CN113563396A - 一种高纯维生素b12的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种高纯维生素B12的制备方法，特别涉及一种利用动态轴向压缩柱大规模分离制备维生素B12的方法。该方法解决了采用传统大孔树脂分离纯化维生素B12存在的成本高、收率低、生产周期长、环境污染严重等问题。
Description
技术领域
本发明涉及维生素B12制备领域，特别涉及一种高纯维生素B12的制备方法，属于医药技术领域。
背景技术
维生素B12又叫钴胺素，是人体必需的维生素，其主要生理功能是参与制造骨髓红细胞防止恶性贫血、防止大脑神经受到破坏，但自然界中的维生素B12都是微生物合成的，高等动植物无法制造维生素B12。虽然Woodward早于1973年完成了维生素B12的全化学合成，但目前工业上仍主要通过菌种培养、发酵提炼而得。维生素B12结构极为复杂，现有提炼纯化工艺中，主要采用传统大孔树脂分离纯化维生素B12，但该方法存在成本高、收率低、生产周期长、环境污染严重等问题。专利文献201910801943.7公开了一种维生素B12的制备方法，将维生素B12转化液通过树脂进行吸附、洗水和解析、控温浓缩和搅拌，抽滤、真空恒温干燥等步骤得到成品，该方法虽然降低了生产成本和环境污染，但维生素B12的收率并不高。专利文献201610793431 .7公开了一种维生素B12专用层析树脂、展层剂及其精制方法，该方法虽然解决了收率低的问题，但该方法需要通过专用树脂和展层剂来实现，存在成本高、生产周期长、环境污染严重的问题。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种高纯维生素B12的制备方法，其技术思路是根据高效液相色谱法的原理，利用动态轴向压缩柱大规模分离制备维生素B12，解决了目前在纯化维生素B12过程中存在的成本高、效率低、生产周期长、环境污染严重等问题，操作简单，成本低，生产周期短，收率高，可重复性好。
本发明提供以下步骤：
1、一种高纯维生素B12的制备方法，包括使用制备型高效液相色谱法纯化维生素B12的步骤，所述制备型高效液相色谱法采用的色谱柱为动态轴向压缩柱。
2、根据技术方案1所述的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）提供维生素B12粗品；
（2）将维生素B12粗品溶于水后超声处理，滤膜过滤，取滤液待用；
（3）使用制备型高效液相色谱法对滤液进行分离纯化，分段收集维生素B12对应谱带的馏分；
（4）将收集到的维生素B12馏分进行后处理，得到维生素B12纯品。
3、根据技术方案1或2所述的方法，其特征在于所述的动态轴向压缩柱内填充的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶。
4、根据技术方案3所述的方法，其特征在于所述的十八烷基硅烷键合硅胶粒度为5um-45um。
5、根据技术方案1或2所述的方法，其特征在于制备型高效液相色谱法使用的流动相为有机溶剂和磷酸氢二钠溶液的混合溶液。
6、根据技术方案5所述的方法，其特征在于所述的有机溶剂包括但不限于为甲醇、乙醇、乙腈或异丙醇。
7、根据技术方案5所述的方法，其特征在于所述的流动相按体积计，有机溶剂和磷酸氢二钠溶液的比率为范围为15:85-5:95。
8、根据技术方案1或2所述的方法，其特征在于所述制备型高效液相色谱法采用梯度洗脱。
9、根据技术方案1或2所述的方法，其特征在于所述的动态轴向压缩柱的填充内径范围为50mm-1600mm。
10、根据技术方案2所述的方法，其特征在于所述后处理包括减压旋蒸浓缩、冻干干燥。
本发明的优点是可直接采用含有维生素B12粗品来制备，不需要大量的前处理，过程简单、易控制，工艺技术简单。本发明方法的优点还在于使用梯度洗脱的方式，一次分离制备就可以得到纯度不低于99.5%的维生素B12。本发明使用的流动相是反相高效液相色谱中常用的试剂，适用于大规模制备生产。
附图说明
图1是维生素B12粗品的分析谱图。
图2是实施例1的制备谱图。
图3是实施例1所得纯品的分析谱图。
图4是实施例2的制备谱图。
图5是实施例2所得纯品的分析谱图。
图6是实施例3的制备谱图。
图7是实施例3所得纯品的分析谱图。
具体实施方式
本发明方法中，维生素B12粗品为生物发酵后所得，其可购买得到或根据已知方法来制备，例如但不限于根据专利文献201010106076.4公开的方法来制备，维生素B12粗品中的维生素B12含量不受特别限制。示例性实施方案中，可采用分析型高效液相色谱对得到的维生素B12进行纯度分析。
实施例1
1、取50g粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
2、将步骤1的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ50×650mm，填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为10um，上样量50g，0到50分钟，甲醇/磷酸氢二钠溶液的体积比由15:85到10:90，紫外可见光度检测器的检测波长为254nm，收集保留时间在10至40min为维生素B12的馏分，当维生素B12洗脱完毕后，流动相切换成浓度大于50%的甲醇，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。将收集的馏分浓缩、冻干后，检测分析纯度为99.8%。
实施例2
1、取12kg粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
2、将步骤1的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ800×750mm，填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为5um，上样量12kg，0到55分钟，乙腈/磷酸氢二钠溶液的体积比由18:82至12:88，紫外可见光度检测器的检测波长为254nm，收集保留时间在11至45min为维生素B12的馏分，当维生素B12洗脱完毕后，流动相切换成浓度大于50%的乙腈，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。将收集的馏分浓缩、冻干后，检测分析纯度为99.9%。
实施例3
1、取20kg粗品溶于水，配制成饱和溶液，超声处理，过滤除去固体颗粒，收集滤液待用。
2、将步骤1的滤液泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，柱填充尺寸为Φ1600×860mm，填料为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶，粒径为15um至25 um，上样量20kg，0到60分钟，乙醇/磷酸氢二钠溶液的体积比由18:82至5:95，紫外可见光度检测器的检测波长为254nm，收集保留时间在10至57min为维生素B12的馏分，当维生素B12洗脱完毕后，流动相切换成浓度大于50%的乙醇，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。将收集的馏分浓缩、冻干后，检测分析纯度为99.8%。
Claims (10)
1.一种高纯维生素B12的制备方法，包括使用制备型高效液相色谱法纯化维生素B12的步骤，所述制备型高效液相色谱法采用的色谱柱为动态轴向压缩柱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）提供维生素B12粗品；
（2）将维生素B12粗品溶于水后超声处理，滤膜过滤，取滤液待用；
（3）使用制备型高效液相色谱法对滤液进行分离纯化，分段收集维生素B12对应谱带的馏分；
（4）将收集到的维生素B12馏分进行后处理，得到维生素B12纯品。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的动态轴向压缩柱内填充的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的十八烷基硅烷键合硅胶的粒度为5um-45um。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于制备型高效液相色谱法使用的流动相为有机溶剂和磷酸氢二钠溶液的混合溶液。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的有机溶剂包括但不限于为甲醇、乙醇、乙腈或异丙醇。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的流动相按体积计，有机溶剂和磷酸氢二钠溶液的比率为范围为15:85-5:95。
8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述制备型高效液相色谱法采用梯度洗脱。
9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的动态轴向压缩柱的填充内径范围为50mm-1600mm。
10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述后处理包括减压旋蒸浓缩、冻干干燥。
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Country or region after: China Address after: 223005 no.1-9 Jixian Road, Huaian Economic and Technological Development Zone, Jiangsu Province Applicant after: Jiangsu Hanbang Technology Co.,Ltd. Address before: 223005 no.1-9 Jixian Road, Huaian Economic and Technological Development Zone, Jiangsu Province Applicant before: JIANGSU HANBON SCIENCE & TECHNOLOGY Co.,Ltd. Country or region before: China |