CN113607846A - 一种测定血浆中达格列净浓度的方法 - Google Patents
一种测定血浆中达格列净浓度的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113607846A CN113607846A CN202110885971.9A CN202110885971A CN113607846A CN 113607846 A CN113607846 A CN 113607846A CN 202110885971 A CN202110885971 A CN 202110885971A CN 113607846 A CN113607846 A CN 113607846A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dapagliflozin
- plasma
- concentration
- sample
- internal standard
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- JVHXJTBJCFBINQ-ADAARDCZSA-N Dapagliflozin Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1CC1=CC([C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)=CC=C1Cl JVHXJTBJCFBINQ-ADAARDCZSA-N 0.000 title claims abstract description 68
- 229960003834 dapagliflozin Drugs 0.000 title claims abstract description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title abstract description 54
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims abstract description 31
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N diazepam Chemical compound N=1CC(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 229960003529 diazepam Drugs 0.000 claims description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 14
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 13
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 11
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 7
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 7
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 claims description 6
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 3
- 239000007939 sustained release tablet Substances 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 claims description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 abstract description 17
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 8
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002547 new drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 abstract description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 2
- 238000004880 explosion Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 35
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 6
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100020888 Sodium/glucose cotransporter 2 Human genes 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108091006269 SLC5A2 Proteins 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 2
- 230000009103 reabsorption Effects 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710103228 Sodium/glucose cotransporter 2 Proteins 0.000 description 1
- 229940123518 Sodium/glucose cotransporter 2 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 210000000512 proximal kidney tubule Anatomy 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了一种测定血浆中达格列净浓度的方法，包括如下步骤血浆样品预处理、将预处理后的血浆样品进行液相色谱分离、质谱测定、计算等步骤：本发明方法与现有技术相比，具有如下优势：(1)达格列净加乙酸根离子形成带电负离子，才更容易在离子源处达到Rayleigh(雷利)极限进而库伦爆炸，提高灵敏度。(2)预处理方法简便。(3)专属性强。(4)灵敏度高：血浆最低定量限为1.0ng·mL‑1。(5)无基质效应。(6)本发明方法快速、操作简便、准确、灵敏度高、检测限低。为达格列净的临床血药物浓度测定提供依据，服务于新药研究开发及临床应用。本方法的血浆标准曲线线性范围为1.0～4000ng·mL‑1，批内和批间精密度RSD均小于15％。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种测定血浆中达格列净浓度的方法。
背景技术
钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)表达于近端肾小管中，是负责肾小管滤过的葡萄糖重吸收的主要转运体。达格列净是一种SGLT2抑制剂，通过抑制SGLT2，减少滤过葡萄糖的重吸收，降低葡萄糖的肾阈值，从而增加尿糖排泄。临床上主要用于2型糖尿病成人患者改善血糖控制。
药物药代动力学以及生物等效性的研究均通过测定药物的药动学参数来评价，药物的检测分析显得非常重要。达格列净生物样品的成分复杂、基体干扰大，同时样品较难获得而且量少，被分析物的浓度通常很低，因此对生物样品分离分析技术提出的要求越来越高，亟需建立一种高灵敏度、高选择性的达格列净血浆浓度分析方法。LC-MS/MS法由于具有特异性好和灵敏度高等诸多优点，是小分子药物生物分析的首选方法。该技术主要步骤包括样品前处理、色谱分离以及质谱检测。
目前，国外现有技术中，前处理通常使用固相萃取法及液-液提取法，步骤较为复杂、成本高、耗时长。临床研究中通常需要检测大量的血液样本。复杂的前处理方法降低了检测的效率。另外，现有技术还存在血浆用量大、检测时间长、检测精度低等缺点。
国内关于人体口服达格列净片或缓释片后血浆中达格列净浓度分析方法没有文献报道。达格列净人体药动学研究中，达格列净在人体半衰期为12.9小时左右，给药后采集血液，至少采集至48小时或更长72小时，这对于分析方法的最低定量限要求很高。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种测定血浆中达格列净浓度的方法。本发明采用地西泮作为内标物，建立人血浆中达格列净的LC-MS/MS测定方法，并按照国家药品监督管理局的相关指导原则的要求对该方法进行验证，从而准确定量检测人血浆样品中的达格列净浓度。通过该方法对达格列净在人体内的药物代谢情况进行探索性研究，以期服务于新药开发(包括一致性评价)。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
包括如下步骤：
(1)血浆样品预处理：取血浆样品，加入内标地西泮溶液，加入乙腈沉淀蛋白，高速离心，吸取上清液，加入去离子水，混匀后进样；
(2)将步骤(1)预处理后的血浆样品进行液相色谱分离：
色谱柱为AgilentZORBAXEclipse 
C8，4.6×100mm，3.5μm；
流动相：6mmoL/L醋酸铵水溶液和乙腈，两者体积比为50：50；柱温为35℃；流速为700μL·min-1；进样量：50μL；
(3)质谱测定：
离子源：电喷雾离子化电离源ESI；离子检测方式：多反应监测；离子极性：负离子；离子源电压IS：-2500V；离子源温度TEM：700℃；碰撞气 CAD：6L·min-1；气帘气CUR：30L·min-1；离子源Gas1：45L·min-1；离子源Gas2：60L·min-1；检测对象的离子选择通道：达格列净[M+CH3COO]-， m/z 467.2/329.2，DP：-45，EP：-10，CE：-25，CXP：-7；内标地西泮[M- H]-，m/z 283.3/226.0，DP：-24，EP：-10，CE：-13，CXP：-5；(1)
(4)计算：采用内标法，以达格列净和内标地西泮的峰面积比值代入标准曲线方程计算达格列净浓度。
进一步，步骤(1)具体为：于1.5mL塑料离心管中精密加入受试者血浆样本200μL，精密加入内标200μg·mL-1地西泮溶液50μL，旋涡10s，加入510μL乙腈沉淀蛋白，涡旋1min，于15000rpm、4℃离心10min；吸取 400μL上清液至进样瓶中，加入200μL去离子水，涡旋混匀，进样测定。
优选的，所述血浆为口服达格列净片或缓释片后的血浆。
优选的，所述血浆为人或动物的血浆。
有益效果：本发明方法与现有技术相比，具有如下优势：
(1)达格列净加乙酸根离子形成带电负离子，才更容易在离子源处达到Rayleigh(雷利)极限进而库伦爆炸，提高灵敏度。
(2)预处理方法简便：血浆样品，有机溶剂沉淀蛋白，，相比与液- 液提取法和固相萃取法，蛋白沉淀法具有操作简便、回收率高等特点，可最大程度提高处理通量和灵敏度。
(3)专属性强：采用AgilentZORBAX Eclipse
C8(4.6×100mm， 3.5μm)色谱柱作为固定相；6mmoL/L醋酸铵水溶液：乙腈＝50：50作为流动相；达格列净保留时间为2.53min左右；内标地西泮保留时间为5.14 min左右，9分钟完成测定，内源性物质不干扰二者的测定。
(4)灵敏度高：血浆最低定量限为1.0ng·mL-1。根据绝对柱上样品量计算，检出限可达0.439pg。本发明适合达格列净片生物等效性或人体药动学研究中使用。
(5)无基质效应，绝对和相对基质效应结果在85％～115％之间。
(6)本发明方法快速、操作简便、准确、灵敏度高、检测限低。为达格列净的临床血药物浓度测定提供依据，服务于新药研究开发及临床应用。本方法的血浆标准曲线线性范围为1.0～4000ng·mL-1，批内和批间精密度RSD均小于15％。
附图说明
图1为质谱图。
其中，1-A为人空白血浆的质谱图，1-B为人空白血浆加入标准品后的质谱图，1-C为人空腹口服达格列净片片10mg后2h血浆样品的质谱图。
注：图中达格列净[M+CH3COO]-，m/z 467.2/329.2，保留时间为2.53min左右；内标地西泮[M-H]-，m/z 283.3/226.0，保留时间为5.14min左右。
具体实施方式
实施例1：人血浆中达格列净浓度的测定；
一、实验材料与仪器
达格列净对照品：由AstraZeneca Pharmaceuticals LP(阿斯利康)提供，批号：AOLH000074；地西泮对照品：由中国食品药品检定研究院提供，批号： 171225-201805；试验用水：超纯水；乙腈：色谱纯(Merck Company)；醋酸铵：分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。
API4000 LC/MS/MS联用仪(美国AB Scisex公司)，色谱工作站：Analyst 1.6；梅特勒XS 105DU电子天平(瑞士梅特勒公司)；Eppendorf Centrifuge 5424R 高速低温离心机(德国Eppendorf公司)；KDC-2046型低速冷冻离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)；Millipore Drict-Q5超纯水机(法国Millipore公司)。
二、液质条件
1.液相色谱条件
色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse 
C8(4.6×100mm，3.5μm)；流动相：6mmoL/L醋酸铵水溶液：乙腈＝50：50；柱温为35℃；流速为700μL·min-1；进样量：50μL；
2.质谱条件
离子源：电喷雾离子化电离源ESI；离子检测方式：多反应监测；离子极性：负离子；离子源电压IS：-2500V；离子源温度TEM：700℃；碰撞气CAD：6L·min-1；气帘气CUR：30L·min-1；离子源Gas1：45L·min-1；离子源Gas2：60L·min-1；检测对象的离子选择通道：达格列净[M+CH3COO]-，m/z 467.2/329.2，DP：-45， EP：-10，CE：-25，CXP：-7；内标地西泮[M-H]-，m/z 283.3/226.0，DP：-24， EP：-10，CE：-13，CXP：-5。
三、实验过程：
1.达格列净标准曲线溶液的配制：
称取适量达格列净对照品(相当于含10mg达格列净)，置于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀得到含1.0mg·mL-1达格列净标准曲线储备液，再以乙腈依次稀释，配成浓度分别为0.02、0.06、0.2、0.6、2、6、20、80μg·mL-1的达格列净标准曲线工作液。
2.人血浆样品的处理：
健康男性受试者空腹服用达格列净片10mg，用240mL温开水送服；于给药后2h采集外周静脉血3mL，注入肝素管内，离心(4000r·min-1，5min)，吸取受试者血浆样本200μL，精密加入内标200μg·mL-1地西泮溶液50μL，旋涡10s，加入510μL乙腈沉淀蛋白，涡旋1min，于15000rpm、4℃离心10min。吸取400μL上清液至进样瓶中，加入200μL去离子水，吸取混匀液50μL进样 (见图1-C)，计算达格列净和内标峰面积的比值f，代入标准曲线计算浓度。
3.专属性：
取没有给予过达格列净片的人空白血浆200μL于1.5mL塑料离心管中，加入50μL乙腈，旋涡10s，加入510μL乙腈沉淀蛋白，涡旋1min，于15000rpm、 4℃离心10min。吸取400μL上清液至进样瓶中，加入200μL去离子水，涡旋混匀，吸取混匀液520μL进样(见图1-A)。
取1.5mL塑料离心管精密加入达格列净标准曲线溶液(2μg·mL-1)10μL，加入空白血浆200μL，涡旋混匀，加入内标200μg·mL-1地西泮溶液50μL，旋涡10s，加入500μL乙腈沉淀蛋白，涡旋1min，于15000rpm、4℃离心10min。吸取400μL上清液至进样瓶中，加入200μL去离子水，涡旋混匀，吸取混匀液 20μL进样(见图1-B)。
结果显示，在本实验所采用的LC-MS-MS条件下，血浆样品无杂峰对检测组分造成干扰，达格列净保留时间在2.53min左右，内标地西泮保留时间在 5.14min左右。达格列净和内标互不干扰，峰形良好，基线平稳。
4.线性试验
人血浆标准曲线：分别吸取10μL达格列净的标准曲线工作液至1.5mL塑料离心管中，并加入空白血浆200μL，涡旋混匀，制备成相当于含达格列净浓度为1、3、10、30、100、300、1000、4000ng·mL-1的标准曲线血浆样本。按“血浆样品预处理”项下操作。计算达格列净峰面积As和内标峰面积Ai的比值f (f＝As/Ai)，以峰面积比值f对血药浓度C作回归计算。以平均比值f对血药浓度C作回归计算，得回归方程：f＝0.00854×C+0.000321(r＝0.9987，权重系数w＝1/C*C)，达格列净血浆浓度在1.0～4000ng·mL-1范围内线性关系良好。最低定量限为1.0ng·mL-1。
5.准确度和精密度
按照人血浆标准曲线方法配制含达格列净浓度为3.0、150、3200ng·mL-1的最低定量限、低、中、高浓度的血浆样品，按“血浆样品预处理”处理方法分别处理。连续做3批，每批每个浓度各做6份样品，计算达格列净峰面积As和内标峰面积Ai的比值f，代入每批的血浆标准曲线中求得达格列净实测浓度，由实测浓度计算批内、批间精密度和相对标准偏差(RSD)，实测浓度与加入浓度的比值即为准确度。结果显示：批内和批间精密度RSD均小于15％，准确度符合要求。
6.基质效应
血浆样品基质：选择来源不同的6个空白血浆样品，各定量吸取200μL至离心管中，加入有机溶剂乙腈500μL，涡旋，离心，取上清液作血浆基质，体积为600μL。
对照样品基质：定量吸取200μL去离子水至离心管中，操作方法与制备血浆样品基质相同，得到对照样品基质。
分别定量吸取600μL血浆样品基质或对照样品基质，加入10μL达格列净质控系列工作液和50μL内标地西泮工作液，混匀。定量吸取上述溶液400μL 与200μL去离子水，混匀。同一浓度样品平行制备和处理6份(低、中、高3 个浓度)。进样测定，获达格列净和内标(地西泮)峰面积。按
计算不同浓度质控水平每个样品中待测物的绝对基质效应。按
计算每个样品中内标的绝对基质效应。按MFf＝MF/MFi×100％计算不同浓度质控水平每个样品中待测物的内标归一化基质效应。结果显示：血浆中达格列净低、中、高三个浓度的绝对基质效应均在85％～115％之间。内标归一化基质效应亦在85％～115％之间。
7.测定结果
上述给予过达格列净片10mg后2h的3名健康男性受试者血浆中达格列净含量分别为143.9、126.1、108.8ng·mL-1。
实施例2：女性受试者血浆中达格列净浓度的测定；
参照实施例1，1名健康女性受试者空腹服用达格列净片10mg，用240mL 温开水送服；于给药后3h采集外周静脉血3mL，注入肝素管内，离心(4000 r·min-1，5min)，吸取受试者血浆样本200μL，精密加入内标500ng·mL-1地西泮溶液50μL，旋涡10s，加入510μL乙腈沉淀蛋白，涡旋1min，于15000rpm、 4℃离心10min。吸取400μL上清液至进样瓶中，加入200μL去离子水，吸取混匀液50μL进样。结果显示：空腹口服达格列净片10mg后5h的1名健康女性受试者血浆中达格列净含量分别为140.3ng·mL-1。
实施例3：受试者给药后48h血浆中达格列净浓度的测定；
参照实施例1，1名健康男性受试者空腹服用达格列净片10mg，用240mL 温开水送服；于给药后48h采集外周静脉血3mL，注入肝素管内，离心(4000 r·min-1，5min)，吸取受试者血浆样本200μL，精密加入内标500ng·mL-1地西泮溶液50μL，旋涡10s，加入510μL乙腈沉淀蛋白，涡旋1min，于15000rpm、 4℃离心10min。吸取400μL上清液至进样瓶中，加入200μL去离子水，吸取混匀液50μL进样。结果显示：空腹口服达格列净片10mg后48h，受试者血浆中达格列净含量为2.798ng·mL-1。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种测定血浆中达格列净浓度的方法，包括如下步骤：
(1)血浆样品预处理：取血浆样品，加入内标地西泮溶液，加入乙腈沉淀蛋白，高速离心，吸取上清液，加入去离子水，混匀后进样；
(2)将步骤(1)预处理后的血浆样品进行液相色谱分离：
色谱柱为AgilentZORBAXEclipse
C8，4.6×100mm，3.5μm；
流动相：6mmoL/L醋酸铵水溶液和乙腈，两者体积比为50：50；柱温为35℃；流速为700μL·min-1；进样量：50μL；
(3)质谱测定：
离子源：电喷雾离子化电离源ESI；离子检测方式：多反应监测；离子极性：负离子；离子源电压IS：-2500V；离子源温度TEM：700℃；碰撞气CAD：6L·min-1；气帘气CUR：30L·min-1；离子源Gas1：45L·min-1；离子源Gas2：60L·min-1；检测对象的离子选择通道：达格列净[M+CH3COO]－，m/z 467.2/329.2，DP：-45，EP：-10，CE：-25，CXP：-7；内标地西泮[M－H]－，m/z283.3/226.0，DP：-24，EP：-10，CE：-13，CXP：-5；
(4)计算：采用内标法，以达格列净和内标地西泮的峰面积比值代入标准曲线方程计算达格列净浓度。
2.根据权利要求1所述的测定血浆中达格列净浓度的方法，其特征在于，步骤(1)具体为：于1.5mL塑料离心管中精密加入受试者血浆样本200μL，精密加入内标200μg·mL-1地西泮溶液50μL，旋涡10s，加入510μL乙腈沉淀蛋白，涡旋1min，于15000rpm、4℃离心10min；吸取400μL上清液至进样瓶中，加入200μL去离子水，涡旋混匀，进样测定。
3.根据权利要求1所述的测定血浆中达格列净浓度的方法，其特征在于，所述血浆为口服达格列净片或缓释片后的血浆。
4.根据权利要求1所述的测定血浆中达格列净浓度的方法，其特征在于，所述血浆为人或动物后的血浆。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110885971.9A CN113607846A (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 一种测定血浆中达格列净浓度的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110885971.9A CN113607846A (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 一种测定血浆中达格列净浓度的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113607846A true CN113607846A (zh) | 2021-11-05 |
Family
ID=78339230
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110885971.9A Pending CN113607846A (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 一种测定血浆中达格列净浓度的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113607846A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140323417A1 (en) * | 2011-11-28 | 2014-10-30 | Sandoz Ag | Crystalline dapagliflozin hydrate |
| CN109374784A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-02-22 | 安徽联创生物医药股份有限公司 | 一种用hplc分离测定达格列净原料药有关物质的方法 |
| CN111189949A (zh) * | 2019-12-13 | 2020-05-22 | 大连市检验检测认证技术服务中心 | 一种保健食品中利格列汀和沙格列汀同时检测的方法 |
-
2021
- 2021-08-03 CN CN202110885971.9A patent/CN113607846A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140323417A1 (en) * | 2011-11-28 | 2014-10-30 | Sandoz Ag | Crystalline dapagliflozin hydrate |
| CN109374784A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-02-22 | 安徽联创生物医药股份有限公司 | 一种用hplc分离测定达格列净原料药有关物质的方法 |
| CN111189949A (zh) * | 2019-12-13 | 2020-05-22 | 大连市检验检测认证技术服务中心 | 一种保健食品中利格列汀和沙格列汀同时检测的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ANNEMARIE B ET AL: "Simple, fast and robust LC-MS/MS method for the simultaneous quantification of canagliflozin, dapagliflozin and empagliflozin in human plasma and urine", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 * |
| MOKHTAR M. MABROUK ET AL: "Ultrasound-assisted dispersive liquid–liquid microextraction for determinationof three gliflozins in human plasma by HPLC/DAD", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 * |
| SAKSAGLIPTIN ET AL: "Simultaneous Estimation of Saxagliptin and Dapagliflozin in Human Plasma by Validated High Performance Liquid Chromatography - Ultraviolet Method", 《TURK J PHARM SCI》 * |
| 刘林 等: "达格列净对2型糖尿病患者血、尿电解质及尿酸影响的病例观察", 《中国糖尿病杂志》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhang et al. | A tandem mass spectrometry assay for the simultaneous determination of acetaminophen, caffeine, phenytoin, ranitidine, and theophylline in small volume pediatric plasma specimens | |
| US20190029591A1 (en) | Methods for determining total body skeletal muscle mass | |
| CN110068644B (zh) | 高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法 | |
| CN104020241A (zh) | 动物血、脑样品中痕量烟碱及其主要代谢物的同步分析方法 | |
| CN111562322B (zh) | 一种血样中五种抗肿瘤药物的富集检测方法及应用 | |
| CN108802250B (zh) | 超高效液质联用检测脑微透析液中11种神经递质的方法 | |
| CN105136957A (zh) | 一种同时测定人血浆中oxc以及代谢产物mhd和mhd-g的检测方法 | |
| CN108918722B (zh) | 一种基于hplc-ms/ms技术检测nmda受体拮抗剂jcc-02血药浓度的方法 | |
| CN114935620A (zh) | 一种同时定量检测78种神经精神类药物的试剂盒 | |
| CN108072712B (zh) | 一种sd大鼠血浆中新化合物wsj-557的血药浓度定量分析方法 | |
| CN114778747A (zh) | Uplc-ms/ms法同时检测血液中16种药物及其代谢物的方法 | |
| CN110133169A (zh) | 一种采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法及应用 | |
| Kadam et al. | Cassette analysis of eight beta-blockers in bovine eye sclera, choroid–RPE, retina, and vitreous by liquid chromatography–tandem mass spectrometry | |
| CN113281423A (zh) | 一种格列美脲杂质及其在格列美脲原料药与制剂中的分析方法 | |
| CN112394124A (zh) | 一种血浆中西地那非、n-去甲基西地那非及n1,n4-去二甲基西地那非含量分析方法 | |
| CN113607846A (zh) | 一种测定血浆中达格列净浓度的方法 | |
| CN107045031B (zh) | 人血浆中沙格列汀和5-羟基沙格列汀的lc-ms/ms高通量检测方法 | |
| CN114994213A (zh) | 一种测定人血浆中抗肿瘤药物酪氨酸激酶抑制血药浓度的试剂盒及测定方法 | |
| CN113030343B (zh) | 一种血浆中吡咯喹啉醌的液相色谱串联质谱检测方法 | |
| CN109298081B (zh) | 一种新利司他中杂质a生物样品的测定方法 | |
| CN113899894A (zh) | 一种同时检测贝伐珠单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法 | |
| CN111521711A (zh) | 一种测定血浆中尼洛替尼浓度的方法 | |
| CN111830162A (zh) | 一种检测血清中核苷类抗病毒药物浓度的方法 | |
| CN111679004A (zh) | 一种普罗布考的质量控制方法 | |
| CN112730682B (zh) | 一种抗病毒药物临床研究血浆样本中奥司他韦及代谢物奥司他韦酸浓度的生物分析方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211105 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |