CN113599426A - 陈皮提取物在制备预防或治疗病毒感染诱导的炎症的产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本申请提供了陈皮提取物在制备预防或治疗病毒感染诱导的炎症的产品中的应用。本申请提供的陈皮提取物具有优异的抗炎症活性，在制备预防或治疗病毒感染诱导的炎症的产品具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本申请涉及生物医学领域，特别涉及陈皮提取物在制备预防或治疗病毒感染诱导的炎症的产品中的应用。
背景技术
冠状病毒(Coronavirus)是导致肺炎以及死亡的重要原因。炎症损伤反应在冠状病毒感染引起的肺炎以及多脏器损伤中起着重要作用。活性氧(ROS)是由肺上皮细胞、内皮细胞以及炎症细胞产生的高度不稳定分子，能够损伤多种细胞成分(如脂质、蛋白质和DNA)；细胞内多余的ROS还能够诱导核因子发生转录，导致炎症因子的产生。目前，针对冠状病毒感染引发的炎症损伤尚无有效的治疗方法，因此研发出一款具有强抗炎活性的药物显得迫在眉睫。
发明内容
有鉴于此，本申请提供了陈皮提取物在制备预防或治疗病毒感染诱导的炎症的产品中的应用。本申请提供的陈皮提取物具有优异的抗炎症效果，尤其对病毒感染诱导的炎症具有优异的抑制作用。
本申请提供了陈皮提取物在制备预防或治疗病毒感染诱导的炎症的产品中的应用。
可选的，所述陈皮提取物抑制冠状病毒诱导的炎症因子释放。
进一步的，所述陈皮提取物抑制HCoV-229E冠状病毒诱导的支气管上皮细胞的炎症反应。
可选的，所述陈皮提取物包括橘皮素、新橙皮苷、橙皮苷、橙皮素、5,7,8,4’-四甲氧基黄酮、3,3’,4’,5,6,7,8-七甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素和川陈皮素中的至少一种。
可选的，所述陈皮提取物的IC50浓度为3mg/mL～5mg/mL。
可选的，所述陈皮提取物的制备方法包括：将陈皮原料进行干燥和粉碎，得到陈皮粉，所述干燥的温度为100℃～150℃，所述干燥的时间为2h～5h；所述陈皮粉置于碱性溶液进行提取，经过滤得到陈皮提取液；所述陈皮提取液经冷冻干燥后得到所述陈皮提取物。
进一步的，所述碱性溶液的pH大于7且小于12；所述陈皮粉和所述碱性溶液的质量比为1：(10～20)；所述提取的温度为60℃～100℃，所述提取的时间为20min～60min。
进一步的，所述碱性溶液为通过向水溶液中滴加碱液获得。
进一步的，所述冷冻干燥包括在-80℃～-20℃进行速冻处理20min-60min，再在-80℃～-60℃的条件下进行冻干处理6h～8h。
可选的，所述产品包括食品、药品和保健品中的至少一种。
本申请提供的陈皮提取物抗炎活性强、细胞毒性小，能够有效抑制病毒感染诱导的炎症，在抗炎症领域，尤其是预防或治疗病毒感染诱导的炎症损伤方面具有广泛的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本申请提供的陈皮提取物的抗炎症效果图，其中，图1中(a)为CXCL10表达水平，图1中(b)为IFN-beta表达水平。
图2为本申请提供的陈皮提取物对细胞形态的作用效果图。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
本申请提供了陈皮提取物在制备预防或治疗病毒感染诱导的炎症的产品中的应用。本申请提供的陈皮提取物抗炎活性强，能够有效抑制病毒感染诱导的炎症反应，在抗炎症领域具有广泛的应用前景。
在本申请实施方式中，陈皮提取物的制备方法包括：将陈皮原料进行干燥和粉碎，得到陈皮粉，干燥的温度为100℃～150℃，干燥的时间为2h～5h；陈皮粉置于碱性溶液进行提取，经过滤得到陈皮提取液；陈皮提取液经冷冻干燥后得到陈皮提取物。在本申请中，在提取之前将陈皮进行粉碎并在高温下进行干燥，同时在提取中采用碱性溶液，极大地提高了陈皮提取物中活性成分的含量；相比于直接进行提取的工艺，本申请提供的制备方法使得陈皮提取物中活性成分的含量提高了近一倍，从而提高了陈皮提取物的抗炎症活性，更有利于其应用。
在本申请实施方式中，陈皮原料为广陈皮。具体的，陈皮原料产自广东新会天马产区。在本申请实施方式中，陈皮原料陈化时间不小于3年，从而有利于陈皮中活性成分的提取。进一步的，陈皮原料陈化时间不小于5年。
在本申请中，陈皮原料在粉碎前先进行干燥处理，既有利于后续粉碎的进行，同时还可以提高提取过程中抗炎症活性成分的提取量。在本申请中，干燥的温度为100℃～150℃，干燥的时间为2h～5h。进一步的，干燥的温度为110℃～140℃，干燥的时间为2.5h～4h。更进一步的，干燥的温度为120℃～135℃，干燥的时间为3h～4h。具体的，干燥的温度可以但不限于为100℃、110℃、125℃、130℃、135℃或145℃等，干燥的时间可以但不限于为2h、2.5h、3h、3.5h、4h或5h等。在一具体实施例中，陈皮原料在120℃干燥3h。
在本申请中，通过将陈皮原料进行粉碎，从而更有利于在提取过程中陈皮活性成分的提取，提高提取率。具体的，可以但不限于通过锤式粉碎机进行粉碎。在本申请实施方式中，陈皮粉的粒径小于8目。通过将陈皮原料粉碎至粒径小于8目，更有利于陈皮粉在碱性容易中的均匀分散，从而提高陈皮提取物中抗炎症活性成分含量。进一步的，陈皮粉的粒径小于20目。具体的，陈皮粉的粒径可以但不限于小于10目、14目、16目、18目、22目或24目等。
在本申请实施方式中，碱性溶液为通过向水溶液中滴加碱液获得。具体的，水溶液包括自来水、去离子水、超纯水、双蒸水等中的至少一种，碱液包括氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、氨水等中的至少一种。
在本申请实施方式中，碱性溶液的pH大于7且小于12。通过在上述碱性溶液中进行陈皮提取物的提取过程，有利于增加陈皮提取物中抗炎症活性成分的含量。进一步的，碱性溶液的pH为8-11。具体的，碱性溶液的pH可以但不限于为8、8.5、9、9.5、10、11或11.5等。在一具体实施例中，碱性溶液的pH为10。
在本申请实施方式中，陈皮粉和碱性溶液的质量比为1：(10～20)。在上述范围内陈皮粉能够更好地分散在碱性溶液中，有利于提取的进行，增加陈皮提取物中活性成分含量，提高陈皮提取物的抗炎症活性。进一步的，陈皮粉和碱性溶液的质量比为1：(12～18)。更进一步的，陈皮粉和碱性溶液的质量比为1：(13～16)。具体的，陈皮粉和碱性溶液的质量比可以但不限于为1:10、1:11、1:14、1:15、1:17、1:19或1:20等。在一具体实施例中，陈皮粉和碱性溶液的质量比为1：10。
在本申请实施方式中，提取的温度为60℃～100℃，提取的时间为20min～60min。上述提取工艺可以更好地获得陈皮中的抗炎症活性成分，如黄酮类物质等，以提高陈皮提取物的抗炎症活性。进一步的，提取的温度为70℃～90℃，提取的时间为30min～50min。具体的，提取的温度可以但不限于为63℃、70℃、78℃、80℃、88℃或95℃等，提取的时间可以但不限于为20min、23min、32min、35min、40min、44min、50min或55min等。在一具体实施例中，提取的温度为100℃，提取的时间为30min。
在本申请中，提取后将混合溶液进行过滤，除去提取后的陈皮粉，获得含有抗炎症活性成分的陈皮提取液。具体的，可以通过滤网进行过滤。在本申请一实施方式中，在冷冻干燥前，还可以对陈皮提取液进行中和。进一步的，在陈皮提取液中加入酸性溶液进行中和。具体的，可以但不限于加入柠檬酸进行中和。
在本申请实施方式中，冷冻干燥包括在-80℃～-20℃进行速冻处理20min-60min，再在-80℃～-60℃的条件下进行冻干处理6h～8h。上述冷冻干燥过程有利于减少活性成分的损失，同时有利于保持活性成分的活性，提高后续制得的陈皮提取物的抗炎症活性。进一步的，冷冻干燥包括在-80℃～-40℃进行速冻处理25min-40min，再在-75℃～-65℃的条件下进行冻干处理6h～7.5h。
本申请提供的制备方法简单，操作方便，可以制得具有抗炎症活性的陈皮提取物，该陈皮提取物毒性小、副作用小、抗炎症活性强，能够有效抑制病毒感染诱导的炎症损伤，在抗炎症领域具有广泛的应用前景。
本申请提取的方法能够更多的富集陈皮中多酚类物质，如橙皮苷、多甲基氧黄酮等黄酮类物质，提高陈皮提取物的活性，从而增强其抗炎症的效果。在本申请实施方式中，陈皮提取物包括橘皮素、新橙皮苷、橙皮苷、橙皮素、5,7,8,4’-四甲氧基黄酮、3,3’,4’,5,6,7,8-七甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素和川陈皮素中的至少一种。
在本申请实施方式中，陈皮提取物的IC50浓度为3mg/mL～5mg/mL。具体的，陈皮提取物的IC50浓度可以但不限于为3mg/mL、3.2mg/mL、3.59mg/mL、3.8mg/mL、4mg/mL、4.3mg/mL、4.5mg/mL、4.7mg/mL、4.8mg/mL或5mg/mL等。
在本申请实施方式中，陈皮提取物抑制冠状病毒诱导的炎症因子释放。本申请提供的陈皮提取物抑制冠状病毒诱导的炎症因子释放，进而抑制病毒感染诱导的炎症反应，从而对机体起到保护作用。进一步的，陈皮提取物抑制HCoV-229E冠状病毒诱导的支气管上皮细胞的炎症反应。进一步的，陈皮提取物抑制HCoV-229E冠状病毒诱导的炎症因子的产生。
在本申请实施方式中，产品包括食品、药品和保健品中的至少一种。通过将上述陈皮提取物作为食品、药品和保健品中的活性成分，使食品、药品和保健品具有抗炎症的活性。在本申请一实施例中，具有抗炎症活性的陈皮提取物可以作为天然药物用于预防或治疗抗炎症药品中，提高药品的安全性，降低药品的副作用。
在本申请实施方式中，产品中还包括载体，载体用于负载陈皮提取物。在本申请一实施例中，载体可以但不限于包括溶剂、聚合物和脂质体中的至少一种。在一实施例中，溶剂包括但不限于水、生理盐水，以及其他非水性溶剂。在另一实施例中，聚合物包括聚赖氨酸、聚乙烯亚胺、壳聚糖、聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸、明胶、环糊精、海藻酸钠、白蛋白和血红蛋白中的至少一种。在又一实施例中，脂质体可以由阳离子类脂、中性辅助类脂、胆固醇、磷脂自组装而成，也可以由二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇穿插于磷脂分子形成的磷脂层中形成。在本申请中，陈皮提取物可以分散或吸附在上述载体表面或内部，形成均匀且稳定的分散体系，有利于提高产品中陈皮提取物活性成分的稳定性，从而提高产品的抗炎症效果。
在本申请实施方式中，产品中还包括辅料，辅料包括稀释剂、赋形剂和稳定剂中的一种或多种。在本发明中，稀释剂的主要作用为填充片剂的重量或体积从而便于压片，稀释剂包括淀粉类、糖类、纤维素类和无机盐中的一种或多种。在本发明中，赋形剂是指在产品中的除了主要药物活性成以外的附加物，赋形剂包括如片剂中的黏合剂、填充剂、润滑剂，丸剂中的酒、醋、药汁等，半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分等。在本发明中，稳定剂的主要作用是为了稳定产品中的各个成分，稳定剂可以但不限于为防腐剂、抗氧剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂等。
实施例一种陈皮提取物制备方法
将广陈皮在120℃下干燥3h后，进行粉碎，得到陈皮粉。将陈皮粉加入至100℃的双蒸水中，并用50％的氢氧化钠溶液调节混合溶液pH值至10，同时搅拌30min，其中，陈皮粉和双蒸水的质量比为1：10。经过滤后得到陈皮提取液，将陈皮提取液置于-80℃速冻60min，再在-60℃冻干处理6h，得到具有抑制病毒感染诱导的炎症的陈皮提取物。
效果实施例
本申请所用HCoV-229E株系从武汉大学医学病毒学研究所获得，HCoV-229E病毒在Huh-7细胞中生长、纯化，并进行滴度测定；人原代支气管上皮细胞购买于美国典型培养物保藏中心。
将实施例制得的陈皮提取物配置成不同浓度的溶液，浓度分别为6.25mg/mL、12.5mg/mL和25mg/mL，抗炎药物地塞米松(DEX，200nM)作为对照，将不同浓度的陈皮提取物溶液以及抗炎药物地塞米松分别孵育Huh-7细胞24h后显微镜下观察细胞形态，均没有异常病变，表明上述浓度的陈皮提取物溶液无明显细胞毒性。
原代上皮细胞在未含血清的培养体系进行扩增培养(PneumaCultTM-Ex PlusMedium,Cat.05040,STEMCELL Technologies)，培养7-8天达到80％以上的覆盖之后，进行分化培养(PneumaCultTM-ALI-S Medium,Cat.05050,STEMCELL Technologies)，培养的全过程加入100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。在原代气道上皮细胞分化完全之后，分为6组，分别为MOCK组(未进行任何干预)，DMSO组(只给予病毒+DMSO溶剂对照)、DEX组(病毒+200nM地塞米松)、GCP-6.25组(病毒+6.25mg/ml陈皮提取物)、GCP-12.5组(病毒+12.5mg/ml陈皮提取物)以及GCP-25.0组(病毒+25mg/ml陈皮提取物)，其中各组细胞孵育DMSO溶剂、地塞米松或陈皮提取物48h后，加入HCoV-229E病毒进行染毒实验，孵育2h，而后吸取各组细胞上清，用ELISA试剂盒(Invitrogen Technologies)进行炎症因子检测，结果如图1所示，其中，图1中(a)为CXCL10表达水平，图1中(b)为IFN-beta表达水平，###p<0.001。可以看出，本申请提供的陈皮提取物能够很好的抑制HCoV-229E病毒感染所诱导原代上皮细胞分泌IFN-beta以及CXCL10水平，具有优异的抗炎症活性。将余下的细胞进行病理切片和HE染色，结果如图2所示。可以看出，相较于MOCK组，病毒感染诱导了上皮细胞发生了病变(DMSO组)，而给予地塞米松和陈皮提取物可以缓解冠状病毒感染诱导的上皮细胞病变，包括上皮脱落、纤毛丢失等，因此本申请提供的陈皮提取物对冠状病毒感染所诱导的上皮损伤具有一定的保护效应。
以上所揭露的仅为本申请较佳实施例而已，当然不能以此来限定本申请之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本申请权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (10)
1.陈皮提取物在制备预防或治疗病毒感染诱导的炎症的产品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述陈皮提取物抑制冠状病毒诱导的炎症因子释放。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述陈皮提取物抑制HCoV-229E冠状病毒诱导的支气管上皮细胞的炎症反应。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述陈皮提取物包括橘皮素、新橙皮苷、橙皮苷、橙皮素、5,7,8,4’-四甲氧基黄酮、3,3’,4’,5,6,7,8-七甲氧基黄酮、去甲基川陈皮素和川陈皮素中的至少一种。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述陈皮提取物的IC50浓度为3mg/mL～5mg/mL。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述陈皮提取物的制备方法包括：
将陈皮原料进行干燥和粉碎，得到陈皮粉，所述干燥的温度为100℃～150℃，所述干燥的时间为2h～5h；
所述陈皮粉置于碱性溶液进行提取，经过滤得到陈皮提取液；
所述陈皮提取液经冷冻干燥后得到所述陈皮提取物。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述碱性溶液的pH大于7且小于12；所述陈皮粉和所述碱性溶液的质量比为1：(10～20)；所述提取的温度为60℃～100℃，所述提取的时间为20min～60min。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述碱性溶液为通过向水溶液中滴加碱液获得。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述冷冻干燥包括在-80℃～-20℃进行速冻处理20min-60min，再在-80℃～-60℃的条件下进行冻干处理6h～8h。
10.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括食品、药品和保健品中的至少一种。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211105 |
|
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