CN109744411B

CN109744411B - 一种中华绒螯蟹饲料添加剂及其配备方法

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Publication number: CN109744411B
Application number: CN201910166680.7A
Authority: CN
Inventors: 迟骋; 刘佳岱; 刘文斌; 郑肖川; 许晨远; 张彩燕; 强发旗
Original assignee: Jiangsu Haipurui Fodder Co ltd; Nanjing Agricultural University
Current assignee: Jiangsu Haipurui Fodder Co ltd; Nanjing Agricultural University
Priority date: 2019-03-06
Filing date: 2019-03-06
Publication date: 2022-11-25
Anticipated expiration: 2039-03-06
Also published as: CN109744411A

Abstract

本发明公开了一种中华绒螯蟹饲料添加剂及其配备方法，组份包括谷胱甘肽3～12份，氯化胆碱8～12份，抗氧化剂2～5份，防霉剂4～8份和食盐45～55份。先将谷胱甘肽、氯化胆碱和抗氧化剂进行混合，得到一次混合物；再将得到的一次混合物与防霉剂和食盐进行二次混合，得到二次混合物即得。本发明饲料添加剂中引入谷胱甘肽，可显著降低LPS对中华绒螯蟹造成的应激反应，显著提高藻毒素影响下中华绒螯蟹的免疫力，增强中华绒螯蟹对藻毒素的抗病力，对蟹体内的藻毒素解毒，所用的原料均为常见的在我国可规模化生产的饲料原料，其生产工艺也和一般的蟹用颗粒饲料类似，便于大规模推广。

Description

一种中华绒螯蟹饲料添加剂及其配备方法

技术领域

本发明涉及水产养殖、营养调控和饲料加工技术领域，尤其是一种中华绒螯蟹饲料添加剂及其配备方法。

背景技术

中华绒螯蟹是一种经济蟹类，又称河蟹、毛蟹、清水蟹、大闸蟹。为中国久负盛名的美食。其螯足用于取食和抗敌，掌部内外缘密生绒毛，绒螯蟹因此而得名。杂食性，鱼、虾、螺、蚌、蠕虫、蚯蚓、昆虫及其幼虫等均可作为大闸蟹的动物性饵料。

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)(以下简称河蟹)因其丰富的营养价值和独特的风味深受消费者青睐，是我国重要的经济养殖蟹类之一。2015年全国河蟹总产量高达约82.3万吨，其中大部分来自池塘养殖。长期以来，池塘养殖河蟹主要采用冰鲜杂鱼、玉米、小麦、黄豆和饼粕类等传统饲料，然而这些传统饲料存在来源不稳定、营养成分不均衡、饲料利用率低、易引起水质恶化等缺点，容易导致河蟹患病和成蟹品质不稳定等问题。传统养殖模式已成为制约我国河蟹养殖业可持续发展的重要因素之一。

河蟹--中华绒螯蟹味道鲜美，营养丰富，历来就是百姓餐桌上的中高档水产品。2017年全国河蟹产量超过75.09万吨，同比增加0.30％，江苏产量为34.59万吨，稳居全国第一。河蟹产业已成为渔业的支柱产业、品牌产业，产业涉及全省13个市，有江苏省淡水渔业的“半壁江山”之称。江苏河蟹养殖以规格大、产量高、膏红肉质优为特点。目前，河蟹产业以市场为导向，需求大、价格高，在水产养殖各品种中优势明显。然而，由于河蟹养殖起步早，规模大，技术成熟度高，也带来一些亟待解决的问题。目前河蟹养殖中部分地区仍以单一原料(南瓜、玉米、大豆、冰鲜鱼等)作为成蟹饵料，配合饲料应用严重不足，部分地区配合饲料在成蟹养殖饵料中所占比例在20％以下。由于营养不均衡，除影响生长外，还导致性早熟、蟹膏存留时间短、水质污染和病害频发，而为应对不利条件使用的抗生素又影响河蟹质量安全。配合饲料同时也存在许多发展空间，寻求更好的营养配比，通过合理的添加剂提高饲料利用率、河蟹抗病力也是大力发展的研究方向之一。

目前日趋严重的水体富集化使水化暴发成为全球化的环境问题，构成水化的藻类主要为蓝藻，部分藻类能产生微囊藻毒素。肝脏是受损害最严重的器官，然而中华绒螯蟹可食部位包括肝胰腺。藻毒素可造成河蟹抗病力减弱，同时由于人类食用也可能造成食用后人体患癌率的增加。

发明内容

为了克服现有技术中提出的规模化和集约化养殖过程中中华绒螯蟹出现的饲料生产成本较高、饵料单一导致蟹品质下降、饲料利用率低下、中华绒螯蟹抗病力低下，本发明提供了一种中华绒螯蟹饲料添加剂及其配备方法，以提高饲料利用率，增强中华绒螯蟹免疫力，促进中华绒螯蟹生长发育，有效提高养殖产量。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种中华绒螯蟹饲料添加剂，它包括如下按质量份组成的组份：

谷胱甘肽：3～12份，

氯化胆碱：8～12份，

抗氧化剂：2～5份，

防霉剂：4～8份，

食盐：45～55份。

其中，谷胱甘肽是广泛存在细胞中的一种生物活性肽，其中在动物肝细胞、酵母和小麦胚芽细胞中较为丰富。能参与机体自由基的清除、免疫应答的激活、毒素的螯合、细胞完整性的保护和部分物质的吸收等多方面的生理活动，在临床医学和营养学上已有大量的研究。近年来向水产动物饲料中添加谷胱甘肽，可增强养殖动物的抗氧化应激能力，改善动物机体健康，并促进养殖动物生长，谷胱甘肽在水产饲料中呈现出广阔的应用前景。大量研究也表明，谷胱甘肽在微囊藻毒素的解毒代谢过程中也发挥重要作用。在水生动物体内藻毒素经谷胱甘肽-S-转移酶催化与谷胱甘肽结合，形成中间代谢产物MCLR-GSH，继而进一步代谢为水溶性更强的MCLR-Cys来进行解毒。通过建立脂多糖(LPS)诱导氧化应激的模型可以来探究谷胱甘肽抗氧化保护作用机制，为谷胱甘肽作为抗氧化添加剂提供依据。

进一步地，该饲料添加剂优选配方包括如下按质量份组成的组份：

谷胱甘肽：6份，

氯化胆碱：10份，

抗氧化剂：3份，

防霉剂：5份，

食盐：50份。

优选地，上述饲料添加剂在饲料中的添加量为2～3％。

其中，所述抗氧化剂为乙氧基喹啉、L-抗坏血酸、丁羟甲苯、丁羟甲氧苯或生育酚中的任意一种或两种以上的组合。

所述防霉剂为丙酸钙、甲酸、甲酸钙、山梨酸或柠檬酸的任意一种或两种以上的组合。

上述中华绒螯蟹饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：

步骤一：将谷胱甘肽、氯化胆碱和抗氧化剂进行混合，得到一次混合物；

步骤二：将得到的一次混合物与防霉剂、食盐进行二次混合，得到二次混合物即得。

本发明进一步保护一种中华绒螯蟹饲料，在上述得到的饲料添加剂中按照质量比1:1.2～1.5添加80目的沸石粉作为填充物，得到均匀混料，然后按照质量百分比1.7～1.8％加入到蟹用饲料中即得。

有益效果：

1、本发明饲料添加剂中引入谷胱甘肽，可显著降低LPS对中华绒螯蟹造成的应激反应、改善机体的非特异性免疫力，并最终提高其在养殖期间以及捕捞和运输过程中的存活率和免疫力；

2、本发明饲料添加剂可显著提高藻毒素影响下中华绒螯蟹的免疫力，增强中华绒螯蟹对藻毒素的抗病力，对蟹体内的藻毒素解毒，所用的原料均为常见的在我国可规模化生产的饲料原料，其生产工艺也和一般的蟹用颗粒饲料类似，便于大规模推广。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。

图1为不同日粮对中华绒鳌蟹血中ACP(酸性磷酸酶)活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图2为不同日粮对中华绒鳌蟹血中AKP(碱性磷酸酶)活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图3为不同日粮对中华绒鳌蟹血中LZM(溶菌酶)活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图4为不同日粮对中华绒鳌蟹血中MPO(髓过氧化物酶)活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图5为不同日粮对中华绒鳌蟹血中总蛋白含量的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图6为不同日粮对中华绒鳌蟹血中GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图7为不同日粮对中华绒鳌蟹肝胰腺中AKP(碱性磷酸酶)活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图8为不同日粮对中华绒鳌蟹肝胰腺中ACP(酸性磷酸酶)活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图9为不同日粮对中华绒鳌蟹肝胰腺中GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图10为不同日粮在不同时间对注射25μg/kg藻毒素的中华绒鳌蟹血中C3(补体C3)含量的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图11为不同日粮在不同时间对注射25μg/kg藻毒素的中华绒鳌蟹血中MPO(髓过氧化物酶)活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图12为不同日粮在对注射400μg/kg LPS的中华绒鳌蟹血中血细胞总数的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图13为不同日粮在对注射400μg/kg LPS的中华绒鳌蟹肝胰腺中ROS(活性氧)含量的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图14为不同日粮在对注射400μg/kg LPS的中华绒鳌蟹肝胰腺中caspase-3活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

图15为不同日粮在对注射400μg/kg LPS的中华绒鳌蟹肝胰腺中caspase-8活性的影响；每个数据代表四个重复的平均值，不同上标的柱形图差异显著(p<0.05)。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。

实施例1

试验饲料为三组：(1)对照组：无外源添加谷胱甘肽饲料，每千克饲料中含氯化胆碱1000mg、抗氧化剂(乙氧基喹啉)300mg、防霉剂500mg和食盐5000mg；(2)试验1组：每千克饲料中含谷胱甘肽600mg、氯化胆碱1000mg、抗氧化剂(乙氧基喹啉)300mg、防霉剂500mg和食盐5000mg(配方一)；(3)试验2组：每千克饲料中含谷胱甘肽900mg、氯化胆碱1000mg、抗氧化剂(乙氧基喹啉)300mg、防霉剂500mg和食盐5000mg(配方二)。

试验1组和2组饲料的制备方法如下：(1)按配方称取各种原料；(2)将谷胱甘肽、氯化胆碱、和抗氧化剂进行混合，得到一次混合物；(3)将一次混合物、防霉剂和食盐进行二次混合，得到二次混合物；(4)在二次混合物中添加1.4倍质量粉碎成80目的沸石粉作为填充物，即得到匀混料；(5)将上述匀混料添加到蟹用饲料中。

表1为各组配方和营养水平，其中复合预混料包括以下矿物质(g/kg)和维生素(IU或mg/kg)：CuSO₄·5H₂O:2g；FeSO₄·7H₂O:25g；ZnSO₄·7H₂O:22g；MnSO₄·4H₂O:7g；Na₂SeO₃:0.04g；KI:0.026g；CoCl₂·6H₂O:0.1g；维生素A:900000IU；维生素D:200000IU；维生素E:4500mg；维生素K₃:220mg；维生素B₁:320mg；维生素B₂:1090mg；维生素B₅:2000mg；维生素B₆:500mg；维生素B₁₂:1.6mg；维生素C:10000mg；泛酸:1000mg；叶酸:165mg；胆碱:60000mg；生物素:100mg；肌醇:15000mg；合生元:1842mg。

表1

试验中华绒螯蟹与饲养管理：

试验用中华绒螯蟹驯化7天，期间投喂基础饲料，驯化后挑选体格健壮规格整齐，初始体重(26.1±0.15)g的中华绒螯蟹120只，随机分成3组，每组4个重复，每个重复10只。试验蟹养殖于室外水泥池(1.0×1.0×0.5m)中，每日饱食投喂3次(时间分别在7:30、16:30、19:30)，养殖期为10周。试验期间，水温在20～30℃之间，pH为7.0～7.5，溶解氧为8.0～8.7。养殖10周后进行采样，测定各组生长性能及免疫相关蛋白和酶，结果见表2和图1至9。

表2各组生长性能

注：相同列不同字母表示差异显著(P<0.05)。

从表2可以看出，与对照组相比，试验1组饲料和2组饲料的增重率、特定生长率、存活率显著提高，证明外源添加谷胱甘肽的日粮可以有效提高蟹增重和存活率。

从图1至9可以看出，在日粮中添加谷胱甘肽可以提高中华绒螯蟹的免疫力和抗氧化能力。

实施例2

试验饲料与实施例1相同，分成三组。

试验蟹驯化7天，期间投喂基础饲料，驯化后挑选体格健壮规格整齐，初始体重(26±0.04)g的中华绒螯蟹48只，随机分成3组，每组4个重复，每个重复4只。试验蟹养殖于室外水泥池中，每日饱食投喂3次(时间分别在7:30、16:30、19:30)，养殖期为10周。试验期间，水温在18～25℃之间，pH为7.0～7.5，溶解氧为8.0～8.7。养殖10周后进行微囊藻毒素(浓度为25μg/kg)攻毒，测定免疫指标，结果见图10、11。

从图10、11可以看出，随着时间的延长，藻毒素对机体的毒性加深。由于谷胱甘肽对机体的解毒作用，在12h、24h的血中C3的含量要高于对照组。图11在6、12h谷胱甘肽添加组的蟹血中的MPO活性高于对照组，在24h谷胱甘肽组已解毒，MPO活性降低至正常值。

实施例3

脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是革兰阴性细菌的外膜成分，其与白细胞分化抗原(Cluster of differentiation 14，CD14)相互作用后与Toll样受体4(Toll-likereceptor-4，TLR-4)结合，而后通过核转录因子(Nuclear factor-κB，NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号通路激活炎症基因表达从而引发炎症反应。炎症反应包括在启动宿主脂质过氧化的各种类型细胞中自由基生成酶的激活，所以LPS经常用于炎症和氧化应激的试验模型中。

试验饲料与实施例1相同，分成三组。

试验蟹驯化3天，期间投喂基础饲料，驯化后挑选体格健壮规格整齐，初始体重(100±0.04)g的中华绒螯蟹12只，随机分成3组，每组4个重复，每个重复2只。试验蟹养殖于室内循环系统中，每日饱食投喂2次(时间分别在7:30、16:30)，养殖期为2周。试验期间，水温在18～25℃之间，pH为7.0～7.5，溶解氧为8.0～8.7。养殖2周后进行注射LPS(浓度为400μg/kg)，测定免疫指标，结果见图12至15。

如图12看出，不同日粮在对注射400μg/kg LPS的中华绒鳌蟹血中血细胞总数的影响。血细胞中包括球蛋白等多种与免疫相关物质，添加谷胱甘肽血细胞总数未明显下降，抗炎能力提高。

如图13所示，不同日粮在对注射400μg/kg LPS的中华绒鳌蟹肝胰腺中ROS(活性氧)含量的影响。ROS的量急剧增多由于明显的细胞结构的损坏。细胞都会通过酶(如，过氧化歧化酶superoxide dismutase等)的作用来减少ROS对细胞的损伤作用。添加谷胱甘肽表明减少了炎症对细胞的损伤。

如图14所示，caspase-3是动物细胞凋亡通路下游关键的死亡蛋白酶，对照组caspase-3的活性升高，表示细胞凋亡升高，抗炎能力下降。所以添加谷胱甘肽可以增强抗炎能力。

如图15所示，caspase-8是动物细胞凋亡通路下游关键的死亡蛋白酶，位于caspase-3上游，通过外源性调控细胞凋亡。证明谷胱甘肽通过外源性来控制细胞凋亡。

以上实验结果表明：与现有技术相比，本发明配方经过与无添加外源谷胱甘肽配合饲料的配方和营养成分进行对比分析测定，证明本发明的饲料具有以下优点：(一)本发明是在对中华绒螯蟹营养全面系统的研究基础上形成的，其原料组合和营养配比更加均衡和合理，具有广泛的实验基础和科学依据；(二)其谷胱甘肽添加比例范围更加适合生产，便于降低成本；(三)使用本发明后可以提高蟹体生长、降低饵料系数；(四)可以极大程度增强蟹体免疫力，提高存活率，提高商品蟹出售价格和质量；(五)所用的原料均为常见的在我国可规模化生产的饲料原料，其生产工艺也和一般的蟹用颗粒饲料类似，便于大规模推广。

本发明配方中所用的原料均为常见的在我国可规模化生产的饲料原料，制作工艺也相对简单，具有取材方便、价格低廉和可大规模工业化生产等优点。结果表明其可以一定程度上降低饲料的生产成本、提高蟹的存活率、降低饵料系数、提高抗应激能力和，增强对藻毒素的解毒能力并最终改善其的养殖效益。

本发明提供了一种中华绒螯蟹饲料添加剂及其配备方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

Claims

1.一种中华绒螯蟹饲料在养殖LPS诱导的中华绒鳌蟹中的应用，其特征在于，所述中华绒螯蟹饲料组成为：每千克饲料中含谷胱甘肽900mg、氯化胆碱1000mg、抗氧化剂乙氧基喹啉300mg、防霉剂500mg和食盐5000mg，所述饲料的制备方法如下：(1)按配方称取各种原料；(2)将谷胱甘肽、氯化胆碱、和抗氧化剂进行混合，得到一次混合物；(3)将一次混合物、防霉剂和食盐进行二次混合，得到二次混合物；(4)在二次混合物中添加1.4倍质量粉碎成80目的沸石粉作为填充物，即得到匀混料；(5)将上述匀混料添加到蟹用饲料中。