CN115885904A - 一种提高海水蟹类耐受低盐胁迫的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种提高海水蟹类耐受低盐胁迫的方法,是在蟹类的稚蟹饲料中添加氧化三甲胺TMAO;所述的氧化三甲胺TMAO在饲料中的添加量为0.01‑0.08%。本发明的方法能有效提高蟹类的低盐耐受能力,大大提高蟹类在低盐急性胁迫下的成活率,增加蟹类的养殖产量。
Description
技术领域
本发明属于蟹类养殖方法技术领域,具体涉及一种提高三疣梭子蟹和拟穴青蟹耐受低盐胁迫的方法。
背景技术
三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus,梭子蟹)和拟穴青蟹(Scyllaparamamosain,青蟹)是我国最重要的海洋经济蟹类。自20世纪80年代开始人工养殖以来,梭子蟹和青蟹的养殖产量逐步提升,2021年的全国海水养殖产量分别达到10.5万吨和15.2万吨。其中梭子蟹的养殖产量不足捕捞量的四分之一,对野生自然资源的高度依赖制约着梭子蟹养殖产业的可持续发展。尽管青蟹的养殖产量已高于海捕产量,但在进一步拓展青蟹在低盐养殖区的实践中,青蟹的死亡率非常高。
在海水蟹的池塘养殖过程中,经常会遭遇台风、暴雨等自然灾害天气的干扰,导致养殖塘水体盐度的急剧下降。梭子蟹的最适生长盐度为20-35‰,低盐会影响梭子蟹正常的摄食、生长、发育、蜕壳、肌肉组成、非特异性免疫酶和蛋白酶活性等一系列表型和生理特性。因此提高梭子蟹的低盐耐受能力是解决急性低盐胁迫下梭子蟹大量死亡的关键。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种提高海水蟹类耐受低盐胁迫的方法,能够显著提高蟹类在低盐下的存活率。
本发明所提供的提高蟹类耐受低盐胁迫的方法,是在蟹类的饲料中添加氧化三甲胺TMAO;
所述的方法,是在蟹类的稚蟹的饲料中添加氧化三甲胺TMAO;
所述的氧化三甲胺TMAO在饲料中的添加量为0.01-0.08%;
作为优选,所述的氧化三甲胺TMAO在饲料中的添加量为0.02%;
所述的蟹类,为三疣梭子蟹或拟穴青蟹;
所述的方法,在养殖期间,采用自然光照周期,水温为28-29℃。
本发明的方法能有效提高蟹类的低盐耐受能力,大大提高蟹类在低盐急性胁迫下的成活率,增加蟹类的养殖产量。
附图说明
图1:梭子蟹的单筐养殖图的结构示意图,其中:1是帆布池,2是养殖筐;
图2:梭子蟹稚蟹在低盐胁迫下的生存曲线图;
图3:营养强化后梭子蟹稚蟹血清的渗透压在低盐胁迫下的变化图。
图4:拟穴青蟹的稚蟹在低盐胁迫下的生存曲线图;
图5:拟穴青蟹的稚蟹血清的渗透压在低盐胁迫下的变化图。
具体实施方式
本发明针对海水蟹类低盐耐受能力的问题,通过建立的方法,有效提高了海水蟹在急性低盐(盐度=4)胁迫后的成活率,为海水蟹的健康养殖提供技术支撑。
本发明的方法,是在是在蟹类的稚蟹的饲料中添加氧化三甲胺TMAO;所述的氧化三甲胺TMAO在饲料中的添加量为0.01-0.08%。
其中饲料可以选用三疣梭子蟹或拟穴青蟹养殖中,幼蟹培养常的饲料。
对于本发明所涉及的名词解释如下:
1、梭子蟹稚蟹:梭子蟹分为成蟹、稚蟹和幼体,稚蟹为介于梭子蟹成体和幼体之间的蟹。
2、青蟹稚蟹:青蟹分为成蟹、稚蟹和幼体,稚蟹为介于青蟹成体和幼体之间的蟹。
3、盐度:指海水中溶解物质质量与海水质量的比值。海水盐度,是指海水中全部溶解物质与海水重量之比,通常以每千克海水中所含的溶解物质的克数来表示。
4、氧化三甲胺(Trimetlylamine oxide),简称TMAO。
下面结合附图和具体实施方式对本发明进一步阐述。
实施例1:
采用15g左右的三疣梭子蟹的稚蟹进行营养强化和低盐胁迫试验,以成活率和血淋巴渗透压作为筛选标准,最终确定了TMAO的强化浓度和使用方法,为提高梭子蟹在急性低盐胁迫下的成活率奠定基础。
本发明所提供的能提高梭子蟹低盐耐受能力的饲料添加剂是TMAO,其使用方法包括如下的步骤:
(1)梭子蟹稚蟹挑选和消毒处理
挑选四肢健全、体格健壮、无病害、活力较强的梭子蟹稚蟹,先后使用0.04ppm的氟乐灵和10ppm的甲醛浸泡稚蟹0.5h。
(2)养殖池的准备
首先对养殖用的帆布池和养殖筐进行消毒和清洗,用海水铺满池底,用漂白粉浸泡1h,漂白粉用量为150g/m2,用刷子刷洗帆布池四壁和养殖筐,刷洗干净后,用自来水冲洗干净帆布池和养殖筐。把养殖筐均匀排布在帆布池中(图1)。
向帆布池中注入经沉淀和漂白粉消毒的正常盐度(25‰)的海水,至养殖池中海水深度为0.4m。
(3)稚蟹暂养
将稚蟹放入(2)中的帆布池的养殖筐中进行单筐养殖;每天投喂蟹体重3-5%的配合饲料。喂食后1h检查梭子蟹的蜕壳和死亡情况,捞出残饵、死蟹以及蜕下的壳,同时视情况换水30-50%。
(4)稚蟹的营养强化
按照0.02%、0.04%和0.08%的比例把TMAO喷洒于颗粒饲料表面,待自然阴干后作为营养强化饲料。
把每3个帆布池的稚蟹(共60只,每个帆布池内20只)设为1组,共4组,分别投喂不同浓度的TMAO强化的饲料,以不加TMAO的饲料为对照。营养强化时间为15d。
(5)稚蟹的低盐胁迫
用自来水调整水体盐度到4‰,将养殖海水直接换成盐度为4‰的低盐度海水,观察和记录稚蟹的死亡情况。
对实施例进行数据处理和结果分析:
1数据处理:
1.1死亡数量统计和生存曲线分析
各组稚蟹的死亡数量以三个重复的死亡总数计算。采用Kaplan-Meier方法的Log-rank(Mantel-Cox)法获得各组之间的差异显著性,并用R软件绘制生存曲线。
1.2血清渗透压的测定
用1mL注射器在梭子蟹游泳足的基膜处抽血,每只梭子蟹抽取约1mL,将血液置于1.5mL的离心管中,在4℃下静置过夜,在5000rpm下离心5min,收集上清液,即获得血清。取20μL血清,用冰点渗透压仪进行血清的渗透压检测。
2结果:
2.1稚蟹的死亡数量和存活情况比较
由表1可知,经TMAO强化后,稚蟹的在低盐胁迫下的死亡数量明显降低,其中低浓度(0.02%)TMAO强化的稚蟹的死亡数量最少,只有13个,比对照少19个;但随着强化浓度的提高,稚蟹的死亡数量也随之增加,但仍然比对照少死亡10个及以上。值得关注的是,经强化后的稚蟹在低盐胁迫下的死亡发生在12h内,而未经强化的对照稚蟹死亡发生现象几乎覆盖整个低盐胁迫过程。
表1:梭子蟹稚蟹在低盐胁迫下每组的死亡总数统计表
相应地,经营养强化的稚蟹的存活率也明显高于对照(图2),并在低盐胁迫12h后基本保持稳定。
2.2稚蟹血清的渗透压比较
由图3所示,TMAO强化能明显提高梭子蟹血清的渗透压,特别在低盐胁迫的前12h。随着胁迫时间的延长,血清渗透压维持在一个相对稳定的水平,但TMAO强化过的梭子蟹具有较高的血清渗透压。
梭子蟹的耐低盐能力影响着梭子蟹的养殖产量。本发明利用重要生态调节物质TMAO为营养强化物质,通过直接喷洒方式添加到梭子蟹的配合饲料中,并通过低盐胁迫,对TMAO提高梭子蟹耐低盐能力的可行性进行了初步研究:
梭子蟹稚蟹在TMAO强化后的死亡数量明显降低,存活率明显提高,而且梭子蟹的血清渗透压维持在一个相对较高的水平。
实施例2
采用30g左右的青蟹稚蟹进行营养强化和低盐胁迫试验,以成活率和血淋巴渗透压作为筛选标准,最终确定了TMAO的强化浓度和使用方法,为提高青蟹在急性低盐胁迫下的成活率奠定基础。
本发明所提供的能提高青蟹低盐耐受能力的饲料添加剂是TMAO,其使用方法包括如下的步骤:
(1)青蟹稚蟹挑选和消毒处理
挑选四肢健全、体格健壮、无病害、活力较强的青蟹稚蟹,先后使用0.04ppm的氟乐灵和10ppm的甲醛溶于海水中浸泡0.5h。
(2)养殖池的准备
首先对养殖用的帆布池和养殖筐进行消毒和清洗,用海水铺满池底,用漂白粉浸泡1h,漂白粉用量为150g/m2,用刷子刷洗帆布池四壁和养殖筐,刷洗干净后,用自来水冲洗干净帆布池和养殖筐。把养殖筐均匀排布在帆布池中(图1)。
向帆布池中注入经沉淀和漂白粉消毒的正常盐度(25‰)的海水,至养殖池中海水深度为0.4m。
(3)稚蟹暂养
将稚蟹放入(2)中的帆布池的养殖筐中进行单筐养殖;每天投喂蟹体重3-5%的配合饲料。喂食后1h检查青蟹的蜕壳和死亡情况,捞出残饵、死蟹以及蜕下的壳,同时视情况换水30-50%。
(4)稚蟹的营养强化
按照0.01%、0.02%、0.04%和0.08%的比例把TMAO喷洒于颗粒饲料表面,待自然阴干后作为营养强化饲料。
把每3个帆布池的稚蟹(共60只,每个帆布池内20只)设为1组,共5组,分别投喂不同浓度的TMAO强化的饲料,以不加TMAO的饲料为对照。营养强化时间为7d。
(5)稚蟹的低盐胁迫
用自来水调整水体盐度到0.5‰,将养殖海水直接换成盐度为0.5‰的低盐度海水,观察和记录稚蟹的死亡情况。
对实施例进行数据处理和结果分析:
1数据处理:
1.1死亡数量统计和生存曲线分析
各组稚蟹的死亡数量以三个重复的死亡总数计算。采用Kaplan-Meier方法的Log-rank(Mantel-Cox)法获得各组之间的差异显著性,并用R软件绘制生存曲线。
1.2血清渗透压的测定
用5mL注射器在青蟹游泳足的基膜处抽血,每只青蟹抽取约2mL,将血液置于1.5mL的离心管中,在4℃下静置过夜,在5000rpm下离心5min,收集上清液,即获得血清。取20μL血清,用冰点渗透压仪进行血清的渗透压检测。
2结果:
2.1稚蟹的死亡数量和存活情况比较
由表2可知,经TMAO强化后,稚蟹的在低盐胁迫下的死亡数量明显降低,其中低浓度(0.02%)TMAO强化的稚蟹的死亡数量最少,只有2个,比对照少7个;但随着强化浓度的提高,稚蟹的死亡数量也随之增加,但仍然比对照少半数以上。值得关注的是,经强化后的稚蟹在低盐胁迫下的死亡发生在12h内,而未经强化的对照稚蟹死亡发生现象几乎覆盖整个低盐胁迫过程。
表2:青蟹稚蟹在低盐胁迫下每组的死亡总数表
相应地,经营养强化的稚蟹的存活率也明显高于对照(图4),并在低盐胁迫12h后基本保持稳定。
2.2稚蟹血清的渗透压比较
由图5所示,TMAO强化能明显减缓青蟹低盐胁迫6h内血清渗透压的下降幅度,在之后青蟹血清渗透压逐步上升达到一个最高值。随着胁迫时间的延长,青蟹血清渗透压缓慢降低,以适应环境渗透压。值得一提的是,0.08%浓度组的血清渗透压在胁迫12h后仍逐步升高。而TMAO强化过的青蟹相较于对照组具有较高的血清渗透压。
青蟹的耐低盐能力影响着青蟹的养殖产量。本发明利用重要生态调节物质TMAO为营养强化物质,通过直接喷洒方式添加到青蟹的配合饲料中,并通过低盐胁迫,对TMAO提高青蟹耐低盐能力的可行性进行了初步研究:
上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点,并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰,都应该涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种提高蟹类耐受低盐胁迫的方法,其特征在于,所述的方法是在蟹类的饲料中添加氧化三甲胺TMAO。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的方法是在蟹类的稚蟹饲料中添加氧化三甲胺TMAO。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的氧化三甲胺TMAO在饲料中的添加量为0.01-0.08%。
4.如权利要求1的方法,其特征在于,所述的氧化三甲胺TMAO在饲料中的添加量为0.02。
5.如权利要求1的方法,其特征在于,所述的蟹类,为三疣梭子蟹或拟穴青蟹。
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