CN113820419B - 一种牛大力酒中有效成分的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种牛大力酒中有效成分的测定方法，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行测定，超高效液相色谱条件：流动相A为体积浓度0.05‑0.15％的甲酸水溶液，流动相B为体积浓度0.005‑0.015％的甲酸乙腈溶液，采用梯度洗脱；质谱条件：采用电喷雾离子源(ESI)，分别以正离子模式和负离子模式测定。本发明采用液相色谱质谱联用对牛大力酒的有效成分进行分离和鉴定，一共鉴定出29种化合物，其中三类萜类及黄酮类化合物首次从牛大力酒中分离得到，测定方法快速准确，操作简单。
Description
技术领域
本发明涉及化学成分分析技术领域，特别涉及一种牛大力酒中有效成分的测定方法。
背景技术
牛大力(Millettia speciosa Champ)，别名猪脚笠、金钟根、山莲藕、倒吊金钟、大力薯，是一种常用的山草药。其气味甘香，性温和，具有壮阳，养肾补虚，强筋活络，平肝、润肺之功效，通常人们采用煲汤或入酒制成保健酒，以达到强筋活络、补脾益气、滋阴补血等目的。
牛大力酒属于保健酒，以蒸馏酒、发酵酒或食用酒精为基酒，加入牛大力或其他药材，酿制、调配或再加工的方式制成。通常牛大力酒的成分较为复杂，添加的辅助药材的药效成分易影响有效成分的含量，加之成分里的糖类、色素等大分子物质，干扰有机溶剂的检测，而保健酒中的有效成分的含量是评价其质量的重要指标之一，现有技术缺少检测和鉴定牛大力酒中有效成分的方法，因此急需一种能够有效测定牛大力酒的有效成分的检测方法，为牛大力酒行业标准提供技术支持和研究基础。
发明内容
鉴于此，本发明的目的在于提出一种牛大力酒中有效成分的测定方法，从牛大力酒中共分离和鉴定了29种化学成分，包括酚酸类3个、黄酮类5个、三萜类21个，其中三类萜类及黄酮类首次从牛大力中分离得到，实现了牛大力酒较为全面和系统的分析，为牛大力酒中有效成分的定性分析和药理研究提供理论的研究基础。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种牛大力酒中有效成分的测定方法，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行测定；
超高效液相色谱的条件：
色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3；
柱温：38-42℃；
进样量：0.8-1.2μL；
流速：0.28-0.32mL/min；
流动相：流动相A为体积浓度0.05-0.15％甲酸水溶液，流动相B为体积浓度0.005-0.015％甲酸乙腈溶液；
洗脱程序如下：
| 时间 | 流动相A(v/v) | 流动相B(v/v) |
| 0.00 | 99.0 | 1.0 |
| 0-2.00 | 75.0 | 25.0 |
| 2.01-6.00 | 70.0 | 30.0 |
| 6.01-9.00 | 65.0 | 35.0 |
| 9.01-10.00 | 60.0 | 40.0 |
| 10.01-13.00 | 60.0 | 40.0 |
| 13.01-14.00 | 30.0 | 70.0 |
| 14.01-15.00 | 1.0 | 99.0 |
| 15.01-17.00 | 1.0 | 99.0 |
| 17.01-20.00 | 99.0 | 1.0 |
进一步说明，柱温为40℃。
进一步说明，进样量为1.0μL。
进一步说明，流速为0.3mL/min。
优选地，甲酸水溶液的体积浓度为0.1％。
优选地，甲酸乙腈溶液的体积浓度为0.01％。
进一步说明，质谱条件为：采用电喷雾离子源(ESI)，分别以正离子模式和负离子模式测定，毛细管电压分别为3.0kv和2.0kv，锥孔电压均为40V，锥孔气体流量均为50L/hr，扫描范围m/z 50-1200Da，扫描时间0.2s，检测时间20min。
进一步说明，正离子模式和负离子模式的离子源温度为100℃。
进一步说明，正离子模式和负离子模式的辅助喷雾电离与去溶剂气体为氮气，去溶剂化温度为450℃，去溶剂化气体流量为600L/hr。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪的分析方法，结合特定的流动相和洗脱程序，以及设置特定的质谱条件，快速鉴定了牛大力酒中的主要化学成分，一共鉴定出29种化合物，其中三类萜类及黄酮类化合物首次从牛大力酒中分离得到，可为牛大力酒进一步的化学成分、药理研究以及有效成分的定量研究提供技术基础。
附图说明
图1为负离子模式下实施例1的质谱总离子流图(TIC)和原始基峰离子(BPI)色谱图
图2为负离子模式下实施例1质谱总离子流图的峰位置
图3为负离子模式下实施例2质谱总离子流图(TIC)和原始基峰离子(BPI)色谱图
图4为负离子模式下实施例2质谱总离子流图的峰位置
图5为鉴定实施例1的部分化学成分结构式
图6为鉴定实施例1的部分化学成分结构式
图7为鉴定实施例2的化学成分结构式
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
供试品溶液的制备：分别取53度浓香型白酒供试品和牛大力酒供试品，以12000rpm，时间为10min，温度为4℃，进行冷冻离心，静置1-2min，取上清液，过0.2μm微孔滤膜，分别得53度浓香型白酒供试品溶液和牛大力酒供试品溶液；
实施例1-一种牛大力酒中有效成分的测定方法
将牛大力酒供试品溶液采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行测定：
超高效液相色谱的条件：
色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3；
柱温：40℃；
进样量：1μL；
流速：0.3mL/min；
流动相：流动相A为体积浓度0.1％甲酸水溶液，流动相B为体积浓度0.01％甲酸乙腈溶液；
洗脱程序如下：
质谱条件为：采用电喷雾离子源(ESI)，分别以正离子模式和负离子模式测定，采集MSE数据，扫描范围m/z 50-1200Da，扫描时间0.2s，检测时间20min；低能量碰撞电压(CE)6V，高能量碰撞电压为60V；正、负离子模式的毛细管电压分别为3.0、2.0kv，锥孔电压为40V，离子源温度为100℃，辅助喷雾电离与去溶剂气体为高纯度N2，去溶剂化温度450℃，锥孔气体流量50L/hr，去溶剂化气体流量600L/hr。
采用Masslynx V4.1软件进行采集、管理和处理质谱数据；利用UNIFI科学信息系统进行数据的处理，并基于文献报道数据，结合TCM Chiese[UNIFI1.7]、ChemSpider在线数据库，进行化合物成分鉴定。
实施例1质谱总离子流图(TIC)和原始基峰离子(BPI)色谱图如图1所示，负离子模式下实施例1质谱总离子流图的峰位置图如图2所示，从牛大力酒中共分离和鉴定了29种化学成分，如表1：
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于：将53度浓香型白酒供试品溶液替换牛大力酒供试品溶液，作为对照品；其余步骤同实施例1。
53度浓香型白酒供试品溶液质谱总离子流图(TIC)和原始基峰离子(BPI)色谱图如图3所示，负离子模式下53度浓香型白酒供试品溶液质谱总离子流图的峰位置图如图4所示，化学成分表如下：
表2
实施例3-一种牛大力酒中有效成分的测定方法
将牛大力酒供试品溶液采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行测定：
超高效液相色谱的条件：
色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3；
柱温：38℃；
进样量：0.8μL；
流速：0.28mL/min；
流动相：流动相A为体积浓度0.05％甲酸水溶液，流动相B为体积浓度0.005％甲酸乙腈溶液；
洗脱程序如下：
| 时间 | 流动相A(v/v) | 流动相B(v/v) |
| 0.00 | 99.0 | 1.0 |
| 0-2.00 | 75.0 | 25.0 |
| 2.01-6.00 | 70.0 | 30.0 |
| 6.01-9.00 | 65.0 | 35.0 |
| 9.01-10.00 | 60.0 | 40.0 |
| 10.01-13.00 | 60.0 | 40.0 |
| 13.01-14.00 | 30.0 | 70.0 |
| 14.01-15.00 | 1.0 | 99.0 |
| 15.01-17.00 | 1.0 | 99.0 |
| 17.01-20.00 | 99.0 | 1.0 |
质谱条件为：采用电喷雾离子源(ESI)，分别以正离子模式和负离子模式测定，采集MSE数据，扫描范围m/z 50-1200Da，扫描时间0.2s，检测时间20min；低能量碰撞电压(CE)6V，高能量碰撞电压为60V；正、负离子模式的毛细管电压分别为3.0、2.0kv，锥孔电压为40V，离子源温度为100℃，辅助喷雾电离与去溶剂气体为高纯度N2，去溶剂化温度450℃，锥孔气体流量50L/hr，去溶剂化气体流量600L/hr。
采用Masslynx V4.1软件进行采集、管理和处理质谱数据；利用UNIFI科学信息系统进行数据的处理，并基于文献报道数据，结合TCM Chiese[UNIFI1.7]、ChemSpider在线数据库，进行化合物成分鉴定。
实施例4-一种牛大力酒中有效成分的测定方法
将牛大力酒供试品溶液采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行测定：
超高效液相色谱的条件：
色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3；
柱温：42℃；
进样量：1.2μL；
流速：0.32mL/min；
流动相：流动相A为体积浓度0.15％甲酸水溶液，流动相B为体积浓度0.015％甲酸乙腈溶液；
洗脱程序如下：
质谱条件为：采用电喷雾离子源(ESI)，分别以正离子模式和负离子模式测定，采集MSE数据，扫描范围m/z 50-1200Da，扫描时间0.2s，检测时间20min；低能量碰撞电压(CE)6V，高能量碰撞电压为60V；正、负离子模式的毛细管电压分别为3.0、2.0kv，锥孔电压为40V，离子源温度为100℃，辅助喷雾电离与去溶剂气体为高纯度N2，去溶剂化温度450℃，锥孔气体流量50L/hr，去溶剂化气体流量600L/hr。
采用Masslynx V4.1软件进行采集、管理和处理质谱数据；利用UNIFI科学信息系统进行数据的处理，并基于文献报道数据，结合TCM Chiese[UNIFI1.7]、ChemSpider在线数据库，进行化合物成分鉴定。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种牛大力酒中有效成分的测定方法，其特征在于，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行测定；
超高效液相色谱的条件为：
色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3；
柱温：38-42 ℃；
进样量：0.8-1.2 μL；
流速：0.28-0.32 mL/min；
流动相：流动相A为体积浓度0.05-0.15 %甲酸水溶液，流动相B为体积浓度0.005-0.015 %甲酸乙腈溶液；
洗脱程序如下：
质谱仪的质谱条件为：采用电喷雾离子源，分别以正离子模式和负离子模式测定，毛细管电压分别为3.0 kv和2.0 kv，锥孔电压均为40 V，锥孔气体流量均为50 L/hr，扫描范围m/z 50-1200 Da，扫描时间0.2 s，检测时间20 min；
所述正离子模式和负离子模式的离子源温度为100 ℃；
所述正离子模式和负离子模式的辅助喷雾电离与去溶剂气体为氮气，去溶剂化温度为450 ℃，去溶剂化气体流量为600 L/hr；
从牛大力酒中共分离和鉴定了29种化学成分，为1-O-芥子酰-β-D-葡糖苷、圣草酚-7-O-α-L-阿拉伯糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、花旗松素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、Sequinoside K、紫丁香-1-O-鼠李糖-葡萄糖、刺囊酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-[α-L-阿拉伯吡喃糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、刺囊酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、刺囊酸3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖-(1→2)-α-L-鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖苷、Subprogenin3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside、Subprogenin 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-[(1→6)]-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside、Bridgesigenin A 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucuronopyranoside、刺囊酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸3-O-α-L-阿拉伯吡喃-(1→2)-α-L-鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖苷、齐墩果酸3-O-α-L-阿拉伯吡喃-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖苷、金雀异黄素、金合欢酸内酯3-O-α-L-鼠李糖基-(1→6)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖苷、Millettiasaponin A 3-O-α-L-arabinopyranosy-(1→2)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucuronopyranoside、Millettiasaponin A 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucuronopyranoside、Subprogenin3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-D-glucuronopyranoside、芒柄花黄素、高丽槐素、大豆皂苷Ⅱ、Sophoridiol 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucuronopyranoside、刺囊酸3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-(1→2)-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖苷、香树脂醇3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-葡糖醛酸吡喃糖苷、丝石竹皂苷元3-O-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-d吡喃葡糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、齐墩果酸3-O-α-L-鼠李糖基-(1→6)-[α-L-阿拉伯吡喃糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷、Subprogenin 3-O-α-L-arabinopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)]-β-D-glucopyranoside和桦木酸。
2. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述柱温为40 ℃。
3. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述进样量为1.0 μL。
4. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述流速为0.3 mL/min。
5. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述甲酸水溶液的体积浓度为0.1%。
6. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述甲酸乙腈溶液的体积浓度为0.01 %。
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