CN113712024A - 一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供的现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液及其制备方法，属于鱼类精液稀释液领域，主要解决大规模人工繁育黄河鲶时往往因为精液不够而影响人工繁育规模的问题，该现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液，包括鲶雄鱼精液、水，所述鲶雄鱼精液与水以1∶1的比例混合激活，激活后的精液与0.6％～0.8％浓度的葡萄糖溶液以1∶10的比例稀释，葡萄糖溶液为0.8％浓度的葡萄糖溶液。该种精液稀释液的制备方法，包括如下步骤：步骤1：配置0.8％浓度的葡萄糖作为等渗液；步骤2：采集黄河鲶雄鱼的精液；步骤3：步骤2采集的精液与黄河水比例为1∶1进行混合激活；步骤4：用步骤3激活后的精液与0.8％浓度的葡萄糖溶液以1∶10的比例进行稀释保存。

Description

一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液及其制备 方法

技术领域

本发明属于鱼类精液稀释液领域，具体涉及一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液及其制备方法。

背景技术

黄河鲶(SilurusLanzhouensis)又称兰州鲶，别名鲶鱼、土鲶，隶属于鲶形目、鲶科，是黄河中上游重要的土著名优经济鱼类。黄河甘肃段是黄河鲶的原产地和主要的栖息地。黄河鲶鱼具有生长快、适应性强、耐低温、耐低氧等良好生态习性，肉质细嫩，富含各类营养成分，且口感细腻、刺少肉多，具有很高的营养价值和优良的品质，享有“黄河活人参”之美誉，受到人们广泛青睐，呈现出良好的利用前景。黄河鲶在鱼类种质资源相对匮乏的黄河流域是一种难得的具有很大开发利用潜力的地方特色鱼类种质资源。

由于黄河鲶鱼的雄鱼生长速度明显慢于雌鱼且性成熟后精液较少，在生产中大规模进行人工繁育时往往因为精液不够而影响人工繁育规模。近年来，由于黄河鲶鱼养殖规模的不断扩大及人工繁殖的需要，通过低温冷冻保存技术将黄河鲶雄鱼的精液进行保存，对于优化人工繁育和苗种生产技术工艺、提高人工繁育规模具有重要意义，但是低温冷冻保存精液稀释液成本较高，而且在实际应用中发现，精液稀释液现配现用受精率更高。本发明以黄河鲶鱼为研究对象，以提高鲶鱼受精率为目的，采用不同浓度葡萄糖溶液对黄河鲶鱼的精子活力进行实验观察，找到最适合受精的精液稀释液浓度，确保精子具有最大活力，提高受精率，为黄河鲶鱼规模化人工繁殖提供基础、丰富鲶科鱼类精子生物学内容。

发明内容

本发明的目的在于提供一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液及其制备方法，以解决大规模人工繁育黄河鲶时往往因为精液不够而影响人工繁育规模的问题。

为了解决以上问题，本发明采取的技术方案是：

一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液，包括鲶雄鱼精液、水，所述鲶雄鱼精液与水以1∶1的比例混合激活，激活后的精液与0.6％～0.8％浓度的葡萄糖溶液以1∶10的比例稀释。

进一步地，所述葡萄糖溶液为0.8％浓度的葡萄糖溶液。

进一步地，所述水为过滤暴气增氧后的黄河上游兰州段黄河水。

进一步地，一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：配置0.8％浓度的葡萄糖作为等渗液；

步骤2：采集黄河鲶雄鱼的精液；

步骤3：步骤2采集的精液与黄河水比例为1∶1进行混合激活；

步骤4：用步骤3激活后的精液与0.8％浓度的葡萄糖溶液以1∶10的比例进行稀释保存。

进一步地，所述步骤1采集黄河鲶雄鱼的精液方法为：采精前，停止投喂饲料，采精时，擦干鲶雄鱼腹部，用拇指和食指沿腹部从前向后轻轻挤压，先将前端精液及尿液弃掉，然后将精液接到干燥的培养皿中遮光备用。

本发明的有益效果如下：

本发明提供的这种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液，以0.6％～0.8％浓度葡萄糖溶液作为等渗液时，精子激烈运动时间长，精子寿命也延长。

以0.8％浓度葡萄糖溶液作为等渗液时，精子激烈运动时间最长，精子寿命也最长。

黄河鲶精子，先用黄河水以1∶1的比例激活，之后再用0.8％的葡萄糖作为等渗液处理，精子激烈运动时间明显高于只用等渗液处理的精子激烈运动时间，是因为添加黄河水后降低了外界环境渗透压，延长了精子激烈运动时间，表明了等渗液的渗透压处在最高点浓度与精子死亡浓度之间，是一种接近于精子保存液的渗透压溶液，而先滴加黄河水后加等渗液的处理中，精子活力高于先加等渗液后加黄河水的处理，采用此方法延长了精子快速运动时间，增加了精卵相遇的机会，有利于受精率的提高，受精率可达85％，孵化率可达83％，比精液原液的受精率高。

具体实施方式

下面通过具体实验对本发明作进一步说明。

材料与方法

1.1试验材料

黄河鲶鱼保种场培育的4龄黄河鲶成熟雄鱼。

1.2试验方法

1.2.1精液采集

挑选健壮黄河鲶雄鱼暂养于水池中，期间停止投喂饲料，采精时，擦干鲶雄鱼腹部，用拇指和食指沿腹部从前向后轻轻挤压，先将前端精液及尿液弃掉，然后将精液接到干燥的培养皿中遮光备用。

1.2.2精子活动能力观察

将载玻片置于16×40倍显微镜下，用吸管分别吸入以下溶液1滴于载玻片上：(1)黄河水(经过滤暴气增氧处理的黄河上游兰州段黄河水)；(2)0.2％葡萄糖溶液；(3)0.4％葡萄糖溶液；(4)0.6％葡萄糖溶液；(5)0.8％葡萄糖溶液；(6)1.0％葡萄糖溶液；(7)1.2％葡萄糖溶液；(8)生理盐水；(9)纯净水；(10)蒸馏水；

然后用解剖针挑取精液依次与载玻片上的溶液混合，通过显微镜观察精子的活动。计时从混合时开始，观察以一个视野为准，精子活动等级参照吴景贵之标准：激烈运动时间是从精液与溶液混合开始，视野中只见到激烈翻动的黑点，看不清精子的形态和运动路线；缓慢运动时间是从能分辨出精子个体形态和运动路线，到失去前进的运动能力为止的运动状态；摇尾运动时间是精子基本上只在原地做微弱摇尾运动，直到停止摆动。

以视野中70％精子由前一运动状态转为另一运动状态，即认定为该批精子前一运动阶段终结和后一运动阶段的开始，视野中95％的精子停止活动为摇尾运动的结束。

1.3数据统计与分析

所有采集数据均采用Excel软件进行整理，再用SPSS 17.0对数据进行One wayANOVA方法方差分析。差异显著时用Duncan′s法作多重比较，显著水平为(P＜0.05)，结果用(平均数±标准差)表示。

结果与分析

2.1不同浓度葡萄糖溶液、不同的水中黄河鲶精子激烈运动的时间比较

注：1：同一列数值肩注不同字母表示差异显著(P＜0.05)，肩注相同字母为差异不显著(P＞0.05)；2：养殖用水的本底矿化度为386.5mg/L。

由表1可见，在黄河水中，精子激烈运动时间为(19.85±4.81)s，在葡萄糖浓度0.2％～0.8％的范围内，随着葡萄糖浓度的升高，精子激烈运动时间相应延长，在0.8％浓度葡萄糖中，精子激烈运动时间为(36.20±2.79)s，随着浓度继续升高，精子激烈运动时间缩短，且在0.8％葡萄糖中与0.6％葡萄糖中差异不显著，而0.8％葡萄糖中与1.0％葡萄糖中差异极显著，说明葡萄糖浓度在0.8％时精子激烈运动时间最长，随着葡萄糖浓度的继续升高，精子激烈运动的时间逐渐降低。

葡萄糖浓度在0.2％～0.8％的范围内，随着葡萄糖浓度的升高，精子寿命同样延长，在0.8％浓度时达到最大为(91.32±6.27)s，然后随着葡萄糖浓度的继续升高，精子寿命显著缩短。

由此可以得出：以0.6％～0.8％浓度葡萄糖溶液作为等渗液时，精子激烈运动时间长，精子寿命也同样延长，尤其是以0.8％浓度葡萄糖溶液作为等渗液时，精子激烈运动时间最长，精子寿命也最长。

以下再以不同处理方法进行实验，得出的实验数据：

2.2不同处理方法黄河鲶精子激烈运动时间比较

表2：不同处理方法黄河鲶精子激烈运动时间比较

注：1：同一列数值肩注不同字母表示差异显著(P＜0.05)，肩注相同字母为差异不显著(P＞0.05)；2：黄河水的本底矿化度为386.5mg/L；

由表2可知，第三种处理方法与第四种处理方法相比，第三种较第四种处理方式精子激烈运动时间延长，精子寿命也更长，第三种处理方式的精子寿命时间为(96.16±4.62)s。

精液原液和稀释液的比较

由表3可知，利用表2中的第三种方法获得的精液稀释液，受精率和孵化率均高于精液原液处理组，其受精率、孵化率可以达到85％、83％。

讨论

3.1不同浓度葡萄糖溶液、不同的水中黄河鲶精子激烈运动的时间比较

在0.2％～0.8％浓度葡萄糖溶液中，黄河鲶鱼的精子激烈运动时间随着葡萄糖浓度升高而逐渐延长，在0.8％浓度时达到最大，然后随着葡萄糖浓度的继续升高，精子激烈运动时间则逐渐降低；黄河鲶鱼的精子寿命时间也是随着葡萄糖的浓度升高而逐渐延长，在0.8％浓度时达到最大，然后随着葡萄糖浓度的继续升高，精子寿命时间则逐渐降低。因此可以得出：在0.8％浓度的葡萄糖中，精子激烈运动时间和精子寿命时间均是最长的。

不同浓度等渗液中黄河鲶精子激烈运动的时间比较

从本研究看，不同浓度葡萄糖溶液对黄河鲶鱼精子的活力与寿命的影响是不同的，而且有非常显著的效果。在低浓度的葡萄糖溶液中，黄河鲶鱼精子的活力逐渐加强，在0.8％的葡萄糖溶液中，精子活力达到最高。在高于0.8％浓度的溶液中，精子的活力受到抑制。可以得出精子在0.8％时达到最高，表明0.8％的葡萄糖浓度接近黄河鲶鱼精浆的渗透压。

在人工授精过程中，等渗液是用来清洗掉卵子中破卵所流出的卵黄物质，这些卵质在受精过程中能够降低精子与卵结合的机会，降低受精率。等渗液是一种渗透压高于孵化用水的溶液。黄河鲶精子，先用黄河水处理激活，之后再用0.8％的葡萄糖作为等渗液处理，精子激烈运动时间明显高于只用等渗液处理的精子激烈运动时间，认为是添加黄河水后降低了外界环境渗透压，延长了精子激烈运动时间。表明了等渗液的渗透压处在最高点浓度与精子死亡浓度之间，是一种接近于精子保存液的渗透压溶液，而先滴加黄河水后加等渗液的处理中，精子活力高于先加等渗液后加黄河水的处理。

结论

黄河鲶鱼精子活力在浓度为0.2％～0.8％葡萄糖溶液中随浓度的增加运动时间逐渐延长，若葡萄糖溶液的浓度继续增加则精子激烈运动时间逐渐缩短，相应的精子寿命也逐渐缩短；认为在黄河鲶鱼的人工授精过程中，应该采用0.8％浓度的葡萄糖作为等渗液，具体方法是精液与黄河水比例为1∶1先进行混合激活，激活后的精液与0.8％浓度的葡萄糖溶液以1∶10的比例再进行稀释，然后进行人工授精。采用此方法延长了精子快速运动时间，增加了精卵相遇的机会，有利于受精率的提高，受精率可达85％，孵化率可达83％，比精液原液的受精率高。

一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液的制备方法，具体操作步骤如下：

步骤1：配置0.8％浓度的葡萄糖作为等渗液；

步骤2：采集黄河鲶雄鱼的精液：挑选健壮黄河鲶雄鱼暂养于水池中，期间停止投喂饲料，采精时，擦干鲶雄鱼腹部，用拇指和食指沿腹部从前向后轻轻挤压，先将前端精液及尿液弃掉，然后将精液接到干燥的培养皿中遮光备用；

步骤3：步骤2采集的精液与黄河水比例为1∶1进行混合激活；

步骤4：用步骤3激活后的精液与0.8％浓度的葡萄糖溶液以1∶10的比例进行稀释保存。

Claims (5)

1.一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液，其特征在于：包括鲶雄鱼精液、水，所述鲶雄鱼精液与水以1∶1的比例混合激活，激活后的精液与0.6％～0.8％浓度的葡萄糖溶液以1∶10的比例稀释。

2.根据权利要求1所述的一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液，其特征在于：所述葡萄糖溶液为0.8％浓度的葡萄糖溶液。

3.根据权利要求2所述的一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液，其特征在于：所述水为过滤暴气增氧后的黄河上游兰州段黄河水。

4.一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1：配置0.8％浓度的葡萄糖作为等渗液；

步骤2：采集黄河鲶雄鱼的精液；

步骤3：步骤2采集的精液与黄河水比例为1∶1进行混合激活；

步骤4：用步骤3激活后的精液与0.8％浓度的葡萄糖溶液以1∶10的比例进行稀释保存。

5.根据权利要求4所述的一种现配现用的提高黄河鲶鱼受精率的精液稀释液的制备方法，其特征在于：所述步骤1采集黄河鲶雄鱼的精液方法为：采精前，停止投喂饲料，采精时，擦干鲶雄鱼腹部，用拇指和食指沿腹部从前向后轻轻挤压，先将前端精液及尿液弃掉，然后将精液接到干燥的培养皿中遮光备用。