CN113773988B - 一种枯草芽孢杆菌及其在辣椒防病增产中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌及其在辣椒防病增产中的应用，属于农业微生物领域，枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，命名为GT018‑JZ18111，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNO.17701。本发明枯草芽孢杆菌对辣椒黑茎病治效果好，并且能够有效提高辣椒产量。

Description

一种枯草芽孢杆菌及其在辣椒防病增产中的应用
技术领域
本发明涉及农业微生物技术领域，更具体的说是涉及一种枯草芽孢杆菌及其在辣椒防病增产中的应用。
背景技术
辣椒黑茎病是由辣椒疫霉菌侵染引起的一种相对严重的土传真菌性病害，其最易侵染辣椒茎秆，表现为植株枯萎、叶片腐斑呈黑褐色、果实变黑等症状。此病可侵染辣椒整个生长期，在相对较差的土壤环境中，会引发辣椒整个植株的死亡，减少20％-30％的产量，更为严重时，会导致辣椒绝收。因此，如何对辣椒黑茎病进行有效防控是本领域技术人员研究的重点。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种枯草芽孢杆菌，对辣椒黑茎病治效果好，并且能够有效提高辣椒产量。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，命名为GT018-JZ18111，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.17701，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2019年04月30日。
上述枯草芽孢杆菌在辣椒防病增产中的应用。
上述枯草芽孢杆菌用于防治辣椒黑茎病。
一种辣椒防病增产制剂，包括上述枯草芽孢杆菌。
上述辣椒防病增产制剂中有效活菌数为5×109～10×109CFU/mL。
由上述技术方案可知，本发明公开的枯草芽孢杆菌GT018-JZ18111对于辣椒黑茎病具有显著的防治效果，并且可提高辣椒产量，适于推广应用。
附图说明
图1所示为GT018-JZ18111菌落形态。
图2所示为GT018-JZ18111与辣椒黑茎病病原菌拮抗实验结果。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1 GT018-JZ18111的分离及鉴定
取土壤样本，经过平板稀释法，得到纯化培养的菌株，经过病原菌相关试验验证发现，其中一株菌对辣椒的黑茎病病原菌具有明显的抑制作用(图1)：如图2所示，利用平板进行菌与菌间的拮抗作用筛选，其中四株枯草芽孢杆菌菌株分别标号为5、6、7、8，6号拮抗效果最佳，将其命名为GT018-JZ18111，简称JZ18111。
菌株JZ18111具有以下特征：
细胞杆状，革兰氏染色阳性，大小0.6-0.8μm×2.0-4.0μm。
芽孢端生到亚端端生，芽孢囊不膨大，芽孢柱形。
在肉汤培养基上，72h菌落圆形，扁平，较湿润，白色，边缘不整齐。
阳性反应：接触酶；氧化酶；水解淀粉。
阴性反应：卵磷脂酶；厌氧生长；丙酸盐利用；乳糖发酵产酸。
其16S rDNA基因序列(SEQ ID NO.1)：
GCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGACGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCATGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTCGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATCGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGTACAACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACAACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGA。
鉴定为枯草芽孢杆菌。
实施例2 菌株JZ18111发酵液的制备
菌株JZ18111斜面保存培养基为牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g，放入1000mL水中，pH7.2-7.4，分装后121℃高压灭菌30min。
发酵前，将JZ18111斜面置于室温中活化4-6小时，转接至种子液体培养基中。种子液体培养基成分为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，置于1000mL无菌水中。种子培养条件为：32-35℃、180-200rpm/min，培养16-20小时。
将培养好的种子液按照质量比3％-5％添加于发酵液中进行发酵液的制备，发酵液的配方：每1000mL水中，按照质量比添加豆饼粉0.1％、玉米粉0.5％、碳酸钙0.1％、红糖0.5％、硫酸铵0.05％、磷酸氢二钾0.025％、氢氧化钠0.06％，pH7.2-7.4。发酵时间为24-48小时，温度为32-35℃，搅拌速度180-200rpm/min。发酵过程中，采用血球计数的方式，含菌量达到5×109CFU/mL时，即可终止发酵。
实施例3 田间试验
试验地位于河北省保定市莲池区农业种植基地；地形为冲积平原，地势平坦，肥力均匀，在当地属中等水平，代表面积200亩；土壤类型：潮土；土壤质地：中壤；前茬作物：黄瓜；前茬作物施肥量：复合肥80kg/亩，有机肥2000kg/亩；前茬作物产量4100kg/亩；土壤养分状况为：pH7.8、有机质12.6g/kg、全氮0.89g/kg、有效磷12.5mg/kg、有效钾116mg/kg。
试验设4个处理，3次重复，采用完全随机区组设计。小区面积6.00m×4.00m＝24.00m2。
处理1：常规施肥；
处理2：常规施肥减量10％+实施例2制备发酵液；
处理3：常规施肥减量10％+与处理2发酵液等量的市售枯草芽孢杆菌(5×109CFU/mL)；
处理4：空白对照；
其它田间管理措施一致。
辣椒种植前，对各处理辣椒种子进行浸泡处理，具体条件为：处理2采用实施例2制备的发酵液稀释100倍浸泡，处理3采用市售枯草芽孢杆菌菌液(5×109CFU/mL)稀释100倍浸泡，其他组采用清水浸泡；各组将种子完全浸泡于浸泡液中，40分钟后，进行播种。辣椒出苗后，可按照下述相关试验方案进行施肥。
试验田为日光温室保护地，田间管理均按常规方法。试验地辣椒采用育苗移栽方式栽培丰力红冠，2月20日播种，3月2日出苗，4月29日施底肥(常规施肥为基施磷酸二铵25kg、硫酸钾复合肥10kg)，深翻整地，起垄，4月28日移栽，每亩地保苗6000株。中耕3次，全期滴水11次，随水滴肥8次，生育期每亩地滴水310立方米，生育期处理1组每亩地共滴施尿素20千克、磷酸二氢钾8千克；处理2组相较于处理1组尿素、磷酸二氢钾减量10％，并施用实施例2发酵液20千克；处理3组相较于处理1组尿素、磷酸二氢钾减量10％，并施用市售枯草芽孢杆菌菌液20千克，处理4组不施加肥料。9月26日，采收完毕。各试验小区除处理不同外，其它管理措施同当地习惯一致。结果如表1、2所示。
表1不同处理对辣椒主要农艺性状的比较
处理 单果长/cm 单果直径/cm 坐果数/个 单果重/g
1 14.88 1.17 17.54 5.54
2 16.42 1.36 21.65 6.12
3 16.13 1.28 19.32 5.86
4 13.21 0.93 16.93 5.13
表2不同处理对辣椒产量的影响(产量单位：kg)
Figure BDA0003234579640000061
由上表可见，常规施肥减量10％+实施例2发酵液比常规施肥增产169.5kg/亩，增产率11.43％；比常规施肥减量10％+市售枯草芽孢杆菌增产84.3kg/亩，增产率5.38％；比空白对照增产306.5kg/亩，增产率22.78％。经随机区组方差分析后，处理2同处理3相比，产量差异达到显著水平；处理2同处理1相比，产量差异达到显著水平；处理2和处理4量差异达到极显著水平。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 微生物肥料技术研究推广中心
<120> 一种枯草芽孢杆菌及其在辣椒防病增产中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1413
<212> DNA
<213> Artificial
<400> 1
gcaagtcgag cggacagatg ggagcttgct ccctgatgtt agcggcggac gggtggtaac 60
acgtgggtaa cctgcctgta agactgggat aactccggga aaccggggct ataccggatg 120
gttgtttgaa ccgcatggtt caaacataaa aggtggcttc ggctaccact tacagatgga 180
cccgcggcgc attagctagt tggtgaggta acggctcacc aaggcaacga tgcgtagccg 240
acctgagagg gtgatcggcc acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc 300
agcagtaggg aatcttccgc aatggacgaa agttgacgga gcaacgccgc gtgagtgatg 360
aaggttttcg gatcgtaaag ctctgttgta gggaagaaca agtaccgttc gaatagggcg 420
gtaccttgac ggtacctaac cagaagccac ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat 480
acgtaggtgg caagcgttgt ccggaattat tgggcgtaaa gggctcgcag gcggtttctt 540
aagtctgatg tgaaagcccc cggctcaacc ggggagggtc attggaaact ggggaacttg 600
agtgcagaag acgagagtgg aattccacgt gtagcggtga aatgcgtaga gatgtggagg 660
aacaccatgg cgaaggcgac tctctggtct gtaactgacg ctgaggagcg aaagcgtggg 720
gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtag 780
ggggtttccg ccccttagtg ctgcagctaa cgcattaagc actccgcctg gggagtacgg 840
tcgcaagact gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtcg agcatgtggt 900
ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atccttgaca atcctagaga 960
taggacgtcc ccttcggggg cagagtgaca ggtggtgcat cgttgtcgtc agctcgtgtc 1020
gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt gatcttagtt gccagcattc 1080
agttgggcac tctaaggtga ctgccggtga caaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa 1140
tcatcatgcc ccttatgacc tgggtacaac gtgctacaat ggacagaaca aagggcagcg 1200
aaaccgcgag gttaagccaa tcccacaaat ctgttctcag ttcggatcgc agtctgcaac 1260
tcgactgcgt gaagctggat cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt 1320
cccgggcctt gtacaaccgc ccgtcacacc acgagagttt gtaacacccg aagtcggtga 1380
ggtaaccttt taggagccag ccgccgaagg tga 1413

Claims (4)

1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其特征在于，命名为GT018-JZ18111，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.17701。
2.权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌在辣椒防黑茎病和增产中的应用。
3.一种辣椒防病增产制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌。
4.根据权利要求3所述的一种辣椒防病增产制剂，其特征在于，有效活菌数为5×109~10×109CFU/mL。
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