CN113712136A - 一种提高南美白对虾抗应激能力的添加剂、饲料及其应用 - Google Patents

一种提高南美白对虾抗应激能力的添加剂、饲料及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种提高南美白对虾抗应激能力的添加剂，其组分包括维生素C和肌肉肌醇，二者之间的质量比为200‑300:200‑300。本发明还公开了一种提高南美白对虾抗应激能力的饲料，其包括基础饲料、维生素C和肌肉肌醇，其中，每千克饲料中，所述维生素C含量为200‑300mg，所述肌肉肌醇含量为200‑300mg。本发明还公开了上述添加剂和饲料的应用。本发明提供添加剂和饲料能够提高南美白对虾抵抗盐度应激、缺氧应激、氨氮应激和高铜胁迫的能力，尤其是提高南美白对虾抗环境应激能力及缓解高铜引起的氧化应激。

Description

一种提高南美白对虾抗应激能力的添加剂、饲料及其应用
技术领域
本发明涉及水产养殖添加剂及饲料，具体地，涉及一种提高南美白对虾抗应激能力的添加剂及其应用。同时，本发明涉及的包含所述添加剂的饲料及其应用。
背景技术
在水产养殖过程中，氧气、盐度和氨氮等应激源易引起胁迫环境，影响水产动物的健康状况。盐度会影响虾的生长、渗透压调节、氧消耗、蜕壳和免疫等方面。虽然南美白对虾能适应从1‰到50‰的盐度环境，但盐度应激还是会降低虾对病原体感染的抵抗力和免疫力，影响虾的生理机能。由于水域面积的限制，对虾的养殖密度逐步提高。基于经济和环境因素考虑而开发的高密度养殖模式提高了水体中氨的水平并降低氧的浓度，而过量的氨会抑制免疫反应并增加甲壳类动物感染病原体的易感性，急性氨应激会引起氧化应激，从而对虾的健康状况产生不利影响。氧浓度也是对虾高密度养殖模式水体中主要限制因素之一，缺氧应激(水中溶解氧：DO<2mg/L)会严重影响水产动物的生长、发育、呼吸、代谢及免疫反应，甚至导致死亡。铜作为甲壳动物必需的营养素之一，常被应用于水产养殖业。硫酸铜的应用被证明是控制鱼塘中某些有毒物质和传染病的有效途径。另外，硫酸铜也会被添加到饲料中作为铜的来源。金属污染(包括铜)对中国的沿海和河口生态系统的压力日益加深，这可能对海水养殖造成巨大风险。铜能够在鱼虾类组织中积累，并且可能累积达到对鱼虾类具有毒害作用的浓度。虽然铜是对虾的必需微量元素，在许多生理过程中扮演着重要的角色，但是高浓度的铜会降低对虾的生长性能，还可能对脂质、蛋白质和DNA造成氧化损伤，给水产养殖业造成巨大损失。因此，需要天然、安全的饲料添加剂或者饲料提高对虾对环境应激的抵抗力。
维生素C和肌醇，作为维生素家族的一员，对于大多数水生动物来说不可缺少。肌肉肌醇是肌醇最具生物活性的异构体。目前，尚未在南美白对虾中发现肌醇与盐度应激、缺氧应激和氨氮应激之间的关系及维生素C与肌醇协同作用的报道。养殖过程中会面对缺氧、盐度急剧变化、氨氮胁迫及重金属胁迫等环境刺激，从而使对虾产生应激反应，容易导致虾出现摄食量下降、发病，甚死亡的情况。而维生素C和肌肉肌醇作为一种天然、安全、必需的饲料添加剂，对于添加肌肉肌醇和维生素C的饲料研究具有很强的社会效益和经济效益。
发明内容
本发明为克服现有技术的不足，目的之一是提供一种提高南美白对虾抗应激能力的添加剂。该添加剂可以提高南美白对虾抗环境应激能力以及缓解高铜引起的氧化应激。
本发明的目的之二是提供上述添加剂的应用。
本发明的目的之三是提供包含上述添加剂的饲料。
本发明的目的之四是提供上述饲料的应用。
本发明的目的之一通过以下技术方案实现：一种提高南美白对虾抗应激能力的添加剂，其组分包括维生素C和肌肉肌醇，二者之间的质量比为200-300:200-300。
维生素C和肌醇是大部分水产动物所必需的营养素。维生素C作为一种天然抗氧化剂，在抵抗氧化应激方面发挥着重要作用；肌肉肌醇是肌醇中最普遍的天然存在的生物活性异构体，可参与生物体内的脂质代谢、酶活性的介导和信号转导的调控。另外，肌醇能增强对鱼虾非特异性免疫，降低脂质过氧化水平和蛋白质氧化水平，提高抗氧化能力。
作为本发明的一个实施例，维生素C和肌肉肌醇的质量比为250:200。
本发明的目的之二涉及上述添加剂的应用，具体涉及所述添加剂在制备南美白对虾养殖饲料中的应用。
本发明的目的之三通过以下技术方案实现：一种提高南美白对虾抗应激能力的饲料，包括基础饲料、维生素C和肌肉肌醇，其中，每千克饲料中，所述维生素C含量为200-300mg，所述肌肉肌醇含量为200-300mg。其中，所述维生素C含量为基础饲料中本身含有的维生素C及外加维生素C含量的总和，而肌肉肌醇含量为外加肌肉肌醇的量。
作为本发明的一个实施例，每千克饲料中，所述维生素C含量为250mg，所述肌肉肌醇含量为200mg。
本发明中，所述基础饲料包括以下质量分数的组分：鱼粉15-25％，去皮豆粕20-30％，花生麸10-15％，小麦面粉20-25％，磷虾粉4-5％，啤酒酵母2-4％，大豆浓缩蛋白3-5％，鱼油1-3％，豆油1-3％，磷酸二氢钙0.5-1.5％，氯化胆碱(有效含量50％)0.1-0.3％，复合矿物盐0.1-0.5％，复合维生素0.5-1.5％，其中，复合维生素中的维生素C与外加的维生素C总量为200-300mg/kg饲料。
所述基础饲料包括以下质量分数的组分：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.28％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％，其中，复合维生素中的维生素C与外加的维生素C总量为250mg/kg饲料。
优选地，所述鱼粉为进口鱼粉。
本发明的目的之四涉及上述添加剂的应用，具体涉及所述饲料在南美白对虾养殖中的应用，以提高南美白对虾抵抗盐度应激、缺氧应激、氨氮应激和高铜胁迫的能力，尤其是提高南美白对虾抗环境应激能力及缓解高铜引起的氧化应激。
本发明具有以下有益效果：
1.本发明提供的添加剂中，维生素C可有效降低对虾血清和肝胰腺的丙二醛含量，降低脂质过氧化水平，提升南美白对虾的抗氧化能力，且对南美白对虾的生长性能没有负面影响，肌肉肌醇能提高南美白对虾抗盐度应激、缺氧应激及氨氮应激能力，并有效降低环境应激后血清丙二醛、肝胰腺丙二醛和蛋白质羰基含量，降低对虾脂质过氧化水平和蛋白质氧化水平，而且维生素C与肌肉肌醇的协同作用可有效缓解高铜环境对南美白对虾的胁迫作用。
2.本发明提供的饲料中包含以上添加剂，提高了南美白对虾抵抗盐度应激、缺氧应激、氨氮应激和高铜胁迫的能力，尤其是提高了南美白对虾抗环境应激能力及缓解高铜引起的氧化应激。
3.本发明提供的饲料中含有氯化胆碱和磷酸二氢钙，其中，氯化胆碱是维持对虾正常生长的重要营养物质，可有效调节虾的脂肪代谢，防止脂肪在肝胰腺异常沉积；磷酸二氢钙可为虾提供钙、磷等矿物质营养。
4.本发明提供的饲料添加剂和饲料的生产工艺较简单，对器材要求不高，具有快速、便捷的优点，便于大规模推广，在南美白对虾养殖中的应用前景广泛。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
各实验组配方以鱼粉、去皮豆粕和花生麸为主要的饲料蛋白源，鱼油和豆油为主要的脂肪源，小麦面粉为糖源。
各实施例中所述的指标按以下公式计算：
增重率(％)＝100×(终末虾均重-初始虾均重)/初始虾均重；
特定生长率(％/day)＝100×[LN(终末虾均重)-LN(初始虾均重)]/实验天数；
饲料系数＝饲料投喂量/(终末虾总重-初始虾总重)；
成活率(％)＝100×终末虾尾数/初始虾尾数；
肝体比＝100×肝重/体重；
肥满度(g/cm3)＝100×体重(g)/体长(cm)3；
应激后的成活率(％)＝100×应激实验结束时的尾数/应激实验开始时的尾数
实施例1维生素C含量对南美白对虾生长性能和抗氧化水平的影响
1.1实验方法
1.1.1实验组设置
试验以维生素C多聚磷酸酯(有效含量35％)作为维生素C来源，采用高效液相色谱法测定试验组饲料中维生素C浓度。
试验组1：
饲料添加剂：维生素C(实测含量)与肌肉肌醇(添加量)的质量比为：48.55:300
饲料配方：鱼粉25％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.27％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，鱼油1％，豆油1％，大豆卵磷脂1％；磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中肌肉肌醇有效含量为97％，添加量为300mg/kg饲料)，维生素C多聚磷酸酯0.03％。采用高效液相色谱法测定饲料中维生素C含量为48.55mg/kg饲料。
试验组2：
饲料添加剂：维生素C(实测含量)与肌肉肌醇(添加量)的质量比为：84.98:300
饲料配方：鱼粉25％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.24％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，鱼油1％，豆油1％，大豆卵磷脂1％；磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中肌肉肌醇有效含量为97％，添加量为300mg/kg饲料)，维生素C多聚磷酸酯0.06％。采用高效液相色谱法测定其维生素C含量为84.98mg/kg饲料。
试验组3：
饲料添加剂：维生素C(实测含量)与肌肉肌醇(添加量)的质量比为：308.36:300
饲料配方：鱼粉25％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.07％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，鱼油1％，豆油1％，大豆卵磷脂1％；磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中肌肉肌醇有效含量为97％，添加量为300mg/kg饲料)，维生素C多聚磷酸酯0.23％。采用高效液相色谱法测定其维生素C含量为308.36mg/kg饲料。
试验组4：
饲料添加剂：维生素C(实测含量)与肌肉肌醇(添加量)的质量比为：639.27:300
饲料配方：鱼粉25％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉23.84％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，鱼油1％，豆油1％，大豆卵磷脂1％；磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中肌肉肌醇有效含量为97％，添加量为300mg/kg饲料)，维生素C多聚磷酸酯0.46％。采用高效液相色谱法测定其维生素C含量为639.27mg/kg饲料。
对照组1不包括维生素C多聚磷酸酯
饲料添加剂：维生素C(实测含量)与肌肉肌醇(添加量)的质量比为：14.64:300
饲料配方：鱼粉25％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.30％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，鱼油1％，豆油1％，大豆卵磷脂1％；磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中肌肉肌醇有效含量为97％，添加量为300mg/kg饲料)，维生素C多聚磷酸酯0％。采用高效液相色谱法测定其维生素C含量为14.64mg/kg饲料。
1.1.2分组试验
将试验用南美白对虾幼虾投喂商业饲料驯化2周，随机挑选750尾健康、有活力、初始体重约为0.57g的南美白对虾分别放于25个500L养殖桶中。实验共计5个处理组，每个处理组5个重复，每个重复30尾虾。试验期间，5个处理组分别饲喂试验组1～4和对照组1的饲料，每天表观饱食投喂4次，试验养殖周期为8周。
养殖周期结束后，对虾禁食24h，称量每桶虾的重量，然后随机选取5尾虾测定个体体长和体重，并随机选取另外6尾虾用来测定血清和肝胰腺的抗氧化指标。实验结果以平均值±标准误表示，数据采用SPSS Statistic 20.0软件进行统计分析。在比较各实验组的差异显著性前先检验实验数据是否符合方差齐性原则，如果分析结果显示方差齐性，则对数据进行单因素方差分析(One-way ANOVA),采用Duncan多重比较检验均值的差异显著性(P＜0.05)；若分析结果显示方差非齐性，则用Kruskal-Wallis ANOVA对数据进行非参数检验。
1.2实验结果
饲料中维生素C含量对南美白对虾生长性能的影响如表1所示，可见试验组1～4制备的饲料对南美白对虾的生长性能没有负面影响。
表1饲料中维生素C含量对南美白对虾生长性能的影响
Figure BDA0003253152040000071
注：结果以平均值±标准误表示(n＝5)。
本试验中，试验组1～4均有效提高南美白对虾血清和肝胰腺中的总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶活性和谷胱甘肽还原酶活性。丙二醛作为氧化损伤的生物标志物，对细胞结构和功能具有很强的生物毒性。试验组1～4均有效降低血清和肝胰腺中丙二醛的含量，具体数据如表2所示。
表2饲料维生素C含量对南美白对虾抗氧化指标的影响
Figure BDA0003253152040000072
Figure BDA0003253152040000081
注：结果以平均值±标准误表示(血清n＝4；肝胰腺n＝3)。同一行数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
综上所述，实验结果证明每1千克饲料中含84.98～639.27mg的维生素C可有效降低南美白对虾脂质过氧化水平，提高抗氧化能力。
实施例2肌醇含量对南美白对虾抗盐度应激、缺氧应激和氨氮应激能力及抗氧化水平的影响
2.1实验方法
2.1.1试验组设置
试验组5
饲料添加剂：肌肉肌醇(添加量)与维生素C(添加量)的质量比为：100:250
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.29％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(有效含量97％)添加量为100mg/kg饲料。采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌醇含量为368.8mg/kg饲料。
试验组6
饲料添加剂：肌肉肌醇(添加量)与维生素C(添加量)的质量比为：200:250
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.28％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(有效含量97％)添加量为200mg/kg饲料。采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌醇含量为459.7mg/kg饲料。
试验组7
饲料添加剂：肌肉肌醇(添加量)与维生素C(添加量)的质量比为：400:250
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.26％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(有效含量97％)添加量为400mg/kg饲料。采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌醇含量为673.1mg/kg饲料。
试验组8
饲料添加剂：肌肉肌醇(添加量)与维生素C(添加量)的质量比为：800:250
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.22％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(有效含量97％)添加量为800mg/kg饲料，采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌醇含量为993.8mg/kg饲料。
试验组9
饲料添加剂：肌肉肌醇(添加量)与维生素C(添加量)的质量比为：1600:250
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.14％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(有效含量97％)添加量为1600mg/kg饲料，采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌醇含量为1674.4mg/kg饲料。
对照组2不包括肌肉肌醇
饲料添加剂：肌肉肌醇(添加量)与维生素C(添加量)的质量比为：0:250
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.30％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(97％)添加量为0mg/kg饲料，采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌醇含量242.6mg/kg饲料。
2.1.2分组试验
2.1.2.1饲料中肌醇含量对南美白对虾抗盐度应激能力及抗氧化水平的影响
将试验的南美白对虾幼虾投喂商业饲料驯化2周，随机挑选900尾健康、有活力、初始体重约为0.40±0.00g的南美白对虾分别放于30个500L养殖桶中。实验共计6个处理组，每组设置5个重复，每个重复30尾虾。试验期间，6个组分别投喂试验组5～9和对照组2的饲料，每天表观饱食投喂4次，试验养殖周期为8周。
在养殖实验结束24小时后，进行急性盐度应激实验。从每个饲料处理组随机选取3个重复，每个重复随机选择10尾虾(虾体规格上较为一致)。运用淡水将盐度从30‰(当日实测盐度)快速降低到6‰，并记录盐度降低所花时间及盐度应激开始时间。利用盐度计检测水体盐度。急性盐度应激时间为6小时，记录各个重复每小时虾的死亡情况。实验结果以平均值±标准误表示，数据采用SPSS Statistic 20.0进行统计分析。在比较各实验组的差异显著性前先检验实验数据是否符合方差齐性原则，如果分析结果显示方差齐性，则对数据进行单因素方差分析(One-way ANOVA),采用Tukey多重比较检验均值的差异显著性(P＜0.05)；若分析结果显示方差非齐性，则用Kruskal-Wallis ANOVA对数据进行非参数检验。
2.1.2.2饲料中肌醇含量对南美白对虾抗缺氧应激能力及抗氧化水平的影响
将试验的南美白对虾幼虾投喂商业饲料驯化2周，随机挑选540尾健康、有活力、初始体重约为0.40±0.00g的南美白对虾分别放于18个500L养殖桶中，实验共计6个处理组，每组设置3个重复，每个重复30尾虾。试验期间，6个组分别投喂试验组5～9和对照组2的饲料，每天表观饱食投喂4次，试验养殖周期为8周。
养殖周期结束后，从每个桶随机选取10尾虾移入装有海水的20L塑料桶中进行急性缺氧应激实验。缺氧应激实验将虾所处溶氧环境由6.6mg/L降低至0.4mg/L，每隔1小时记录虾的死亡数，计算各组的成活率，试验持续3个小时。实验结果以平均值±标准误表示，数据采用SPSS Statistic 20.0进行统计分析。在比较各实验组的差异显著性前先检验实验数据是否符合方差齐性原则，如果分析结果显示方差齐性，则对数据进行单因素方差分析(One-way ANOVA),采用Tukey多重比较检验均值的差异显著性(P＜0.05)；若分析结果显示方差非齐性，则用Kruskal-Wallis ANOVA对数据进行非参数检验。
2.1.2.3饲料中肌醇含量对南美白对虾抗氨氮应激能力及抗氧化水平的影响
将试验的南美白对虾幼虾投喂商业饲料驯化2周，随机挑选540尾健康、有活力、初始体重约为0.40±0.00g的南美白对虾分别放于18个500L养殖桶中，实验共计6个处理组，每组设置3个重复，每个重复30尾虾。试验期间，6个组分别投喂试验组5～9和对照组2的饲料，每天表观饱食投喂4次，试验养殖周期为8周。
养殖周期结束后，每个桶随机选取10尾虾进行24小时氨氮应激实验。将虾所处氨氮环境调整为60.21mg/L，每隔6小时记录虾的死亡情况，24小时后停止试验并统计各组的成活率。实验结果以平均值±标准误表示，数据采用SPSS Statistic 20.0进行统计分析。在比较各实验组的差异显著性前先检验实验数据是否符合方差齐性原则，如果分析结果显示方差齐性，则对数据进行单因素方差分析(One-way ANOVA),采用Tukey多重比较检验均值的差异显著性(P＜0.05)；若分析结果显示方差非齐性，则用Kruskal-Wallis ANOVA对数据进行非参数检验。
2.2试验结果
2.2.2.1饲料中肌醇含量对南美白对虾抗盐度应激能力及抗氧化水平的影响
试验结果如表4和表5所示，6小时盐度应激实验后，各组成活率在50～86.67％之间。试验组6、8和9成活率显著高于对照组2(P<0.05)，而其余各组之间成活率无显著性差异(P>0.05)。盐度应激后，各试验组血清丙二醛和肝胰腺蛋白质羰基含量显著低于对照组2(P<0.05)。除试验组8外，其余试验组肝胰腺丙二醛含量显著低于对照组2(P<0.05)。
表4饲料中肌醇含量对南美白对虾盐度应激后成活率的影响
Figure BDA0003253152040000121
注：结果以平均值±标准误表示。同一列数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
表5饲料中肌醇含量对南美白对虾盐度应激后脂质过氧化水平和蛋白质氧化水平的影响
Figure BDA0003253152040000122
注：结果以平均值±标准误表示。同一列数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
2.2.2.2饲料中肌醇含量对南美白对虾抗缺氧应激能力及抗氧化水平的影响
试验结果如6和7所示，3小时缺氧应激实验后，各组成活率在66.67～93.33％之间。试验组6、8和9对虾成活率显著高于对照组2(P<0.05)，而其余各组之间无显著性差异(P>0.05)。各试验组肝胰腺丙二醛含量显著低于对照组2(P<0.05)；除试验组5和7外，其余试验组肝胰腺蛋白质羰基含量显著低于对照组2(P<0.05)。
表6饲料肌醇含量对南美白对虾缺氧应激后成活率的影响
Figure BDA0003253152040000131
注：结果以平均值±标准误表示(n＝3)。同一列数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
表7饲料中肌醇含量对南美白对虾缺氧应激后脂质过氧化水平和蛋白质氧化水平的影响
Figure BDA0003253152040000132
注：结果以平均值±标准误表示(n＝3)。同一列数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
2.2.2.3饲料肌醇含量对提高南美白对虾氨氮应激能力的影响
试验结果如表8和9所示，24小时氨氮应激实验后，各组成活率在43.33-76.67％之间。试验组5、6和9的对虾成活率显著高于对照组2(P<0.05)，而其余各组之间无显著性差异(P>0.05)。试验组6和8血清丙二醛含量显著低于对照组2(P<0.05)；各试验组肝胰腺丙二醛含量虽低于对照组2，但仅试验组5有显著性差异(P<0.05)；除试验组7外，各试验组肝胰腺蛋白质羰基含量显著低于对照组2(P<0.05)。
表8饲料肌醇含量对南美白对虾氨氮应激后成活率的影响
Figure BDA0003253152040000133
注：注：结果以平均值±标准误表示(n＝3)。同一列数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
表9饲料中肌醇含量对南美白对虾氨氮应激后脂质过氧化水平和蛋白质氧化水平的影响
Figure BDA0003253152040000141
注：结果以平均值±标准误表示(n＝3)。同一列数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
综上所述，饲料中添加100-1600mg/kg饲料的肌肉肌醇(有效含量为97％)可提高南美白对虾抗盐度应激、缺氧应激和氨氮应激能力，降低应激后脂质过氧化水平和蛋白质氧化水平，其中添加200mg/kg饲料的肌肉肌醇效果最好。
实施例3维生素C和肌醇对高铜引起的氧化应激的影响
3.1实验方法
3.1.1试验组设置
试验组10
饲料添加剂(添加量)：肌肉肌醇、维生素C与五水硫酸铜的质量比为：200:250:430.76。
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.04％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.7％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(有效含量97％)添加量为200mg/kg饲料，五水硫酸铜添加量为430.76mg/kg饲料。采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌肉肌醇含量为465.9mg/kg饲料；采用原子吸收光谱法(GB/T 13885-2003)测定得到饲料中铜含量为119.19mg/kg饲料。
对照组3
饲料添加剂(添加量)：肌肉肌醇、维生素C与五水硫酸铜的质量比为：0:250:79.2。
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.09％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.7％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(有效含量97％)添加量为0mg/kg饲料，五水硫酸铜添加量为79.2mg/kg饲料。采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌肉肌醇含量为294.4mg/kg饲料；采用原子吸收光谱法(GB/T 13885-2003)测定得到饲料中铜含量为37.08mg/kg饲料。
对照组4
饲料添加剂(添加量)：肌肉肌醇、维生素C与五水硫酸铜的质量比为：0:250:430.76。
饲料配方：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.04％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱(有效含量50％)0.2％，复合矿物盐0.7％，复合维生素1％(其中维生素C添加量为250mg/kg饲料)，肌肉肌醇(有效含量97％)添加量为0mg/kg饲料，五水硫酸铜添加量为430.76mg/kg饲料。采用气相色谱法(NY/T 1345–2007)测定得到饲料中的肌肉肌醇含量为304.1mg/kg饲料；采用原子吸收光谱法(GB/T 13885-2003)测定得到饲料中铜含量为125.99mg/kg饲料。
3.1.2分组试验
将试验用南美白对虾幼虾投喂商业饲料驯化2周，随机挑选360尾健康、有活力、初始体重约为0.89g左右的南美白对虾分别放于9个300L水泥池中。实验共计3个处理组，每个处理组3个重复，每个重复40尾虾。试验期间，3个组分别饲喂试验组10和对照组3和4的饲料，每天表观饱食投喂4次，试验养殖周期为8周。
养殖周期结束后，对虾禁食24h，每个池随机选取11尾虾测定其血清与肝胰腺的抗氧化指标以及免疫酶活性；每个池随机选取10尾虾进行9小时氨氮应激实验。将虾所处氨氮环境调整为5.21mg/L，应激实验结束后，计算成活率。实验结果以平均值±标准误表示，数据采用SPSS Statistic 20.0进行统计分析。在比较各实验组的差异显著性前先检验实验数据是否符合方差齐性原则，如果分析结果显示方差齐性，则对数据进行单因素方差分析(One-way ANOVA),采用Tukey多重比较检验均值的差异显著性(P＜0.05)；若分析结果显示方差非齐性，则用Kruskal-Wallis ANOVA对数据进行非参数检验。
3.2实验结果
9小时氨氮应激实验结果如表10所示，试验组10和对照组3成活率显著高于对照组4(P<0.05)，与对照组3相比，对照组4的成活率降低了31.8％。与对照组4相比，试验组10的成活率增加了26.7％。饲料中高含量的铜会导致南美白对虾对氨氮应激的抵抗力下降，而饲料中添加200mg/kg的肌肉肌醇和250mg/kg的维生素C可提高氨氮应激后的成活率，缓解高铜对虾抗氨氮应激能力的负面影响。
表10饲料维生素C与肌醇含量对南美白对虾氨氮应激能力的影响
Figure BDA0003253152040000161
注：结果以平均值±标准误表示(n＝3)。同一行数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
应激前试验对虾的血清丙二醛及肝胰腺的丙二醛、蛋白质羰基含量如表11所示。试验组10和对照组3血清和肝胰腺丙二醛含量、肝胰腺蛋白质羰基含量显著低于对照组4(P<0.05)。由此可见，饲料中高含量的铜会提高对虾脂质过氧化水平和蛋白质氧化水平，引起氧化应激，而饲料中添加200mg/kg的肌肉肌醇和250mg/kg的维生素C可缓解该状况。
表11饲料维生素C与肌醇含量对南美白对虾脂质过氧化水平的影响
Figure BDA0003253152040000162
注：结果以平均值±标准误表示(n＝3)。同一列数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
应激前碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)实验结果如表12所示，AKP和ACP酶的活性与免疫应答有关。对照4AKP和ACP活性均低于试验组10和对照组3。由此可见，饲料中高含量的铜可能抑制免疫反应，而饲料中添加200mg/kg的肌肉肌醇和250mg/kg的维生素C可增强对虾的免疫水平。
表12饲料维生素C与肌醇含量对南美白对虾免疫水平的影响
Figure BDA0003253152040000171
注：结果以平均值±标准误表示(n＝3)。同一列数值上不同字母表示存在显著性差异(P<0.05)。
综上所述，饲料中高含量的铜会引起氧化应激，降低氨氮应激后的成活率，并可能抑制对虾的免疫反应。而饲料中添加200mg/kg的肌肉肌醇和250mg/kg的维生素C可缓解高铜导致的负面影响。

Claims (9)

1.一种提高南美白对虾抗应激能力的添加剂，其特征是，其组分包括维生素C和肌肉肌醇，二者之间的质量比为200-300:200-300。
2.根据权利要求1所述的提高南美白对虾抗应激能力的添加剂，其特征是，维生素C和肌肉肌醇的质量比为250:200。
3.权利要求1或2所述的提高南美白对虾抗应激能力的添加剂在制备南美白对虾养殖饲料中的应用。
4.一种提高南美白对虾抗应激能力的饲料，其特征是，包括基础饲料、维生素C和肌肉肌醇，其中，每千克饲料中，所述维生素C含量为200-300mg，所述肌肉肌醇含量为200-300mg。
5.根据权利要求4所述的提高南美白对虾抗应激能力的饲料，其特征是，所述维生素C含量为250mg，所述肌肉肌醇含量为200mg。
6.根据权利要求4所述的提高南美白对虾抗应激能力的饲料，其特征是，所述基础饲料包括以下质量分数的组分：鱼粉15-25％，去皮豆粕20-30％，花生麸10-15％，小麦面粉20-25％，磷虾粉4-5％，啤酒酵母2-4％，大豆浓缩蛋白3-5％，鱼油1-3％，豆油1-3％，磷酸二氢钙0.5-1.5％，氯化胆碱0.1-0.3％，复合矿物盐0.1-0.5％，复合维生素0.5-1.5％，其中，所述复合维生素中的维生素C与外加的维生素C总量为200-300mg/kg饲料。
7.根据权利要求5所述的提高南美白对虾抗应激能力的饲料，其特征是，所述基础饲料包括以下质量分数的组分：鱼粉20％，去皮豆粕25％，花生麸12％，小麦面粉24.28％，磷虾粉5％，啤酒酵母3％，大豆浓缩蛋白4％，鱼油2％，豆油2％，磷酸二氢钙1％，氯化胆碱0.2％，复合矿物盐0.5％，复合维生素1％，其中，所述复合维生素中的维生素C与外加的维生素C总量为250mg/kg饲料。
8.根据权利要求4-7任一项所述的提高南美白对虾抗应激能力的饲料，其特征是，所述鱼粉为进口鱼粉。
9.权利要求4-8任一项所述提高南美白对虾抗应激能力的饲料在南美白对虾养殖中的应用。
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