CN113624904A - 姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，所述鉴别方法包括提供对照品溶液、制备供试品溶液并采用薄层色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测的步骤；所述对照品溶液中的对照品包含姜酮和6‑姜辣素；制备所述供试品溶液的步骤包括：取姜竹茹中药配方颗粒，制备含有姜酮和6‑姜辣素的提取液；采用聚酰胺柱对所述含有姜酮和6‑姜辣素的提取液进行柱层析，柱层析的条件包括：层析柱采用聚酰胺柱，洗脱液为甲醇体积百分比为25％～55％的甲醇溶液，洗脱方式采用等度洗脱。该方法实现了基于薄层色谱法鉴别姜竹茹中药配方颗粒中生姜，为姜竹茹中药配方颗粒产品的质量控制提供科学的、快速的、低成本的新方法。

Description

姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法

技术领域

本发明涉及中药检测技术领域，具体涉及一种姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法。

背景技术

姜竹茹中药配方颗粒，其是由姜竹茹饮片水提后浓缩干燥得到的。姜竹茹饮片是通过竹茹炮制而来，是用姜汁炙或炒至黄色，其形如竹茹，表面黄色，微有姜香气。姜竹茹长于化痰止呕。

姜竹茹中药配方颗粒，其鉴别面临的问题包括：中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提、分离、浓缩、干燥、制粒而成的颗粒。中药配方颗粒取材于传统中药饮片，药效物质应与中药饮片水煎汤剂保持基本一致。传统上人们以眼观、鼻嗅、口尝、手摸可识别药材种类，而中药配方颗粒从有形的饮片经过一系列加工，变成不具备饮片外观形状的成品，以传统的目测、鼻嗅等已难以鉴别。由于中药配方颗粒失去了传统饮片赖以识别的外形、气味等性状特征，而其作为“固体汤剂”配药在处方中所发挥重要功效，因此采用合适的技术手段实现中药配方颗粒所含药材种类的鉴别格外重要。

目前，姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别尚属空白，因此，亟待提供一种姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法。

发明内容

基于以上背景技术，本发明的主要目的是提供一种姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，该方法采用薄层色谱法鉴别姜竹茹中药配方颗粒中生姜，为姜竹茹中药配方颗粒的质量控制提供有效手段。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，所述鉴别方法包括提供对照品溶液、制备供试品溶液，以及采用薄层色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测的步骤；

所述对照品溶液中的对照品包含姜酮和6-姜辣素；

制备所述供试品溶液的步骤包括：

取姜竹茹中药配方颗粒，制备含有姜酮和6-姜辣素的提取液；

对所述含有姜酮和6-姜辣素的提取液进行柱层析，柱层析的条件包括：层析柱采用聚酰胺柱，洗脱液为甲醇体积百分比为25％～55％的甲醇水溶液。

在其中一个实施例中，制备所述的含有姜酮和6-姜辣素的提取液的步骤包括：

取所述姜竹茹中药配方颗粒，以甲醇水溶液为提取溶剂提取，收集醇提液；

除去所述醇提液中的溶剂，所得残渣a经水溶解后用乙酸乙酯提取，收集有机相；

除去所述有机相中的溶剂，所得残渣b用甲醇溶解。

在其中一个实施例中，用所述乙酸乙酯提取的次数为1次～3次，每1g所述姜竹茹中药配方颗粒每1次提取对应所述乙酸乙酯的用量为6mL～10mL。

在其中一个实施例中，用所述乙酸乙酯提取的方式采用振荡提取。

在其中一个实施例中，所述提取溶剂含甲醇的体积百分比为78％～85％。

在其中一个实施例中，每1g所述姜竹茹中药配方颗粒对应所述提取溶剂的用量为18mL～22mL。

在其中一个实施例中，用所述提取溶剂提取的方式采用超声提取。

在其中一个实施例中，所述聚酰胺柱的参数条件包括：填料粒径为100目～200目，填料质量为1.5g～2.5g，内径为1.5cm～2.5cm，装柱方式采用干法装柱。

在其中一个实施例中，所述对照品溶液中的溶剂包含甲醇。

在其中一个实施例中，每1mL所述对照品溶液包含0.18mg～0.22mg所述姜酮和0.18mg～0.22mg所述6-姜辣素。

在其中一个实施例中，所述鉴别方法还包括如下步骤：取缺生姜的阴性样品制备阴性样品溶液，并在检测的过程中采用薄层色谱法对所述阴性样品溶液进行检测。

在其中一个实施例中，所述缺生姜的阴性样品选用竹茹中药配方颗粒或者麦芽糊精。

在其中一个实施例中，所述薄层色谱法采用的薄层层析板为硅胶G板。

在其中一个实施例中，所述薄层色谱法采用的展开剂为体积比为(1.8～2.2)：(0.8～1.2):1的石油醚、三氯甲烷和乙酸乙酯的混合物，所述石油醚的沸点为60℃～90℃。

在其中一个实施例中，所述薄层色谱法采用的显色剂为香草醛硫酸试液。

与现有技术相比，本发明具备如下有益效果：

姜竹茹中药配方颗粒，是由姜竹茹饮片水提后浓缩干燥得到的，涉及竹茹和生姜两味中药，在姜竹茹饮片的炮制过程中以及中药配方颗粒的制备过程中，产生的化学成分复杂，并且竹茹中的成分可能会跟生姜的成分在鉴别的过程中相互造成干扰。因此，简单地借鉴传统的生姜、干姜中姜类成分的薄层色谱鉴别方法(包括药典中记载的姜类成分的薄层色谱法)难以实现姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别。

为此，本发明在制备供试品溶液的过程中，采用合适的柱层析条件对制备的含有姜酮和6-姜辣素的提取液进行纯化，能够有效除去干扰成分(包括竹茹中的成分)，从而实现生姜特征成分姜酮和6-姜辣素的有效纯化，进而将薄层色谱法成功应用于姜竹茹中药配方颗粒中生姜的检测，检测所得色谱图各斑点Rf值大小适中，整体分离效果较好，斑点较清晰。该方法快速、稳定、专属性强、耐用性好，能够准确显示出生姜成分的特征，为姜竹茹中药配方颗粒产品的质量控制提供科学的、快速的、低成本的新方法。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱不同点样量所得色谱图；采用硅胶G预制薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG20060002)5μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG20060002)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒；(CG20060002)20μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)5μL；5.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；6.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)15μL；

图2为姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱专属性验证色谱图；采用硅胶G预制薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；5.竹茹中药配方颗粒(CG2006011)阴性样品10μL；

图3为常温条件下姜竹茹中药配方颗粒薄层鉴别色谱图；采用硅胶G预制薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；

图4为低温条件下姜竹茹中药配方颗粒薄层鉴别色谱图；采用硅胶G预制薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品10μL(上：姜酮；下：6-姜辣素)；

图5为高湿条件下姜竹茹中药配方颗粒薄层鉴别色谱图；采用硅胶G预制薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品10μL(上：姜酮；下：6-姜辣素)；

图6为低湿条件下姜竹茹中药配方颗粒薄层鉴别色谱图；采用硅胶G预制薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；

图7为不同厂家(海洋)硅胶G板考察色谱图；采用硅胶G预制薄层板(G，批号：20191018，青岛海洋化工有限公司)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；

图8为不同厂家(谱科)硅胶G板考察色谱图；采用硅胶G预制薄层板(G，批号：20210326，青岛谱科分离材料有限公司)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；

图9为不同厂家(默克)硅胶G板考察色谱图；采用硅胶G预制薄层板(TLC Silicagel 60，批号：HXD4333226，默克股份有限公司)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；

图10为不同厂家(烟台银龙)硅胶G板考察色谱图；硅胶G预制薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)；1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；

图11为姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱；硅胶G预制薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)10μL；

图12为实施例3姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品10μL(上：姜酮；下：6-姜辣素)；

图13为实施例4姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006003)10μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(CG2006004)10μL；4.混合对照品10μL(上：姜酮；下：6-姜辣素)；

图14为实施例5姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(甲醇提取)3μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(80％甲醇提取)3μL；3.姜竹茹中药配方颗粒(50％甲醇提取)10μL；4.混合对照品10μL(上：姜酮；下：6-姜辣素)；

图15为实施例6姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱；图中：1.姜竹茹中药配方颗粒(超声+萃取)10μL；2.姜竹茹中药配方颗粒(萃取)10μL；3.混合对照品10μL(上：姜酮；下：6-姜辣素)；

图16为不同洗脱液所得姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱；图中：1.水洗部位10μL；2.水洗后10％甲醇洗脱部位10μL；3.水洗后30％甲醇洗脱部位10μL；4.直接用30％甲醇洗脱部位10μL；5.混合对照品(上：姜酮；下：6-姜辣素)；

图17为不同洗脱液所得姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱；图中：1.30％甲醇洗脱10μL；2.60％甲醇洗脱10μL；3.姜酮对照品10μL；4.6-姜辣素对照品10μL；

图18为不同层析柱所得姜竹茹中药配方颗粒薄层色谱；图中：1.石油醚(60℃-90℃)洗脱10μL；2.石油醚(60℃-90℃):乙酸乙酯(1:1)洗脱10μL；3.乙酸乙酯洗脱10μL；4.甲醇洗脱10μL；5.30％甲醇-聚酰胺柱洗脱10μL；6.姜酮对照品10μL；7.6-姜辣素对照品10μL。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更详细的描述。但是，应当理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式或实施例。相反地，提供这些实施方式或实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式或实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。

本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。

本发明中，涉及到数值区间，如无特别说明，则包括数值区间的两个端点。

本发明中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。

本发明中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。

本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。

目前，中药类成分的定性方法主要有理化试验、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法、气相-质谱法、超高效液相色谱-质谱法等。高效液相色谱法或者液质联用色谱法等，所需仪器更为精密，导致检验成本大大增加。薄层色谱法又称薄层层析法，系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，可用于鉴别、检査和含量测定。薄层色谱法是平面色谱法中应用最广泛的方法之一，易掌握、设备便宜、操作简便灵活。然而，薄层色谱法在姜竹茹中药配方颗粒中的应用尚属空白，本发明旨在将薄层色谱法应用于姜竹茹中药配方颗粒，填补其质量控制空白。

本发明提供一种姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，所述鉴别方法包括提供对照品溶液、制备供试品溶液，以及采用薄层色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测的步骤；

所述对照品溶液中的对照品包含姜酮和6-姜辣素；

制备所述供试品溶液的步骤包括：

取姜竹茹中药配方颗粒，制备含有姜酮和6-姜辣素的提取液；

采用聚酰胺柱对所述含有姜酮和6-姜辣素的提取液进行柱层析，柱层析的条件包括：层析柱采用聚酰胺柱，洗脱液为甲醇体积百分比为25％～55％的甲醇水溶液。

本发明所适用的洗脱液中甲醇体积百分比可以为25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％，进一步优选地，可以选用25％～35％。

在其中一个示例中，制备所述的含有姜酮和6-姜辣素的提取液的步骤包括：

取所述姜竹茹中药配方颗粒，以甲醇溶液为提取溶剂提取，收集醇提液；

除去所述醇提液中的溶剂，所得残渣a经水溶解后用乙酸乙酯提取，收集有机相；

除去所述有机相中的溶剂，所得残渣b用甲醇溶解。

在其中一个示例中，用所述乙酸乙酯提取的次数为1次～3次(例如为1次、2次、3次)，每1g所述姜竹茹中药配方颗粒每1次提取对应所述乙酸乙酯的用量为6mL～10mL(例如为6mL、8mL、10mL)。

在其中一个示例中，用所述乙酸乙酯提取的方式采用振荡提取。

在其中一个示例中，所述提取溶剂含甲醇的体积百分比为78％～85％。例如为78％、80％、82％、85％。

在其中一个示例中，每1g所述姜竹茹中药配方颗粒对应所述提取溶剂的用量为18mL～22mL(例如为18mL、20mL、22mL)。

在其中一个示例中，用所述提取溶剂提取的方式采用超声提取。

在其中一个示例中，所述聚酰胺柱的参数条件包括：填料粒径为100目～200目，填料质量为1.5g～2.5g，内径为1.5cm～2.5cm。例如为聚酰胺柱(100目～200目，2g，2cm)。

在其中一个示例中，制备所述供试品溶液的步骤包括：

取所述姜竹茹中药配方颗粒，以甲醇百分比为78％～85％的甲醇溶液为提取溶剂超声提取，收集提取液a；

除去所述提取液a中的溶剂，所得残渣a’经水溶解后用乙酸乙酯震荡提取，收集提取液b；

除去所述提取液b中的溶剂，所得残渣b’用甲醇溶解。

采用聚酰胺柱对所述含有姜酮和6-姜辣素的提取液进行柱层析，柱层析的条件包括：层析柱采用聚酰胺柱，洗脱液为甲醇体积百分比为25％～55％的甲醇溶液。

在特征成分姜酮和6-姜辣素的提取过程中，本发明结合了甲醇溶液超声波提取法、乙酸乙酯液-液萃取法、柱层析法对姜类成分进行纯化富集，比一般的单纯地使用超声波法或者液-液萃取法效果更好，能够把干扰成分除去。

在其中一个示例中，所述对照品溶液中的溶剂包含甲醇。

在其中一个示例中，每1mL所述对照品溶液包含0.18mg～0.22mg所述姜酮和0.18mg～0.22mg所述6-姜辣素，例如包含0.18mg所述姜酮和0.18mg所述6-姜辣素、0.22mg所述姜酮和0.22mg所述6-姜辣素、0.2mg所述姜酮和0.2mg所述6-姜辣素。

在其中一个示例中，所述鉴别方法还包括如下步骤：取缺生姜的阴性样品制备阴性样品溶液，并在检测的过程中采用薄层色谱法对所述阴性样品溶液进行检测。

在其中一个示例中，所述缺生姜的阴性样品选用竹茹中药配方颗粒或者麦芽糊精。

在其中一个示例中，所述薄层色谱法采用的薄层层析板为硅胶G板。

在其中一个示例中，所述薄层色谱法采用的展开剂为体积比为(1.8～2.2)：(0.8～1.2):1的石油醚、三氯甲烷和乙酸乙酯的混合物，所述石油醚的沸点为60℃～90℃。例如为石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)、石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(1.8:1.2:1)、石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2.2:0.8:1)。

在其中一个示例中，所述薄层色谱法采用的显色剂为香草醛硫酸试液。

下述实施例中所述试验方法，如无特别说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特别说明，均可从商业途径获得。

实施例1

本实施例提供一种姜竹茹中药配方颗粒中姜的鉴别方法，主要采用薄层色谱法进行鉴别，包含如下步骤：

1.仪器、试剂与试药

仪器：薄层自动成像仪(CAMAG REPROSTAR 3，瑞士卡玛公司)、全自动薄层点样仪(AUTOMATIC TLC SAMPLER4，瑞士卡玛公司)、万分之一天平(ME204E，瑞士梅特勒)、超声清洗仪(KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司)、超纯水系统(Milli-Q Direct，默克股份有限公司)、水浴锅(HWS-28，上海一恒科技有限公司)；双槽展开缸；硅胶G薄层板(G，批号：20191008，青岛海洋化工有限公司)、硅胶G薄层板(G，批号：20210326，青岛谱科分离材料有限公司)、硅胶G薄层板(TLC Silica gel 60，批号：HXD4333226，默克股份有限公司)、硅胶G薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)。

试剂：甲醇(批号：SY22009009，西陇科学股份有限公司)；石油醚(60-90℃)(批号：SY22007012，福晨化学试剂有限公司)；三氯甲烷(批号：SY22011016，广州化学试剂厂)；乙酸乙酯(批号：SY22009001，西陇科学股份有限公司)；聚酰胺粉(批号：SY21901016，国药集团化学试剂有限公司)；水为超纯水(实验室自制)。

试药：姜竹茹中药配方颗粒(批号CG2006002、CG2006003、CG2006004；来源：广东一方制药有限公司)；竹茹中药配方颗粒(批号CG2006011；来源：广东一方制药有限公司)；6-姜辣素(批号：111833-202007，中国食品药品检定研究院)；姜酮(批号：111807-201802，中国食品药品检定研究院)。

2.溶液的制备

2.1供试品溶液的制备

取姜竹茹中药配方颗粒约2.5g，研细，加80％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于聚酰胺柱(聚酰胺100目～200目，2g，内径为2cm，干法装柱)上，用30％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

2.2对照品溶液的制备

精密称定6-姜辣素与姜酮适量，加甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合对照品溶液。

2.3阴性样品溶液的制备

取竹茹中药配方颗粒样品2.5g，研细，加80％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于聚酰胺柱(聚酰胺100目～200目，2g，内径为2cm，干法装柱)上，用30％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为阴性对照溶液。

2.4显色剂的配制

取香草醛0.1g，加硫酸10mL使溶解，即得。

3薄层色谱条件

薄层板：硅胶G板。

展开剂：石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)。

点样方式：喷雾条带状点样。

展开方式：采用双槽展开缸，薄层板预饱和时间15分钟，展开距离为8cm左右。

检视：喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

4姜竹茹中药配方颗粒不同点样量考察

分别吸取不同体积的姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)供试品溶液、6-姜辣素与姜酮混合对照品溶液点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

实验结果见图1：由图1可见，供试品溶液的点样量为10μL、混合对照品溶液的点样量为10μL时，供试品和对照品色谱的斑点显色清晰，分离度较好，无拖尾现象，背景无干扰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。因此，选择供试品溶液点样量为10μL，对照品溶液点样量为10μL。

5姜竹茹中药配方颗粒专属性考察

分别吸取姜竹茹中药配方颗粒供试品溶液、6-姜辣素与姜酮混合对照品溶液、阴性对照溶液分别点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

实验结果见图2：由图2可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性样品无干扰。说明该薄层方法专属性好。

6不同温度考察

分别吸取姜竹茹中药配方颗粒供试品溶液、6-姜辣素与姜酮混合对照品溶液点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，分别在常温和低温条件下展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

实验结果见图3和图4：由图3和图4可见，常温和低温条件下，姜竹茹中药配方颗粒和6-姜辣素、姜酮对照品色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，表明温度的降低对姜竹茹中药配方颗粒的薄层鉴别无明显影响，说明该薄层鉴别方法对常温和低温的条件耐用性良好。

7不同湿度考察

分别吸取姜竹茹中药配方颗粒供试品溶液、6-姜辣素与姜酮混合对照品溶液点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，分别在高湿和低湿条件下展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

实验结果见图5和图6：由图5和图6可见，高湿和低湿条件下，姜竹茹中药配方颗粒供试品色谱和6-姜辣素、姜酮对照品色谱的斑点均显色清晰，分离度较好，无拖尾现象，背景无干扰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。表明湿度对姜竹茹中药配方颗粒薄层鉴别无明显影响，该薄层鉴别方法对不同的湿度耐用性良好。

8不同厂家薄层板考察

分别吸取姜竹茹(青秆竹)中药配方颗粒供试品溶液、6-姜辣素与姜酮混合对照品溶液点样于不同厂家硅胶G薄层板(海洋硅胶G板、烟台银龙硅胶G板、默克硅胶G板)上，以石油醚(60-90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，分别在同一温湿度条件下展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

实验结果见图7、图8、图9和图10：由图7、图8、图9和图10可见，采用不同厂家的硅胶G薄层板(海洋硅胶G板、谱科硅胶G板、银龙硅胶G板、默克硅胶G板)，姜竹茹中药配方颗粒供试品色谱和6-姜辣素、姜酮对照品色谱的斑点均显色清晰，分离度较好。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。说明该薄层鉴别方法对不同厂家的硅胶G薄层板的耐用性良好。

9小结

本实施例所得色谱图各斑点Rf值大小适中，整体分离效果较好，斑点较清晰，阴性无干扰，经不同的温湿度考察，证明该方法耐用性良好。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。表明以6-姜辣素与姜酮对照品为参照，该方法能够很好地用于姜竹茹中药配方颗粒中姜类成分的薄层色谱鉴别。

实施例2

本实施例提供一种姜竹茹中药配方颗粒中姜的鉴别方法，包括如下步骤：

1供试品溶液的制备

分别取姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002、CG2006003、CG2006004)约2.5g，研细，加80％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于聚酰胺柱(聚酰胺100目～200目，2g，内径为2cm，干法装柱)上，用30％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

2对照品溶液的制备

精密称定6-姜辣素与姜酮适量，加甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合对照品溶液。

2.3展开

照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)实验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，展开，展距约8厘米。

2.4显色

喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

2.5结果判定

试验结果见图11：三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，说明三批姜竹茹配方颗粒中含有姜类成分，符合规定。

实施例3

本实施例是实施例2的变化例，相对于实施例2的变化之处主要包括“1供试品溶液的制备”的步骤，具体包括：

分别取姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002、CG2006003、CG2006004)约2.5g，研细，加78％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于聚酰胺柱(聚酰胺100目～200目，1.5g，内径为1.5cm，干法装柱)上，用25％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

试验结果见图12：三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，说明三批姜竹茹中药配方颗粒中含有姜类成分，符合规定。

实施例4

本实施例是实施例2的变化例，相对于实施例2的变化之处主要包括“1供试品溶液的制备”的步骤，具体包括：

分别取姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002、CG2006003、CG2006004)约2.5g，研细，加85％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次25mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于聚酰胺柱(聚酰胺100目～200目，2.5g，内径为2.5cm，干法装柱)上，用55％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

试验结果见图13：三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，说明三批姜竹茹中药配方颗粒中含有姜类成分，符合规定。

实施例5

本实施例是实施例2的变化例，相对于实施例2的变化之处主要包括“1供试品溶液的制备”的步骤，具体包括：

分别取姜竹茹中药配方颗粒(CG2006002)约2.5g，研细，平行3份，分别加甲醇、80％甲醇、50％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。

试验结果见图14：三供试品色谱中，由于只有单纯的超声提取，没有经过除杂纯化步骤，斑点均较为模糊不清。但从图中仍然能够看出，80％甲醇提取的样品斑点相对甲醇提取与50％甲醇提取的多，原因可能是姜酮与6-姜辣素均微溶于水，不溶于50％的甲醇溶液，所以在其色谱中观察不到该斑点。而使用80％甲醇提取会比甲醇提取，斑点颜色深一点，提取效率比甲醇的高一点。因此，选择80％甲醇作为第一步的提取溶剂，为后面的纯化实验能够最大限度地提取姜酮和6-姜辣素提供基础。

实施例6

本实施例是实施例2的变化例，相对于实施例2的变化之处主要包括“1供试品溶液的制备”的步骤，具体包括：

取姜竹茹中药配方颗粒约2.5g，研细，分别加80％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液1。

取姜竹茹中药配方颗粒约2.5g，研细，加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液2。

试验结果见图15：单纯地使用乙酸乙酯进行液-液提取，由于乙酸乙酯对颗粒的渗透性较差，导致提取效率低，6-姜辣素几乎未被提取出来，无法同时对生姜特征性成分姜酮和6-姜辣素进行检验。而使用80％甲醇超声后再用乙酸乙酯进行萃取，能够同时将姜酮和6-姜辣素提取出来，但色谱背景较深，主斑点未够明显，姜酮斑点附近有其它斑点干扰，分离度欠佳，尚需更进一步的纯化。

对比例1

本对比例提供一种姜竹茹中药配方颗粒中姜的鉴别方法，包括如下步骤：

1供试品溶液的制备

取姜竹茹中药配方颗粒约2.5g，平行2份，研细，分别加80％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于聚酰胺柱(聚酰胺100目～200目，2g，内径为2cm，干法装柱)上。

第1份样品先用水50mL洗脱，再用10％甲醇50mL、30％甲醇50mL洗脱，分别收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液1、2、3。

第2份样品直接用30％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液4。

2对照品溶液的制备

精密称定6-姜辣素与姜酮适量，加甲醇分别制成每1mL含0.2mg的对照品溶液。

3展开

照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)实验，吸取上述溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)上，以石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，展开，展距约8厘米。

4显色

喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

5结果判定

结果：聚酰胺吸附属于氢键吸附，其溶剂的洗脱能力由弱到强:水<甲醇或乙醇<丙酮<稀氢氧化钠或氨水<甲酰胺<二甲基甲酰胺<尿素水溶液。一般选用洗脱溶剂时先用水或不同比例的甲醇-水/乙醇-水溶液进行洗脱。由图16可以看出：

第1份样品中先用水作为洗脱溶液，把部分的姜酮成分洗脱出来，剩余的小部分姜酮和6-姜辣素均在30％甲醇部位，两个主要成分不在同一部位。

第2份样品中直接使用30％甲醇进行洗脱，姜酮和6-姜辣素均在同一部位。而且先用水洗并没有除掉太多两个主要成分以外的杂质，除杂效果不太明显。因此，选择30％甲醇直接洗脱效果更好。

对比例2

本对比例提供一种姜竹茹中药配方颗粒中姜的鉴别方法，包括如下步骤：

1供试品溶液的制备

取姜竹茹中药配方颗粒约2.5g，平行2份，研细，分别加80％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于聚酰胺柱(聚酰胺100目～200目，2g，内径为2cm，干法装柱)上。

第1份样品用30％甲醇50mL洗脱，第2份样品用60％甲醇50mL洗脱，分别收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液1、2。

2对照品溶液的制备

精密称定6-姜辣素与姜酮适量，加甲醇分别制成每1mL各含0.2mg的对照品溶液。

3展开

照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)实验，吸取上述溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)上，以石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，展开，展距约8厘米。

4显色

喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

5结果判定

结果：由图17可以看出，用30％甲醇或者是60％甲醇作为洗脱溶液，两个主要成分均在均能被洗脱出来，但30％甲醇洗脱出来的杂质较少，色谱条带背景较60％甲醇洗脱出来的浅。而且出于环保，减少有机溶剂的使用，优选30％甲醇作为洗脱溶剂。

对比例3

本对比例提供一种姜竹茹中药配方颗粒中姜的鉴别方法，包括如下步骤：

1供试品溶液的制备

取姜竹茹中药配方颗粒约2.5g，平行4份，研细，分别加80％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于硅胶柱(柱层析硅胶100目～200目，2g，内径为2cm，干法装柱)上，分别用石油醚(60℃～90℃)、石油醚(60℃～90℃):乙酸乙酯(1:1)、乙酸乙酯、甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣分别加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液1、2、3、4。

取姜竹茹中药配方颗粒约2.5g，研细，分别加80％甲醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加于聚酰胺柱(聚酰胺100目～200目，2g，内径为2cm，干法装柱)上，用30％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液5。

2对照品溶液的制备

精密称定6-姜辣素与姜酮适量，加甲醇分别制成每1mL含0.2mg的对照品溶液。

3展开

照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)实验，吸取上述溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板(SG，批号：20210309，烟台市化学工业研究所)上，以石油醚(60℃～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2:1:1)为展开剂，展开，展距约8厘米。

4显色

喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。

5结果判定

结果：由图18可以看出，使用硅胶柱对姜的6-姜辣素与姜酮成分进行纯化，用石油醚(60℃～90℃)进行洗脱，没有成分被洗脱下来。而用石油醚(60℃～90℃):乙酸乙酯(1:1)、乙酸乙酯、甲醇进行洗脱，所得到的色谱图相差不大，这说明用石油醚(60℃～90℃):乙酸乙酯(1:1)足以把所需的成分洗脱下来。但与过聚酰胺柱比较，背景较深，且6-姜辣素斑点附近有其他杂质干燥，斑点分离度和清晰度欠佳，除杂效果不如聚酰胺柱。因此，选择聚酰胺作为柱层析填料。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所述附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (13)

1.一种姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述鉴别方法包括提供对照品溶液、制备供试品溶液，以及采用薄层色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测的步骤；

所述对照品溶液中的对照品包含姜酮和6-姜辣素；

制备所述供试品溶液的步骤包括：

取姜竹茹中药配方颗粒，制备含有姜酮和6-姜辣素的提取液；

对所述含有姜酮和6-姜辣素的提取液进行柱层析，柱层析的条件包括：层析柱采用聚酰胺柱，洗脱液采用甲醇体积百分比为25％～55％的甲醇水溶液。

2.根据权利要求1所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，制备所述的含有姜酮和6-姜辣素的提取液的步骤包括：

取所述姜竹茹中药配方颗粒，以甲醇水溶液为提取溶剂提取，收集醇提液；

除去所述醇提液中的溶剂，所得残渣a经水溶解后用乙酸乙酯提取，收集有机相；

除去所述有机相中的溶剂，所得残渣b用甲醇溶解。

3.根据权利要求2所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，用所述乙酸乙酯提取的次数为1次～3次，每1g所述姜竹茹中药配方颗粒每1次提取对应所述乙酸乙酯的用量为6mL～10mL；或/和，用所述乙酸乙酯提取的方式采用振荡提取。

4.根据权利要求2或者3所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述提取溶剂含甲醇的体积百分比为78％～85％。

5.根据权利要求2或者3所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，每1g所述姜竹茹中药配方颗粒对应所述提取溶剂的用量为18mL～22mL；或/和，用所述提取溶剂提取的方式采用超声提取。

6.根据权利要求1至3任一项所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述聚酰胺柱的参数条件包括：填料粒径为100目～200目，填料质量为1.5g～2.5g，内径为1.5cm～2.5cm，装柱方式采用干法装柱。

7.根据权利要求1至3任一项所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述对照品溶液中的溶剂包含甲醇。

8.根据权利要求7所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，每1mL所述对照品溶液包含0.18mg～0.22mg所述姜酮和0.18mg～0.22mg所述6-姜辣素。

9.根据权利要求1至3以及8任一项所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述鉴别方法还包括如下步骤：取缺生姜的阴性样品制备阴性样品溶液，并在检测的过程中采用薄层色谱法对所述阴性样品溶液进行检测。

10.根据权利要求9所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述缺生姜的阴性样品选用竹茹中药配方颗粒或者麦芽糊精。

11.根据权利要求1至3、8以及10任一项所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱法采用的薄层层析板为硅胶G板。

12.根据权利要求1至3、8以及10任一项所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱法采用的展开剂为体积比为(1.8～2.2)：(0.8～1.2):1的石油醚、三氯甲烷和乙酸乙酯的混合物，所述石油醚的沸点为60℃～90℃。

13.根据权利要求1至3、8以及10任一项所述的姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱法采用的显色剂为香草醛硫酸试液。

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