CN113543847A - 微小rna的表达增强剂和微小rna表达增强用饮食品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种表达增强剂，其为含有紫檀芪的微小RNA的表达增强剂，微小RNA为选自由miR‑34a、miR‑16、miR‑126、miR‑193b和let‑7a组成的组中的至少1种。
Description
技术领域
本发明涉及微小RNA的表达增强剂和微小RNA表达增强用饮食品。
背景技术
微小RNA是碱基对长度约为22个碱基的RNA。已知作为芪类衍生物的白藜芦醇和紫檀芪会促进或抑制这样的微小RNA中的特定的微小RNA的表达(非专利文献1和2)。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Scientific Reports，2,314,2012
非专利文献2：Oncotarget，2015年，第6卷，29号，pp.27214-27226
发明内容
发明要解决的问题
近些年，关于miR-200c、miR-141、miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a这样的微小RNA，已经明确了表达量的异常与癌症、骨质疏松症、心肌梗塞、脑部疾病、循环系统疾病、痴呆、牙周病等疾病的发生相关，能够控制(增强)上述微小RNA的表达量的化合物作为各种疾病的治疗剂和/或预防剂等是有用的。
因此，本发明的目的在于提供微小RNA的新的表达增强剂。
用于解决问题的方案
本发明例如涉及以下的各发明。
(1)一种表达增强剂，其为含有紫檀芪(Pterostilbene)的微小RNA的表达增强剂，微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
(2)根据(1)所述的表达增强剂，其用于经口给予。
(3)一种表达增强剂，其为含有紫檀芪的经口给予用的微小RNA的表达增强剂，微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
(4)一种饮食品，其为包含紫檀芪的微小RNA表达增强用饮食品，微小RNA为选自由miR-200c、miR-141、miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
(5)一种增强微小RNA的表达的方法，其包括向需要其的对象给予紫檀芪的步骤，微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
(6)一种增强微小RNA的表达的方法，其包括向需要其的对象经口给予紫檀芪的步骤，微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
(7)一种紫檀芪的应用，用于制造微小RNA的表达增强剂，其中，微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
(8)一种紫檀芪的应用，用于制造微小RNA的经口给予用表达增强剂，其中，微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
(9)一种紫檀芪，其用于增强微小RNA的表达，微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
(10)一种紫檀芪，其用于通过经口给予而增强微小RNA的表达，微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
发明的效果
根据本发明，提供微小RNA的新的表达增强剂。
附图说明
图1的(A)～(D)是分别示出miR-200c、miR-141、miR-34a和miR-16的表达量的测定结果的图。
图2的(A)～(C)是分别示出miR-126、miR-193b和let-7a的表达量的测定结果的图。
具体实施方式
以下，对用于实施本发明的方式进行详细地说明。但是，本发明不限定于以下的实施方式。
＜本发明的特征＞
(微小RNA的表达增强剂)
本发明具有如下特征：提供一种表达增强剂，所述表达增强剂为含有紫檀芪的微小RNA的表达增强剂，微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
(经口给予用的微小RNA的表达增强剂)
本发明具有如下特征：提供一种表达增强剂，所述表达增强剂为含有紫檀芪的经口给予用的微小RNA的表达增强剂，微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
(饮食品)
本发明还具有如下特征：提供一种饮食品，所述饮食品为包含紫檀芪的微小RNA表达增强用饮食品，微小RNA为选自由miR-200c、miR-141、miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
＜微小RNA的表达增强剂＞
“微小RNA的表达增强剂”可以使微小RNA从微小RNA的表达量已降低的状态增加至与健康的人(healthy person)同样的表达量，也可以将微小RNA的表达量维持在与健康的人同样的表达量。即，微小RNA的表达增强剂也可以称为微小RNA的表达调节剂、表达控制剂或表达促进剂。
＜微小RNA＞
本实施方式的表达增强剂增强miR-200c、miR-141、miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a的表达。因此，本实施方式的表达增强剂可以用作上述微小RNA中的1种或2种以上的表达增强剂。
＜微小RNA的表达增强剂的用途＞
上述的微小RNA的表达增强剂可以适宜地用作癌症、骨质疏松症、心肌梗塞、脑部疾病、循环系统疾病、痴呆、牙周病等疾病的治疗剂和/或预防剂。
＜各微小RNA的序列＞
上述的微小RNA是成熟的单链的微小RNA，分别具有以下所示的序列。
(1)miR-200c：UAAUACUGCCGGGUAAUGAUGGA(序列号1)
(2)miR-141：UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG(序列号2)
(3)miR-34a：UGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGU(序列号3)
(4)miR-16：UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG(序列号4)
(5)miR-126：UCGUACCGUGAGUAAUAAUGCG(序列号5)
(6)miR-193b：AACUGGCCCUCAAAGUCCCGCU(序列号6)
(7)let-7a：UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU(序列号7)
＜紫檀芪＞
紫檀芪(Pterostilbene)是由下述式(1)表示的化合物。
＜紫檀芪的含量＞
本实施方式的表达增强剂中，紫檀芪的含量以表达增强剂总量为基准计可以为0.01质量％以上或0.10质量％以上，或者10质量％以下或5质量％以下。
＜紫檀芪的获得方法＞
本实施方式中，紫檀芪可以使用市售品，也可以使用通过化学合成而得到者。
＜油脂＞
本实施方式的表达增强剂可以还含有油脂。此时，表达增强剂变得更适合用于经口给予。
＜油脂的种类＞
本实施方式的表达增强剂中可以含有的油脂可以是动物油，也可以是植物油。作为油脂，例如可列举出玉米油、大豆油、芝麻油、菜籽油、红花油、橄榄油、蓖麻油、棉籽油、米油、葵花油、葡萄籽油和小麦胚芽油等植物油和蛋黄油、鱼油、鲸油、肝油等动物油、或它们的精制油(色拉油)、及如MCT(中链脂肪酸甘油三酯)、甘油二酯那样实施化学或酶处理而得到的食用油等。油脂可以单独使用1种，也可以组合使用2种以上。
＜油脂的含量＞
油脂的含量以表达增强剂总量为基准计可以为0.1质量％以上或1质量％以上，或者10质量％以下或8质量％以下。
＜添加剂＞
本实施方式的表达增强剂可以进一步含有添加剂(不包括紫檀芪和油脂在内)。作为添加剂，例如可列举出赋形剂、结合剂、润滑剂、崩解剂、乳化剂、表面活性剂、基剂、助溶剂、悬浮剂。
＜制剂形态＞
本实施方式的表达增强剂可以是固体(例如，粉末)、液体(水溶性或脂溶性的溶液或悬浮液)、糊剂等任意的形状。另外，可以是散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液体制剂、悬浮剂、糖浆剂等任意剂型。
＜表达增强剂的制备方法＞
上述的各种制剂可以通过将紫檀芪和根据需要使用的上述油脂和添加剂混合，并根据需要进行成型而制备。
关于微小RNA的表达增强剂的制备方法，以下对剂型为液体的情况进行说明。首先，准备已加热至材料温度50～90℃的油脂。向加热了的油脂中添加紫檀芪并使其溶解。然后，将紫檀芪和油脂的混合物与其它成分混合，根据需要进行灭菌处理等，能够制备含有紫檀芪的制剂。
＜给予方法＞
本实施方式的表达增强剂通过经口给予而能够发挥上述微小RNA的表达增强作用，因此能够用于经口给予用途。即，本实施方式的表达增强剂可以作为上述微小RNA中的1种或2种以上的经口给予用表达增强剂使用。通常，通过腹腔内给予等非经口给予而发挥期望效果的制剂即使经口给予也不一定发挥期望的效果。然而，本实施方式的表达增强剂不仅通过非经口给予可发挥微小RNA的表达增强效果，而且即使经口给予也可发挥微小RNA的表达增强效果。对于微小RNA的表达增强剂的给予量、给予时机、给予期，可以进行适宜设定。
＜给予对象＞
成为本实施方式的表达增强剂的给予对象的生物体优选为哺乳动物，更优选为人。
＜给予量＞
作为具体的给予量的一例，例如，对成人男子(体重60kg)进行给予时，每天的表达增强剂的给予量可以为0.01mg～5000mg/天/人，为0.05mg～1000mg/天/人、更优选为0.1mg～500mg/天/人、进一步优选为0.5mg～250mg/天/人。表达增强剂每天的给予量只要在上述范围内就可以进行1天1次给予，也可以1天分成多次(例如，2次或3次)进行给予。需要说明的是，给予量是以表达增强剂中的有效成分(即，紫檀芪)的量为基准的值。
＜表达增强剂的用途＞
本实施方式的表达增强剂可以用作药物、准药物、饮食品(饮料、食品)、饲料、饲料添加物等制品的成分。作为饮料，例如可列举出水、清凉饮料水、果汁饮料、乳饮料、酒精饮料、运动饮料、营养饮品等。作为食品，例如可列举出面包类、面类、米类、豆腐、乳制品、酱油、豆酱、点心类、奶油、酱汁类、蛋黄酱、调味汁等。另外，本实施方式的表达增强剂也可以用作健康食品、功能性标示食品、特殊用途食品、营养辅助食品、营养强化剂(例如，医用补充剂)或特定保健用食品等的成分。
＜微小RNA表达增强用饮食品＞
本实施方式的表达增强剂可以用作饮食品的成分。即，作为本发明的一实施方式，提供一种饮食品(食品组合物)，其为包含紫檀芪的微小RNA表达增强用饮食品，微小RNA为选自由miR-200c、miR-141、miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
＜增强微小RNA的表达的方法＞
本发明的一实施方式也可以是增强微小RNA的表达的方法，其包括向需要其的对象给予紫檀芪的步骤。在该方法中，对于给予方法、给予对象、给予量等而言，可以与上述的表达增强剂中的情况同样。对象优选为哺乳动物，更优选为人。
＜紫檀芪的用于制造表达增强剂的应用＞
作为本发明的一实施方式，提供紫檀芪的用于制造微小RNA的表达增强剂的应用。需要说明的是，对于该实施方式中的给予方法、给予对象、给予量等而言，可以与上述的表达增强剂中的情况同样。
＜用于增强微小RNA的表达的紫檀芪＞
作为本发明的一实施方式，提供用于增强微小RNA的表达的紫檀芪。需要说明的是，对于该实施方式中的给予方法、给予对象、给予量等而言，可以与上述的表达增强剂中的情况同样。
实施例
以下，基于实施例等对本发明进行更具体地说明。但是，本发明不限定于以下的实施例。
(统计分析)
以下的实施例中，统计分析使用Kaleida Graph4.5(HULINKS公司)，进行方差分析(One-Way ANOVA)后，通过多重比较(Tukey’s HSD Test)进行检验。
〔试验例1：微小RNA的表达量的评价〕
(粉末饲料用的试剂)
试验用的粉末饲料的制备中使用了以下的试剂。
酪蛋白(Oriental Yeast Co.,ltd.)
DL-甲硫氨酸(和光纯药工业株式会社)
β-玉米淀粉(Oriental Yeast Co.,ltd.)
蔗糖(KH1细白糖)(和田制糖株式会社)
纤维素粉末(Oriental Yeast Co.,ltd.)
玉米油(胚芽之惠玉米油)(J-OIL MILLS公司)
矿物质混合物(AIN-93G矿物质混合)(Oriental Yeast Co.,ltd.)
维生素混合物(AIN-93维生素混合)(Oriental Yeast Co.,ltd.)
酒石酸氢胆碱(和光纯药工业株式会社)(Lot.No.:PDQ0575、CTK0241)
90％紫檀芪(Silbinol)(Sabinsa Japan Corporation制)
(含有紫檀芪的粉末饲料的制备)
试验用的饲料(含有紫檀芪的粉末饲料)利用以下的方法制备。即，首先，称量50g玉米油，进行加热而使其达到70℃。在加热了的玉米油中添加紫檀芪并使其溶解。除玉米油和紫檀芪以外的试剂(其它试剂)用乳钵研磨进行混合。向其它试剂的混合物中添加溶解了紫檀芪的玉米油，用乳钵充分地研磨进行混合。然后，用搅拌机进一步混合约30分钟，制备了试验用的饲料。试验用的饲料中包含的各种成分的组成如表1所示。将试验用的饲料放入塑料袋中，在Koga Isotope,Ltd.进行γ射线灭菌后，用于后述的动物实验。另外，准备了表1所示的组成的驯化饲料(紫檀芪的含量：0质量％)。
[表1]
(实验动物)
作为实验动物，使用5周龄雌性的裸鼠(BALB/c-nu/nu,CAnN.Cg-Foxn1<nu>/CrlCjlj)(Charles River Laboratories公司)。
(试剂)
作为试剂，使用以下试剂。
ECM Gel from Engelbreth-Holm-Swam murine sarcoma(Invitrogen公司)
エスカイン(注册商标)吸入麻醉液(Pfizer公司)
甲虫荧光素(Beetle Luciferin)，钾盐(Promega公司)
丙二醇(Sigma-Aldrich公司)
(饲养方法)
在保持在温度20～25℃、湿度40～60％的条件下的环境下饲养上述实验动物。作为喂食器，使用吊挂型的喂食器。
(试验组)
每组设为8只或10只，设定了(i)对照组(0％(w/w)紫檀芪组、n＝18)和(ii)0.25％(w/w)紫檀芪组(n＝18)这两组的试验区。
(试验方法和评价结果)
首先，让5周龄雌性的裸鼠在实验开始前适应环境1周左右。
作为含有紫檀芪的粉末饲料的经口给予对微小RNA的表达量的影响的研究，首先，用吊挂型喂食器给予对照饲料(驯化饲料)约1周后，分为(i)对照组和(ii)0.25％(w/w)紫檀芪组这两组。对照组中，经口给予了驯化饲料，紫檀芪组中，经口给予了含有紫檀芪的粉末饲料(紫檀芪的含量：0.25质量％)。
在分组起经过1周的时间点，对各组的小鼠进行了癌细胞移植实验。在癌细胞移植实验中，首先，将待移植的癌细胞(MM-231-luc-D3H2LN)悬浮于磷酸盐缓冲液(PBS)，与基质胶(ECM Gel from Engelbreth-Holm-Swammurine sarcoma)以1：1的比率进行混合，准备了移植用的悬浮液(细胞数：1×105个细胞/ml)。接着，在异氟烷(エスカイン(注册商标)吸入麻醉液)麻醉下，将1×104个癌细胞移植(导入100μl上述的移植用的悬浮液(细胞数：1×105个细胞/ml))到小鼠的乳腺。通过如下方式进行癌细胞已移植的确认：在移植后静置一段时间，以150mg/kg的量向腹腔内给予15mg/ml荧光素溶液(Beetle Luciferin,PotassiumSalt、Promega公司)，在约10分钟后用IVIS Spectrum(Perkin Elmer公司)测定细胞来源的发光(荧光素酶活性)，从而进行。每天适宜地管理试验用的饲料和小鼠的状态。小鼠的体重进行适时测量。给予开始日(第0天)是移植癌细胞(肿瘤)当天。此外，从给予开始日起每隔一周通过IVIS spectrum经时观察发光。
在从给予开始经过21天的时间点，在异氟烷麻醉下摘出肿瘤，进行了安乐死。将各组(对照组或紫檀芪组)中摘出的肿瘤作为测定用的试样，利用以下所示的方法，进行了miR-200c、miR-141、miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a的表达量的定量分析。需要说明的是，本试验例重复进行了两次独立试验。
首先，使用miRNeasy(注册商标)Mini Kit，依据制造商推荐的方案，从测定用的试样中提取了RNA。对于提取的RNA，使用TaqMan(注册商标)MicroRNA assay和TaqMan(注册商标)MicroRNA Reverse TranscriptionKit，分别依据制造商推荐的方案，转化为互补DNA(cDNA)。将该cDNA作为模板，使用TaqMan(注册商标)Universal PCR Master Mix,NoAmpErase(注册商标)UNG，通过StepOne PlusTM Real-Time PCR System(AppliedBiosystems)进行了miRNA的定量分析。将结果示于图1～2。图1～2中，误差条表示标准误差。
(评价结果)
如图1～2所示，经口给予了紫檀芪的组(紫檀芪组)与对照组相比，miR-200c、miR-141、miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a的表达得到了增强。
序列表
<110> 丘比株式会社（Kewpie Corporation）
<120> 微小RNA的表达增强剂和微小RNA表达增强用饮食品
<130> FP19-1206-00
<150> JP2019-042523
<151> 2019-03-08
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
uaauacugcc ggguaaugau gga 23
<210> 2
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
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<210> 3
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
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<210> 4
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
<210> 5
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
ucguaccgug aguaauaaug cg 22
<210> 6
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
aacuggcccu caaagucccg cu 22
<210> 7
<211> 22
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
ugagguagua gguuguauag uu 22
Claims (10)
1.一种表达增强剂，其为含有紫檀芪的微小RNA的表达增强剂，
所述微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
2.根据权利要求1所述的表达增强剂，其用于经口给予。
3.一种表达增强剂，其为含有紫檀芪的经口给予用的微小RNA的表达增强剂，
所述微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
4.一种饮食品，其为包含紫檀芪的微小RNA表达增强用饮食品，
所述微小RNA为选自由miR-200c、miR-141、miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
5.一种增强微小RNA的表达的方法，其包括向需要其的对象给予紫檀芪的步骤，
所述微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
6.一种增强微小RNA的表达的方法，其包括向需要其的对象经口给予紫檀芪的步骤，
所述微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
7.一种紫檀芪的应用，用于制造微小RNA的表达增强剂，其中，
所述微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
8.一种紫檀芪的应用，用于制造经口给予用的微小RNA的表达增强剂，其中，
所述微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
9.一种紫檀芪，其用于增强微小RNA的表达，
所述微小RNA为选自由miR-34a、miR-16、miR-126、miR-193b和let-7a组成的组中的至少1种。
10.一种紫檀芪，其用于通过经口给予而增强微小RNA的表达，所述微小RNA为选自由miR-200c和miR-141组成的组中的至少1种。
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