CN113616787A - 荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用 - Google Patents
荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113616787A CN113616787A CN202110924266.5A CN202110924266A CN113616787A CN 113616787 A CN113616787 A CN 113616787A CN 202110924266 A CN202110924266 A CN 202110924266A CN 113616787 A CN113616787 A CN 113616787A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- zinc oxide
- litchi
- adjuvant
- cluster
- oxide cluster
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 220
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 title claims abstract description 113
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 109
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 title claims abstract description 13
- 241001629511 Litchi Species 0.000 title description 6
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 claims abstract description 48
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 35
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 4
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims description 21
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 12
- RNWHGQJWIACOKP-UHFFFAOYSA-N zinc;oxygen(2-) Chemical class [O-2].[Zn+2] RNWHGQJWIACOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 claims description 10
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 9
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 8
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- ONDPHDOFVYQSGI-UHFFFAOYSA-N zinc nitrate Chemical compound [Zn+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ONDPHDOFVYQSGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 3
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 3
- SRWMQSFFRFWREA-UHFFFAOYSA-M zinc formate Chemical compound [Zn+2].[O-]C=O SRWMQSFFRFWREA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims description 3
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 20
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 abstract description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 5
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 abstract description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 abstract description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 45
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 43
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 12
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 9
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 7
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000009781 safety test method Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 2
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 2
- 230000024121 nodulation Effects 0.000 description 2
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- -1 zinc salt polyol Chemical class 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000241413 Propolis Species 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000091 immunopotentiator Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004237 neck muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940069949 propolis Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 229940126583 recombinant protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 229910052984 zinc sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01G—COMPOUNDS CONTAINING METALS NOT COVERED BY SUBCLASSES C01D OR C01F
- C01G9/00—Compounds of zinc
- C01G9/02—Oxides; Hydroxides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2002/00—Crystal-structural characteristics
- C01P2002/70—Crystal-structural characteristics defined by measured X-ray, neutron or electron diffraction data
- C01P2002/72—Crystal-structural characteristics defined by measured X-ray, neutron or electron diffraction data by d-values or two theta-values, e.g. as X-ray diagram
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/01—Particle morphology depicted by an image
- C01P2004/03—Particle morphology depicted by an image obtained by SEM
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/30—Particle morphology extending in three dimensions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/30—Particle morphology extending in three dimensions
- C01P2004/32—Spheres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/50—Agglomerated particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/60—Particles characterised by their size
- C01P2004/62—Submicrometer sized, i.e. from 0.1-1 micrometer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/60—Particles characterised by their size
- C01P2004/64—Nanometer sized, i.e. from 1-100 nanometer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用,所述方法包括:将锌盐加入多元醇溶剂中混匀,获得锌盐多元醇溶液;将所述锌盐多元醇溶液进行第一加热,后加入去离子水,进行第二加热至溶液出现浑浊,去除热源待自然冷却,获得反应产物;其中,所述去离子水与所述锌盐多元醇溶液的体积比为1:15~100;将所述反应产物进行固液分离,获得氧化锌纳米团簇沉淀,后清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇。该荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂表面凹凸不平,有效提高抗原的吸附能力;该氧化锌纳米团簇与病毒、细菌的颗粒相似,可增加免疫细胞的识别和吞噬,提高抗原递呈效率。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学技术领域,特别涉及一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用。
背景技术
佐剂是非特异性免疫增强剂,当与抗原一起注射或预先注入机体时,可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂通过改变抗原的物理形状,延缓抗原降解和排除,延长抗原在机体内保留时间;刺激单核吞噬细胞对抗原的递呈能力;刺激淋巴细胞分化,增加扩大免疫应答能力等机制来增强机体的免疫应答。佐剂的使用可降低抗原的用量或接种剂量/次数,提高疫苗的免疫效力。
目前常用佐剂主要有铝凝胶佐剂、油乳佐剂、蜂胶佐剂和脂质体佐剂,但上述佐剂仍然具有局部反应严重、不可冻干保存、稳定性差、生产技术难度大、成本高、功能性单一、免疫佐剂的装载和兼容性差等缺点。因此,研发高效、安全的新型免疫疫苗佐剂提高免疫效力是目前急需解决的问题。
纳米材料负载抗原,通过不同途径提高抗原呈递细胞(APC)的摄取率,纳米载体发挥关键作用;纳米颗粒又可以有效地保护负载的抗原/佐剂不受周围生物环境的影响,增加其半衰期,以引发适应性免疫应答,逐渐成为疫苗佐剂的研究热点。由于纳米粒子具有独特的载体结构特性,抗原物质与纳米粒子纳米颗粒不仅可以吸附并稳定疫苗抗原,同时能够延缓抗原的释放;另外,由于其尺寸与病原体相当,纳米颗粒可以使免疫原以与病原体递呈相同的方式递呈给免疫系统,诱导与自然感染相似的免疫应答。
因此,急需开发出一种提高抗原呈递效率的疫苗佐剂,成为亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明目的是提供一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用,该荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂表面凹凸不平,有效提高抗原的吸附能力;该氧化锌纳米团簇与病毒、细菌的颗粒非常相似,可增加免疫细胞的识别和吞噬,提高抗原递呈效率。
在本发明的第一方面,提供了一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,所述方法包括:
将锌盐加入多元醇溶剂中混匀,获得锌盐多元醇溶液;
将所述锌盐多元醇溶液进行第一加热,后加入去离子水,进行第二加热至溶液出现浑浊,去除热源待自然冷却,获得反应产物;其中,所述去离子水与所述锌盐多元醇溶液的体积比为1:15~100;
将所述反应产物进行固液分离,获得氧化锌纳米团簇沉淀,后清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇。
进一步地,所述锌盐和所述多元醇溶剂的质量体积比为(1:20~200)g/L。
进一步地,所述锌盐包括无机锌盐和有机锌盐中的至少一种;其中,所述无机锌盐包括氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、甲酸锌和乙酸锌中的至少一种。
进一步地,所述多元醇溶剂包括含有多羟基的醇类及其寡聚物和聚合物中的至少一种,所述含有多羟基的醇类包括乙二醇、丙二醇、二甘醇、甘油和聚乙二醇中的至少一种。
进一步地,所述第一加热包括:于120~180℃下预加热5~15min。
进一步地,所述第二加热包括:于120~180℃下预加热5~15min。
进一步地,所述第一加热、第二加热和所述去除热源待自然冷却中,全程进行磁力搅拌,所述磁力搅拌的转速为200~1000rpm。
进一步地,所述将所述反应产物进行固液分离,获得氧化锌纳米团簇沉淀,后清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇,包括:
将所述反应产物用等体积有机溶剂稀释,后于6000~12000rpm离心5~10min收集氧化锌纳米团簇沉淀,采用有机溶剂清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇。
在本发明的第二方面,提供了一种采用所述方法制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂,所述荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂由多个的纳米氧化锌球组装而成的直径为150~300nm荔枝状氧化锌团簇。
在本发明的第三方面,提供了所述的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂作为疫苗佐剂的应用。
本发明实施例中的一个或多个技术方案,至少具有如下技术效果或优点:
1、本发明提供的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,通过多元醇溶剂热法,将锌盐多元醇溶液进行第一加热以对锌盐进行溶解,向上述预热好的锌盐多元醇溶液中快速加入加入去离子水以引发锌盐的水解,进行第二加热至溶液出现浑浊,去除热源待自然冷却,获得反应产物;其中,所述去离子水与所述锌盐多元醇溶液的体积比为1:15~100目的在于使得锌盐水解速度适中获得团簇适中(直径为150~300nm)的荔枝状纳米氧化锌团簇。该方法简单有效、生产成本低、适于规模化生产;
2、本发明提供的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂,由直径5nm左右的纳米氧化锌球组装而成的荔枝状氧化锌团簇,其直径为150~300nm,表面凸凹不平,可见氧化锌纳米球;荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂表面凹凸不平,有效提高抗原的吸附能力;该氧化锌纳米团簇与病毒、细菌的颗粒相似,可增加免疫细胞的识别和吞噬,提高抗原递呈效率。纳米颗粒主要通过内吞和渗入的方式进入细胞,纳米颗粒的尺寸200nm左右、团簇状形貌、增大表面结构等直接影响其与细胞的交互作用,提高抗原呈递效率。
3、本发明提供的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂作为疫苗佐剂的应用,将荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂辅佐的猪伪狂犬病灭活疫苗(C1201株)疫苗具有接种量小,无不良反应,效率高的特点,。该佐剂不仅能够用于灭活疫苗和亚单位疫苗,还能运用于重组蛋白疫苗,有利于动物疫苗的免疫保护。且在动物安全方面上,相对于矿物油佐剂副作用明显减少。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为本发明制备的荔枝状纳米氧化锌团簇的扫描电子显微镜照片;
图2为本发明制备的荔枝状纳米氧化锌团簇的X射线晶体衍射(XRD)图;
图3为本发明制备的荔枝状纳米氧化锌团簇的水合粒径分布图;
图4为本发明制备的荔枝状纳米氧化锌团簇的Zeta电位;
图5为荔枝状纳米氧化锌团簇为佐剂猪伪狂犬病灭活疫苗(C1201株)灭活疫苗溶液外观;
图6为免疫小鼠中和抗体对比结果;
图7为本发明实施例提供的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法的流程图。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例,具体阐述本发明,本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解,这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明,而非限制本发明。
在整个说明书中,除非另有特别说明,本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此,除非另有定义,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾,本说明书优先。
除非另有特别说明,本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等,均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。
本发明实施例提供一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂,总体思路如下:
根据本发明一种典型的实施方式,提供了一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,如图7所示,所述方法包括:
步骤S1、将锌盐加入多元醇溶剂中混匀,获得锌盐多元醇溶液;
所述步骤S1中:
所述锌盐包括无机锌盐和有机锌盐中的至少一种;其中,所述无机锌盐包括氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、甲酸锌和乙酸锌中的至少一种。在其他实施方式中可选其他锌盐,本发明实施例优选乙酸锌;
所述多元醇溶剂包括含有多羟基的醇类及其寡聚物和聚合物中的至少一种,所述含有多羟基的醇类包括乙二醇、丙二醇、二甘醇、甘油和聚乙二醇中的至少一种。在其他实施方式中可选其他含有多羟基的醇类,本发明实施例优选二甘醇;
所述锌盐和所述多元醇溶剂的质量体积比为(1:20~200)g/L。优选1:50;该质量体积比有利于氧化锌的成核和组装形成团簇;多元醇溶剂添加过多不利于生成氧化锌核,多元醇溶剂添加过少不利于形成尺寸均一的团簇;
步骤S2、将所述锌盐多元醇溶液进行第一加热,后加入去离子水,进行第二加热至溶液出现浑浊,去除热源待自然冷却,获得反应产物;其中,所述去离子水与所述锌盐多元醇溶液的体积比为1:15~100;
上述技术方案中,所述去离子水与所述锌盐多元醇溶液的体积比为1:15~100目的在于使得锌盐水解速度适中获得团簇适中(直径为150~300nm)的荔枝状纳米氧化锌团簇;纳米颗粒主要通过内吞和渗入的方式进入细胞.大量的实验和理论分析表明,纳米颗粒的尺寸200nm左右、团簇状形貌、增大表面结构、等直接影响其与细胞的交互作用,提高抗原呈递效率。
所述去离子水与所述锌盐多元醇溶液的体积比若小于1:100锌盐水解速度慢,团簇尺寸变大;若大于1:15锌盐水解速度快,成核数量多,团簇尺寸小;所述去离子水与锌盐多元醇溶液的比例优选为1:50。
作为一种优选的实施方式,所述第一加热、第二加热和所述去除热源待自然冷却中,全程进行磁力搅拌,所述磁力搅拌的转速为200~1000rpm。
作为一种可选的实施方式,所述第一加热包括:于120~180℃下预加热5~15min。(最优时间10min),加热过程中通过磁力搅拌使溶液受热均匀,磁力搅拌速度为200~1000rpm;所述第一加热起到预热的作用,预热温度若小于120℃锌盐水解较慢,若大于180℃多元醇会发生氧化变色;预热时间若小于5min溶液不能均匀受热,若大于15min会加速多元醇氧化变色;
作为一种可选的实施方式,所述第二加热包括:于120~180℃下预加热5~15min。在该条件下有利于荔枝状纳米氧化锌团簇成功合成。
作为一种具体的实施方式,在200~1000rpm(最优搅拌速度500rpm)持续磁力搅拌下,按照水:多元醇溶剂的体积比1:25、1:50、1:75、1:100(最优配比为1:50)向上述预热好的溶液中快速加入去离子水以引发锌盐的水解,继续加热5~15min(最优时间10min)溶液出现浑浊,证明此时荔枝状纳米氧化锌团簇成功合成;
步骤S3、将所述反应产物进行固液分离,获得氧化锌纳米团簇沉淀,后清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇。
所述步骤S3具体包括:
将所述反应产物用等体积有机溶剂稀释,后于6000~12000rpm离心5~10min收集氧化锌纳米团簇沉淀,采用有机溶剂清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇。
所述有机溶剂包括乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、二甲基甲酰胺中的一种,所述有机溶剂优选乙醇;
所述清洗步骤具体包括:加入适量有机溶剂并在超声协助下分散沉淀,然后通过6000~12000rpm离心5~10min收集氧化锌团簇;优选重复上述步骤1~3次得到纯化的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂。
根据本发明另一种典型的实施方式,提供了用所述方法制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂。所述荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂由许多直径5nm左右(范围可以列为4~6nm)的纳米氧化锌球组装而成的荔枝状氧化锌团簇,其直径为150~300nm,表面凸凹不平,可见氧化锌纳米球;
单个氧化锌团簇由许多更小的纳米颗粒组成,表面凹凸不平、比表面积大,有效提高抗原的吸附能力;更重要的是该纳米团簇与病毒、细菌的颗粒非常相似,可增加免疫细胞的识别和吞噬,提高抗原递呈效率;纳米颗粒主要通过内吞和渗入的方式进入细胞.大量的实验和理论分析表明,纳米颗粒的尺寸200nm左右、团簇状形貌、增大表面结构、等直接影响其与细胞的交互作用,提高抗原呈递效率。我们的材料基本符合这些描述。
根据本发明另一种典型的实施方式,提供了所述的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂作为疫苗佐剂的应用。
本发明实施例将荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂溶液稀释为浓度为1mg/mL的半成品备用;后将所述荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂溶液和已灭活的猪伪狂犬病病毒液(C1201株)(灭活前抗原含量为108.5TCID50/ml)按照灭活抗原体积比1:1吸附制备成疫苗待用。荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂辅佐的猪伪狂犬病灭活疫苗(C1201株)疫苗具有接种量小,无良反应,效率高的特点,有望在细菌、病毒、亚单位疫苗等多类疫苗制备方面得到广泛应用。
下面将结合实施例及实验数据对本申请的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用进行详细说明。
实施例1、荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法
1、将1.1g乙酸锌加入到装有50mL二甘醇的圆底烧瓶中,在300rpm的转速下磁力搅拌30min使乙酸锌充分溶解备用;
2、将装有上述溶液的圆底烧瓶放入180℃的硅油中预加热10min,加热过程中通过磁力搅拌使溶液受热均匀,磁力搅拌速度为500rpm;
3、在500rpm持续磁力搅拌下,按照水:二甘醇的体积比1:50向上述预热好的溶液中快速加入去离子水以引发锌盐的水解,继续加热10min溶液出现浑浊,证明此时荔枝状纳米氧化锌团簇成功合成;
4、移去热源,继续磁力搅拌直至溶液冷却至室温。产物用等体积乙醇稀释,10000rpm离心5min收集氧化锌纳米团簇沉淀,加入适量乙醇并在超声协助下分散沉淀,然后通过10000rpm离心5min收集氧化锌团簇,重复上述步骤3次得到纯化的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂。
5、本发明实施例制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的SEM图如图1所述,由图1可知,本发明的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂由许多直径5nm左右的纳米氧化锌球组装而成的荔枝状氧化锌团簇,其直径为150~300nm,表面凸凹不平,可见氧化锌纳米球。
本发明实施例制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的X射线晶体衍射(XRD)图如图2所示,可知荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂为六方纤锌矿氧化锌晶体;
本发明实施例制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的水合粒径分布图如图3所示,表明荔枝状纳米氧化锌团簇的粒径分布在100~400nm,主要分布在200nm~300nm;
本发明实施例制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的的Zeta电位如图4所示,表明颗粒表面带有正电荷。
实施例2、荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法
1、将1.1g乙酸锌加入到装有22mL二甘醇的圆底烧瓶中,在200rpm的转速下磁力搅拌30min使乙酸锌充分溶解备用;
2、将装有上述溶液的圆底烧瓶放入120℃的硅油中预加热15min,加热过程中通过磁力搅拌使溶液受热均匀,磁力搅拌速度为500rpm;
3、在500rpm持续磁力搅拌下,按照水:二甘醇的体积比1:15向上述预热好的溶液中快速加入去离子水以引发锌盐的水解,继续加热10min溶液出现浑浊,证明此时荔枝状纳米氧化锌团簇成功合成;
4、移去热源,继续磁力搅拌直至溶液冷却至室温。产物用等体积乙醇稀释,10000rpm离心5min收集氧化锌纳米团簇沉淀,加入适量乙醇并在超声协助下分散沉淀,然后通过10000rpm离心5min收集氧化锌团簇,重复上述步骤3次得到纯化的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂。本发明实施例制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的SEM和XRD图基本同实施例1。
实施例3、荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法
1、将1.1g乙酸锌加入到装有220mL二甘醇的圆底烧瓶中,在1000rpm的转速下磁力搅拌30min使乙酸锌充分溶解备用;
2、将装有上述溶液的圆底烧瓶放入160℃的硅油中预加热12min,加热过程中通过磁力搅拌使溶液受热均匀,磁力搅拌速度为500rpm;
3、在500rpm持续磁力搅拌下,按照水:二甘醇的体积比1:100向上述预热好的溶液中快速加入去离子水以引发锌盐的水解,继续加热10min溶液出现浑浊,证明此时荔枝状纳米氧化锌团簇成功合成;
4、移去热源,继续磁力搅拌直至溶液冷却至室温。产物用等体积乙醇稀释,10000rpm离心5min收集氧化锌纳米团簇沉淀,加入适量乙醇并在超声协助下分散沉淀,然后通过10000rpm离心5min收集氧化锌团簇,重复上述步骤3次得到纯化的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂。本发明实施例制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的SEM和XRD图基本同实施例1。
实施例4、猪伪狂犬病灭活疫苗(C1201株)灭活疫苗的制备
1、将实施例1制备好的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂用生理盐水稀释配置成1mg/mL,置于4℃冰箱备用;
2、将灭活后的猪伪狂犬病病毒液(C1201株)(灭活前抗原含量为108.5TCID50/ml)按照体积比1:1比例与荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂充分混合,即得实验佐剂疫苗。(分别以制备的三批纳米氧化锌团簇佐剂配制三批实验佐剂疫苗,记为实验佐剂疫苗1、实验佐剂疫苗2和实验佐剂疫苗3。
实施例5、实验佐剂疫苗对小鼠的安全性试验
每批疫苗腹腔注射小鼠20只,0.5ml/只,并设未接种对照小鼠5只。接种后连续观察14日,每日观察记录小鼠的精神、食欲及死亡情况等。对小鼠的安全性试验结果显示:试验鼠精神及食欲正常,均健活;注射部位观察疫苗吸收良好、无红肿、无结节;白油佐剂对照疫苗组小鼠注射部位疫苗为完全吸收(表1)。
表1-疫苗对小鼠接种的临床观察结果
由表1的数据可知,本发明的佐剂制备疫苗对昆明小鼠安全性良好。
实施例6、实验佐剂疫苗对兔的安全性试验
每批疫苗腿部肌肉注射兔5只,5.0ml/只,同时设空白对照兔5只相同条件下饲养,连续观察14日,每日观察记录兔注射部位有无肿包、精神状态、食欲及死亡情况等。
表2-疫苗对兔接种后的临床观察结果
试验结果显示:经过连续观察14日,试验兔精神及食欲正常;注射部位观察疫苗吸收良好、无红肿、无结节;白油佐剂对照疫苗注射部位疫苗未完全吸收(表2)。空白对照组均健活,无异常临床反应。表明实验佐剂制备疫苗对兔安全性良好,免疫无残留。
实施例7、实验佐剂疫苗对仔猪的安全性试验
将25头仔猪随机分为5组,每组5头,每种佐剂疫苗接种仔猪5头,颈部肌肉注射4ml/头,另一组为空白对照。免疫后每日测量体温,并观察猪的精神状态、食欲,记录仔猪的不良反应。14日后剖检观察注射部位局部炎症反应及各脏器病变状况。根据不同佐剂疫苗对仔猪免疫后的体温、临床表现、局部炎症反应及脏器病理变化等安全性指标的影响程度,评价纳米氧化锌团簇作为佐剂制备疫苗的安全性。仔猪体温结果见表3,临床观察结果见表4。
表3-试验佐剂配制疫苗免疫仔猪后的体温记录
表4-试验佐剂配制疫苗免疫仔猪后的临床观察结果
*注:“临床表现无异常”指仔猪精神、食欲及体温正常。
试验结果显示:疫苗接种仔猪后连续观察14日,仔猪体温、精神及食欲均正常,试验猪均未出现不良反应及死亡情况;试验结束后解剖试验猪,心、肺、肝、脾、肾、脑、扁桃体及淋巴结等脏器均无病变。白油佐剂疫苗眼观有未完全吸收疫苗。结果表明,试验佐剂疫苗安全性良好,优于白油佐剂疫苗。
实施例8、实验佐剂疫苗对小鼠的有效性
将3批实验佐剂疫苗和白油佐剂对照疫苗分别接种17~22g昆明小鼠20只,每只腹腔免疫0.3ml。同时设置攻毒对照组5只、空白对照组5只。于免疫后21日用伪狂犬病毒PRVHP-17株强毒株进行攻毒,每只腹腔注射伪狂犬病毒PRV HP-11株病毒液0.1ml(含200LD50)。连续观察10日,记录每组小鼠健活数。3批实验佐剂疫苗组16~19只小鼠健活;白油佐剂疫苗组12/20健活;攻毒对照5/5死亡;空白对照5/5健活。结果见表5,荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂辅助的猪伪狂犬病灭活疫苗能显著提高免疫小鼠的攻毒保护率。
表5-对小鼠免疫攻毒试验结果
组别 | 死亡数(只) | 健活数/总数 |
实验佐剂疫苗1 | 2 | 18/20 |
实验佐剂疫苗2 | 1 | 19/20 |
实验佐剂疫苗3 | 4 | 16/20 |
白油佐剂对照疫苗组 | 8 | 12/20 |
攻毒对照组 | 5 | 0/5 |
空白对照组 | 0 | 5/5 |
实施例9、免疫小鼠产生中和抗体检测
按表6中分组(荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂,商业白油佐剂对照,商业铝胶佐剂对照,和空白对照)各免疫小鼠20只,各腹腔注射疫苗0.3ml,14日后,再次各腹腔注射疫苗0.3ml。初次免疫后4,8,16,24,28周采集小鼠尾静脉血,分离血清,将待检血清倍比稀释后,分别加入等量的含有100TCID50的伪狂犬病毒液,置37℃下作用60分钟,接种96孔ST细胞培养板,根据各孔CPE情况统计数据,计算被检血清中和抗体效价。(表6)所获得的实验数据以SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析,P﹤0.05具有统计学意义(图6)。
表6 免疫小鼠产生中和抗体
通过表6数据分析可以看出,从第四周开始,各个实验组都能产生中和抗体,并普遍在十二周以后达到峰值。其中荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂实验组取得了最佳免疫效果,中和抗体水平都显著高于其他对照实验组P﹤0.05,并同时在整个检测期间都维持较高的水平。
最后,还需要说明的是,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念,则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以,所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (10)
1.一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,其特征在于,所述方法包括:
将锌盐加入多元醇溶剂中混匀,获得锌盐多元醇溶液;
将所述锌盐多元醇溶液进行第一加热,后加入去离子水,进行第二加热至溶液出现浑浊,去除热源待自然冷却,获得反应产物;其中,所述去离子水与所述锌盐多元醇溶液的体积比为1:15~100;
将所述反应产物进行固液分离,获得氧化锌纳米团簇沉淀,后清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇。
2.根据权利要求1所述的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,其特征在于,所述锌盐和所述多元醇溶剂的质量体积比为(1:20~200)g/L。
3.根据权利要求1所述的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,其特征在于,所述锌盐包括无机锌盐和有机锌盐中的至少一种;其中,所述无机锌盐包括氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、甲酸锌和乙酸锌中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,其特征在于,所述多元醇溶剂包括含有多羟基的醇类及其寡聚物和聚合物中的至少一种,所述含有多羟基的醇类包括乙二醇、丙二醇、二甘醇、甘油和聚乙二醇中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,其特征在于,所述第一加热包括:于120~180℃下预加热5~15min。
6.根据权利要求1所述的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,其特征在于,所述第二加热包括:于120~180℃下预加热5~15min。
7.根据权利要求1所述的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,其特征在于,所述第一加热、第二加热和所述去除热源待自然冷却中,全程进行磁力搅拌,所述磁力搅拌的转速为200~1000rpm。
8.根据权利要求1所述的一种荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂的制备方法,其特征在于,所述将所述反应产物进行固液分离,获得氧化锌纳米团簇沉淀,后清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇,包括:
将所述反应产物用等体积有机溶剂稀释,后于6000~12000rpm离心5~10min收集氧化锌纳米团簇沉淀,采用有机溶剂清洗,获得荔枝状纳米氧化锌团簇。
9.一种采用权利要求1-8任一所述方法制备得到的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂,其特征在于,所述荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂由多个的纳米氧化锌球组装而成的直径为150~300nm荔枝状氧化锌团簇。
10.权利要求9所述的荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂作为疫苗佐剂的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110924266.5A CN113616787A (zh) | 2021-08-12 | 2021-08-12 | 荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110924266.5A CN113616787A (zh) | 2021-08-12 | 2021-08-12 | 荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113616787A true CN113616787A (zh) | 2021-11-09 |
Family
ID=78384895
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110924266.5A Pending CN113616787A (zh) | 2021-08-12 | 2021-08-12 | 荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113616787A (zh) |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1296916A (zh) * | 2000-12-29 | 2001-05-30 | 山东大学 | 一种制备氧化锌纳米粉体的方法 |
CN1565977A (zh) * | 2003-07-08 | 2005-01-19 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种纳米氧化锌的制备方法 |
US20090136580A1 (en) * | 2007-09-22 | 2009-05-28 | Boise State University | PREFERENTIAL KILLING OF CANCER CELLS AND ACTIVATED HUMAN T CELLS USING ZnO NANOPARTICLES |
CN101514029A (zh) * | 2009-04-08 | 2009-08-26 | 东华大学 | 一种氧化锌(ZnO)纳米棒的制备方法 |
CN102992390A (zh) * | 2012-12-14 | 2013-03-27 | 暨南大学 | 一种纳米氧化锌溶胶和氧化锌亚微米球的制备方法 |
CN106119961A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-11-16 | 河南师范大学 | 一种尺寸可控的单晶氧化锌纳米棒的制备方法 |
CN107628635A (zh) * | 2017-09-20 | 2018-01-26 | 厦门理工学院 | 一种水热合成四叶螺旋桨形纳米氧化锌的方法及纳米氧化锌 |
CN108212183A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-06-29 | 成都新柯力化工科技有限公司 | 一种用于污水处理的氧化锌纳米晶复合光催化剂及制备方法 |
-
2021
- 2021-08-12 CN CN202110924266.5A patent/CN113616787A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1296916A (zh) * | 2000-12-29 | 2001-05-30 | 山东大学 | 一种制备氧化锌纳米粉体的方法 |
CN1565977A (zh) * | 2003-07-08 | 2005-01-19 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种纳米氧化锌的制备方法 |
US20090136580A1 (en) * | 2007-09-22 | 2009-05-28 | Boise State University | PREFERENTIAL KILLING OF CANCER CELLS AND ACTIVATED HUMAN T CELLS USING ZnO NANOPARTICLES |
CN101514029A (zh) * | 2009-04-08 | 2009-08-26 | 东华大学 | 一种氧化锌(ZnO)纳米棒的制备方法 |
CN102992390A (zh) * | 2012-12-14 | 2013-03-27 | 暨南大学 | 一种纳米氧化锌溶胶和氧化锌亚微米球的制备方法 |
CN106119961A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-11-16 | 河南师范大学 | 一种尺寸可控的单晶氧化锌纳米棒的制备方法 |
CN107628635A (zh) * | 2017-09-20 | 2018-01-26 | 厦门理工学院 | 一种水热合成四叶螺旋桨形纳米氧化锌的方法及纳米氧化锌 |
CN108212183A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-06-29 | 成都新柯力化工科技有限公司 | 一种用于污水处理的氧化锌纳米晶复合光催化剂及制备方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
CLAUS FELDMANN & HANS-OTTO JUNGK: "Polyol-Mediated Preparation of Nanoscale Oxide Particles", 《ANGEW CHEM INT ED ENGL》 * |
DIDIER JÉZÉQUEL ET AL.: "Submicrometer zinc oxide particles: Elaboration in polyol medium and morphological characteristics", 《JOURNAL OF MATERIALS RESEARCH》 * |
K M REDDY ET AL.: "Selective toxicity of zinc oxide nanoparticles to prokaryotic and eukaryotic systems", 《APPL PHYS LETT.》 * |
PRASHANT SHARMA ET AL.: "Application of ZnO-Based Nanocomposites for Vaccines and Cancer Immunotherapy", 《PHARMACEUTICS》 * |
YI HU & HUNG-JIUN CHEN: "Preparation and characterization of nanocrystalline ZnO particles from a hydrothermal process", 《JOURNAL OF NANOPARTICLE RESEARCH》 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1126568C (zh) | 用于疫苗中的佐剂 | |
WO2016165632A1 (zh) | 一种能联合免疫细胞增强肿瘤杀伤能力的双特异性抗体及其制备方法和应用 | |
CN112972667A (zh) | 一种山羊支原体肺炎二联灭活疫苗及其制备方法 | |
CN105816873A (zh) | 一种动物疫苗的聚合物组合佐剂及其应用 | |
CN113616787A (zh) | 荔枝状纳米氧化锌团簇佐剂及其制备方法与作为疫苗佐剂的应用 | |
JPH02149530A (ja) | 水酸化亜鉛または水酸化鉄をアジュバントとして含有する抗原溶液 | |
CN102973931B (zh) | 一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺 | |
Steinkuller et al. | Studies on the mode of action of the heterologous immunogenicity of a methanol-insoluble fraction of attenuated tubercle bacilli (BCG) | |
CN106267176B (zh) | 鸡传染性鼻炎疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
CN113801812B (zh) | 一株多杀性巴氏杆菌及其应用 | |
CN104324370B (zh) | 疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
CN1218750C (zh) | 皮内注射用重组乙型肝炎卡介苗联合疫苗及制备方法 | |
CN1305528C (zh) | 免疫佐剂 | |
CN112618709B (zh) | 一种猪口服接种疫苗缓释佐剂及其制备方法与应用 | |
CN113896206B (zh) | 一种空心介孔硅纳米微球及其制备方法和用途 | |
CN1380422A (zh) | 确定参与粘附的分子的方法及含有以此方法鉴别的致免疫肽的疫苗 | |
CN106421775B (zh) | 一种疫苗用佐剂及含该佐剂的疫苗组合物和其应用 | |
US3157576A (en) | Vaccine for aleutian disease (hypergammaglobulinemia) in mink | |
RU2109519C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против некробактериоза животных | |
CN114177283B (zh) | 一种磁驱动纳米马达Fe3O4/Ca@MnCO3的制备以及其在DC疫苗中的应用 | |
CN112618711B (zh) | 一种猪口服接种疫苗纳米复合佐剂及其制备方法与应用 | |
CN114805554A (zh) | 抗猪链球菌和副猪嗜血杆菌的精制卵黄抗体注射剂及其制备方法 | |
CN115154595A (zh) | 纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗 | |
CN106267180B (zh) | 一种坏死梭杆菌无细胞抗原及其制备方法和制备的疫苗 | |
RU2037319C1 (ru) | Способ профилактики бруцеллеза |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211109 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |