CN113812543A - 藻粉型育苗饵料及其应用和对虾溞状体期育苗的方法 - Google Patents

藻粉型育苗饵料及其应用和对虾溞状体期育苗的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及养殖领域，具体涉及一种藻粉型育苗饵料及其应用和对虾溞状体期育苗的方法。所述藻粉型育苗饵料包含金藻，以及三角褐指藻和角毛藻中的至少一种；其中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，金藻的含量≥30重量％，三角褐指藻的含量为0‑50重量％，角毛藻的含量为0‑50重量％。该饵料具有营养全面、质量稳定和使用方便等优点，解决了传统对虾育苗溞状体期使用单细胞活藻作为饵料存在的供应不稳定、质量参次不齐、营养不均衡等问题。使用该饵料能够使得育苗成活率平均提高20％以上，虾苗免疫力提高，应对环境变化的能力提高，育苗水体中的弧菌等有害菌的数量显著减少。

Description

藻粉型育苗饵料及其应用和对虾溞状体期育苗的方法
技术领域
本发明涉及养殖领域，具体涉及一种藻粉型育苗饵料及其应用和对虾溞状体期育苗的方法。
背景技术
现在对虾(南美白对虾、斑节对虾、中国对虾、日本对虾)育苗场中，活藻的培养在室外开放的环境中在水桶和水泥池中进行的，藻细胞的生长受气候环境、水体环境的影响大，藻细胞的数量和质量随着气候环境和水体环境的波动而波动，导致对虾溞状体期时饵料数量和质量不稳定，严重影响对虾苗的发育。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的活藻饵料数量和质量不稳定从而影响对虾苗发育的问题，提供一种藻粉型育苗饵料及其应用和对虾无节幼体期育苗的方法，该饵料具有营养全面、质量稳定和使用方便等优点，解决了传统对虾育苗溞状体期使用单细胞活藻作为饵料存在的供应不稳定、质量参次不齐、营养不均衡等问题。
为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种藻粉型育苗饵料，所述藻粉型育苗饵料包含金藻，以及三角褐指藻和角毛藻中的至少一种；
其中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，金藻的含量≥30重量％，三角褐指藻的含量为0-50重量％，角毛藻的含量为0-50重量％。
本发明第二方面提供如上所述的藻粉型育苗饵料在对虾溞状体期育苗中的应用。
本发明第三方面提供一种对虾溞状体期育苗的方法，该方法包括：使用如上所述的藻粉型育苗饵料投喂溞状体期的对虾幼苗。
本发明的藻粉型育苗饵料由微藻培养工厂规模化量产，饵料质量稳定，供应持续性高；饵料保存期长，从活藻的2-7天变为藻粉的1-2年，不受气候影响，满足全年育苗需要；具有营养全面、质量稳定和使用方便等优点，解决了传统对虾育苗无节幼体到溞状体期使用单细胞活藻作为饵料存在的供应不稳定、质量参次不齐、营养不均衡等问题。
使用本发明所述的饵料投喂对虾开口后溞状体能够使得育苗成活率平均提高20％以上，育苗水体中的弧菌等有害菌的数量显著减少。
饵料富含多不饱和脂肪酸(EPA或DHA)和类胡萝卜素(岩藻黄素或叶黄素)，增强对虾的免疫力，使其应对环境变化的能力提高。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明第一方面提供一种藻粉型育苗饵料，所述藻粉型育苗饵料包含金藻，以及三角褐指藻和角毛藻中的至少一种；
其中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，金藻的含量≥30重量％，三角褐指藻的含量为0-50重量％，角毛藻的含量为0-50重量％。
在本发明的一种优选的实施方式中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，金藻的含量为50-95重量％(比如可以为50、55、60、65、70、75、80、85、90、95重量％以及任意两个值之间组成的任意范围)，更优选为75-95重量％。在所述优选的范围内，能够提高虾苗的存活率，并降低弧菌等有害菌的数量。
在本发明的一种优选的实施方式中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，三角褐指藻的含量为0-30重量％(比如可以为0、5、10、15、20、25、30重量％以及任意两个值之间组成的任意范围)，更优选为2.5-15重量％。在所述优选的范围内，能够提高虾苗的存活率，并降低弧菌等有害菌的数量。
在本发明的一种优选的实施方式中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，角毛藻的含量为0-30重量％(比如可以为0、5、10、15、20、25、30重量％以及任意两个值之间组成的任意范围)，更优选为2.5-15重量％。在所述优选的范围内，能够提高虾苗的存活率，并降低弧菌等有害菌的数量。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述藻粉型育苗饵料包含金藻、三角褐指藻和角毛藻。当所述藻粉型育苗饵料同时含有上述三种微藻时，三种微藻之间存在协同作用，能够进一步提高对虾溞状体期幼苗的育苗成活率，降低育苗水体中有害菌的数量。
在本发明中，优选地，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，金藻的含量为50-95重量％，更优选为75-95重量％；三角褐指藻的含量为1-30重量％，更优选为2.5-15重量％；角毛藻的含量为1-30重量％，更优选为2.5-15重量％。在所述优选的范围内，能够进一步提高育苗效果。
在本发明中，所述藻粉型育苗饵料中优选还包含小球藻、螺旋藻和卵囊藻中的至少一种。
其中，所述小球藻、螺旋藻和卵囊藻的含量可以在较宽的范围内选择，优选地，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，所述小球藻、螺旋藻和卵囊藻的总含量在5重量％以下。在所述优选的范围内，能够在保证育苗效果的情况下，降低生产成本。
在本发明中，金藻、三角褐指藻、角毛藻、小球藻、螺旋藻和卵囊藻的藻株可以各自独立地是现有的藻株，对其种类没有特别的限制。
在本发明中，金藻、三角褐指藻、角毛藻、小球藻、螺旋藻和卵囊藻的培养，本领域技术人员可以根据现有技术进行操作。
在本发明中，金藻、三角褐指藻、角毛藻、小球藻、螺旋藻和卵囊藻的培养可以各自独立地在本领域常规使用的生物反应器中进行。其中，优选地，金藻、三角褐指藻、角毛藻、螺旋藻和卵囊藻各自独立地在密闭式光生物反应器(如管道式光生物反应器)或开放式光生物反应器(如跑道池)中进行培养；小球藻优选在发酵罐中进行培养。
在本发明中，用于培养金藻、三角褐指藻、角毛藻、小球藻、螺旋藻和卵囊藻的培养基可以为本领域常规使用的培养基。
优选地，用于培养金藻、三角褐指藻和角毛藻的培养基各自独立地为f/2培养基。更优选地，所述f/2培养基为改良的f/2培养基，其组成为：30-40g/海盐，0.1-2g/L NaNO3，50-80mg/L NaH2PO4.H2O，3-5mg/L FeCl3.6H2O，3-5mg/L Na2EDTA.2H2O，0.01-0.03mg/LCuSO4.5H2O，0.01-0.03mg/L NaMoO4.2H2O，0.01-0.8mg/L ZnSO4.7H2O，0.005-0.2mg/LCoCl2，0.1-0.5mg/L MnCl2.4H2O，1-5μg/L维生素B12，1-5μg/L生物素，0.1-1μg/L维生素B1。
优选地，用于培养小球藻的培养基为Endo培养基。优选地，所述Endo培养基为改良的Endo培养基，其组成为：20-30g/L葡萄糖，1-5g/LKNO3，1-2g/L KH2PO4，1-2g/LMgSO4.7H2O，0.1-0.4g/L柠檬酸钠，0.01-0.04g/L FeSO4.7H2O，1-4mg/L EDTA-Na2，0.01-0.05g/L CaCl2.2H2O，1-5mg/L H3BO3，0.1-0.5mg/L ZnSO4.7H2O，1-3mg/L MnCl2.4H2O，0.01-0.04mg/L NaMoO4，0.03-0.1mg/L CuSO4.2H2O。
优选地，用于培养螺旋藻的培养基为Zarrouk培养基。更优选地，所述Zarrouk培养基为改良的Zarrouk培养基，其组成为：15-20g/L NaHCO3，1-5g/L KNO3，0.5-2.5g/L K2SO4，0.5-1.5g/L NaCl，0.005-0.2g/L FeSO4·7H2O，0.01-0.2g/L EDTA，1-5mg/L H3BO3，10-40μg/L(NH4)6Mo7O24，1-3mg/L MnCl2·4H2O，50-100μg/L CuSO4·5H2O，150-300μg/L ZnSO4·7H2O，20-30mg/L NH4VO3，40-60mg/L NiSO3·7H2O，15-25mg/L NaWO4，30-50mg/L Ti(SO4)2，2-6mg/L Co(NO3)2·6H2O。
优选地，用于培养卵囊藻的培养基为BG-11培养基或BBM培养基。更优选地，所述BG-11培养基的组成为：1-3g/L NaNO3，20-60mg/L KH2PO4，50-100mg/L MgSO4.7H2O，30-50mg/L CaCl2.2H2O，4-8mg/L柠檬酸，4-8mg/L柠檬酸铁铵，0.5-1.5mg/L EDTA-Na2，10-40mg/L NaCO3，2-4mg/L H3BO3，1-3mg/L MnCl2·4H2O，150-300μg/L ZnSO4·7H2O，200-500μg/L Na2MOO4·2H2O，50-100μg/L CuSO4.5H2O，40-60μg/L Co(NO3)2·6H2O。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述金藻的培养条件包括：盐度为20-25‰，温度为20-30℃，光强为60-120μmol m-2s-1，pH为6.5-7.5，培养5-10天。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述三角褐指藻的培养条件包括：盐度为20-25‰，温度为15-25℃，光强为50-200μmol m-2s-1，pH为6.5-7.5，培养7-10天。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述角毛藻的培养条件包括：盐度为25-30‰，温度为20-25℃，光强为50-100μmol m-2s-1，pH为6.5-7.5，培养7-10天。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述小球藻的培养条件包括：pH为6.5-7.5，温度为25-30℃，转速为150-200rpm，培养6-12天。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述螺旋藻的培养条件包括：温度为25-30℃，光强为50-100μmol m-2s-1，pH为8-9，培养7-10天。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述卵囊藻的培养条件包括：温度为25-30℃，光强为100-500μmol m-2s-1，pH为8-8.5，培养3-5天。
在本发明中，所述藻粉型育苗饵料的制备方法可以是本领域常规的制备方法，比如可以是上述各种藻的藻粉按照比例混合制得。其中，藻粉的制备方法可以是本领域常规的干燥方法制得的。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述金藻藻粉、三角褐指藻藻粉和所述角毛藻藻粉的制备方法各自独立地为冷冻干燥。
在本发明的一种优选的实施方式中，所述小球藻藻粉和所述螺旋藻藻粉的制备方法各自独立地包括：冷冻干燥或喷雾干燥。
优选地，所述冷冻干燥的方法包括：在-40至-30℃的条件下预冻1-4h，在-20至0℃的条件下一次升华15-24h，在20-40℃的条件下二次解析1-6h。
优选地，所述喷雾干燥的条件包括：进风温度为150-200℃，出风温度为85-95℃，时间为36-54h。
本发明第二方面提供如上所述的藻粉型育苗饵料在对虾无节幼体期育苗中的应用。
本发明第三方面提供一种对虾无节幼体期育苗的方法，该方法包括：使用如上所述的藻粉型育苗饵料投喂溞状体期的对虾幼苗。
在本发明中，所述对虾可以是目前存在的对虾种类，所述对虾可以为南美白对虾、斑节对虾、中国对虾或日本对虾，更适用于南美白对虾。
在本发明中，藻粉型育苗饵料的使用方法优选包括：将养殖清水和藻粉型育苗饵料混合后，得到藻粉型育苗饵料混合液，然后将所述藻粉型育苗饵料混合液投喂给无节幼体期的对虾幼苗。
其中，养殖清水优选为300-500目滤膜过滤后海水。
在本发明中，所述混合的方法可以为本领域常规的方法，比如可以通过均质、搅拌、过滤中的至少一种方法，使得藻粉型育苗饵料均匀的分散在养殖清水中。
在本发明中，将养殖清水和藻粉型育苗饵料混合后还可以经过过滤，去除其中未充分分散的藻细胞。其中，过滤的孔径可以为300-500目。得到的滤过液即为藻粉型育苗饵料混合液。
在本发明中，所述藻粉型育苗饵料混合液中的藻粉型育苗饵料的含量可以在较宽的范围内选择，优选地，以所述藻粉型育苗饵料混合液的总体积计，所述藻粉型育苗饵料混合液中的藻粉型育苗饵料的含量为0.1-100g/L。
在本发明中，优选地，所述藻粉型育苗饵料投喂无节幼体期的对虾幼苗时的用量使得水体中藻细胞浓度为1×104-1×105个/mL。
在本发明中，无节幼体期的对虾幼苗的培养方法可以按照本领域常规的培养方法进行培养。优选地，无节幼体期的对虾幼苗的培养方法包括：水温为20-25℃，盐度为15-25‰，日投饵次数为4-6次，即每4-6小时投喂一次，每天早上用虹吸法或池底排水法换水一次。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
以下实施例中，各藻种为保藏在国投生物科技投资有限公司国投微藻中心藻种库的等鞭金藻(Isochrysisgalbana)、三角褐指藻(Phaeodactylumtricornutum)、牟氏角毛藻(Chaetocerosmuelleri)、小球藻(Chlorella sorokiniana)、螺旋藻(Spirulinaplatensis)和波吉卵囊藻(Oocystisborgei)。
改良的f/2培养基的组成为：35g/海盐，1g/L NaNO3，67mg/L NaH2PO4.H2O，3.65mg/L FeCl3.6H2O，4.37mg/L Na2EDTA.2H2O，0.0196mg/L CuSO4.5H2O，0.0126mg/L NaMoO4.2H2O，0.044mg/L ZnSO4.7H2O，0.01mg/L CoCl2，0.36mg/L MnCl2.4H2O，2.5μg/L维生素B12，2.5μg/L生物素，0.5μg/L维生素B1。
改良的Endo培养基的组成为：葡萄糖20g/L，KNO3 3g/L，1.2g/L KH2PO4，1.2g/LMgSO4.7H2O，柠檬酸钠0.2g/L，0.016g/L FeSO4.7H2O，2.1mg/L EDTA-Na2，0.03g/LCaCl2.2H2O，2.86mg/L H3BO3，0.222mg/L ZnSO4.7H2O，1.81mg/L MnCl2.4H2O，0.021mg/LNaMoO4，0.07mg/L CuSO4.2H2O。
改良的Zarrouk培养基的组成为：16.8g/L NaHCO3，3g/L KNO3，1g/L K2SO4，1g/LNaCl，0.01g/L FeSO4·7H2O，0.08g/L EDTA，2.86mg/L H3BO3，20μg/L(NH4)6Mo7O24，1.8mg/LMnCl2·4H2O，80μg/L CuSO4·5H2O，220μg/L ZnSO4·7H2O，22.9mg/L NH4VO3，47.8mg/LNiSO3·7H2O，17.9mg/L NaWO4，40.9mg/L Ti(SO4)2，4.4mg/L Co(NO3)2·6H2O。
BG-11培养基的组成为：1.5g/L NaNO3，40mg/L KH2PO4，75mg/L MgSO4.7H2O，36mg/LCaCl2.2H2O，6mg/L柠檬酸，6mg/L柠檬酸铁铵，1mg/L EDTA-Na2，20mg/L NaCO3，2.86mg/LH3BO3，1.81mg/L MnCl2·4H2O，220μg/L ZnSO4·7H2O，390μg/L Na2MOO4·2H2O，80μg/LCuSO4.5H2O，50μg/L Co(NO3)2·6H2O。
制备例
本制备例用于说明藻粉的制备方法
(1)藻的培养
等鞭金藻(Isochrysisgalbana)的培养：在管道式光生物反应器中进行自养培养，培养基为改良的f/2，盐度为20‰，温度为20℃，光强为60μmol m-2s-1，初始pH为7.0，培养5天。
三角褐指藻(Phaeodactylumtricornutum)的培养：在管道式光生物反应器中进行自养培养，培养基为改良的f/2，盐度为20‰，温度为15℃，光强为200μmol m-2s-1，初始pH为7.0，培养7天。
牟氏角毛藻(Chaetocerosmuelleri)的培养：在管道式光生物反应器中进行自养培养，培养基为改良的f/2，盐度为25‰，温度为25℃，光强为50μmol m-2s-1，初始pH为7.0，培养3天。
小球藻(Chlorella sorokiniana)的培养：在发酵罐中进行异养培养：培养基为改良的Endo，初始pH为6.5，温度为30℃，转速为150rpm，葡萄糖浓度为20g/L，培养6天。
螺旋藻(Spirulina platensis)的培养：在管道式光生物反应器中进行自养培养，培养基为改良的Zarrouk培养基，温度为25℃，光强为100μmol m-2s-1，初始pH为8，培养10天。
波吉卵囊藻(Oocystisborgei)的培养：在管道式光生物反应器中进行自养培养，BG-11培养基，温度为25℃，光强为100μmol m-2s-1，初始pH为8，培养3天。
(2)藻粉的制备
分别采收步骤(1)中培养得到的藻体，然后采用冷冻干燥的方式分别进行干燥，得到单独的藻粉，其中，冷冻干燥的方法为-35℃预冻2h，0℃一次升华19h，20℃二次解析2h。
实施例1
本实施例用于说明藻粉型育苗饵料的配方及其制备方法
按照表1所示的配方将涉及的藻粉混合均匀，配制得到育苗饵料。其中，表1中各种藻粉的含量以重量％表示。
表1
编号 金藻 三角褐指藻 角毛藻 小球藻 螺旋藻
S1 90 5 5 0 0
S2 80 10 10 0 0
S3 75 10 15 0 0
S4 80 0 20 0 0
S5 75 25 0 0 0
S6 80 5 10 0 5
S7 75 10 10 5 0
S8 65 10 20 2 3
对比例1
本对比例用于说明参比的南美白对虾育苗的方法
活藻藻液的准备：将单细胞金藻从琼脂平皿上接入灭菌的f/2或其它相应的藻类培养基中，在三角瓶中培养7天，待藻液浓度达到3×108个/L时，以1：10的比例接入500L的桶中，在桶内培养2天，再以1：10的比例接入40000L的水泥池中，培养3天，藻细胞浓度达到3×107个/L时，用于投喂无节幼体期南美白对虾。
对比例2
本对比例用于说明育苗饵料的配方及其制备方法
按照表2所示的配方将涉及的藻粉混合均匀，配制得到育苗饵料。其中，表2中各种藻粉的含量以重量％表示。
表2
编号 金藻 小球藻 螺旋藻
D1 90 0 10
D2 65 20 15
实施例2
本实施例用于说明本发明所述的南美白对虾育苗的方法
分别按照表1中编号为S1-S8的配方配制相应的藻粉型育苗饵料、对比例1中得到的金藻活藻和分别按照表2中编号D1-D2所述的配方配制相应的藻粉型育苗饵料，投喂无节幼体期南美白对虾进行育苗。
藻粉型育苗饵料混合液的制备：取藻粉型育苗饵料和养殖清水，使用均质机均质5min后，使用400目纱网过滤，取滤过液，配制成藻粉型育苗饵料含量为10g/L的藻粉型育苗饵料混合液(藻细胞数约为3×1011个/L)。
无节幼体期南美白对虾的培养条件包括：水温为20-25℃，盐度为20-25‰，换水1次，总换水量为100％；日投饵6次，所述藻粉型育苗饵料投喂无节幼体期的对虾幼苗时的用量使得水体中藻细胞浓度为1×104-1×105个/mL。
对南美白对虾的育苗成活率进行测定，并测定育苗水体中有害菌(弧菌)的数目，具体结果见表3。
表3
编号 成活率％ 弧菌含量(个/mL)
S1 89.2 550
S2 84.7 1000
S3 80.3 2470
S4 73.5 4500
S5 71.2 4900
S6 83.2 1250
S7 79.5 3500
S8 70 5200
对比例1 60.7 24610
D1 69.1 5500
D2 68.3 6100
通过表1的结果可以看出，采用本发明所述的配方配制的饵料用于南美白对虾的育苗能够显著提高育苗的存活率，并且能够显著降低水体中弧菌的数量。
当本发明中的饵料藻粉型育苗饵料中包含四种以上的藻粉时，能够在保持育苗存活率的情况下，降低成本，具有较大的经济价值。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种藻粉型育苗饵料，其特征在于，所述藻粉型育苗饵料包含金藻，以及三角褐指藻和角毛藻中的至少一种；
其中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，金藻的含量≥30重量％，三角褐指藻的含量为0-50重量％，角毛藻的含量为0-50重量％。
2.根据权利要求1所述的藻粉型育苗饵料，其中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，金藻的含量为50-95重量％，三角褐指藻的含量为0-30重量％，角毛藻的含量为0-30重量％。
3.根据权利要求1或2所述的藻粉型育苗饵料，其中，所述藻粉型育苗饵料包含金藻、三角褐指藻和角毛藻。
4.根据权利要求3所述的藻粉型育苗饵料，其中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，金藻的含量为50-95重量％，三角褐指藻的含量为1-30重量％，角毛藻的含量为1-30重量％。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的藻粉型育苗饵料，其中，所述藻粉型育苗饵料中还包含小球藻、螺旋藻和卵囊藻中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的藻粉型育苗饵料，其中，以所述藻粉型育苗饵料的总重量计，所述藻粉型育苗饵料中，所述小球藻、螺旋藻和卵囊藻的总含量在5重量％以下。
7.权利要求1-6中任意一项所述的藻粉型育苗饵料在对虾溞状体期育苗中的应用。
8.一种对虾溞状体期育苗的方法，其特征在于，该方法包括：使用权利要求1-6中任意一项所述的藻粉型育苗饵料投喂无节幼体期的对虾幼苗。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述对虾选自南美白对虾、斑节对虾、中国对虾和日本对虾。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，所述藻粉型育苗饵料投喂溞状体期的对虾幼苗时的用量使得水体中藻细胞浓度为1×104-1×105个/mL。
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