CN113796481A - 一种龟苓膏固体饮料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种龟苓膏固体饮料及其制备方法。所述的龟苓膏固体饮料，由如下重量份的原料制备而成：全龟2‑40份、茯苓4‑30份、甘草5‑50份、栀子4‑10份、槐花4‑15份、罗汉果3‑25份、金银花2‑30份、薄荷3‑30份、凉粉草5‑40份、麦芽糊精1‑60份、白砂糖1‑60份。本发明还提供了一种龟苓膏固体饮料制备方法，该方法结合安全高效的生物酶解法、制剂工艺学对现有的龟苓膏生产工艺及食品类型进行改进，制备出的龟苓膏固体饮料利用率高、稳定性好、适用人群广、功能性优于普通龟苓膏的龟苓膏固体饮料，并且成本低，携带、运输、贮存方便，有效解决上述市面龟苓膏所存在的问题。
Description
技术领域
本发明涉及食品技术领域，具体涉及一种龟苓膏固体饮料及其制备方法。
背景技术
湿热体质与多种重大疾病密切相关。据统计数据显示，中国一般人群中湿热体质占比高达 13.09%。龟苓膏是历史悠久的传统药膳，最初为清宫中专供皇帝食用的名贵药物，现代以广西梧州龟苓膏最为闻名。据《苍梧郡志》记载，早在明末清初的时候，苍梧郡（即现梧州市）民间就出现了龟苓膏的专门店铺。龟苓膏作为传统药膳，具有滋阴润燥、清热解毒、利湿等功效，尤适于阴虚湿热体质人群。
据调查，市面上龟苓膏产品对龟原料的处理方法为水煎煮提取法，作为药渣弃去的龟肉渣尚存多达 70-90%的营养物质，同时龟甲经过煎煮，其提取率仅 7.0%，造成贵重药材龟没有充分利用，产品功效受到较大影响。此外，龟苓膏作为特殊的膏状食品，其水分含量高，稳定性差，不利于其运输、贮存。另外，抗氧剂、防腐剂等化学添加剂使用较多，这些均降低了产品安全性，故本发明现从生产工艺、产品剂型两方面对龟苓膏产品进行改进。
《黄帝内经》:肾主骨，生髓，其华在发，开窍于耳及二阴。《医宗必读》说:肾为先天之本”。肾主藏精，肾中精气推动人体的生长发育，促进生殖机能的成熟以及调节人体的生理功能。而人体所有的生长发育，包括骨骼的生长发育，都依赖于肾气的推动和肾精的濡养。肾精充沛时，骨髓得到濡养，骨骼就会强壮有力，若人体出现肾阴虚状态，则不利于骨骼生长，导致骨质疏松症，故用斑马鱼骨质疏松模型，从防治骨质疏松的效果方面，反映其滋阴效果。
凡是具有清解火热毒邪，治疗热毒或火毒证的药物，皆称为清热解毒药，其主要应用于热毒火毒蕴结肌肤所致的疮痈肿毒、丹毒、瘟毒发斑、炸腮、毒蛇咬伤，癌肿、水火烫伤以及其他急性热性病，咽喉肿痛，热毒血痢等病症。近年来，清热解毒药被广泛应用于临床上的病毒感染导致的炎症，如腮腺炎，病毒性肺炎，乙肝肺炎等等。故结合现代药理，采用斑马鱼炎症模型，考察产品抗炎功效，反映其清热解毒效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种龟苓膏固体饮料及其制备方法，该方法结合安全高效的生物酶解法、制剂工艺学对现有的龟苓膏生产工艺及食品类型进行改进，制备出的龟苓膏固体饮料利用率高、稳定性好、适用人群广、功能性优于普通龟苓膏的龟苓膏固体饮料，并且成本低，携带、运输、贮存方便，有效解决上述市面龟苓膏所存在的问题，
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
所述的龟苓膏固体饮料，由如下重量份的原料制备而成：
全龟2-40份、茯苓4-30份、甘草5-50份、栀子4-10份、槐花4-15份、罗汉果3-25份、金银花2-30份、薄荷3-30份、凉粉草5-40份。
优选的，所述的龟苓膏固体饮料，由如下重量份的原料制备而成：
全龟10-20份、茯苓10-15份、甘草15-30份、栀子5-8份、槐花6-12份、罗汉果8-15份、金银花10-15份、薄荷10-15份、凉粉草10-20份。
所述的龟苓膏固体饮料，其中还含有如下重量份的辅料：麦芽糊精1-60份、白砂糖1-60份。
所述的全龟为活龟洗净宰杀后，去掉内脏后的部分。
所述的龟苓膏固体饮料，制备包括以下步骤：
（1）取全龟，加入用龟重量的8-12倍水提取两次，每次1-3小时，过滤，将两次的滤液合并得全龟水提液，将提取后的全龟龟渣收集备用；
（2）取提取后的龟渣称重，然后粉碎制浆，其间不断加入水调节料液比位1:0.5-20，制得龟浆；
用柠檬酸或食用碱溶液调节龟浆pH至3.0-9.0，加热至30-80℃，按照0.1-10万U/g龟渣的量加入蛋白酶，恒温酶解3-8h，100℃下加热灭酶10min后过滤，得龟酶解液；
（3）取茯苓、甘草、栀子、槐花、罗汉果、金银花、薄荷、凉粉草，加入这些药材总重量8-12倍的水提取两次，每次0.5-2小时，过滤，将两次的滤液合并混合得中药药液；
（4）将全龟水提液、龟酶解液和中药药液三者混合，充分搅拌混匀后，过滤，浓缩，加入麦芽糊精、白砂糖，用65%-89%乙醇混合制粒，干燥，过筛，即得。
所述的全龟为活龟洗净宰杀后，去掉内脏后的部分。
所述的步骤4中，制粒后的干燥过程为：置于50-70℃下鼓风干燥箱干燥3-8h。
所述的步骤4中，过的筛的目数为20-40目。
所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或多种。
本发明首次将生物法酶解技术加入到龟苓膏的制作中，与传统的单纯的水提工艺相比，大大提高了龟的利用率，发明人前期实验数据显示，采用复合酶解技术后，龟肉的利用率从21%提高至79%以上，并有进一步优化的空间。另外，还使产品增添了氨基酸、有机酸及核苷酸等营养物质，以及活性肽、牛磺酸、维生素等活性物质，增强产品功效。
本发明将龟苓膏制作成龟苓膏固体颗粒，使产品淀粉等辅料的添加量大幅下降，质量、体积显著变小，风味好，饮用方便，应用范围广。
本发明去除了黑凉粉的制作工艺和煮膏、罐装等步骤，改为酶解工艺和固体颗粒剂生产工艺，避免需要添加较多的淀粉等辅料才能成型，即使高血糖、糖尿病患者也能服用。
本发明使得淀粉等辅料的添加量大幅下降，质量、体积显著变小，风味好，饮用方便，功能性稳定，有效扩大产品应用范围，具有很好的应用前景。
附图说明
图1为各组经钙黄绿素染色后的斑马鱼脊椎骨荧光图像；
图2为斑马鱼骨骼染色荧光面积结果分析图；
图3为斑马鱼中性粒细胞显微成像图；
图4为斑马鱼中性粒细胞相对迁移数量统计图。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数。
实施例1
取全龟200克、茯苓400克、甘草500克、栀子400克、槐花400克、罗汉果300克、金银花200克、薄荷300克、凉粉草500克、麦芽糊精100克、白砂糖100克。
所述的龟苓膏固体饮料，制备包括以下步骤：
（1）取全龟，加入用龟重量的8倍水提取两次，每次2小时，过滤，将两次的滤液合并得全龟水提液，将提取后的全龟龟渣收集备用；
（2）取提取后的龟渣称重，然后粉碎制浆，其间不断加入水调节料液比位1:1，制得龟浆；
用柠檬酸或食用碱溶液调节龟浆pH至5.5，加热至35℃，按照0.5万U/g龟渣的量加入蛋白酶，恒温酶解3h，加热灭酶（100℃，10min），过滤，得龟酶解液；
（3）取茯苓、甘草、栀子、槐花、罗汉果、金银花、薄荷、凉粉草，加入这些药材总重量10倍的水提取两次，每次0.5小时，过滤，将两次的滤液合并混合得中药药液；
（4）将全龟水提液、龟酶解液和中药药液三者混合，充分搅拌混匀后，过滤，浓缩，加入麦芽糊精、白砂糖，用65%乙醇混合制粒，置于50℃下鼓风干燥箱干燥5h，过20目筛，即得。
所述的蛋白酶为中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶的混合物。
实施例2
取全龟1500克、茯苓1200克、甘草2000克、栀子600克、槐花800克、罗汉果1200克、金银花1200克、薄荷1200克、凉粉草1500克、麦芽糊精6000克、白砂糖6000克。
所述的全龟为活龟洗净宰杀后，去掉内脏后的部分。
所述的龟苓膏固体饮料，制备包括以下步骤：
（1）取全龟，加入用龟重量的11倍水提取两次，每次2.5小时，过滤，将两次的滤液合并得全龟水提液，将提取后的全龟龟渣收集备用；
（2）取提取后的龟渣称重，然后粉碎制浆，其间不断加入水调节料液比位1: 15，制得龟浆；
用柠檬酸或食用碱溶液调节龟浆pH至5.0，加热至70℃，按照3万U/g龟渣的量加入蛋白酶，恒温酶解4h，加热灭酶（100℃，10min），过滤，得龟酶解液；
（3）取茯苓、甘草、栀子、槐花、罗汉果、金银花、薄荷、凉粉草，加入这些药材总重量10倍的水提取两次，每次1小时，过滤，将两次的滤液合并混合得中药药液；
（4）将全龟水提液、龟酶解液和中药药液三者混合，充分搅拌混匀后，过滤，浓缩，加入麦芽糊精、白砂糖，用89%乙醇混合制粒，置于70℃下鼓风干燥箱干燥7h，过30目筛，即得。
所述的蛋白酶为胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶的混合物。
实施例3
取全龟1000克、茯苓1000克、甘草1500克、栀子500克、槐花600克、罗汉果800克、金银花1000克、薄荷1000克、凉粉草1000克、麦芽糊精2000克、白砂糖1500克。
所述的全龟为活龟洗净宰杀后，去掉内脏后的部分。
所述的龟苓膏固体饮料，制备包括以下步骤：
（1）取全龟，加入用龟重量的9倍水提取两次，每次2小时，过滤，将两次的滤液合并得全龟水提液，将提取后的全龟龟渣收集备用；
（2）取提取后的龟渣称重，然后粉碎制浆，其间不断加入水调节料液比位1:5，制得龟浆；
用柠檬酸或食用碱溶液调节龟浆pH至6.0，加热至58℃，按照0.8万U/g龟渣的量加入蛋白酶，恒温酶解5h，加热灭酶（100℃，10min），过滤，得龟酶解液；
（3）取茯苓、甘草、栀子、槐花、罗汉果、金银花、薄荷、凉粉草，加入这些药材总重量8倍的水提取两次，每次1小时，过滤，将两次的滤液合并混合得中药药液；
（4）将全龟水提液、龟酶解液和中药药液三者混合，充分搅拌混匀后，过滤，浓缩，加入麦芽糊精、白砂糖，用75%乙醇混合制粒，置于60℃下鼓风干燥箱干燥6h，过25目筛，即得。
所述的蛋白酶为风味蛋白酶。
实施例4
取全龟2000克、茯苓1500克、甘草3000克、栀子800克、槐花1200克、罗汉果1500克、金银花1500克、薄荷1500克、凉粉草2000克、麦芽糊精4000克、白砂糖2500克。
所述的全龟为活龟洗净宰杀后，去掉内脏后的部分。
所述的龟苓膏固体饮料，制备包括以下步骤：
（1）取全龟，加入用龟重量的10倍水提取两次，每次1.5小时，过滤，将两次的滤液合并得全龟水提液，将提取后的全龟龟渣收集备用；
（2）取提取后的龟渣称重，然后粉碎制浆，其间不断加入水调节料液比位1:10，制得龟浆；
用柠檬酸或食用碱溶液调节龟浆pH至7.0，加热至60℃，按照1万U/g龟渣的量加入蛋白酶，恒温酶解3.5h，加热灭酶（100℃，10min），过滤，得龟酶解液；
（3）取茯苓、甘草、栀子、槐花、罗汉果、金银花、薄荷、凉粉草，加入这些药材总重量8-12倍的水提取两次，每次1.5小时，过滤，将两次的滤液合并混合得中药药液；
（4）将全龟水提液、龟酶解液和中药药液三者混合，充分搅拌混匀后，过滤，浓缩，加入麦芽糊精、白砂糖，用70%乙醇混合制粒，置于55℃下鼓风干燥箱干燥7h，过28目筛，即得。
所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶。
实施例5
取全龟4000克、茯苓3000克、甘草5000克、栀子1000克、槐花1500克、罗汉果2500克、金银花3000克、薄荷3000克、凉粉草4000克、麦芽糊精6000克、白砂糖3000克。
所述的全龟为活龟洗净宰杀后，去掉内脏后的部分。
所述的龟苓膏固体饮料，制备包括以下步骤：
（1）取全龟，加入用龟重量的12倍水提取两次，每次3小时，过滤，将两次的滤液合并得全龟水提液，将提取后的全龟龟渣收集备用；
（2）取提取后的龟渣称重，然后粉碎制浆，其间不断加入水调节料液比位1:20，制得龟浆；
用柠檬酸或食用碱溶液调节龟浆pH至7.5，加热至50℃，按照4万U/g龟渣的量加入蛋白酶，恒温酶解6h，加热灭酶（100℃，10min），过滤，得龟酶解液；
（3）取茯苓、甘草、栀子、槐花、罗汉果、金银花、薄荷、凉粉草，加入这些药材总重量10倍的水提取两次，每次2小时，过滤，将两次的滤液合并混合得中药药液；
（4）将全龟水提液、龟酶解液和中药药液三者混合，充分搅拌混匀后，过滤，浓缩，加入麦芽糊精、白砂糖，用89%乙醇混合制粒，置于70℃下鼓风干燥箱干燥8h，过30目筛，即得。
所述的蛋白酶为胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶的混合物。
实施例6
一、实验样品准备：
1、实验中对照组样品制备如下：
龟苓膏浸膏
注：龟苓膏浸膏处方和制法参照：国家中成药标准汇编眼科耳鼻喉科皮肤科分册，国家药品监督管理局标准 龟苓膏 （WS-11022(ZD-1022)-2002）。
取龟（去内脏）10g、地黄67g、土茯苓133g、绵茵陈13g、金银花13g、甘草13g、火麻仁13g。制法如下：
以上七味药材，将生地黄、土茯苓、火麻仁、甘草酌予碎断，冷水浸泡过夜。加水煎煮三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时；金银花、绵茵陈加水熬煮二次，每次1小时，合并滤液，滤过，滤液浓缩至约338ml龟加水熬煮6小时以上，成汁后，加入上述浓缩液中，继续浓缩至密度为1.15±0.05即得龟苓膏浸膏。
2、实施例1组
采用实施例1的原料配方和制备工艺，其中步骤4中浓缩完后的浸膏作为实验用样品，不加麦芽糊精、白砂糖。
具体制备过程如下：
取全龟200克、茯苓400克、甘草500克、栀子400克、槐花400克、罗汉果300克、金银花200克、薄荷300克、凉粉草500克。
所述的龟苓膏固体饮料，制备包括以下步骤：
（1）取全龟，加入用龟重量的8倍水提取两次，每次2小时，过滤，将两次的滤液合并得全龟水提液，将提取后的全龟龟渣收集备用；
（2）取提取后的龟渣称重，然后粉碎制浆，其间不断加入水调节料液比位1:1，制得龟浆；
用柠檬酸或食用碱溶液调节龟浆pH至5.5，加热至35℃，按照0.5万U/g龟渣的量加入蛋白酶，恒温酶解3h，100℃下加热灭酶10min，过滤，得龟酶解液；
（3）取茯苓、甘草、栀子、槐花、罗汉果、金银花、薄荷、凉粉草，加入这些药材总重量8-12倍的水提取两次，每次0.5小时，过滤，将两次的滤液合并混合得中药药液；
（4）将全龟水提液、龟酶解液和中药药液三者混合，充分搅拌混匀后，过滤，浓缩即得。
所述的蛋白酶为中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶的混合物。
二、预防骨质疏松（滋阴）功效评价实验
1、实验方法
选取健康的4dpf的斑马鱼80尾随机分为空白组及模型组，空白组20尾，模型组60尾。从4dpf开始，空白组加入含0.5% DMSO的培养基，模型组加入含10μmol/L 地塞米松（Dex）培养基（含0.5% DMSO），28.5±0.5℃恒温培养48h后，将模型组斑马鱼随机分为Dex组（模型组），对照组，实施例1组，每组20尾。
空白组及模型组给药条件不变，对照组加入龟苓膏溶液，将对照组的龟苓膏浸膏用含10μmol/L Dex的养鱼水稀释，其最终中药材含量为60mg/L。
实施例1组加入龟苓膏固体颗粒溶液1（将实施例1的龟苓膏固体颗粒用含10μmol/L Dex的养鱼水稀释，其最终中药材含量为60mg/L），所有组别均含0.5% DMSO，继续于28.5±0.5℃恒温培养，隔天换药，孵育至9dpf。
用0.2%钙黄绿素溶液对各组斑马鱼进行染色，5min后吸出钙黄绿素溶液，用养鱼用水清洗，每次15min，重复清洗3次。每组随机选取10尾形态正常斑马鱼，用0.04g/L的三卡因对斑马鱼进行麻醉，在荧光显微镜下拍照并统计各组斑马鱼椎骨荧光面积。
2、实验结果
通过结合imageJ图像分析软件和GraphPad Prism8对斑马鱼骨骼染色结果进行数据处理。使用Excel进行数据统计，斑马鱼骨骼染色结果统计汇总结果如图1和图2所示。
图1显示，与空白组相比，模型组斑马鱼椎骨节数减少，椎骨面积减少；与模型组相比，对照组和实施例1组可以显著增加斑马鱼椎骨节数与面积，促进骨骼形成。
结合图2数据分析，与空白组比较，模型组斑马鱼椎骨荧光面积显著减少（P＜0.01），与模型组组比较，对照组和实施例1组椎骨荧光面积明显增加（P＜0.05），且与对照组比较，实施例1组椎骨荧光面积更大。
结论
该结果显示龟苓膏固体颗粒对斑马鱼表现出明显的骨质疏松抵抗效果，其效果优于传统工艺制作的龟苓膏，具有促进斑马鱼骨骼形成、保护骨骼的作用。
三、清热解毒（抗炎）功效评价实验
1.实验方法
选取健康的3dpf的中性粒细胞转基因型斑马鱼80尾随机分为空白组及模型组，空白组、模型组、对照组、实施例1组，各20尾。空白组加入养鱼水；模型组加入含20μmol/L 硫酸铜的养鱼水；对照组加入龟苓膏溶液2（将对照组的龟苓膏浸膏用含20μmol/L硫酸铜的养鱼水稀释，其最终中药材含量为60mg/L）；实施例1组加入龟苓膏固体颗粒溶液2（将实施例1的龟苓膏固体颗粒用含20μmol/L硫酸铜的养鱼水稀释，其最终中药材含量为60 mg/L）,所有组别均含0.1% DMSO，于控温光照培养箱中28.5±0.5 ℃恒温培养2 h。在体视荧光显微镜下实时活体观察中性粒细胞在硫酸铜造成的急性炎症的反应，并拍照。
2.实验结果
由图3、图4可知，炎症模型组斑马鱼的中性粒细胞迁移数显著高于空白对照组（P＜0.01），硫酸铜诱导的炎症模型构建成功。与炎症模型组相比，实施例1组的中性粒细胞迁移数量显著减少（P＜0.05），这说明龟苓膏固体颗粒具有显著的抗炎作用，且作用效果优于对照组。
3、结论
该结果显示对照组龟苓膏与实施例1组龟苓膏固体颗粒在斑马鱼上，二者对斑马鱼均表现出一定的抗炎效果，具有清热解毒作用，且实施例1组效果更优。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (8)
1.一种龟苓膏固体饮料，其特征在于由如下重量份的原料制备而成：
全龟2-40份、茯苓4-30份、甘草5-50份、栀子4-10份、槐花4-15份、罗汉果3-25份、金银花2-30份、薄荷3-30份、凉粉草5-40份。
2.如权利要求1所述的龟苓膏固体饮料，其特征在于由如下重量份的原料制备而成：
全龟10-20份、茯苓10-15份、甘草15-30份、栀子5-8份、槐花6-12份、罗汉果8-15份、金银花10-15份、薄荷10-15份、凉粉草10-20份。
3.如权利要求1所述的龟苓膏固体饮料，其特征在于，其中还含有如下重量份的辅料：
麦芽糊精1-60份、白砂糖1-60份。
4.如权利要求1或2所述的龟苓膏固体饮料，其特征在于制备包括以下步骤：
（1）取全龟，加入用龟重量的8-12倍水提取两次，每次1-3小时，过滤，将两次的滤液合并得全龟水提液，将提取后的全龟龟渣收集备用；
（2）取提取后的龟渣称重，然后粉碎制浆，其间不断加入水调节料液比位1:0.5-20，制得龟浆；
用柠檬酸或食用碱溶液调节龟浆pH至3.0-9.0，加热至35-80℃，按照0.1-10万U/g龟渣的量加入蛋白酶，恒温酶解3-8h，然后加热使蛋白酶灭活，过滤，得龟酶解液；
（3）取茯苓、甘草、栀子、槐花、罗汉果、金银花、薄荷、凉粉草，加入这些药材总重量8-12倍的水提取两次，每次0.5-2小时，过滤，将两次的滤液合并混合得中药药液；
（4）将全龟水提液、龟酶解液和中药药液三者混合，充分搅拌混匀后，过滤，浓缩，加入麦芽糊精、白砂糖，用65%-89%乙醇混合制粒，干燥，过筛，即得。
5.如权利要求4所述的龟苓膏固体饮料，其特征在于：所述的全龟为活龟洗净宰杀后，去掉内脏后的部分。
6.如权利要求4所述的龟苓膏固体饮料，其特征在于：所述的步骤4中，制粒后的干燥过程为：置于50-70℃下鼓风干燥箱干燥5-8h。
7.如权利要求4所述的龟苓膏固体饮料，其特征在于：所述的步骤4中，过的筛的目数为20-30目。
8.如权利要求4所述的龟苓膏固体饮料，其特征在于：所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或多种。
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2021
- 2021-08-04 CN CN202110891298.XA patent/CN113796481A/zh active Pending
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