滤液离心，收集上清液。将上清液通过超旋转蒸发仪浓缩至原来体积的十分之一，搅拌的同时滴加98％乙醇使肉苁蓉多糖沉淀，直至乙醇浓度为80％时，静置15h，倒出滤液，收集多糖，待乙醇挥发后，通过冻干保存。
将冻干保存的肉苁蓉多糖用适量水溶解，搅拌的同时滴加95％乙醇，分别在乙醇浓度为30％、50％、80％时收集沉淀出的肉苁蓉多糖，待乙醇挥发后冻干保存。
所述酸水为用柠檬酸将水调节pH至5.2。
上述乙醇浓度均是使用酒精计在常温下测量得到的。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施案例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.肉苁蓉多糖在制备具有吸湿、保湿功效的化妆品中的应用；
所述肉苁蓉多糖的制备方法为：将肉苁蓉通过复合酶联合超声提取法进行提取，然后用乙醇沉淀得到粗多糖，加入水溶解粗多糖，再加入乙醇进行纯化，根据溶液中乙醇含量的不同，得到不同的醇沉肉苁蓉多糖；所述复合酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶；
所述纤维素酶为2%，所述木瓜蛋白酶为2%，所述果胶酶为0.45%；
所述复合酶提取的pH为5.2，温度为54.1℃，提取时间为2h；
所述用乙醇沉淀是加入浓度为90%的乙醇直至溶液中乙醇浓度为80%；
所述加入乙醇进行纯化是加入浓度为90%的乙醇，然后在溶液中乙醇浓度为30%、50%或80%时收集沉淀出的肉苁蓉多糖。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述化妆品包括霜膏、乳液、膜粉剂、啫喱剂、粉饼、水剂、气雾剂和喷雾剂。
3.一种化妆品，其中具有吸湿、保湿功效的成分包括权利要求1或2中所述的肉苁蓉多糖。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105496841A (zh) * 2014-09-26 2016-04-20 上海家化联合股份有限公司 一种肉苁蓉鳞茎提取物的制备方法及保湿作用
CN109846762A (zh) * 2018-09-17 2019-06-07 上海珈凯生物科技有限公司 一种具有美白功效的组合物及其制备方法、应用
CN111821207A (zh) * 2020-08-05 2020-10-27 三门涵谷化妆品有限公司 一种抗炎祛痘化妆品组合物及其制备方法
CN112142867A (zh) * 2020-09-30 2020-12-29 兰州大学 一种肉苁蓉多糖的提取方法及其应用
CN112779305A (zh) * 2019-11-08 2021-05-11 华熙生物科技股份有限公司 一种肉苁蓉酶解寡糖浓缩液的制备方法及所得产品和应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105496841A (zh) * 2014-09-26 2016-04-20 上海家化联合股份有限公司 一种肉苁蓉鳞茎提取物的制备方法及保湿作用
CN109846762A (zh) * 2018-09-17 2019-06-07 上海珈凯生物科技有限公司 一种具有美白功效的组合物及其制备方法、应用
CN112779305A (zh) * 2019-11-08 2021-05-11 华熙生物科技股份有限公司 一种肉苁蓉酶解寡糖浓缩液的制备方法及所得产品和应用
CN111821207A (zh) * 2020-08-05 2020-10-27 三门涵谷化妆品有限公司 一种抗炎祛痘化妆品组合物及其制备方法
CN112142867A (zh) * 2020-09-30 2020-12-29 兰州大学 一种肉苁蓉多糖的提取方法及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
汪多仁等.《绿色发酵与生物化学品》.科学技术文献出版社,2007,第344页倒数第2-3段、第345页第1段. *

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