CN113640414A - 一种唾液酸定量检测方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种唾液酸定量检测方法及其应用，所述唾液酸定量检测方法包括以下步骤：(1)将待测样品与阳离子树脂混合吸附，过滤得到滤液A；(2)将步骤(1)得到的滤液A与阴离子树脂混合吸附，之后过滤，将阴离子树脂用溶液浸泡，过滤得到滤液B；(3)将步骤(2)得到的滤液B进行液相色谱检测，根据标准曲线计算唾液酸含量；所述待测样品包括燕窝酸饮品、果冻或软糖。本发明提供的唾液酸定量检测方法检测速度快、准确度高，唾液酸回收率高。
Description
技术领域
本发明属于食品分析领域，具体涉及一种唾液酸定量检测方法及其应用，尤其涉及一种准确度高的唾液酸定量检测方法及其应用。
背景技术
N-乙酰神经氨酸又称唾液酸，俗称燕窝酸，是燕窝划分等级的关键指标之一。现有检测燕窝制品中唾液酸的方法较常见的为国标法(GB/T 30636-2014《燕窝及其制品中唾液酸的测定液相色谱法》)。该方法首先采用匀浆机对燕窝饮品进行匀浆，然后放置于透析袋中流水透析去除部分干扰物。最后采用50％乙酸水溶液沸水浴加热10min对待测样品进行充分水解，然后上液相检测。但在实际检测过程中，对果冻、软糖、饮品等样品进行透析处理后仍存在干扰成分影响检测结果。而且该检测方法检测周期较长，单透析过程就需要24h左右，成本较高。
由于目前检测燕窝制品中唾液酸的方法存在干扰成分影响检测结果、检测周期长的问题。因此，如何提供一种准确度高、干扰小的唾液酸检测方法，成为了亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种唾液酸定量检测方法及其应用，尤其提供一种准确度高的唾液酸定量检测方法及其应用。本发明提供的唾液酸定量检测方法检测速度快、准确度高，唾液酸回收率高。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供了一种唾液酸定量检测方法，所述唾液酸定量检测方法包括以下步骤：
(1)将待测样品与阳离子树脂混合吸附，过滤得到滤液A；
(2)将步骤(1)得到的滤液A与阴离子树脂混合吸附，之后过滤，将阴离子树脂用溶液浸泡，过滤得到滤液B；
(3)将步骤(2)得到的滤液B进行液相色谱检测，根据标准曲线计算唾液酸含量。
所述待测样品包括燕窝酸饮品、果冻或软糖。
所述待测样品中的唾液酸为生产过程添加进去的游离态唾液酸。
上述检测方法通过对待测样品进行处理，利用阳离子树脂将干扰成分吸附，之后用阴离子树脂吸附唾液酸，并洗脱回收唾液酸，最后检测唾液酸含量，显著降低了干扰成分的影响，唾液酸回收率高，准确度高，检测速度快。
所述阳离子树脂和阴离子树脂使用前经过热水清洗，并用盐酸和氢氧化钠溶液交替浸泡至树脂pH为中性。
优选地，步骤(1)所述阳离子树脂包括001-7、C100或D113中任意一种，优选D113。
上述特定阳离子树脂显著降低了干扰成分的含量，提高了准确度。
优选地，步骤(1)所述待测样品与阳离子树脂混合前还经过搅拌并稀释。
优选地，步骤(1)所述待测样品与阳离子树脂的质量比为1:1-1:3，其中待测样品可以是稀释后的待测样品。
优选地，步骤(1)所述吸附的时间为1-5h。
其中，稀释后的待测样品与阳离子树脂的质量比可以是1:1、1:1.5、1:2、1:2.5或1:3等，吸附的时间可以是1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h、4.5h或5h等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
优选地，步骤(2)所述阴离子树脂包括D918、D351、D354或ECA23中任意一种，优选ECA23。
上述特定阴离子树脂能够有效吸附唾液酸，将其与其他干扰成分分离，提高了唾液酸回收率，提高检测的准确度。
优选地，步骤(2)所述滤液A与阴离子树脂的质量比为1:1-1:3。
优选地，步骤(2)所述吸附的时间为1-5h。
优选地，步骤(2)所述溶液包括氯化钠溶液、甲酸溶液或盐酸中任意一种。
优选地，步骤(2)所述阴离子树脂与氯化钠溶液的体积比为1:2-1:5。
优选地，步骤(2)所述氯化钠溶液的质量分数为4-6％。
其中，滤液A与阴离子树脂的质量比可以是1:1、1:1.5、1:2、1:2.5或1:3等，吸附的时间可以是1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h、4.5h或5h等，阴离子树脂与氯化钠溶液的体积比可以是1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5等，氯化钠溶液的质量分数可以是4％、4.5％、5％、5.5％或6％等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
优选地，步骤(3)所述液相色谱检测的色谱柱包括Aminex HPX-87H Column、Amide-80或C18-WR中任意一种，优选Aminex HPX-87H Column。
优选地，步骤(3)所述液相色谱检测的柱温为50-65℃，流速为0.4-1mL/min。
优选地，步骤(3)所述液相色谱检测的流动相为硫酸溶液，所述硫酸溶液的浓度为4-6mM。
其中，柱温可以是50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃或65℃等，流速可以是0.4mL/min、0.5mL/min、0.6mL/min、0.7mL/min、0.8mL/min、0.9mL/min或1mL/min等，硫酸溶液的浓度可以是4mM、4.5mM、5mM、5.5mM或6mM等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
另一方面，本发明还提供了如上所述的唾液酸定量检测方法在检测食品中唾液酸含量的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种唾液酸的定量检测方法，通过对待测样品进行处理，利用阳离子树脂将干扰成分吸附，之后用阴离子树脂吸附唾液酸，并洗脱回收唾液酸，最后检测唾液酸含量，显著降低了干扰成分的影响，唾液酸回收率高，准确度高，检测速度快；通过选择特定阳离子树脂显著降低了干扰成分的含量，提高了准确度；通过选择特定阴离子树脂能够有效吸附唾液酸，将其与其他干扰成分分离，提高了唾液酸回收率，达到87.3％以上，最高可达97.2％，提高检测的准确度。
附图说明
图1是实施例1提供的唾液酸定量检测方法的检测结果HPLC图；
图2是实施例4提供的唾液酸定量检测方法的检测结果HPLC图；
图3是对比例1提供的唾液酸定量检测方法的检测结果HPLC图；
图4是对比例2提供的唾液酸定量检测方法的检测结果HPLC图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供了一种唾液酸定量检测方法，具体步骤如下：
S1、首先使用热水对树脂进行清洗，阳离子树脂(D113)使用75℃的热水清洗，阴离子树脂(ECA23)一般使用55℃的热水。然后使用质量分数5％的盐酸和3％的氢氧化钠溶液交替浸泡两种树脂，最终使树脂洗至中性。
S2、精确称取50mL的燕窝酸饮品(唾液酸净含量120.0mg)，使用匀浆机高速搅匀，将处理后的样品稀释至250mL。
S3、将稀释后的样品按质量比1:1.5的比例先加入洗好的阳离子树脂中，搅拌吸附2.5h利用阳离子树脂吸附掉样品中杂质，使用布氏漏斗抽干树脂中残留的滤液，此时样品中唾液酸成分会留在滤液中。
S4、将第3步中的滤液按质量比1:1.5的比例加入洗好的阴离子树脂中，搅拌后静置吸附2.5h利用阴离子树脂吸附滤液中的唾液酸，吸附结束后使用布氏漏斗抽干树脂中残留的滤液，此时样品中唾液酸会被阴离子树脂吸附而结合到树脂空隙中。
S5、将吸附后过滤掉滤液的阴离子树脂加入到3倍体积的质量分数5％NaCl溶液中，之后用布氏漏斗抽干得到滤液，之后经液相色谱(色谱柱：Bio-Rad Aminex HPX-87HColumn，柱温：60℃，流动相：5mM H2SO4水溶液，流速：0.6mL/min，进样量：20μL，检测波长：210nm)检测滤液中唾液酸含量，计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为116.04mg，回收率为96.7％。检测结果HPLC图谱如图1所示。
实施例2
本实施例提供了一种唾液酸定量检测方法，具体步骤如下：
S1、首先使用热水对树脂进行清洗，阳离子树脂(D113)使用75℃的热水清洗，阴离子树脂(ECA23)一般使用55℃的热水。然后使用质量分数5％的盐酸和3％的氢氧化钠溶液交替浸泡两种树脂，最终使树脂洗至中性。
S2、精确称取50g的果冻(唾液酸净含量75.0mg)，90℃水浴加热1min使其融化，使用匀浆机高速搅匀，将处理后的样品稀释至250mL。
S3、将稀释后的样品按质量比1:1的比例先加入洗好的阳离子树脂中，搅拌吸附5h利用阳离子树脂吸附掉样品中杂质，使用布氏漏斗抽干树脂中残留的滤液，此时样品中唾液酸成分会留在滤液中。
S4、将第3步中的滤液按质量比1:1的比例加入洗好的阴离子树脂中，搅拌后静置吸附5h利用阴离子树脂吸附滤液中的唾液酸，吸附结束后使用布氏漏斗抽干树脂中残留的滤液，此时样品中唾液酸会被阴离子树脂吸附而结合到树脂空隙中。
S5、将吸附后过滤掉滤液的阴离子树脂加入到3倍体积的质量分数5％NaCl溶液中，之后用布氏漏斗抽干得到滤液，之后经液相色谱(色谱柱：Bio-Rad Aminex HPX-87HColumn，柱温：60℃，流动相：5mM H2SO4水溶液，流速：0.6mL/min，进样量：20μL，检测波长：210nm)检测滤液中唾液酸含量，计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为72.1mg，回收率为96.1％。
实施例3
本实施例提供了一种唾液酸定量检测方法，具体步骤如下：
S1、首先使用热水对树脂进行清洗，阳离子树脂(D113)使用75℃的热水清洗，阴离子树脂(ECA23)一般使用55℃的热水。然后使用质量分数5％的盐酸和3％的氢氧化钠溶液交替浸泡两种树脂，最终使树脂洗至中性。
S2、取燕窝酸软糖(唾液酸净含量250.0mg)，用剪刀剪成小块，加入50％乙酸50mL，90℃水浴加热5min使其融化，使用匀浆机高速搅匀，将处理后的样品稀释至250mL。
S3、将稀释后的样品按质量比1:3的比例先加入洗好的阳离子树脂中，搅拌吸附1h利用阳离子树脂吸附掉样品中杂质，使用布氏漏斗抽干树脂中残留的滤液，此时样品中唾液酸成分会留在滤液中。
S4、将第3步中的滤液按质量比1:3的比例加入洗好的阴离子树脂中，搅拌后静置吸附1h利用阴离子树脂吸附滤液中的唾液酸，吸附结束后使用布氏漏斗抽干树脂中残留的滤液，此时样品中唾液酸会被阴离子树脂吸附而结合到树脂空隙中。
S5、将吸附后过滤掉滤液的阴离子树脂加入到3倍体积的质量分数5％NaCl溶液中，之后用布氏漏斗抽干得到滤液，之后经液相色谱(色谱柱：Bio-Rad Aminex HPX-87HColumn，柱温：60℃，流动相：5mM H2SO4水溶液，流速：0.6mL/min，进样量：20μL，检测波长：210nm)检测滤液中唾液酸含量，计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为243mg，回收率为97.2％。
实施例4
本实施例提供了一种唾液酸定量检测方法，检测方法中除第一步中将阳离子树脂D113替换成等量的001-7外，其余与实施例1一致。计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为113.9mg，回收率为94.9％。检测结果HPLC图谱如图2所示。
实施例5
本实施例提供了一种唾液酸定量检测方法，检测方法中除第一步中将阳离子树脂D113替换成等量的C100外，其余与实施例1一致。计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为114.7mg，回收率为95.6％。
实施例6
本实施例提供了一种唾液酸定量检测方法，检测方法中除第一步中将阴离子树脂ECA23替换成等量的D918外，其余与实施例1一致。计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为104.7mg，回收率为87.3％。
实施例7
本实施例提供了一种唾液酸定量检测方法，检测方法中除第一步中将阴离子树脂ECA23替换成等量的D351外，其余与实施例1一致。计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为107.7mg，回收率为89.9％。
对比例1
本对比例提供了一种唾液酸定量检测方法，具体步骤如下：
S1、精确称取50mL的燕窝酸饮品(唾液酸净含量120mg)，使用匀浆机高速搅匀，取处理后的样品等体积加入50％的乙酸水溶液，置于沸水浴中加热水解15min。
S2、将水解后的样品用布氏漏斗抽干得到滤液，之后经液相色谱(色谱柱：300SCX阳离子交换色谱柱，4.6mm×250mm，粒径5μm，流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液体积比＝9:1，柱温：30℃，流速：1.0mL/min，进样量：20μL，检测波长：205nm)检测滤液中唾液酸含量，计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为102.36mg，回收率为85.3％。检测结果HPLC图谱如图3所示。
对比例2
本对比例提供了一种唾液酸定量检测方法，具体步骤如下：
S1、精确称取50mL的燕窝酸饮品(唾液酸净含量120.0mg)，使用匀浆机高速搅匀，将处理后的样品稀释至250mL。
S2、将稀释后的样品用布氏漏斗抽干得到滤液，之后经液相色谱(色谱柱：AminexHPX-87H Column，柱温：60℃，流动相：5mM H2SO4水溶液，流速：0.6mL/min，进样量：20μL，检测波长：210nm)检测滤液中唾液酸含量，计算经树脂处理后剩余唾液酸总量为275.4mg，回收率为229.5％。检测结果HPLC图谱如图4所示。
标准曲线绘制：
配制5.0g/L的唾液酸标准品水溶液，稀释成0.5-5g/L的梯度溶液，按照实施例1中的检测方法处理，绘制浓度与峰面积的关系曲线。以浓度(g/L)为横坐标，峰面积为纵坐标，得标准曲线Y＝9.22828×106X+144974，R2＝0.999。
以上结果显示本发明提供的唾液酸检测方法检测效果好，准确度高，唾液酸回收率高；比较实施例1、对比例1-2可以发现，本发明通过采用将样品经过阳离子树脂和阴离子树脂处理的方法提高了检测的准确度和唾液酸回收率；从实施例1、4-7的测试结果可以发现，本发明通过选择特定阳离子树脂和阴离子树脂进一步提高了唾液酸的回收率，提高了检测的准确性；比较图1-2也可以发现，本发明通过选择特定阳离子树脂进一步提高了对干扰成分的吸附效果，使得干扰成分含量进一步降低，分离效果进一步提高，检测结果更准确。
此外，本发明通过改变实施例1中的部分参数进行测试，结果如下：
| 改变参数 | 唾液酸总量 | 回收率 |
| ① | 115.4 | 96.2％ |
| ② | 112.9 | 94.1％ |
| ③ | 113.6 | 94.7％ |
| ④ | 116.2 | 96.8％ |
| ⑤ | 111.5 | 92.9％ |
| ⑥ | 115.9 | 96.6％ |
其中①将稀释后的样品按质量比1:2.5的比例加入洗好的阳离子树脂中；②将稀释后的样品按质量比1:2.5的比例加入洗好的阴离子树脂中；③将S3、S4步骤中加入阳离子、阴离子后搅拌吸附时间改为1.5h；④将S3、S4步骤中加入阳离子、阴离子后搅拌吸附时间改为3.5h；⑤将S5步骤中吸附后过滤掉滤液的阴离子树脂加入到2倍体积的质量分数5％NaCl溶液中；⑥将S5步骤中吸附后过滤掉滤液的阴离子树脂加入到5倍体积的质量分数5％NaCl溶液中。
以上结果显示本发明提供的检测方法具有检测效果好，唾液酸回收率高的特点。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的唾液酸定量检测方法及其应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
Claims (10)
1.一种唾液酸定量检测方法，其特征在于，所述唾液酸定量检测方法包括以下步骤：
(1)将待测样品与阳离子树脂混合吸附，过滤得到滤液A；
(2)将步骤(1)得到的滤液A与阴离子树脂混合吸附，之后过滤，将阴离子树脂用溶液浸泡，过滤得到滤液B；
(3)将步骤(2)得到的滤液B进行液相色谱检测，根据标准曲线计算唾液酸含量；
所述待测样品包括燕窝酸饮品、果冻或软糖。
2.根据权利要求1所述的唾液酸定量检测方法，其特征在于，步骤(1)所述阳离子树脂包括001-7、C100或D113中任意一种，优选D113。
3.根据权利要求1或2所述的唾液酸定量检测方法，其特征在于，步骤(1)所述待测样品与阳离子树脂混合前还经过搅拌并稀释；
优选地，步骤(1)所述待测样品与阳离子树脂的质量比为1:1-1:3。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的唾液酸定量检测方法，其特征在于，步骤(1)所述吸附的时间为1-5h。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的唾液酸定量检测方法，其特征在于，步骤(2)所述阴离子树脂包括D918、D351、D354或ECA23中任意一种，优选ECA23。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的唾液酸定量检测方法，其特征在于，步骤(2)所述滤液A与阴离子树脂的质量比为1:1-1:3。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的唾液酸定量检测方法，其特征在于，步骤(2)所述吸附的时间为1-5h。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的唾液酸定量检测方法，其特征在于，步骤(2)所述溶液包括氯化钠溶液、甲酸溶液或盐酸中任意一种；
优选地，步骤(2)所述阴离子树脂与溶液的体积比为1:2-1:5；
优选地，步骤(2)所述溶液的质量分数为4-6％。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的唾液酸定量检测方法，其特征在于，步骤(3)所述液相色谱检测的色谱柱包括Aminex HPX-87H Column、Amide-80或C18-WR中任意一种，优选Aminex HPX-87H Column；
优选地，步骤(3)所述液相色谱检测的柱温为50-65℃，流速为0.4-1mL/min；
优选地，步骤(3)所述液相色谱检测的流动相为硫酸溶液，所述硫酸溶液的浓度为4-6mM。
10.一种根据权利要求1-9中任一项所述的唾液酸定量检测方法在检测食品中唾液酸含量的应用。
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- 2021-08-09 CN CN202110907363.3A patent/CN113640414A/zh active Pending
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