CN113720954A - 一种智脑胶囊指纹图谱建立方法及质量评价方法 - Google Patents

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Abstract

一种智脑胶囊指纹图谱建立方法及质量评价方法，属于复方中药制剂品控管理技术领域，取智脑胶囊内容物适量，加甲醇超声提取，过滤膜过滤；精密称取对照品加甲醇配置成一定浓度对照品溶液；流动相选择乙腈‑水，采用梯度洗脱；检测器选择DAD，色谱柱选择BEH C18；测定获得10批样品UPLC图谱，将获得的UPLC图谱导入相似度评价软件中，计算样品相似度，并确定标准指纹图谱；以相似度大于0.90则符合智脑胶囊质量要求，从而完成对待测智脑胶囊样品的质量评价。本发明利用超高效液相色谱法构建了智脑胶囊的指纹图谱，并对多批次智脑胶囊进行分析确定了其标准指纹图谱，建立一种稳定可靠的智脑胶囊质量控制方法。

Description

一种智脑胶囊指纹图谱建立方法及质量评价方法
技术领域
本发明属于复方中药制剂品控管理技术领域，具体是涉及一种智脑胶囊指纹图谱建立方法及质量评价方法。
背景技术
目前，中药指纹图谱技术主要包括薄层扫描(TLCS)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和高效毛细管电泳法(HPCE)等色谱法，以及紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)、质谱法(MS)、核磁共振法(NMR)和X—射线衍射法等光谱法。其中，色谱方法为主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成为公认的三种常规分析手段。由于高效液相色谱法(HPLC)具有分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点，而且中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测。因此高效液相色谱法已成为中药指纹图谱技术的首选方法。
智脑胶囊为安徽中医药大学第一附属医院的医院制剂。该制剂处方以其不同剂型应用于临床治疗阿尔茨海默症超过20余年，疗效确切。该制剂处方主要由党参、黄芪、黄精、肉苁蓉、郁金、石菖蒲、川芎和地龙八味中药组成，主要功效为健脾益肾、豁痰化瘀、开窍健脑。目前，该制剂的主要质量控制方法是对制剂中的黄芪、石菖蒲为对照药材，采用薄层色谱法进行鉴别，以HPLC法测定制剂中松果菊苷含量。但是，目前这种质量控制方法手段较为单一，不能全面控制和反应该制剂的质量。
本发明主要采用UPLC分析技术，建立智脑胶囊的指纹图谱，较全面控制制剂的质量。该方法目前相关文献报道。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种智脑胶囊指纹图谱建立方法及质量评价方法，采用UPLC技术建立智脑胶囊的指纹图谱，较全面控制制剂的质量，为制定制剂的全面和专属性质量控制指标提供依据，也为该制剂质量的提升、进一步发挥临床疗效以及为新药开发提供支持。
本发明所采用的技术方案为：一种智脑胶囊指纹图谱建立方法，步骤如下：
(1)供试品溶液的制备：
取1g智脑胶囊内容物，加甲醇定容至10ml，超声提取15min，以12000r/min转速离心，取滤液以0.22μm过滤膜过滤，得到供试品溶液；
(2)对照品溶液制备：
精密称取对照品槲皮素、毛蕊异黄酮、党参炔苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷一定量，加甲醇配置成槲皮素0.3mg/ml，毛蕊异黄酮0.3mg/ml，党参炔苷0.981mg/ml，松果菊苷0.519mg/ml，毛蕊花糖苷0.586mg/ml的对照品溶液；
(3)色谱条件：
流动相选择乙腈(A)-水(B)，采用梯度洗脱，条件设置为：0-5min，97％B；5-9min，80％B；9-12min，65％B；12-13min，65％B；13-14min，50％B；14-18min，45％B；18-19min，45％B；19-20min，0％B；20-22min，97％B；22min后停止；
检测器选择DAD，检测波长为260nm；柱温为30.0℃；流速为0.2ml/min；进样量为2μL；色谱柱选择ACQUITY UPLC BEH C18；
(4)指纹图谱建立：
制备10批智脑胶囊样品供试品溶液，按照上述色谱条件分别进样，得到10批样品HPLC图谱，导入相似度评价软件中，计算10批样品相似度，并确定标准指纹图谱；
将制备的对照品溶液以相同色谱条件进样分析，将所得到的对照品图谱与标准指纹图谱进行对比，指认出标准指纹图谱中对照品对应色谱峰峰号。
作为本发明的另一目的，本发明利用上述建立的指纹图谱评价智脑胶囊的质量，具体方法为：建立指纹图谱后，进行方法学验证考察精密度、稳定性以及重复性，再利用相同色谱条件检测待测样品，检测结果通过相似度评价软件对比评价，相似度大于0.90则符合智脑胶囊质量要求，从而完成对待测智脑胶囊样品的质量评价。
本发明的有益效果表现在：
1)、指纹图谱技术作为天然药物提取物及其制剂的质量控制方法已达成国际共识，是一种综合的鉴定手段，专属性强，稳定性高、重复性好，能较全面的评价药材的真实性、优良性。因此，本发明利用超高效液相色谱法构建了智脑胶囊的指纹图谱，并对多批次智脑胶囊进行分析确定了其标准指纹图谱，建立一种稳定可靠的智脑胶囊质量控制方法。
2)、本发明选择合理的色谱条件以及色谱柱，分离效果好，重现性高，鉴别效果优。通过方法验证表明，仪器精密度良好，样品稳定性良好，方法重复性良好，满足指纹图谱的技术要求，为智脑胶囊的质量控制提供了一种较佳的评价方法。
附图说明
图1是智脑胶囊标准指纹图谱。
图2是10批智脑胶囊HPLC指纹图谱叠加图。
图3是5个单一对照品与智脑胶囊指纹图谱的对照图谱。
具体实施方式
实施例1
本发明提供了一种智脑胶囊指纹图谱建立方法及质量评价方法，具体步骤如下：
(1)智脑胶囊的生产：
智脑胶囊处方组成为党参15g、黄芪15g、黄精12g、肉苁蓉15g、郁金10g、石菖蒲8g、川芎10g、地龙8g。称取1000倍量处方药材，用10倍量75％乙醇回流1h，过滤出回流药液；再加入75％乙醇8倍量回流提取40min，过滤出回流药液；合并两次回流药液，回收乙醇，浓缩药液，干燥，加辅料糊精，湿法制粒，整粒装0号胶囊，每粒胶囊0.4g，每瓶50粒，包装。
(2)供试品溶液的制备：
按照上述方法制备10批智脑胶囊，批号如表1所示。
表1. 10批智脑胶囊批号
Figure BDA0003269545790000031
取各批智脑胶囊50粒，倒出内容物，研钵混匀(20g)，精密称取1g左右至容量瓶中，加甲醇定容至10ml，超声提取15min，以12000r/min转速离心，取滤液以0.22μm过滤膜过滤，得到供试品溶液。
(3)对照品溶液制备：
精密称取对照品槲皮素、毛蕊异黄酮、党参炔苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷一定量，加甲醇配置成槲皮素0.3mg/ml，毛蕊异黄酮0.3mg/ml，党参炔苷0.981mg/ml，松果菊苷0.519mg/ml，毛蕊花糖苷0.586mg/ml的对照品溶液。
(4)色谱条件：
流动相选择乙腈(A)-水(B)，采用梯度洗脱，条件设置为：0-5min，97％B；5-9min，80％B；9-12min，65％B；12-13min，65％B；13-14min，50％B；14-18min，45％B；18-19min，45％B；19-20min，0％B；20-22min，97％B；22min后停止；
检测器选择DAD，检测波长为260nm；柱温为30.0℃；流速为0.2ml/min；进样量为2μL；色谱柱选择ACQUITY UPLC BEH C18。
(5)指纹图谱建立：
将10批智脑胶囊样品供试品溶液，按照上述色谱条件分别进样，得到10批样品HPLC图谱，并确定15个共有峰，形成共有模式。其中8号峰为参照峰，其相对保留时间和相对峰面积为1，其他峰与其相比较计算相对保留时间和相对峰面积，结果见表2所示。得到的智脑胶囊标准指纹图谱如图1所示。
表2. 10批智脑胶囊15个峰的相对峰面积及相对保留时间
Figure BDA0003269545790000041
注：8号峰为参照峰，(RRT：相对保留时间，RPA：相对峰面积)
将分析结果导入相似度评价软件(中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)，下同)中，以平均数法计算相似度，得出10批样品的相似度数据，结果见表3，各样品HPLC图谱叠加图如图2所示。
表3. 10批智脑胶囊相似度结果
Figure BDA0003269545790000042
将5种对照品—槲皮素(S3)、毛蕊异黄酮(S4)、党参炔苷(S2)、松果菊苷(S6)和毛蕊花糖苷(S5)的HPLC图谱与指纹图谱进行结合对比，从而指认出槲皮素、毛蕊异黄酮、党参炔苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷在15个共有峰中分别对应峰号为峰13、8、10、7和9，结果如图3所示。
(6)方法学考察
①精密度的考察
按照供试品溶液的制备方法制备S2样品，以确定的最优色谱条件重复进样6次，测得各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值在0.017～0.437％和0.338～4.143％之间(如表4所示)，表明仪器精密度良好，符合指纹图谱的技术要求。
表4.精密度实验结果
Figure BDA0003269545790000051
注：8号峰为参照峰，(RRT：相对保留时间，RPA：相对峰面积)
②稳定性试验
按照供试品溶液的制备方法制备S1号样品，以确定的最优色谱条件分别在0、4、8、12、16、24h进样分析，测得各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值在0.031～1.424％和0.772～1.191％之间(如表5所示)，表明供试品溶液在20h内稳定性良好。
表5.稳定性实验结果
Figure BDA0003269545790000052
注：8号峰为参照峰，(RRT：相对保留时间，RPA：相对峰面积)
③重复性试验
按照确定的供试品溶液的制备方法平行制备S3号样品6份，以前述确定的最优色谱条件分别进样分析，测得各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值在0.008～0.418％和0.101～1.495％之间(如表6所示)，表明该方法重复性良好。
表6.重现性实验结果
Figure BDA0003269545790000061
注：8号峰为参照峰，(RRT：相对保留时间，RPA：相对峰面积)
(7)智脑胶囊质量评价
依照上述供试品溶液的制备方法制备待测样品，再利用相同色谱条件检测待测样品，检测结果通过相似度评价软件对比评价，相似度大于0.90则符合智脑胶囊质量要求，从而完成对待测智脑胶囊样品的质量评价。
以上内容仅仅是对本发明的构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种智脑胶囊指纹图谱建立方法，其特征在于，步骤如下：
(1)供试品溶液的制备：
取1g智脑胶囊内容物，加甲醇定容至10ml，超声提取15min，以12000r/min转速离心，取滤液以0.22μm过滤膜过滤，得到供试品溶液；
(2)对照品溶液制备：
精密称取对照品槲皮素、毛蕊异黄酮、党参炔苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷一定量，加甲醇配置成槲皮素0.3mg/ml，毛蕊异黄酮0.3mg/ml，党参炔苷0.981mg/ml，松果菊苷0.519mg/ml，毛蕊花糖苷0.586mg/ml的对照品溶液；
(3)色谱条件：
流动相选择乙腈(A)-水(B)，采用梯度洗脱，条件设置为：0-5min，97％B；5-9min，80％B；9-12min，65％B；12-13min，65％B；13-14min，50％B；14-18min，45％B；18-19min，45％B；19-20min，0％B；20-22min，97％B；22min后停止；
检测器选择DAD，检测波长为260nm；柱温为30.0℃；流速为0.2ml/min；进样量为2μL；色谱柱选择ACQUITY UPLC BEH C18；
(4)指纹图谱建立：
制备10批智脑胶囊样品供试品溶液，按照上述色谱条件分别进样，得到10批样品HPLC图谱，导入相似度评价软件中，计算10批样品相似度，并确定标准指纹图谱；
将制备的对照品溶液以相同色谱条件进样分析，将所得到的对照品图谱与标准指纹图谱进行对比，指认出标准指纹图谱中对照品对应色谱峰峰号。
2.如权利要求1所述的智脑胶囊指纹图谱建立方法，其特征在于，所述智脑胶囊生产方法为：
智脑胶囊处方组成为党参15g、黄芪15g、黄精12g、肉苁蓉15g、郁金10g、石菖蒲8g、川芎10g、地龙8g；称取1000倍量处方药材，用10倍量75％乙醇回流1h，过滤出回流药液；再加入75％乙醇8倍量回流提取40min，过滤出回流药液；合并两次回流药液，回收乙醇，浓缩药液，干燥，加辅料糊精，湿法制粒，整粒装0号胶囊，每粒胶囊0.4g，每瓶50粒，包装。
3.利用如权利要求1所述方法建立的指纹图谱评价智脑胶囊质量的方法，其特征在于，建立指纹图谱后，进行方法学验证考察精密度、稳定性以及重复性，再利用相同色谱条件检测待测样品，检测结果通过相似度评价软件对比评价，相似度大于0.90则符合智脑胶囊质量要求，从而完成对待测智脑胶囊样品的质量评价。
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