CN113604364A

CN113604364A - 一种棘孢木霉菌株及其应用

Info

Publication number: CN113604364A
Application number: CN202111018022.7A
Authority: CN
Inventors: 赵兴丽; 卢声洁; 张莉; 周玉锋
Original assignee: Guizhou tea research institute
Current assignee: Guizhou tea research institute
Priority date: 2021-09-01
Filing date: 2021-09-01
Publication date: 2021-11-05
Anticipated expiration: 2041-09-01
Also published as: CN113604364B

Abstract

本发明提供了一种棘孢木霉菌株，该所棘孢木霉菌株命名为棘孢木霉SX‑KXTM‑T11Trichoderma asperellum SX‑KXTM‑T11，保藏编号为CCTCC NO:M2021919，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2021年7月21日。还提供了应用，用于提高茶树的抗病性、提高茶青产量和茶叶品质。本发明可以提高茶树的抗病性、提高茶青产量和茶叶品质成分。

Description

一种棘孢木霉菌株及其应用

技术领域

本发明属于棘孢木霉技术领域，具体涉及一种棘孢木霉菌株及其应用。

背景技术

茶轮斑病是茶树栽培生产中一类重要的叶部病害，对茶树树势、茶叶品质和产量影响较大。长期以来，化学农药一直是茶种植业中的一项重要植保措施，但随着茶园病害发生日趋严重，农药使用频率也在逐步加强，从而导致3R等问题日益凸显，严重影响茶产品质量安全及茶园生态安全。寻找更为安全有效的防治措施来替代传统药剂的使用，对促进茶农节本增效、茶园生态及茶产业健康发展具有重要意义。微生物作为一类新型生防资源，可有效推进茶园有害生物进行无害化治理，是减少或替代化学农药使用的一项重要措施。另外，如何改善并提高茶青产量和茶叶品质是茶叶加工后面临的重要问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种棘孢木霉菌株及其应用，该棘孢木霉菌株可以提高茶树的抗病性、提高茶青产量和茶叶品质。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种棘孢木霉菌株，其特征在于，所述棘孢木霉菌株命名为棘孢木霉SX-KXTM-T11Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11，保藏编号为CCTCC NO:M2021919，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2021年7月21日。

优选地，所述棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11的tef正向序列如SEQ ID NO:1所示，所述ITS正向序列如SEQ ID NO:3所示。

本发明还提供了上述的棘孢木霉菌株的应用，其特征在于，所述棘孢木霉菌株用于提高茶树的抗病性。

优选地，所述棘孢木霉菌株用于防治由Neopestalotiopsis ellipsospora引起的茶树轮斑病。

优选地，所述棘孢木霉菌株用于提高茶树叶片病程相关蛋白基因CSS0006056、CSS0019982和CSS0030854的表达量。

本发明还提供了上述的棘孢木霉菌株的应用，所述棘孢木霉菌株用于提高茶青产量和茶叶品质成分。

优选地，所述棘孢木霉菌株用于提高茶叶中氨基酸、茶多酚和总儿茶素的含量。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

本发明的棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11可以提高茶树的抗病性，用于防治Neopestalotiopsis ellipsospora引起的茶树轮斑病，提高茶树叶片病程相关蛋白基因CSS0006056、CSS0019982和CSS0030854的表达量，还可以提高茶青产量和茶叶品质成分。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。

附图说明

图1是本发明实施例1的木霉菌株SX-KSTM-T11对茶轮斑病的生长抑制作用图。

图2是本发明实施例1的木霉发酵液对茶轮斑病的生长抑制作用图。

图3是本发明实施例1的木霉菌株SX-KSTM-T11的形态特征图。

图4是本发明实施例1的基于ITS和tef基因片段构建最大似然树图。

具体实施方式

实施例1

本实施例为棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11的分离、筛选、鉴定和保藏：

1、茶树根际木霉菌分离：

用铁铲将茶树根围表层土壤及腐叶除去后，采用五点取样法挖取深度约10cm的土壤，装入无菌样品袋中带回实验室，风干、备用。采用梯度稀释法对采自茶树根际土样进行木霉菌株的分离。称取5g风干土样倒入装有45mL无菌水的锥形瓶中，28℃、150r/min振荡培养30min，使之充分混匀后即可得到浓度为10^-1g/mL的样品悬液。在超净工作台中将其逐一稀释成10^-2g/mL、10^-3g/mL和10^-4g/mL的浓度，静置后用移液枪分别取10^-3g/mL和10^-4g/mL的悬液100μL滴于虎红酸钠培养基平板上，无菌涂布棒涂匀，密封，28℃培养箱中倒置、黑暗培养，待有菌落形成后将其转至新鲜PDA培养基上纯化，转接2次，得到纯培养物，硫酸纸袋进行低温(-20℃)保存。

先后从贵州、广西、陕西和浙江等茶区共采集茶树根际土样154份，分离到木霉菌株共258株(如表1)。贵州茶区采集土壤样品89份，分离木霉菌138株；浙江茶区采集土壤样品15份，分离到木霉菌9株；广西茶区采集土样15份，共获得木霉菌12株；陕西茶区采集土壤样品35份，分离木霉菌99株。

表1土样采集及木霉分离情况

2、拮抗茶轮斑病的木霉菌筛选：

试验所用病原菌(ZYP04-5)卵圆新拟盘多毛孢(Neopestalotiopsisellipsospora)，为实验室分离鉴定所得。以菌株ZYP04-5为靶标菌采用两点对峙法对木霉菌株进行初筛。在距离PDA平板中心2.5cm处的直径上分别接种培养7d的木霉菌和茶轮斑病菌菌饼(直径为6mm)，每组3个重复，以单接茶轮斑病菌为对照，于25℃下培养7d。7d后测量并计算茶轮斑病菌的生长速度，同时统计木霉菌对茶轮斑病菌的覆盖率。对初筛效果较好的木霉菌采用抑菌圈法进行复筛。无菌条件下取8个直径为6mm的木霉菌菌饼接于120mL的PDB培养基中，28℃、180r/min条件下振荡培养7d，静置2d，经灭菌过滤纸初步过滤后，7830r/min离心10min，取上清液通过0.22μm滤膜。按10％的比例将木霉菌发酵液加入到PDA培养基中，混匀倒平板，取茶轮斑病菌饼接种于平板中央。25℃培养7d，十字交叉法测量茶轮斑病菌菌落半径，计算其抑菌效果。

通过平板对峙试验，258株木霉菌对茶轮斑病病原菌ZYP04-5的生长均有一定抑制作用，生长抑制率大于60％的菌株共有234株。由于木霉菌生长速度较快，可迅速占领营养和生长空间，培养3d后大部分木霉菌菌丝开始与病原菌菌丝接触，从而导致交界处病原菌菌丝受到抑制，减缓生长或停止生长。随着培养时间的延长，部分木霉菌菌丝可覆盖病原菌生长，并在病原菌上产生大量分生孢子，致使病原菌菌落变色。通过抑菌圈法对234株初筛效果大于60％的木霉菌株进行复筛。

结果表明，菌株SX-KSTM-T11对茶轮斑病具有较强的抑制作用，对菌株ZYP04-5的生长抑制率为72.44％(图1)，如图1所示，A和B为单接种病原菌的对照，其中A为菌落正面，B为菌落背面；C和D为同时接种病原菌和木霉菌，木霉菌对病原菌的抑制情况，C为正面，D为背面。由图1可知，菌株SX-KSTM-T11可通过营养竞争(优先占据平板，吸收营养)和空间竞争(覆盖于病原菌菌落上方继续生长)从而抑制病原菌的生长。

菌株SX-KSTM-T11的发酵液对菌株ZYP04-5的抑菌率为62.94％(图2)，如图2所示，A和B为平板中加入无菌水后病原菌的生长情况，其中A为菌落正面，B为菌落背面；C和D为平板中加入菌株SX-KSTM-T11发酵液后病原菌的生长情况，C为正面，D为背面。由图2可知，菌株SX-KSTM-T11的发酵液会明显的抑制病原菌的生长。

3、木霉菌株SX-KSTM-T11的鉴定：

木霉菌株SX-KSTM-T11纯化培养7d后，挑取木霉菌菌丝和分生孢子制成水玻片，于显微镜下观察木霉菌的分生孢子梗、分生孢子等形态特征。并使用灭菌手术刀收集木霉菌菌丝及分生孢子，采用Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒提取基因组DNA。采用真菌引物ITS1/ITS4和真菌引物TEF-728F/TEF-rev分别扩增该菌株的ITS和tef片段，所述棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11的tef正向序列如SEQ ID NO:1所示，tef反向序列如SEQ ID NO:2所示，所述ITS正向序列如SEQ ID NO:3所示，ITS反向序列如SEQ ID NO:4所示；所述真菌引物ITS1的序列如SEQ ID NO:5所示，所述真菌引物ITS4的序列如SEQ ID NO:6所示，真菌引物引物TEF-728F的序列如SEQ ID NO:7所示，真菌引物引物TEF-rev的序列如SEQ ID NO:8所示。

扩增体系(25μL)：2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，dd H₂O 9.5uL，DNA模板、上游引物和下游引物各1μL。ITS扩增程序为：95℃预变性3min，95℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，35个循环，最后72℃延伸5min；EF-1α扩增程序为：98℃预变性2min，98℃变性10sec，58.4℃退火15sec，72℃延伸10sec，35个循环，最后72℃延伸5min；扩增产物依托上海公司进行一代序列测定。测序结果经Gene Bank中的BLAST比对分析后下载相似性较高序列，采用BioEdit进行比对和校正，利用MAGA 6.0软件将ITS和tef基因序列连接起来，比对拼接后的序列采用RA×ML软件构建系统进化树，以确定该菌与同属菌株间的亲缘关系。

木霉菌株SX-KXTM-T11菌落在PDA培养基上生长较快，28℃下培养72h即可长满直径为90mm培养皿，菌落呈白色，气生菌丝较多，无分生孢子产生；培养至10d左右可形成同心轮纹结构，由淡黄色分生孢子组成，无色素和特殊气味产生(图3A，菌落正反面)。在PDA培养基上可产生垫状至半球状分生孢子簇，散生或聚生，棉絮状。分生孢子梗单生或对生于节上，在梗的顶部，瓶梗2～4个呈直角生出，安瓿形(图3B，菌丝及分生孢子梗)；分生孢子黄绿色，亚球形至卵圆形，光滑，直径约为2.36～3.39μm，没有厚基孢子(图3C，分生孢子)。

PCR扩增菌株SX-KXTM-T11的基因组DNA的ITS和tef片段，获得片段长度分别为513bp和545bp的碱基序列，将序列提交至NCBI比对，选取并下载与菌株SX-KXTM-T11序列相似性高的菌株为内群，以Nectria eustromatica和Nectria berolinensis为外群构建系统发育树(表2、图4。结果表明，菌株SX-KXTM-T11以100％的支持率与Trichodermaasperellum聚为一枝，结合该菌株形态学特征，将菌株SX-KXTM-T11鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum。

表2本实施例中所用的菌株

4、木霉菌的保藏：

保藏编号为CCTCC NO:M2021919，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2021年7月21日。

实施例2

本实施例为棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液提高茶树的抗病性：

试验于贵州省茶叶研究所茶园实施(海拔为1110.83m)。采用常规喷雾法将棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液喷施于茶树蓬面，以喷施清水为对照，用量8L，3次重复，小区面积约33m²，共约150株茶树，随机区组排列。

1、RNA文库建立和测序：

以清水为对照，棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液处理的茶树叶片为材料，委托成都诺米代谢生物科技有限公司，采用第二代测序技术，基于Illumina测序平台完成测序工作，主要方法如以下：

将已通过Aglient 2100仪器质检合格的RNA，采用合成mRNA的全长cDNA进行转录组数据库的构建，具体操作按说明书进行。采用PCR扩增进行文库片段富集，通过Aglient2100Bioanalyzer对文库、文库总浓度及文库总浓度有效浓度进行质检。将已构建好的cDNA文库在Illumina测序平台上机测序。获得原始下机数据(polymerase reads)，进行过滤，将过滤后得到的高质量序列(Clean Data)比对到该物种的参考基因组上。根据比对结果，计算每个基因的表达量，在此基础上，进一步对样品进行表达差异分析和富集分析等。

茶叶总RNA提取：

a.取10-20mg组织加入300μL裂解液RL，用研磨器彻底匀浆，向匀浆中加入600μLRNase-Free ddH₂O(含有10μL Proteinase K)，混匀后56℃放置10min；

b.12,000rpm离心5min，取上清；

c.缓慢加入0.5倍上清体积无水乙醇，混匀，将得到的溶液转入吸附柱CR3中，12,000rpm离心30s，倒掉收集管中的废液；

d.向吸附柱CR3中加入350μL去蛋白液RW1，12,000rpm离心30s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中，向吸附柱中央加入80μL的DNaseⅠ工作液，室温放置15min；

e.向吸附柱CR3中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30s，弃掉废液，将吸附柱CR3放回收集管中；

f.向吸附柱CR3中加入500μL漂洗液RW，12000rpm离心30s，弃掉废液，将吸附柱放回收集管中，再重复操作一次；

g.12,000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3室温放置2min，彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液将吸附柱CR3转入RNase-Free离心管中，向吸附膜中间位置悬空加入80μL RNase-Free dd H₂O，室温放置2min，12,000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中，-20℃保存备用；

采用Trizol法分别提取清水处理(DZ)和棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichodermaasperellum SX-KXTM-T11发酵液处理的茶树叶片总RNA，各RNA条带清晰。应用Agilent2100仪器检测总RNA质量，质量均合格且满足建库需求。

2、表达差异分析：

使用HTSeq统计基因的表达量，采用DESeq对基因表达进行差异分析，通过FPKM(FPKM>1)对基因表达量进行标准化，FPKM>1表示基因是表达的，根据基因表达量计算相同基因在不同处理间表达的差异倍数，筛选条件为：表达差异倍数|log2FoldChange|>1，显著性P-value<0.05。

棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液处理的茶树样品以及清水对照茶树样品的转录组测序原始数据经Cutadapt去除3'端带接头的序列，去除平均质量分数低于Q20的Reads。并使用HISAT2(http://ccb.jhu.edu/software/hisat2/index.shtml)软件将过滤后的Reads比对到茶树舒茶早参考基因组上。

3、差异表达基因功能注释：

使用Blast2GO软件进行差异基因功能GO(http://www.geneontology.org/)注释，结合KEGG在线数据库与GO数据库(Gene Ontology)，获得相关基因的注释信息，进一步对基因功能富集与代谢途径进行分析。

对差异表达基因的GO富集注释的条目按照细胞组分(cellular component)、分子功能(molecular function)以及生物学过程(biologicalprocess)进行GO分类。基于GO数据库，与处理组(CK)相比，棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液处理茶树叶片的转录组中有224条差异表达基因被注释到一个或多个GO term。又经KEGG在线富集分析发现，棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液处理后茶树叶片的代谢通路主要富集在代谢调节途径上。以表达差异倍数|log2FoldChange|>1和P-value<0.05(这个都是用英文表示的)为筛选条件得到163个显著差异表达基因，其中86个基因上调，77个基因下调。为进一步分析棘孢木霉SX-KXTM-T11Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液处理对茶树叶片的影响，筛选出与抗病相关且显著上调的表达基因。结果发现，与对照相比，棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichodermaasperellum SX-KXTM-T11发酵液处理后茶树叶片中有3条基因(表3)：CSS0006056(PR1)，CSS0019982(E1.11.1.7)，CSS0030854(C2H2)显著上调。

表3抗病相关基因差异表达情况

4、显著差异表达基因的qRT-PCR验证：

使用Primer 3软件设计引物，委托成都诺米代谢生物科技有限公司合成，引物序列为：

内参基因ACTB的正向引物的序列如SEQ ID NO:9所示，

内参基因ACTB的反向引物的序列如SEQ ID NO:10所示，

CSS0006056基因的正向引物的序列如SEQ ID NO:11所示，

CSS0006056基因的反向引物的序列如SEQ ID NO:12所示，

CSS0019982基因的正向引物的序列如SEQ ID NO:13所示，

CSS0019982基因的反向引物的序列如SEQ ID NO:14所示，

CSS0030854基因的正向引物的序列如SEQ ID NO:15所示，

CSS0030854基因的反向引物的序列如SEQ ID NO:16所示。

qRT-PCR与数据分析：使用FastKing RT Kit(KR116)试剂盒将提取好的总RNA反转录合成cDNA。置于-20℃保存备用。使用Power qPCR PreMix(Genecopoeia)试剂(10μL)和Primer_F+R(1μL)配制成混合液，荧光定量反应体系和反应程序见表4-5。每个样品做3个技术性重复。采用ΔΔCt法对qRT-PCR扩增数据进行处理，利用统计学软件IBM spssstatistics 22对扩增数据进行显著性分析。

表4荧光定量反应体系

试剂	使用量
		Mix+引物(混合液)	10μL
DNA模板	10μL
		Total	20μL

表5荧光定量反应程序

通过qRT-PCR验证喷施棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液后茶树抗病相关基因的表达量变化。筛选出与抗病相关的3个基因的相对表达量和转录组测序结果进行比较(表6)，发现3个基因虽在差异表达倍数上存在一定偏差，但总体趋势相同。

表6转录组上调表达基因验证结果

通过转录组测序分析发现，棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液处理茶树叶片后，茶树叶片中与病程相关蛋白基因CSS0006056(PR1)出现高表达，并通过对该基因进行qRT-PCR验证表明转录组测序结果可靠。研究结果表明，棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液提高了茶树的抗病性。

实施例3

本实施例为棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液对茶青产量和品质的影响：

棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液喷施茶蓬30d后采集50cm×50cm样框中一芽2叶，茶样带回实验室后，先用微波炉进行杀青处理，中火，90s；再置于80℃烘箱中进行烘干处理，干样内含物依托贵州省茶叶研究所采用高效液相法进行茶叶品质检测。

棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液处理茶树后，茶青产量与清水对照(CK)相比均呈增加趋势(表7)，其增加率分别为16.57％；茶叶内含物氨基酸、茶多酚和儿茶素总量与清水对照(CK)相比也呈增加趋势，其中氨基酸的增加率为9.83％，茶多酚增加率为20.80％，儿茶素总量增加率为25.67％。

表7棘孢木霉SX-KXTM-T11发酵液处理后对茶叶品质和产量的影响

处理	茶青产量(g)	氨基酸(％)	茶多酚(％)	总儿茶素(％)
					CK	55.17±18.48	1.73±0.06	8.80±1.31	6.39±0.49
SX-KXTM-T11	64.31±19.57	1.90±0.10	10.63±0.31	8.03±0.13
					增加率	16.57	9.83	20.80	25.67

实施例4

本实施例为棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11的应用，用于防治茶树轮斑病(Neopestalotiopsis ellipsospora)。

采用棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液喷施茶蓬，茶树轮斑病爆发初期进行第一次施药，在第一次施药后15天进行第二次施药，共施药2次。

试验设2个处理组:

处理A组为每次施药每株茶树植株根际接种50mL的浓度为1×10⁶个孢子/mL的棘孢木霉SX-KXTM-T11 Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11发酵液；

处理B组为在茶树植株上喷施50mL清水作为空白对照；

每个处理组分别设置3个重复小区，每小区约100株茶树，每小区的面积约为100m²。

在自然发病情况下，于茶树轮斑病发病高峰期对叶片发病情况进行分级，根据发病分级指数计算病情指数及防治效果，每个小区随机调查10株(每株随机选取10片叶片进行调查)，参照《农药田间药效试验准则》制定分级标准，对发病情况进行分级，分级标准如下：

0级，叶片无病斑；

1级，叶片病斑占整个叶片面积的5％以下；

3级，叶片病斑占整个叶片面积的6％～10％；

5级，叶片病斑占整个叶片面积的11％～25％；

7级，叶片病斑占整个叶片面积的26％～50％；

9级，叶片病斑占整个叶片面积的50％以上。

叶片发病率(％)＝100％×发病叶片数/总调查叶片数；

病情指数＝100×Σ(各级病叶数×病害级别数)/(调查总叶数×9)；

防治效果(％)＝100×(对照区病情指数-处理区病情指数)/对照区病情指数。

结果如表8，使用50mL发酵液喷施于茶树蓬面，可有效防治茶树轮斑病，防治效果能达到61.42％。

表8各处理对茶树轮斑病的防治效果

处理组	发病率(％)	病情指数	防治效果(％)
				处理A组	35.00±5.43a	9.56±2.10b	61.42％
处理B组	53.00±5.97a	24.78±0.04a	-

注：表中字母表示p<0.05水平下的差异显著性，-表示未调查。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

序列表

<110> 贵州省茶叶研究所

<120> 一种棘孢木霉菌株及其应用

<130> 2020.3.10

<160> 16

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 536

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 1

tgtgaacgtt accaaactgt tgcctcggcg gggtcacgcc ccgggtgcgt cgcagccccg 60

gaaccaggcg cccgccggag gaaccaacca aactctttct gtagtcccct cgcggacgta 120

tttcttacag ctctgagcaa aaattcaaaa tgaatcaaaa ctttcaacaa cggatctctt 180

ggttctggca tcgatgaaga acgcagcgaa atgcgataag taatgtgaat tgcagaattc 240

agtgaatcat cgaatctttg aacgcacatt gcgcccgcca gtattctggc gggcatgcct 300

gtccgagcgt catttcaacc ctcgaacccc tccgggggat cggcgttggg gatcgggacc 360

cctcacacgg gtgccggccc cgaaatacag tggcggtctc gccgcagcct ctcctgcgca 420

gtagtttgca caactcgcac cgggagcgcg gcgcgtccac gtccgtaaaa cacccaactt 480

tctgaaatgt tgacctcgga tcaggtagga atacccgctg aacttaagca tatcaa 536

<210> 2

<211> 536

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 2

aggtcacatt tcagaaagtt gggtgtttta cggacgtgga cgcgccgcgc tcccggtgcg 60

agttgtgcaa actactgcgc aggagaggct gcggcgagac cgccactgta tttcggggcc 120

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aaatgacgct cggacaggca tgcccgccag aatactggcg ggcgcaatgt gcgttcaaag 240

attcgatgat tcactgaatt ctgcaattca cattacttat cgcatttcgc tgcgttcttc 300

atcgatgcca gaaccaagag atccgttgtt gaaagttttg attcattttg aatttttgct 360

cagagctgta agaaatacgt ccgcgagggg actacagaaa gagtttggtt ggttcctccg 420

gcgggcgcct ggttccgggg ctgcgacgca cccggggcgt gaccccgccg aggcaacagt 480

ttggtaacgt tcacattggg tttgggagtt gtaaactcgg taatgatccc tccgca 536

<210> 3

<211> 588

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 3

aattatatgc ccgacaattc tgttctcagt tttgtctttc ttttttcagc atcaccccgc 60

tttgccagcc tacctacccc tcctttggca cagcaaaaaa ttttctcgct gccttgtttg 120

gcttttagtg gggtgtcaat tttgtttgac gacaacccca ctatcgccac tgtacctctt 180

tccatcatcc accacatgct tttgttcaat cgcatcgtct attttcaata tctcttgttc 240

attatgctga tcatgcttca atcaatagga agccgccgaa ctcggcaagg gttccttcaa 300

gtatgcgtgg gttcttgaca agctcaaggc cgagcgtgag cgtggtatca ccatcgacat 360

tgccctctgg aagttcgaga ctcccaagta ctatgtcacc gtcattggta tgttttggac 420

acttcagtcg acattgcaag atcgtcattc taacatactc tccccacaga cgctcccggt 480

caccgtgatt tcatcaagaa catgatcact ggtacctccc aggctgactg cgctatcctg 540

attatcgctg ccggtactgg tgagttcgag gctggtatct ccaaggat 588

<210> 4

<211> 599

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 4

atcaggatag cgcagtcagc ctgggaggta ccagtgatca tgttcttgat gaaatcacgg 60

tgaccgggag cgtctgtggg gagagtatgt tagaatgacg atcttgcaat gtcgactgaa 120

gtgtccaaaa cataccaatg acggtgacat agtacttggg agtctcgaac ttccagaggg 180

caatgtcgat ggtgatacca cgctcacgct cggccttgag cttgtcaaga acccacgcat 240

acttgaagga acccttgccg agttcggcgg cttcctattg attgaagcat gatcagcata 300

atgaacaaga gatattgaaa atagacgatg cgattgaaca aaagcatgtg gtggatgatg 360

gaaagaggta cagtggcgat agtggggttg tcgtcaaaca aaattgacac cccactaaaa 420

gccaaacaag gcagcgagaa aattttttgc tgtgccaaag gaggggtagg taggctggca 480

aagcggggtg atgctgaaaa aagaaagaca aaactgagaa cagaattgtc gggcatataa 540

ttgtgccaaa aattgatggg aaaagcagtg aaattagctt accttctcga actttctcg 599

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 5

tccgtaggtg aacctgcgg 19

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 6

tcctccgctt attgatatgc 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 7

catcgagaag ttcgagaagg 20

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 8

gccatccttg gagataccag c 21

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 9

gccatctttg attggaatgg 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 10

ggtgccacaa ccttgatctt 20

<210> 11

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 11

agtgggtgtt gggacctat 19

<210> 12

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 12

cctcagcaag gttctctcc 19

<210> 13

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 13

tgcttcttta cttaggctcc a 21

<210> 14

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 14

ccctttctca ctcactatgc t 21

<210> 15

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 15

gccaactgct tgatgctac 19

<210> 16

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial synthesis)

<400> 16

ttggaatgat ggaaactgg 19

Claims

1.一种棘孢木霉菌株，其特征在于，所述棘孢木霉菌株命名为棘孢木霉SX-KXTM-T11Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11，保藏编号为CCTCC NO:M2021919，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2021年7月21日。

2.根据权利要求1所述的一种棘孢木霉菌株，其特征在于，所述棘孢木霉SX-KXTM-T11Trichoderma asperellum SX-KXTM-T11的tef正向序列如SEQ ID NO:1所示，所述ITS正向序列如SEQ ID NO:3所示。

3.一种如权利要求1或2所述的棘孢木霉菌株的应用，其特征在于，所述棘孢木霉菌株用于提高茶树的抗病性。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述棘孢木霉菌株用于防治由Neopestalotiopsis ellipsospora引起的茶树轮斑病。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述棘孢木霉菌株用于提高茶树叶片病程相关蛋白基因CSS0006056、CSS0019982和CSS0030854的表达量。

6.一种如权利要求1或2所述的棘孢木霉菌株的应用，其特征在于，所述棘孢木霉菌株用于提高茶青产量和茶叶品质成分。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述棘孢木霉菌株用于提高茶叶中氨基酸、茶多酚和总儿茶素的含量。