CN113621479A - 一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法。所述透气膜用于培养室，用以培养高产量水痘病毒。所述透气膜依次包括透气层、细胞粘附层；所述透气层为聚二甲基硅氧烷复合膜；所述细胞粘附层为聚己内酯复合膜。有益效果：(1)调控制备了可增强氧气渗透率的聚二甲基硅氧烷复合膜为水痘病毒的培养提供氧气，协同二氧化碳培养箱，有效解决二氧化碳、氧气气体交换问题。(2)调控制备了可增强细胞粘附性的聚己内酯复合膜，增强水痘病毒的粘附和扩散。(3)利用稀释的聚二甲基硅氧烷将聚二甲基硅氧烷复合膜和聚己内酯复合膜复合，形成兼具透气性和细胞粘附双性能的透气膜，协同增强水痘病毒的增殖分化，实现高产量培养。

Description

一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法
技术领域
本发明涉及水痘病毒培养技术领域，具体为一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法。
背景技术
水痘是一种由带状孢疹病毒感染引起的传染病，因此需要培养水痘病毒制备疫苗预防水痘。其中，水痘病毒培养中不可缺少需要氧气，常见的培养器中，氧气通常是来自顶部气液界面向底部单项的扩散运动，而水痘病毒培养一般是静态培养，没有介质流动，因此，在培养过程中存在高细胞密度的水痘病毒，当溶解氧到底部时，氧气已经接近耗尽，使得水痘病毒质量存在不均匀性。解决问题的方式是采用透气膜提供氧气，平衡溶解氧在细胞培养器的底部，从而增加水痘病毒细胞的质量均匀性，增强底部细胞的生长和代谢，从而增加水痘病毒的产量。
而现有的透气膜，通常为氟化乙烯丙烯膜、聚碳酸酯膜、聚苯乙烯膜，该类膜通常是具有疏水和透气性的膜，不具有氧气的选择性，且渗透性慢，影响氧气提供，从而影响水痘病毒的增殖。另一方面，该类膜通常都细胞粘附性不佳，而粘附会产生细胞周期、细胞分化、细胞迁移和细胞生存等刺激信号，有利于细胞的增殖分化。
因此，解决氧气渗透性和细胞粘附的问题，增强氧气渗透率和细胞粘附性，制备一种高产量水痘病毒培养用透气膜具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高产量水痘病毒培养用透气膜及其培养方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
水痘病毒的培养方式为：(1)细胞复苏：将MRC-5细胞加入至含10～20％新生牛血清的M199-801培养液中，设置温度为37℃水浴，解冻，溶解离心，加入细胞生长液重悬细胞，转移，设置温度为37℃，培养3～4天，得到细胞；(2)细胞传代：使用37℃预温的0.01mol/LPBS液洗涤细胞表面两次，加入EDTA-Trypsin消化液，消化1～2分钟，去除消化液，加入细胞培养液，按照1:4～1:8传代比例进行传代；(3)病毒接种：当细胞单层融合度为80～90％时，将水痘病毒的种子批执行感染，感染复数为0.001～0.01；(4)病毒培养：将感染后的细胞在维持液为2～5％的新生牛血清，pH＝7.2～7.4的M199-801培养液，维持液量为0.2～0.3mL/cm2的条件下进行培养。
本专利中制备的透气膜，用于培养室，利用透气膜中氧气选择性渗透性，结合5％浓度的二氧化碳培养箱，有效控制溶氧，使得MRC-5细胞达到最佳生长状态，有效增强水痘病毒细胞的增殖，提高培养液中病毒的滴度。
透气膜安装后进行了钴60灭菌处理；透气膜中使用时，聚己内酯复合膜一侧接触细胞培养器的内部，可接触培养液，增强细胞粘附；聚二甲基硅氧烷一侧与外部环境接触，其具有疏水性，有效防水，防止污染物的进入。
一种高产量水痘病毒培养用透气膜，所述透气膜依次包括透气层、细胞粘附层；所述透气层为聚二甲基硅氧烷复合膜；所述细胞粘附层为聚己内酯复合膜。
较为优化地，所述透气层的原料包括以下组分：按重量计，90～100份聚二甲基硅氧烷、20～25份氧化锆前体、8～10份酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。
较为优化地，所述酞菁钴@碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的原料包括以下组分：按重量计， 9～12份聚丙烯吡咯烷酮、6～10份多壁碳纳米管、8～11份酞菁钴。
较为优化地，所述细胞粘附层的原料包括以下组分：按重量计，50～60份聚丙烯、20～26 份聚己内酯、10～20份精氨酸。
较为优化地，所述透气膜用于细胞培养容器，培养水痘病毒；使用时，细胞粘附层朝内与细胞培养器内部接触；透气层朝外，与外部环境接触。
较为优化地，一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，包括以下步骤：
S1：将聚丙烯和聚己内酯溶解在DMF-二氯甲烷混合溶剂中，作为纺丝溶液，静电纺丝，得到纤维膜；将其置于精氨酸水溶液中，振荡反应，用水洗涤，得到聚己内酯复合膜，备用；
S2：将氧化锆前体加入至正己烷溶剂中搅拌；加入聚二甲基硅氧烷搅拌；加入酞菁钴 /多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮搅拌，均质化，得到铸膜溶液；将其涂布在模板上，脱气，初干燥，得到聚二甲基硅氧烷复合膜；
S3：将聚己内酯复合膜其中一面喷涂聚二甲基硅氧烷水溶液，并以其为接触面，覆盖在聚二甲基硅氧烷复合膜上，初干燥，终干燥，拉伸，得到透气膜。
较为优化地，步骤1中，静电纺丝的条件为：温度为23～28℃，相对湿度为48～52％，送料速度为0.4～0.6mL/h，接收距离为15cm，电压为12～15Kv。
较为优化地，步骤1中，所述精氨酸水溶液的浓度为0.1～0.5mol/L；振荡反应的条件为：温度为28～42℃，时间为1～2小时。
较为优化地，步骤S2中，所述酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的培养方法为：设置温度为0～3℃，将亚硝酸钠溶液加入至吡啶溶液中混合，加入多壁碳纳米管分散液，搅拌反应2～3小时；设置温度为25～28℃，搅拌反应8～10小时，洗涤至中性，干燥；惰性气体下，将其超声分散在溶剂中，加入酞菁钴，设置温度为70～75℃回流2～3小时，洗涤过滤；将其与聚丙烯吡咯烷酮分散在DMF-水中，超声6～8小时，洗涤干燥，得到酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。
较为优化地，步骤S2中，聚二甲基硅氧烷水溶液的浓度为3～6wt％；初干燥温度为60～70℃，时间为12小时；终干燥温度为145～155℃，时间为2天。
本方案中，以聚己内酯复合膜为主体，作为细胞粘附层，增加水痘病毒的粘附性；并在其表面覆盖一层聚二甲基硅氧烷膜作为透气层。两张膜均具有高透气性，同时由于聚二甲基硅氧烷复合膜的高透氧性，辅助提供水痘病毒生产时的氧气；以此，两者协同，显著增强水痘病毒的增殖分化、活性，从而实现高产量生产。
(1)以聚二甲基硅氧烷为主体的膜是一种对稳定性高、低毒性、疏水性强的无孔透气膜。但本方案中，两层膜复合后会增加气体阻力，降低透气性，因此，本方案中将氧化锆前体与含有二氧化醇末端的聚二甲基硅氧烷通过原位溶胶凝胶反应，还原形成二氧化锆，作为无机交联剂，与聚二甲基硅氧烷杂交形成聚二甲基硅氧烷复合膜，从而提高气体分子渗透动力，增加了渗透率，以此优化互补复合后产生的气体渗透率的降低。同时，二氧化锆的加入增强了聚二甲基硅氧烷复合膜的刚性，促进了聚合物基体中线性硬度的增加。二氧化锆周边形成了较宽的结构域，因此形成了更高的气体渗透率。
具体：由于加入二氧化锆前体是四正丁氧基锆，可以与聚二甲基硅氧烷产生络合反应，预干燥温度促进了反应，会生成氢氧化锆和烷氧化锆。而后期复合时的终干燥150℃左右，会将挤出氢氧化锆中的冷凝水同时使得烷氧化锆形成纳米二氧化锆，水去除的同时，增加了纳米孔隙。由于并非直接加入纳米二氧化锆，因此，其在聚二甲基硅氧烷复合膜中具有良好的分散性。
此外，加入了酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮，选择性增强氧气渗透率，提供培养水痘病毒的额外氧气。
具体：通过将多壁碳纳米管表面吡啶化，再与酞菁钴共价接枝，形成酞菁钴/多壁碳纳米管再利用多壁碳纳米管与聚丙烯吡咯烷酮的界面弱氢键，形成酞菁钴/多壁碳纳米管/ 聚丙烯吡咯烷酮，以此增强分散性。
其中，酞菁钴中钴的电子云较高，对氧具有很强的亲和力，其在聚合物基质中具有可逆的氧相互作用，可以增强氧气的选择性。而吡啶化的碳纳米管，由于吡啶中的含氮配体与含有金属中心的酞菁钴的配位结合，产生了更多了增强了氧结合，从而增强了氧气转运的能力。当然，当酞菁钴/多壁碳纳米管加入量较多的情况下，会产生缠绕和堆积，降低性能，因此，使用聚丙烯吡咯烷酮复合，增强酞菁钴/多壁碳纳米管的分散性，同时由于其本身也含有含氮配体增加了氧气转运的能力，从而增强供氧能力，增加水痘病毒的产量。
(2)以聚丙烯为主体，以聚己内酯为辅，联合纺丝，制备聚己内酯复合膜。其中以疏水性的聚丙烯为主体，作为膜的骨架，而己内酯是一种可降解的聚酯，具有高韧性，因此为辅，增加膜的韧性。两种均为低毒性，可以用于水痘病毒的培养。其中，由于该膜本身具有孔结构具有透气性，因此，聚二甲基硅氧烷膜转运的氧气，可以传输至内部，培养水痘病毒。
同时，使用精氨酸对聚己内酯复合膜表面修饰，一方面，是增加两层膜之间的气体通道，另一方面精氨酸是一种碱性氨基酸，可以增强水痘病毒的粘附，从而增强增殖，因为培养过程中，粘附会产生细胞的周期、细胞分化、细胞迁移和细胞生存的刺激信号。而聚己内酯对聚丙烯的修饰，增强了粗糙度，然后又利用聚己内酯表面接枝精氨酸，双重增强了水痘病毒的粘附和扩散，从而增加了产量。较平常的产量增殖两倍以上。
与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：(1)调控制备了可增强氧气渗透率的聚二甲基硅氧烷复合膜为水痘病毒的培养提供氧气，协同二氧化碳培养箱，有效解决二氧化碳、氧气气体交换问题。(2)调控制备了可增强细胞粘附性的聚己内酯复合膜，增强水痘病毒的粘附和扩散。(3)利用稀释的聚二甲基硅氧烷将聚二甲基硅氧烷复合膜和聚己内酯复合膜复合，形成兼具透气性和细胞粘附双性能的透气膜，协同增强水痘病毒的增殖分化，实现高产量培养。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中培养方法均为：
步骤1：将透气膜安装在培养室中，聚己内酯复合膜一侧接触细胞培养器的内部，可接触培养液；聚二甲基硅氧烷一侧与外部环境接触；进行钴60灭菌处理，得到水痘病毒培养室；
步骤2：水痘病毒的培养：(1)细胞复苏：将MRC-5细胞加入至含15％新生牛血清的M199-801培养液中，设置温度为37℃水浴，解冻，溶解离心，加入细胞生长液重悬细胞，转移，设置温度为37℃，培养4天，得到细胞；(2)细胞传代：使用37℃预温的 0.01mol/LPBS液洗涤细胞表面两次，加入EDTA-Trypsin消化液，消化2分钟，去除消化液，加入细胞培养液，按照1:6传代比例进行传代；(3)病毒接种：当细胞单层融合度为86％时，将水痘病毒的种子批执行感染，感染复数为0.001；(4)病毒培养：将感染后的细胞在维持液为3％的新生牛血清，pH＝7.3的M199-801培养液，维持液量为 0.25mL/cm2的条件下进行培养。
实施例1：
S1：将聚丙烯和聚己内酯溶解在DMF-二氯甲烷混合溶剂中，作为纺丝溶液，设置条件：温度为25℃，相对湿度为50％，送料速度为0.5mL/h，接收距离为15cm，电压为13Kv，静电纺丝，得到纤维膜；将其置于0.4mol/L精氨酸水溶液中，设置温度为40℃，振荡反应2小时，用水洗涤，得到聚己内酯复合膜，备用；
S2：(1)设置温度为0℃，将亚硝酸钠溶液加入至吡啶溶液中混合，加入多壁碳纳米管分散液，搅拌反应2.5小时；设置温度为26℃，搅拌反应9小时，洗涤至中性，干燥；惰性气体下，将其超声分散在溶剂中，加入酞菁钴，设置温度为72℃回流2.3小时，洗涤过滤；将其与聚丙烯吡咯烷酮分散在DMF-水中，超声7小时，洗涤干燥，得到酞菁钴/ 多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮，备用；(2)将四正丁氧基锆加入至正己烷溶剂中搅拌；加入聚二甲基硅氧烷搅拌；加入酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮搅拌，均质化，得到铸膜溶液；将其涂布在模板上，脱气，设初干燥为65℃干燥12小时，得到聚二甲基硅氧烷复合膜；
S3：将聚己内酯复合膜其中一面喷涂4wt％聚二甲基硅氧烷水溶液，并以该面为接触面，覆盖在聚二甲基硅氧烷复合膜上，设置初干燥温度干燥12小时，设置终干燥温度为150℃干燥2天，拉伸，得到透气膜。
本方案中，所述透气层的原料包括以下组分：按重量计，92份聚二甲基硅氧烷、22份氧化锆前体、9份酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。所述酞菁钴@碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的原料包括以下组分：按重量计，10份聚丙烯吡咯烷酮、8份多壁碳纳米管、 10份酞菁钴。所述细胞粘附层的原料包括以下组分：按重量计，55份聚丙烯、23份聚己内酯、18份精氨酸。
实施例2：
S1：将聚丙烯和聚己内酯溶解在DMF-二氯甲烷混合溶剂中，作为纺丝溶液，设置条件：温度为23℃，相对湿度为48％，送料速度为0.4mL/h，接收距离为15cm，电压为12Kv，静电纺丝，得到纤维膜；将其置于0.1mol/L精氨酸水溶液中，设置温度为28～42℃，振荡反应1小时，用水洗涤，得到聚己内酯复合膜，备用；
S2：(1)设置温度为0℃，将亚硝酸钠溶液加入至吡啶溶液中混合，加入多壁碳纳米管分散液，搅拌反应2小时；设置温度为25℃，搅拌反应8小时，洗涤至中性，干燥；惰性气体下，将其超声分散在溶剂中，加入酞菁钴，设置温度为70℃回流2小时，洗涤过滤；将其与聚丙烯吡咯烷酮分散在DMF-水中，超声6小时，洗涤干燥，得到酞菁钴/ 多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮，备用；(2)将四正丁氧基锆加入至正己烷溶剂中搅拌；加入聚二甲基硅氧烷搅拌；加入酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮搅拌，均质化，得到铸膜溶液；将其涂布在模板上，脱气，设初干燥为60℃干燥12小时，得到聚二甲基硅氧烷复合膜；
S3：将聚己内酯复合膜其中一面喷涂3wt％聚二甲基硅氧烷水溶液，并以该面为接触面，覆盖在聚二甲基硅氧烷复合膜上，设置初干燥温度干燥12小时，设置终干燥温度为145℃干燥2天，拉伸，得到透气膜。
本方案中，所述透气层的原料包括以下组分：按重量计，90份聚二甲基硅氧烷、20份氧化锆前体、8份酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。所述酞菁钴@碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的原料包括以下组分：按重量计，9份聚丙烯吡咯烷酮、6份多壁碳纳米管、8 份酞菁钴。所述细胞粘附层的原料包括以下组分：按重量计，50份聚丙烯、20份聚己内酯、10份精氨酸。
实施例3：
S1：将聚丙烯和聚己内酯溶解在DMF-二氯甲烷混合溶剂中，作为纺丝溶液，设置条件：温度为28℃，相对湿度为52％，送料速度为0.6mL/h，接收距离为15cm，电压为15Kv，静电纺丝，得到纤维膜；将其置于0.5mol/L精氨酸水溶液中，设置温度为42℃，振荡反应2小时，用水洗涤，得到聚己内酯复合膜，备用；
S2：(1)设置温度为3℃，将亚硝酸钠溶液加入至吡啶溶液中混合，加入多壁碳纳米管分散液，搅拌反应3小时；设置温度为28℃，搅拌反应10小时，洗涤至中性，干燥；惰性气体下，将其超声分散在溶剂中，加入酞菁钴，设置温度为75℃回流3小时，洗涤过滤；将其与聚丙烯吡咯烷酮分散在DMF-水中，超声8小时，洗涤干燥，得到酞菁钴/ 多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮，备用；(2)将四正丁氧基锆加入至正己烷溶剂中搅拌；加入聚二甲基硅氧烷搅拌；加入酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮搅拌，均质化，得到铸膜溶液；将其涂布在模板上，脱气，设初干燥为70℃干燥12小时，得到聚二甲基硅氧烷复合膜；
S3：将聚己内酯复合膜其中一面喷涂6wt％聚二甲基硅氧烷水溶液，并以该面为接触面，覆盖在聚二甲基硅氧烷复合膜上，设置初干燥温度干燥12小时，设置终干燥温度为155℃干燥2天，拉伸，得到透气膜。
本方案中，所述透气层的原料包括以下组分：按重量计，90～100份聚二甲基硅氧烷、 25份氧化锆前体、8～10份酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。所述酞菁钴@碳纳米管 /聚丙烯吡咯烷酮的原料包括以下组分：按重量计，12份聚丙烯吡咯烷酮、10份多壁碳纳米管、11份酞菁钴。所述细胞粘附层的原料包括以下组分：按重量计，60份聚丙烯、26 份聚己内酯、20份精氨酸。
实施例4：不加入氧化锆前体，其余与实施例1相同。
实施例5：不加入多壁碳纳米管，其余与实施例1相同。
实施例6：不加入酞菁钴，其余与实施例1相同。
实施例7：不加入聚丙烯吡咯烷酮，其余与实施例1相同。
实施例8：不加入精氨酸，其余与实施例1相同。
实施例9：聚二甲基硅氧烷水溶液浓度升为10％，其余与实施例1相同。
实验1：将实施例1～9制备的透气膜进行如下测试；参照GB/T1038-2000标准方法，使用透气量测量仪，进行透气性测定；并通过压差法测试膜层的氧气渗透率(单位以GPU计，单位为mol/m2·S·Pa)，所得结果如下表所示。
实验2：将实施例1～9用于培养室中，以说明书中的培养方法对MRC-5细胞进行细胞复苏、细胞传代、病毒接种、病毒培养工艺，培养面积均为6000cm2，培养液量为0.2 mL/cm2，维持液为2％的新生牛血清、pH为7.34，培养温度为37℃，当CPE为50％时收获细胞，通过收获液滴度判断水痘病毒产量的高低。并以细胞工厂的作为对比例10，所得结果如下表所示：
Figure BDA0003193904590000081
结论：将实施例1～3所得数据对比，可知：所制备的透气膜具有优异的透气性和氧气渗透率，提供水痘病毒培养的额外氧气，依次增强细胞的增殖分化。从收获液滴度可以看出，水痘病毒的产量较高。
将实施例4的数据与实施例1相比，可知：数据均有下降，原因是：二氧化锆纳米粒子作为无机交联剂与聚二甲基硅氧烷杂交形成聚二甲基硅氧烷复合膜，其周边形成了较宽的结构域，从而提高气体分子渗透动力，因此形成了更高的气体渗透率。
将实施例5～7的数据以实施例1相比，可知：当酞菁钴缺少时，可以发现氧气渗透率下降较多，缺少多壁碳纳米管的下降幅度此致，然后缺少聚丙烯吡咯烷酮的下降幅度最少，当然，氧气渗透率的下降连带收获液滴度数值的下降，影响了水痘病毒的产量。原因是：实施例5～7中都是单一性缺少酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮中某一个物质。其中酞菁钴中钴离子在聚合物基质中具有可逆的氧相互作用，可以增强氧气的选择性。而吡啶化的碳纳米管，由于吡啶中的含氮配体与含有金属中心的酞菁钴的配位结合，产生了更多了增强了氧结合，从而增强了氧气转运的能力。使用聚丙烯吡咯烷酮复合，增强酞菁钴/ 多壁碳纳米管的分散性，同时由于其本身也含有含氮配体增加了膜氧气转运的能力，以此增强供氧能力，增强水痘病毒的增殖分化，增加产量。
实施例8的数据与实施例1相比，可知：收获液滴度的下降，原因是：精氨酸是一种碱性氨基酸，细胞培养的营养之一，同时其接枝可以增强水痘病毒细胞的粘附、扩散、增殖，从而增强水痘病毒的产量。而实施例9与实施例1相比，可知：透气值的下降，原因是：粘附过程中，聚二甲基硅氧烷水溶液浓度升为10％，增加了交联度，降低了两层之间的气体通道面积。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种高产量水痘病毒培养用透气膜，其特征在于：所述透气膜用于培养室，用以培养高产量水痘病毒。
2.根据权利要求1所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜，其特征在于：所述透气膜依次包括透气层和细胞粘附层；所述透气层为聚二甲基硅氧烷复合膜；所述细胞粘附层为聚己内酯复合膜。
3.根据权利要求2所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜，其特征在于：所述透气层的原料包括以下组分：按重量计，90～100份聚二甲基硅氧烷、20～25份氧化锆前体、8～10份酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。
4.根据权利要求3所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜，其特征在于：所述酞菁钴@碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的原料包括以下组分：按重量计，9～12份聚丙烯吡咯烷酮、6～10份多壁碳纳米管、8～11份酞菁钴。
5.根据权利要求2所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜，其特征在于：所述细胞粘附层的原料包括以下组分：按重量计，50～60份聚丙烯、20～26份聚己内酯、10～20份精氨酸。
6.一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：将透气膜安装在培养室中，聚己内酯复合膜一侧接触细胞培养器的内部，可接触培养液；聚二甲基硅氧烷一侧与外部环境接触；进行钴60灭菌处理，得到水痘病毒培养室；
步骤2：水痘病毒的培养：(1)细胞复苏：将MRC-5细胞加入至含10～20％新生牛血清的M199-801培养液中，设置温度为37℃水浴，解冻，溶解离心，加入细胞生长液重悬细胞，转移，设置温度为37℃，培养3～4天，得到细胞；(2)细胞传代：使用37℃预温的0.01mol/LPBS液洗涤细胞表面两次，加入EDTA-Trypsin消化液，消化1～2分钟，去除消化液，加入细胞培养液，按照1:4～1:8传代比例进行传代；(3)病毒接种：当细胞单层融合度为80～90％时，将水痘病毒的种子批执行感染，感染复数为0.001～0.01；(4)病毒培养：将感染后的细胞在维持液为2～5％的新生牛血清，pH＝7.2～7.4的M199-801培养液，维持液量为0.2～0.3mL/cm2的条件下进行培养。
7.根据权利要求6所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：透气膜的制备方法包括以下步骤：
S1：将聚丙烯和聚己内酯溶解在DMF-二氯甲烷混合溶剂中，作为纺丝溶液，静电纺丝，得到纤维膜；将其置于精氨酸水溶液中，振荡反应，用水洗涤，得到聚己内酯复合膜；
S2：将氧化锆前体加入正己烷溶剂中搅拌溶解；加入聚二甲基硅氧烷搅拌；加入酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮搅拌均匀，均质化，得到铸膜溶液；将其涂布在模板上，脱气，初干燥，得到聚二甲基硅氧烷复合膜；
S3：将聚己内酯复合膜其中一面喷涂聚二甲基硅氧烷水溶液，并以其为接触面，覆盖在聚二甲基硅氧烷复合膜上，初干燥，终干燥，拉伸，得到透气膜。
8.根据权利要求7所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：步骤1中，静电纺丝条件：温度为23～28℃，相对湿度为48～52％，送料速度为0.4～0.6mL/h，接收距离为15cm，电压为12～15Kv；所述精氨酸水溶液的浓度为0.1～0.5mol/L；振荡反应的条件为：温度为28～42℃，时间为1～2小时。
9.根据权利要求7所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：步骤S2中，所述酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮的培养方法为：设置温度为0～3℃，将亚硝酸钠溶液加入至吡啶溶液中混合，加入多壁碳纳米管分散液，搅拌反应2～3小时；设置温度为25～28℃，搅拌反应8～10小时，洗涤至中性，干燥；惰性气体下，将其超声分散在溶剂中，加入酞菁钴，设置温度为70～75℃回流2～3小时，洗涤过滤；将其与聚丙烯吡咯烷酮分散在DMF-水中，超声6～8小时，洗涤干燥，得到酞菁钴/多壁碳纳米管/聚丙烯吡咯烷酮。
10.根据权利要求7所述的一种高产量水痘病毒培养用透气膜的培养方法，其特征在于：步骤S2中，聚二甲基硅氧烷水溶液的浓度为3～6wt％；初干燥温度为60～70℃，时间为12小时；终干燥温度为145～155℃，时间为2天。
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