CN1268202C - 中间球海胆与光棘球海胆杂交方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于包括如下步骤：取自然成熟中间球海胆及光棘球海胆个体并进行催产；分别取中间球海胆卵子及光棘球海胆精子；将中间球海胆卵子与光棘球海胆精子混合，光棘球海胆精子的数量为自交精子用量的20～40倍，待受精膜举起后，洗卵；孵化中间球海胆(♀)*光棘球海胆(♂)受精卵至产生浮游幼体；培育浮游幼体。合适的受精卵孵化条件以及合适的浮游幼体培育条件，使受精卵胚胎发育正常，海胆幼苗成活率高。整个杂交过程简单易行，同现有技术相比，节省了人工促熟期所用的大量人力物力，节省了时间。用该杂交方法获得的海胆幼苗长成后，杂交优势明显，养殖成活率高，完全符合海胆出口标准，具有很高的经济价值。
Description
技术领域：
本发明涉及一种中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，尤其是一种用中间球海胆卵子与光棘球海胆精子进行杂交的方法。
背景技术：
中间球海胆原本主要分布在日本的北方及俄罗斯的远东地区部分沿海，由于它生长快、经济价值较高，我国于1989年从日本引进了该养殖新品种，其成品海胆出口率高，每年为我国创收了大量的外汇。然而，近几年该品种海胆却在我国出现大批死亡现象，严重影响了产品的出口创汇，人们一直在寻求解决此问题的办法。光棘球海胆是西北太平洋沿岸水域较常见的经济海胆，虽然它的经济价值没有中间球海胆高，但却是我国北方沿海所产海胆中最重要的经济种类。为此，许多水产研究人员欲将中间球海胆与光棘球海胆进行杂交，以使杂交子一代海胆在满足出口要求的前提下，利用其杂交优势，提高养殖成活率。据《水产学报》(2000年6月)报道，现有的中间球海胆与光棘球海胆的杂交技术是首先在3月份选取未成熟中间球海胆亲体(中间球海胆的繁殖季节为9～11月)，进行人工培育。人工培育方法为入池后在自然海水(6℃)下培养3天，每天升温1℃，升至15℃后稳定10天左右，再将温度升至18℃恒温培养。同样，也需要选取光棘球海胆种胆，进行人工培育。当中间球海胆积温达到800℃、光棘球海胆积温达到1000℃时，用注射氯化钾方法对中间球海胆及光棘球海胆进行催产，分别取中间球海胆卵子及光棘球海胆精子，并用自交组精子用量10～20倍的光棘球海胆精子与中间球海胆卵子混合，进行受精。该杂交方法人工培育期长，不仅操作复杂，浪费较多的人力物力，而且，经过长期人工培育后的海胆卵子、精子质量下降，受精卵成活率低。《水产学报》同时也报道用此杂交方法产生的中间球海胆(♀)*光棘球海胆(♂)受精卵发育到囊胚期后胚胎滞育、死亡。
发明内容：
本发明的目的是为了解决现有技术中所存在的技术问题，提供一种受精率高、受精卵成活率高的中间球海胆与光棘球海胆杂交方法。
本发明的技术解决方案是：一种中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于包括如下步骤：
a.取自然成熟中间球海胆及光棘球海胆个体并进行催产；
b.分别取中间球海胆卵子及光棘球海胆精子；
c.将中间球海胆卵子与光棘球海胆精子混合，光棘球海胆精子的数量为自交精子用量的20～40倍，待受精膜举起后，洗卵；
d.孵化中间球海胆(♀)*光棘球海胆(♂)受精卵至产生浮游幼体；
e.培育浮游幼体。
所述的a步骤的催产可为注射氯化钾催产方法。
所述的b、c步骤为在16～18℃的海水中进行，从b步骤开始到c步骤的精卵混合完毕的完成时间为不大于1小时。
所述的d步骤为用16～18℃海水、1～2个/毫升的密度，微量充气孵化。
所述的e步骤为以16～18℃海水、0.1～0.8个/毫升密度、日换水1～2次、日投饵料0.6～6万细胞/毫升、微量充气、弱光光照进行培育。
其日换水1～2次可为每次换水1/3～2/3，饵料可为牟氏角毛藻、盐藻、角刺藻及湛江叉鞭金藻单一或混合饵料，弱光可为光照强度20～100lux。
本发明是直接采用自然成熟的海胆进行催产而取得中间球海胆卵子及光棘球海胆精子，并用数量为自交精子用量的20～40倍光棘球海胆精子与中间球海胆卵子混合进行受精，受精率高；合适的受精卵孵化条件以及合适的浮游幼体培育条件，使受精卵胚胎发育正常，海胆幼苗成活率高，试验结果见表1、2。整个杂交过程简单易行，同现有技术相比，节省了人工促熟期所用的大量人力物力，节省了时间。用该杂交方法获得的海胆幼苗长成后，完全符合海胆出口标准，具有很高的经济价值。
中间球海胆、光棘球海胆杂交及自交受精率 表1
| 组合 | 受精率(％) | 平均(％) | ||||||
| N*n | 100 | 99.5 | 99.7 | 99.8 | 99.6 | 99.7 | 97 | 99.3 |
| N*I | 5 | 0 | 2 | 0 | 4.1 | 0.7 | 1.5 | 1.9 |
| I*n | 46 | 48 | 67 | 36 | 55 | 37 | 41 | 47.1 |
| I*i | 99.6 | 99.5 | 99.7 | 99.4 | 100 | 99.7 | 99.1 | 99.6 |
注：N*n光棘球海胆自交；
N*I光棘球海胆卵子、中间球海胆精子杂交；
I*n中间球海胆卵子、光棘球海胆精子杂交；
I*i中间球海胆自交。
中间球海胆、光棘球海胆及其正反交的长腕幼虫特征 表2
| N*n | N*i | I*i | I*n | |
| 口后腕 | 长 | 长 | 短 | 长 |
| 口后针 | 单一、针状 | 单一、针状 | 单一、针状 | 单一、针状 |
| 骨针横肢 | 长、融合 | 中等、分离 | 短、分离 | 中等、分离 |
| 顶部形状 | 圆 | 中等 | 尖 | 中等 |
具体实施方式：
首先，在10月上中旬取自然成熟的中间球海胆及光棘球海胆个体，光棘球海胆种胆是在自然海区采捕，并尽量从温度较低的海水中采集，中间球海胆亲胆取自人工筏式养殖或底播增殖的成熟海胆。采集到成熟的海胆后，视壳径大小自海胆围口膜处注射浓度为0.5mol/l的KCl溶液，进行催产，光棘球海胆注射量为1～2毫升/个，中间球海胆0.5～1毫升/个。催产后将每个海胆的生殖孔朝下分别放在盛满海水的烧杯上，海水为16～18℃，使海胆将精卵排放在烧杯中，即分别取中间球海胆卵子及光棘球海胆精子；将数量为自交精子用量的20～40倍的光棘球海胆精子与中间球海胆卵子充分混合，从产卵、排精开始到人工受精，整个过程应在1小时之内操作完毕，待受精膜举起后，洗受精卵3次，以排除多余的光棘球海胆精子；得到受精卵后要对受精卵进行孵化，孵化条件为用16～18℃海水、1～2个/毫升的密度，微量充气孵化。当产生浮游幼体后再培育浮游幼体，以16～18℃海水、0.1～1个/毫升密度、日换水1～2次、日投饵料0.6～6万细胞/毫升、微量充气、弱光光照进行培育。其日换水1～2次可为每次换水1/3～2/3，饵料可为牟氏角毛藻、盐藻、角刺藻及湛江叉鞭金藻单一或混合饵料，弱光可为光照强度20～100lux。
Claims (7)
1.一种中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于包括如下步骤：
a.取自然成熟中间球海胆及光棘球海胆个体并进行催产；
b.分别取中间球海胆卵子及光棘球海胆精子；
c.将中间球海胆卵子与光棘球海胆精子混合，光棘球海胆精子的数量为自交精子用量的20～40倍，待受精膜举起后，洗卵；
d.孵化中间球海胆(♀)*光棘球海胆(♂)受精卵至产生浮游幼体；
e.培育浮游幼体。
2.根据权利要求1所述的中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于：所述的a步骤的催产为注射氯化钾方法。
3.根据权利要求1或2所述的中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于：所述的b、c步骤为在16～18℃的海水中进行，从b步骤开始到c步骤的精卵混合完毕的完成时间为不大于1小时。
4.根据权利要求1或2所述的中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于：所述的d步骤为用16～18℃海水、1～2个/毫升的密度，微量充气孵化。
5.根据权利要求1或2所述的中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于：所述的e步骤为以16～18℃海水、0.1～1个/毫升密度、日换水1～2次、日投饵料0.6～6万细胞/毫升、微量充气、弱光光照进行培育，弱光为光照强度20～100lux。
6.根据权利要求5所述的中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于：所述的日换水1～2次为每次换水1/3～2/3。
7.根据权利要求5所述的中间球海胆与光棘球海胆杂交方法，其特征在于：所述的饵料为牟氏角毛藻、盐藻、角刺藻及湛江叉鞭金藻单一或混合饵料。
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