CN115053836B - 一种草鱼与黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法及三倍体草鲴杂交鱼的培育方法 - Google Patents
一种草鱼与黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法及三倍体草鲴杂交鱼的培育方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种草鱼与黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法，包括如下步骤：以草鱼为母本，黄尾密鲴为父本，进行人工催产，采用两针注射法对母本草鱼进行注射，父本黄尾密鲴进行一针注射，人工催产后获得的卵子与精子进行人工干法授精，然后流水孵化受精卵，孵化成功后经检测即获得三倍体草鲴杂交鱼。还公开了三倍体草鲴的培育方法。本发明解决了草鱼和黄尾密鲴之间远缘杂交困难的问题，催产效率高，不仅整合了草鱼与黄尾密鲴的优良性状，丰富了市场鱼类品种，而且为优良品种的选育奠定了良好基础，为后续的新型多倍体鱼的选育提供了宝贵的资源，在生物进化和鱼类遗传有种具有重要的生物学意义。
Description
技术领域
本发明属于草鱼和黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法技术领域，特别涉及一种草鱼与黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法及三倍体草鲴杂交鱼的培育方法。
背景技术
黄尾密鲴(Xenocypris davidi Bleeker)俗称黄尾、黄片、黄姑子、黄瓜鱼等，隶属于鲤科(Cyprinidae)鲴亚科(Xenocypri-ninae)鲴属(Xenocypris)，染色体数为48条，属底层鱼类，通常生活在江河、湖泊的中下层，尤其喜栖息于多水草、软泥底质的水域底层，是一种中小型淡水鱼类，在我国的长江、珠江、闽江及闽东南各溪流均有分布。由于其具有肉厚、质实、味道鲜美、营养价值高、易捕捞等特点，是水库、湖泊、池塘养殖的理想鱼类。它已成为当前水产养殖品种结构调整中首选的优良品种之一。草鱼(Ctenopharyngodon idellus)属鲤形目鲤科，雅罗鱼亚科，草鱼属，染色体数目为48条，草鱼具有生长快、饲料来源广、肉味鲜美，产量高等优点，但是近年来由于水质恶化、集约化养殖模式的发展等原因导致草鱼病害严重,死亡率增高,加之很多养殖户都养殖进行自繁，导致其种质资源越来越差，给养殖户带来巨大的经济损失。本发明专利通过草鱼与黄尾密鲴进行远缘杂交获得了优质的三倍体杂交草鱼(草鲴杂交鱼)，一方面三倍体杂交草鱼具有很高的生长速率(性腺发育的能量转移到生长)，在外形特征上，三倍体草鲴与草鱼相似，是一种改良草鱼，食性与草鱼同为草食性，另一方面由于三倍体不育，能够起到保护杂交草鱼的种质资源，不会污染自然界的其他种质资源，同时也可以有效保护三倍体杂交草鱼的知识产权。而黄尾密鲴鱼的饵料特殊，不与主养经济鱼类争食，鱼的生长速度快，且群体生殖力高，适应性广，生命力强，我们可以通过远缘杂交来整合它们的优点。远缘杂交是指种间、属间乃至亲缘关系更远的生物类型的杂交，被认为是促进动植物适应性辐射演化和物种形成的有效方式。远缘杂交可以使基因组从一个物种转移到另一个物种，从而导致杂交后代的表现型和基因型发生改变，是创制优良鱼类的重要方法。在基因型上，远缘杂交能导致后代在染色体组水平上的改变，从而产生三倍体和四倍体后代。在表现型方面，远缘杂交能整合双亲的优点，使杂交后代在外形、生长速度、存活率及抗病能力等方面均表现出杂种优势。这种杂交方法能创制大量的不同的三倍体鱼和四倍体鱼，以及为后续的新型多倍体鱼的选育提供了宝贵的种质资源,在生物进化和鱼类遗传育种上具有重要的生物学意义。由于在遗传结构方面与其亲本相比都发生了许多变化，因此它们在进化上更为具有潜力和优势。
然而，远缘杂交领域面临的长期问题是选育后代存活率低、杂交优势不明显，难以形成可育品系。因此，如何利用和改进现有的生物技术方法，在现有的鱼类品种中挑选合适的亲本鱼进行远缘杂交，从而对其进行遗传改良，以获得性状更为优良、品种更为丰富和对遗传育种研究更加有意义的新型鱼类，就成为了本领域技术人员长期面临和需要解决的问题。
与其他品种的鱼相比较，草鱼(Ctenopharyngodon idellus)草食性，体长形，吻略钝，下咽齿2行，呈梳形。背鳍无硬刺，外缘平直，位于腹鳍的上方，起点至尾鳍基的距离较至吻端为近；栖息于平原地区的江河湖泊，一般喜居于水的中下层和近岸多水草区域。性情活泼，游泳迅速，常成群觅食。草鱼具有草食性，能适应较肥沃的水体环境，具有抗逆性强，肉质好，氨基酸含量丰富等优良特征。
黄尾密鲴(Xenocypris davidi Bleeker)生活在水体的中下层，以附生硅藻、水底腐殖质和高等水生植物的碎屑为食，广泛分布于长江、钱塘江、闽江等水系。体形圆长，肉质肥实，内脏少，该鱼肉质细嫩、营养丰富，并且易养、病少。其生活空间和食性，与其他的养殖鱼能和谐共生，生长速度快于其黄尾密鲴鱼，是主养和混养的理想品种，也是天然水域增殖放流的优良品种。如果将草鱼与黄尾密鲴进行远缘杂交，则有望培育出集两种亲本的优点于一身的杂交后代鱼。但是，草鱼与黄尾密鲴，不是生活在同一水域，繁殖周期不同步，生活水体环境不一样，通过常规方法难以顺利获得杂交后代。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供草鱼与黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法及三倍体草鲴杂交鱼的培育方法。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：
一种草鱼与黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法，包括如下步骤：以草鱼为母本，黄尾密鲴为父本，进行人工催产，采用两针注射法对母本草鱼进行注射，第一针注射剂量：母本草鱼用脑垂体0.5～1mg/kg，LRH-A 10～15μg/kg；隔12h，进行第二次注射，第二次注射剂量：母本草鱼用促黄体素释放激素类似物8～10μg/kg、脑垂体1～2mg/kg，多潘立酮5mg/kg；父本黄尾密鲴进行一针注射，注射剂量：绒毛膜促性腺激素为800-1000unit/kg，促黄体素释放激素类似物6～8μg/kg；人工催产后获得的卵子与精子进行人工干法授精，然后流水孵化受精卵，孵化成功后经检测即获得三倍体草鲴杂交鱼。
促黄体素释放激素类似物(LRH-A)能够促使亲鱼发情产卵，还可以加快性腺成熟。通过长期系统的摸索，本发明催产草鱼时采用两针注射法催产，有利于获得大量优质的卵子，同时对黄尾密鲴的催产剂量进行了调整，有利于达到最大催产率，提高杂交后代的孵化率和存活率。
上述的方法，优选的，在进行人工催产之前，当年的3月上旬，选择腹部柔软且富有弹性、无病无伤、体征良好的雌性草鱼和雄性黄尾密鲴分别作为母本亲鱼和父本亲鱼，在放有母本亲鱼的草鱼池中，按照母本草鱼与父本草鱼为3∶1的数量比例放入母本亲鱼池，进行专池培育，在催产前2个月，每隔1-3天用流水刺激，并且投喂足量的鲜嫩的青草，尽量不投喂饲料，促进性腺发育成熟。
饲养雄性黄尾密鲴的水质指标如下：pH为7.0～7.4，硬度＜15度，铁离子浓度在3×10-7mol/L以下，硫酸根离子浓度＜1.5×10-5mol/L，氯离子浓度＜1.9×10-5mol/L，不含游离氯和其他有毒有害物质，溶氧量＞5×10-6mg/L，氨浓度＜1×10-7mg/L，亚硝酸盐浓度＜1×10-7mol/L，硝酸盐浓度在5.5×10-6mg/L～6.0×10-6mg/L，不含硫化氢；饲养雌性草鱼的水质指标如下：pH为6.5～8.5，溶氧量≥4mg/L，氨氮含量＜0.025mg/L，生化需氧量＜5mg/L。
优选的，在当年的5月下旬到6月上旬，当水温稳定在22℃-25℃时，从亲鱼中挑选出腹部膨大、松软且富有弹性的雌性草鱼作为母本，和轻挤压腹部便能挤出乳白色精液的雄性黄尾密鲴作为父本，进行人工催产。
优选的，所述人工催产时，对母本亲鱼和父本亲鱼的胸鳍基部无鳞处腹腔进行注射，对母本草鱼进行两针注射法，父本黄尾密鲴采用一针注射。
优选的，所述人工催产时，对母本亲鱼和父本亲鱼注射混合催产剂之后，草鱼各按照雌雄数量比2-3∶1放入池塘，黄尾密鲴按照雌雄数量比3-5∶1放入池塘，草鱼和黄尾密鲴放入池塘等待其产卵和产精；所述池塘的水面面积为12-15m2。
优选的，所述人工干法授精的具体操作包括如下步骤：擦去父本亲鱼和母本亲鱼体表覆盖的水，将精液和卵子挤入干燥受精盆中，同时用羽毛快速搅拌，避免阳光直射，搅拌2～3min后，均匀泼洒在网片上，进行流水孵化。
优选的，所述流水孵化受精卵时控制水温在22～25℃。本发明采用新型的鱼类浮性卵孵化装置来流水孵化，流水孵化优点是：1)不断有活水补充，保证水质和氧气需求>5mg/L；2)鱼苗出膜后，便于及时清除卵膜，防止污染水质；3)孵化的幼苗生命力更强，成活率高。
优选的，所述草鱼和黄尾密鲴的杂交后代经过检测筛选后，得到三倍体草鲴，所述检测筛选的方法包括外形测量、流式细胞DNA含量法、血涂片法、血细胞形态鉴定法和染色体鉴定。
基于一个总的发明构思，本发明还提供一种上述方法得到的三倍体草鲴杂交鱼的培育方法，流水孵化得到的三倍体草鲴杂交鱼苗在孵化槽中继续培养2-4天，待其出现腰点后先转入含有流水孵化的木方框培育2-3天，并往里面撒入蛋黄，待其长粗之后再转入预先培肥的池塘中进行精细饲养，鱼苗下池后每天泼洒豆浆1-2次，并放入圆藻或丰年虫，待鱼苗长到5-8cm长后开始喂饲料粉。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1、本发明的方法，解决了草鱼和黄尾密鲴之间远缘杂交困难的问题，本发明采用人工催产的方式并选用促黄体素释放激素类似物以及脑垂体作为混合催产剂，以合适的剂量注入亲鱼体内进行催产，孵化率明显增高，这样对于筛选各种杂交品种后代提供了数量上的最大可能，不仅整合了草鱼与黄尾密鲴的优良性状，丰富了市场鱼类品种，而且为优良品种的选育奠定了良好基础，催产效率高，为后续的新型多倍体鱼的选育提供了宝贵的资源，在生物进化和鱼类遗传有种具有重要的生物学意义。
2、本发明的杂交后代三倍体草鲴，相较于亲本，存在明显的杂交特征，体型像草鱼，整合了双亲的优良特性，不仅食用价值有所提高，而且生长速度快，肉质细嫩，抗病性明显增强。
3、本发明的三倍体草鲴具有草食性的特征，增加了草食性鱼类的种质资源，草食性鱼类由于饲料来源于自然界，而且属于植物性蛋白来源，其绿色生态养殖价值越来越得到大家重视，在生产上具有重要的应用价值。
4、本发明的杂交方法得到了三倍体草鲴，从遗传稳定程度上看，杂交后代中亲本染色体组分离能够有效降低遗传物质不兼容现象，提高杂交后代的存活率；本发明的杂交方法为大规模获得草鲴提供了一种手段，丰富了其它杂交组合的一个亲本来源；同时，因为三倍体具有不育性，利用三倍体草鲴杂交鱼在江河湖泊中养殖，不会污染江河湖泊的种质资源。
5、本发明三倍体草鲴的培育方法，操作简单，鱼苗的存活率高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为草鱼(♀)和黄尾密鲴(♂)杂交后代中三倍体草鲴的外形图；
图2为草鱼(♀)和黄尾密鲴(♂)杂交后代中三倍体草鲴DNA含量图；
图3为草鱼(♀)和黄尾密鲴(♂)杂交后代中三倍体草鲴染色体图；
图4为草鱼(♀)和黄尾密鲴(♂)杂交后代中三倍体草鲴血细胞图；
图5为草鱼(♀)和黄尾密鲴(♂)杂交后代中三倍体草鲴的不同时期培育图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明做更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体实施例。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
实施例1：
一种草鱼与黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法，包括如下步骤：
(1)在当年的3月初，拉网打鱼，从中挑选性成熟特征明显、无病无伤、体征良好的雌性草鱼和雄性黄尾密鲴作为远缘杂交的亲本，置于专门的池子中进行培育，并在培育期间，时刻注意保持水体水质良好、水中含氧量充足，保证繁殖期的亲本具有良好的状态，做好饲养管理工作，在繁殖期前一个月，每天流水来刺激，以促进亲鱼性腺发育成熟；
(2)在当年的5月下旬到6月上旬，当水温稳定在20℃以上，以22℃-25℃最佳，从步骤(1)得到的亲鱼中挑选出腹部膨大、松软且有弹性的雌性草鱼作为母本，和轻挤压腹部便能挤出乳白色精液的雄性黄尾密鲴作为父本，进行人工催产，采用两针注射法对母本亲鱼注射催产剂进行催产，第一针注射剂量：母本草鱼用脑垂体0.5～1mg/kg，促黄体素释放激素类似物10～15μg/kg；隔12h，进行第二次注射，第二次注射剂量：母本草鱼用促黄体素释放激素类似物8～10μg/kg、脑垂体1～2mg/kg，多潘立酮5mg/kg；父本黄尾密鲴进行一针注射，绒毛膜促性腺激素为800-1000unit/kg，促黄体素释放激素类似物6～8μg/kg；等注射完毕后，将母本亲鱼和父本亲鱼按照不同比例数量放在同一产卵池内，人工观察亲鱼产卵，一旦发现鱼有少量浮水现象，立即拉网检查，轻轻挤压母本腹部，有卵粒源源流出，同时选出相应父本，尽快准备人工授精。
(3)在步骤(2)得到的母本亲鱼和父本亲鱼中，挑选产卵顺利的母本亲鱼和产精量大父本亲鱼进行人工干法授精，授精时，要尽量保证亲本体表不覆盖大量水体，将精、卵挤入干燥受精盆中，同时用羽毛快速搅拌，避免阳光直射，搅拌2～3min后，均匀泼洒在水温为22℃左右的孵化槽中继续进行流水孵化，得到草鱼和黄尾密鲴的杂交后代鱼苗。
(4)将孵化培养得到后的杂交后代鱼苗置于孵化槽中继续培养3天，待所述杂交后代鱼苗出现腰点后，转入事先用豆浆已培肥的水泥池中饲养，放苗后每天向水泥池中泼洒豆浆两次，放入圆藻，以保证鱼苗的营养供给，待鱼苗长到5-8cm长后开始喂饲料粉；然后采用外形测量培养法、流式细胞DNA含量法、血涂片法、血细胞形态鉴定法和染色体形态制片法对饲养的后代进行检测筛分，得到三倍体草鲴的外形见图1。
将上述的杂交后代饲养3-4个月左右后，随即检测杂交后代的相关指标，并与母本草鱼和父本黄尾密鲴进行比较，结果如表1所示：
表1：草鱼、黄尾密鲴与草鲴的可数性状比较
| 鱼品种 | 侧线鳞 | 侧线上鳞 | 侧线下鳞 | 背鳍条 | 腹鳍条 | 臀鳍条 |
| 草鱼 | 40-43 | 6-8 | 4-6 | Ⅲ，6-7 | 7-8 | Ⅲ，8-9 |
| 黄尾密鲴 | 60-68 | 10-12 | 6-8 | Ⅲ，7-9 | 15-18 | Ⅲ，11-13 |
| 草鲴 | 50-54 | 9-11 | 4-6 | Ⅲ，8-10 | 8-10 | Ⅲ，9-11 |
表2：草鱼、黄尾密鲴与草鲴的可量性状比较
| 鱼品种 | 全长/体长 | 体长/体高 | 体长/头长 | 头长/头高 | 尾柄长/尾柄高 | 头高/体高 |
| 草鱼 | 1.25±0.02 | 4.26±0.16 | 3.71±0.99 | 1.30±0.04 | 1.10±0.11 | 0.70±0.09 |
| 黄尾密鲴 | 1.19±0.04 | 4.03±0.16 | 4.71±0.31 | 1.21±0.03 | 1.38±0.18 | 0.71±0.13 |
| 草鲴 | 1.24±0.02 | 3.97±0.18 | 4.11±0.57 | 1.25±0.04 | 1.36±0.12 | 0.76±0.12 |
从表2的可量性状发现，三倍体草鲴的可量性状都介于母本草鱼和父本黄尾密鲴之间，具有明显的杂交特征。
表3：不同催产药物组合对草鱼的催产效率比较分析
通过表3比较分析得出，本发明的催产药物组合效果最好。
草鱼与黄尾密鲴杂交后代经过检测筛选：
以母本草鱼和父本黄尾密鲴作对照，用流式细胞仪测量三倍体草鲴，见图2，其DNA含量为74.40，从而说明杂交后代为三倍体鱼。为了鉴定这几种鱼的细胞核差异形态，制备了血涂片，通过比较，发现三倍体草鲴细胞核明显比二倍体黄尾密鲴的细胞核大(P<0.05),在其血涂片的样品中，能够看到明显的亚铃型状的细胞核。再用外周血细胞制片法对母本草鱼和父本黄尾密鲴的杂交后代体细胞染色体数目进行检测，见图3，通过计数发现杂交后代的染色体数目都为72条，从而证明杂交后代是三倍体。
流式细胞含量DNA测定的步骤：先用络合碘纱布将实验鱼尾静脉部位擦拭干净，用经抗凝剂润湿的1mL一次性注射器从实验鱼尾静脉血管部采血约0.2mL，注入Eppendorf管中，用移液枪将被测样品加入到新的Eppendorf管中并将其稀释至微红色，然后再加入500微升细胞核提取液DAPI-A，避光条件下，反应10-15分钟。然后将样品导入20μm尼龙滤器中过滤，最后上机检测。
血涂片法步骤为：用棉签蘸取75％酒精擦拭鱼尾静脉部位，用经抗凝剂润湿的1mL一次性注射器取0.5mL血液，注入到无菌干燥并且装有抗凝剂的Eppendorf管中，用移液枪取10微升血液滴于玻片的一侧。取一个新的无菌玻片成45度方向压在血液上迅速推到载玻片的一端，使血滴均匀的铺在玻片上成一直线。经空气中干燥后，滴加瑞氏染色液(6-8滴)，使涂片被染色液覆盖；染色1分钟后，再加入磷酸缓冲液继续染10分钟，最后用流水轻轻冲洗载玻片背面，空气中自然晾干后，镜检，见图4。
细胞染色体倍性检测法：在超净工作台中配制培养基，100mL培养基包含以下成分：84mL RPMI-1640，15mL小牛血清，2支PHA，1mL 0.1％肝素钠，以7.5％NaHCO3(无菌)或1Nacl调pH至7.2～7.4。用注射器吸取少量灭菌肝素钠溶液，于用碘酒消毒后的实验鱼尾部静脉取血。按每10mL培养液中加入约0.2mL抗凝血的标准将抗凝血加入培养液中，于24℃5％二氧化碳浓度的培养箱中培养68～72小时，培养期间，定期轻轻摇匀，以使细胞充分接触培养基。终止培养前24小时，在培养液中用1mL注射器滴加入10μg/mL的秋水仙碱，使其终浓度为0.05～0.07μg/mL。以上步骤均需无菌操作。取杂交鱼的培养物经处理后转入无菌洁净的10mL离心管中，以1500rpm离心5分钟，弃上清液。向离心管中加入低渗液5mL，用吸管轻轻吹打使其混匀，然后加至9mL后，低渗45～60分钟。加入1mL固定液(甲醇：冰醋酸约3:1)，用吸管轻轻吹打使其混匀1500rpm离心5分钟，弃上清液。加入5mL固定液，轻轻混匀，静置10分钟后1000rpm离心5分钟，弃上清液终止培养前24小时，在培养液中用1mL注射器滴加入10μg/mL的秋水仙碱，使终浓度为0.05～0.07μg/mL。以上步骤均需无菌操作。最后根据细胞数量加入适量固定液制成细胞悬液(一般为1～2mL)后，然后吸取细胞悬液从50cm高处滴片，平直端起，用酒精灯外焰缓慢烘干。再Giemsa染液染色40～60分钟，细流水冲洗载玻片背面洗去染液，自然干燥后镜检、拍照。
草鱼与黄尾密鲴杂交后代三倍体草鲴杂交鱼的培育方法：
将流水孵化得到的三倍体草鲴杂交鱼苗在孵化槽中继续培养2-4天，待其出现腰点后先转入含有流水孵化的木方框培育2-3天，并往里面撒入蛋黄，待其长粗之后再转入预先培肥的池塘中进行精细饲养，鱼苗下池后每天泼洒豆浆1-2次，并放入圆藻或丰年虫，待鱼苗长到5-8cm长后开始喂饲料粉。具体细分为以下三个时期进行培育(如图5)：
1.鱼苗初期培育：对于刚刚孵化出来的杂交鱼苗，体长0.2-0.3cm,靠吸收体内卵黄囊中的营养生活。此时的鱼苗仍然在原孵化槽中进行培育，此时流水水速减弱，提高鱼苗的存活率。
2.鱼苗中期培育：孵出后2到3天，卵黄囊中的营养物质被吸收殆尽，鱼的消化系统已初步发育完全，鱼鳔中充满气体，鱼苗开始向各方向游动，此时应将鱼苗转移到木箱中培育，有利于鱼苗跟水面接触，同时木框投喂蛋黄和丰年虫有利于鱼苗吸食，不会造成浪费，另外这样使水层比较浅，有利于鱼苗粘附，有利于鱼苗生长。
3.鱼苗后期培育：鱼苗长到一定大小，集中投喂有利于生长均一性，让其饱食后再集中下到预先培肥的池塘中，有利于鱼苗生长，不会出现大小不一的情况，这样的鱼苗存活率更高。
本发明的方法，解决了草鱼和黄尾密鲴之间远缘杂交困难的问题，本发明采用人工催产的方式并选用促黄体素释放激素类似物及脑垂体作为混合催产剂，以合适的剂量注入亲鱼腹腔内进行催产，孵化率明显增高，这样对于筛选各种杂交品种后代提供了数量上的最大可能，不仅整合了草鱼与黄尾密鲴的优良性状，丰富了市场鱼类品种，而且为优良品种的选育奠定了良好基础，在鱼类遗传有种具有重要的生物学意义。本发明方法获得的杂交鱼三倍体草鲴，是一种新型的三倍体鱼，整合了亲本的优良性状，不仅食用价值很高，而且生长速度快，抗病性强，耐低氧。本发明的三倍体草鲴的培育方法，操作简单，鱼苗的存活率高。
Claims (3)
1.一种草鱼与黄尾密鲴亚科间远缘杂交的方法，其特征在于，包括如下步骤：以草鱼为母本，黄尾密鲴为父本，进行人工催产，采用两针注射法对母本草鱼进行注射，第一针注射剂量：母本草鱼用脑垂体0.5～1mg/kg，促黄体素释放激素类似物10～15μg/kg；隔12h，进行第二次注射，第二次注射剂量：母本草鱼用促黄体素释放激素类似物8～10μg/kg、脑垂体1～2mg/kg，多潘立酮5mg/kg；父本黄尾密鲴进行一针注射，注射剂量：绒毛膜促性腺激素为800-1000unit/kg，促黄体素释放激素类似物6～8μg/kg；人工催产后获得的卵子与精子进行人工干法授精，然后流水孵化受精卵，孵化成功后经检测即获得三倍体草鲴杂交鱼；
在进行人工催产之前，当年的3月上旬，选择腹部柔软且富有弹性、无病无伤、体征良好的雌性草鱼和雄性黄尾密鲴分别作为母本亲鱼和父本亲鱼，在放有母本亲鱼的草鱼池中，按照母本草鱼与父本草鱼为3：1的数量比例放入母本草鱼池，进行专池培育，在催产前2个月，每隔1-3天用流水刺激，并且投喂足量鲜嫩的青草，促进性腺发育成熟；
在当年的5月下旬到6月上旬，当水温稳定在22℃-25℃时，从亲鱼中挑选出腹部膨大、松软且富有弹性的雌性草鱼作为母本，和轻挤压腹部便能挤出乳白色精液的雄性黄尾密鲴作为父本，进行人工催产；
所述人工催产时，对母本亲鱼和父本亲鱼的胸鳍基部无鳞处腹腔进行注射，对母本草鱼进行两针注射法，父本黄尾密鲴采用一针注射；
所述人工催产时，对母本亲鱼和父本亲鱼注射混合催产剂之后，草鱼各按照雌雄数量比2-3：1放入池塘，黄尾密鲴按照雌雄数量比3-5：1放入池塘，草鱼和黄尾密鲴放入池塘等待其产卵和产精；所述池塘的水面面积为12-15m2；
所述人工干法授精的具体操作包括如下步骤：擦去父本亲鱼和母本亲鱼体表覆盖的水，将精、卵挤入干燥受精盆中，同时用羽毛快速搅拌，避免阳光直射，搅拌2～3min后，均匀泼洒在网片上，进行流水孵化；
所述流水孵化受精卵时控制水温在22℃～25℃。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述草鱼和黄尾密鲴的杂交后代经过检测筛选后，得到三倍体草鲴，所述检测筛选的方法包括外形测量、流式细胞DNA含量法、血涂片法、血细胞形态鉴定法和染色体鉴定。
3.一种由权利要求1或2所述的方法得到的三倍体草鲴杂交鱼的培育方法，其特征在于，将所述三倍体草鲴杂交鱼苗在孵化槽中继续培养2-4天，待其出现腰点后先转入含有流水孵化的木方框培育2-3天，并往里面撒入蛋黄，待其长粗之后再转入预先培肥的池塘中进行精细饲养，鱼苗下池后每天泼洒豆浆1-2次，并放入圆藻或丰年虫，待鱼苗长到5-8cm长后开始喂饲料粉。
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