CN113521225A - 一种治疗肝损伤的中药组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种治疗肝损伤的中药组合物，包括下列组分：药用大黄、虎杖、青皮、郁金、山楂、白茅根、陈皮。本发明的中药组合物、中药提取物或药物对于肝损伤尤其是胆汁淤积型肝损伤效果显著；能够降低血清中谷氨酰转肽酶水平；降低血清中TBA、TBIL和DBIL水平的一种或多种；且药味数少、原材料易得、制备工艺简单、成本低。

Description

一种治疗肝损伤的中药组合物及其用途

技术领域

本发明涉及中药领域，具体为一种治疗肝损伤的中药组合物及其用途。

背景技术

胆宁片为上海和黄药业有限公司独家产品，是上海地区第一个国家级中药新药(三类)，自1991年问世后，由于疗效显著，受到了临床医生和患者的广泛欢迎。胆宁片由大黄、虎杖、青皮、陈皮、郁金、山楂、白茅根等七味中药配伍组成，具有疏肝利胆，清热通下之功效。临床用于肝郁气滞、湿热未清所致的右上腹隐隐作痛、食入作胀、胃纳不香、嗳气、便秘；慢性胆囊炎见上述证候者。

大黄为多基原药材，正品大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxium.Ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill的干燥根和根茎。掌叶大黄和唐古特大黄称北大黄，主产于我国青海、甘肃、四川等地；药用大黄称南大黄，主产于四川、湖北、云南、贵州等地。大黄性寒、味苦。归脾、胃、大肠、肝、心包经。

目前还未有研究表明不同基原的大黄的药效不同。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种治疗肝损伤的中药组合物及其用途。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供第一方面提供一种治疗肝损伤的中药组合物，包括下列组分：药用大黄、虎杖、青皮、郁金、山楂、白茅根、陈皮。

本发明第二方面提供一种治疗肝损伤的中药提取物，为以前述中药组合物为原料提取有效成分制得。

本发明第三方面提供前述中药组合物或前述中药提取物的用途，为制备具有以下任一种或多种作用的药物：

1)降低血清中谷氨酰转肽酶水平；

2)降低血清中TBA、TBIL和DBIL水平的一种或多种。

本发明第四方面提供一种肝损伤的治疗药物，包括治疗有效量的前述的中药提取物及一种或多种常规的药学上可接受的辅料。

如上所述，本发明的一种治疗肝损伤的中药组合物及其用途，具有以下有益效果：本发明的中药组合物、中药提取物、药物对于肝损伤尤其是胆汁淤积型肝损伤效果显著；能够降低血清中谷氨酰转肽酶水平；降低血清中TBA、TBIL和DBIL水平；且药味数少、原材料易得、制备工艺简单、成本低。

附图说明

图1：不同基原大黄的肝损伤治疗药物连续给药9d对ANIT所致胆汁淤积大鼠大鼠体重的影响(n＝10)。与正常组比较，*P<0.05，**,P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001

Vehicle,正常对照组；ANIT,ANIT模型组；UDCA,UDCA阳性对照品组；YHDT+ANIT，药用大黄肝损伤治疗药物3g/kg药物保护组；THDT+ANIT，唐古特大黄肝损伤治疗药物3g/kg药物保护组；ZHDT+ANIT,掌叶大黄肝损伤治疗药物3g/kg药物保护组

图2：不同基原大黄的肝损伤治疗药物连续给药9d对ANIT所致胆汁淤积大鼠肝脏病理切片的影响。A,正常对照组；B,ANIT模型组；C,UDCA阳性对照品组；D,药用大黄肝损伤治疗药物3g/kg药物保护组；E,唐古特大黄肝损伤治疗药物3g/kg药物保护组；F,掌叶大黄肝损伤治疗药物3g/kg药物保护组；(HE染色,×200)

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

本发明的配伍符合中药的“君臣佐使”原则，本发明采用的下述各中药互作配伍，能发挥其协同治病作用，所用中药原料各成分之间具有药效相互交织、相互促进和协调效能。

本发明所采用的原料药(或药材)均可从普通医药商店或中药材销售公司购买得到，其规格符合国家医药标准或符合中国药典等有关规定。所采用的药材除另有说明，均为中药材饮片，该中药材饮片也可以是获得后经加工而成。

本发明所称的“患者”指患有疾病的人、野生动物和家畜。野生动物为自然状态下未经人工驯化的动物。家畜是为了提供食物来源而人工饲养的动物，如猴、猿、狗、鼠、仓鼠、猪、兔、马、奶牛、水牛、公牛、绵羊和山羊等。给予诊断的“患者”优选选择哺乳动物，尤其是人。

本发明的疗效标准参照《中医病症判断疗效标准》中有关疗效标准。痊愈：临床症状全部消失，实验室检查正常。好转：临床症状减轻，实验室检查改善或正常。无效：临床症状无明显好转或加重。

本发明的组合物可以采用中药制剂的常规方法制备成任何常规内服制剂，或者经提取该组合物所得的最终提取液可经常规工艺进一步制备成的剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、合剂、糖浆剂、凝胶剂及缓控释制剂等。为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学上可接受的辅料，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等。

本发明的制备工艺原则上运用《中药新药制备工艺研究的技术要求》，运用现代制剂新技术提取药物的主要有效成分入药，添加一些药学上可接受的辅料或载体。

本发明一实施例的治疗肝损伤的中药组合物，包括下列组分：药用大黄、虎杖、青皮、郁金、山楂、白茅根、陈皮。

本发明的中药组合物中，主要组分至少包括大黄。大黄具有泻下、保肝利胆、抗炎止血、降血脂、抗肿瘤等作用。

药用大黄，为蓼科植物药用大黄Rheum officinale Baill的干燥根和根茎。呈类圆柱形、圆锥形、卵圆形或不规则块状，长3～17cm，直径3～10cm。除尽外皮者表面黄棕色至红棕色，有的可见类白色网状纹理及星点(异型维管束)散在，残留的外皮棕褐色，多具绳孔及粗皱纹。质坚实，有的中心稍松软，断面淡红棕色或黄棕色，显颗粒性；根茎髄部宽广，有星点环列或散在；根木部发达，具放射状纹理，形成层环明显，无星点。气清香，味苦而微涩，嚼之粘牙，有沙粒感。

虎杖，为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎和根。春、秋二季采挖，除去须根，洗净，趁鲜切短段或厚片，晒干。多为圆柱形短段或不规则厚片，长1～7cm，直径0.5～2.5cm。外皮棕褐色，有纵皱纹和须根痕，切面皮部较薄，木部宽广，棕黄色，射线放射状，皮部与木部较易分离。根茎髓中有隔或呈空洞状。质坚硬。气微，味微苦、涩。

青皮，为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮。5～6月收集自落的幼果，晒干，习称“个青皮”；7～8月采收未成熟的果实，在果皮上纵剖成四瓣至基部，除尽瓤瓣，晒干，习称“四花青皮”。四花青皮，果皮剖成4裂片，裂片长椭圆形，长4～6cm，厚0.1～0.2cm。外表面灰绿色或黑绿色，密生多数油室；内表面类由色或黄白色，粗糙，附黄白色或黄棕色小筋络。质稍硬，易折断，断面外缘有油室1～2列。气香，味苦、辛。个青皮，呈类球形，直径0.5～2cm。表面灰绿色或黑绿色，微粗糙，有细密凹下的油室，顶端有稍突起的柱基，基部有圆形果梗痕。质硬，断面果皮黄白色或淡黄棕色，厚0.1～0.2cm，外缘有油室1～2列。瓤囊8～10瓣，淡棕色。气清香，味酸、苦、辛。

郁金，为姜科植物温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling、姜黄Curcumalonga L.、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang或蓬莪术Curcumaphaeocaulis Val.的干燥块根。前两者分别习称“温郁金”和“黄丝郁金”，其余按性状不同习称“桂郁金”或“绿丝郁金”。冬季茎叶枯萎后采挖，除去泥沙和细根，蒸或煮至透心，干燥。温郁金，呈长圆形或卵圆形，稍扁，有的微弯曲，两端渐尖，长3.5～7cm，直径1.2～2.5cm。表面灰褐色或灰棕色，具不规则的纵皱纹，纵纹隆起处色较浅。质坚实，断面灰棕色，角质样；内皮层环明显。气微香，味微苦。黄丝郁金，呈纺锤形，有的一端细长，长2.5～4.5cm，直径1～1.5cm。表面棕灰色或灰黄色，具细皱纹。断面橙黄色，外周棕黄色至棕红色。气芳香，味辛辣。桂郁金，呈长圆锥形或长圆形，长2～6.5cm，直径1～1.8cm。表面具疏浅纵纹或较粗糙网状皱纹。气微，味微辛苦。绿丝郁金，呈长椭圆形，较粗壮，长1.5～3.5cm，直径1～1.2cm。气微，味淡。

山楂，为蔷薇科植物山里红Cralaegus pinnatifida.Bge.var.major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采收，切片，干燥。本品为圆形片，皱缩不平，直径1～2.5cm，厚0.2～0.4cm。外皮红色，具皱纹，有灰白色小斑点。果肉深黄色至浅棕色。中部横切片具5粒浅黄色果核，但核多脱落而中空。有的片上可见短而细的果梗或花萼残迹。气微清香，味酸、微甜。

白茅根，为禾本科植物白茅Imperata cylindrica Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.的干燥根茎。春、秋二季采挖，洗净，晒干，除去须根和膜质叶鞘，捆成小把。本品呈长圆柱形，长30～60cm，直径0.2～0.4cm。表面黄白色或淡黄色，微有光泽，具纵皱纹，节明显，稍突起，节间长短不等，通常长1.5～3cm。体轻，质略脆，断面皮部白色，多有裂隙，放射状排列，中柱淡黄色，易与皮部剥离。气微，味微甜。

陈皮，为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮。药材分为“陈皮”和“广陈皮”。采摘成熟果实，剥取果皮，晒干或低温干燥。陈皮，常剥成数瓣，基部相连，有的呈不规则的片状，厚1～4mm。外表面橙红色或红棕色，有细皱纹和凹下的点状油室；内表面浅黄白色，粗糙，附黄白色或黄棕色筋络状维管束。质稍硬而脆。气香，味辛、苦。广陈皮，常3瓣相连，形状整齐，厚度均匀，约1mm。点状油室较大，对光照视，透明清晰。质较柔软。

青皮、陈皮、郁金疏肝利气。青皮入肝胆气分，降泄三力较烈；陈皮入肺，脾气分，能健脾化湿；郁金为血分之气药，入肝、心、肺三经，能行气化瘀，解郁利胆、退黄。虎杖、大黄、白茅根通下、利胆、清热。虎杖味苦寒，入肝、胆、肺三经，有清热、解毒、利湿退黄之功；大黄味苦寒，入脾、胃、大肠、肝、心包经，有泻下攻积，清热、泻火、解毒之功效；与虎杖都能治湿热黄疸。白茅根味甘寒，入肺、胃、膀胱经，能泻火生津，李时珍谓其能“治黄疸水肿”。山楂味酸、甘，微温，入脾、胃、肝经，能消食健胃，行气散，用于肉食积滞，胃腕胀满、高血脂症。

进一步的，所述肝损伤为胆汁淤积型肝损伤。

所述中药组合物包括下列重量份的组分：药用大黄1-10份、虎杖15-150份、青皮6-60份、郁金9-90份、山楂15-150份、白茅根9-90份、陈皮6-60份。

优选的，所述中药组合物包括下列重量份的组分：药用大黄1-5份，虎杖15-75份、青皮6-30份、郁金9-45份、山楂15-75份、白茅根9-45份、陈皮6-30份。

更优选的，所述中药组合物包括下列重量份的组分：药用大黄1份，虎杖15份、青皮6份、郁金9份、山楂15份、白茅根9份、陈皮6份。

本发明的中药提取物能够：

1)降低血清中谷氨酰转肽酶水平；和/或，

2)降低血清中TBA、TBIL和DBIL水平的一种或多种。

本发明一实施例的一种治疗肝损伤的中药提取物，为以前述中药组合物为原料提取有效成分制得。

本发明中，生药的配方最为关键，在获知生药配方后，本技术领域的技术人员可采用各种常规的中药有效成分提取方法来提取其有效成分，如常规的煎煮、水提醇沉法、醇提水沉法等，由于上述提取方法均能获得前述中药配方中的主要药效成分。

其中，水提醇沉法为：先以水为溶剂提取药材有效成分，再用不同浓度的乙醇沉淀去除提取液中杂质的方法。一般含乙醇量达到50％～60％(重量体积比即g/100ml)时，可去除淀粉等杂质，当含醇量达75％以上，除鞣质、水溶性色素等少数无效成分外，其余大部分杂质均可沉淀去除。

醇提水沉法为：先以适宜浓度的乙醇提取药材成分，再用水除去提取液中杂质的方法。

所述中药组合物提取有效成分后可再经常规的步骤浓缩、纯化或干燥获得中药提取物。其中浓缩的方法包括但不限于：常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发、多效蒸发，纯化的方法包括但不限于：盐析纯化、大孔树脂吸附纯化、乙醇沉淀纯化、离子交换树脂纯化、絮凝沉淀纯化、膜分离纯化、聚酰胺吸附纯化、硅胶吸附层析纯化等，干燥的方法包括但不限于：烘干法、鼓式干燥法、带式干燥法、吸湿干燥法、沸腾干燥法、喷雾干燥法、减压干燥法、冷冻干燥法、红外线干燥法、微波干燥法等。

前述中药组合物或中药提取物可以用于制备肝损伤治疗药物。

进一步的，所述肝损伤治疗药物为胆汁淤积型肝损伤治疗药物。

所述肝损伤治疗药物还包括一种或多种常规的药学上可接受的辅料。如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等。

本发明所述的辅料为将中药组合物或中药提取物形成药物的常规辅料，可以根据药物的剂型对辅料的种类及含量进行灵活选择，为本领域技术人员所熟知的技术。

在一种实施方式中，所述辅料为硫酸钙、蔗糖(药用)、聚维酮K30、硬脂酸镁、碳酸氢钠和薄膜包衣预混剂。

进一步的，所述肝损伤治疗药物至少具有以下功用之一：

1)降低血清中谷氨酰转肽酶水平；

2)降低血清中TBA、TBIL和DBIL水平的一种或多种。

本发明一实施例为前述中药组合物或中药提取物的用途，为制备具有以下任一种或多种作用的药物：

1)降低血清中谷氨酰转肽酶水平；

2)降低血清中TBA、TBIL和DBIL水平的一种或多种。

可选的，所述药物还包括一种或多种常规的药学上可接受的辅料。

在一种实施方式中，所述辅料为硫酸钙、蔗糖(药用)、聚维酮K30、硬脂酸镁、碳酸氢钠和薄膜包衣预混剂。

本发明一实施例为一种肝损伤的治疗药物，包括治疗有效量的如前述的中药提取物及一种或多种常规的药学上可接受的辅料。

本发明的治疗药物的有效治疗剂量应考虑具体剂型，病人年龄、体重、健康状况等因素，作为指导内服等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

在一种实施方式中，所述辅料为硫酸钙、蔗糖(药用)、聚维酮K30、硬脂酸镁、碳酸氢钠和薄膜包衣预混剂。

本专利采用三种不同基原的大黄制成三种肝损伤的治疗药物(药用大黄肝损伤的治疗药物、唐古特大黄肝损伤的治疗药物和掌叶大黄肝损伤的治疗药物)，利用ANIT所致胆汁淤积型，从大鼠体重变化、7个血清学指标、肝脏病理学这三个方面对大鼠的肝损伤保护作用作了比较，从而反应不同基原大黄制成肝损伤的治疗药物后对肝的保护作用。

实施例1肝损伤的治疗药物的制备

1.来料核对

检查来料外观性状，复核来料品名、批号、件数等项目，确认无误后方可投料。

2.投料

将虎杖、青皮、郁金、山楂、白茅根等五味药材按每锅投料量进行投料，投料前确认锅门已关闭。重量比为：虎杖15份、青皮6份、郁金9份、山楂15份、白茅根9份。

3.加热提取

加热回流提取2次，每次1小时，第一次加原料重量的6倍量70％的乙醇，第2次加原料重量4倍量70％的乙醇。每次提取结束，经过滤器过滤，放出提取液进入储罐。

4.浓缩

将储罐内药液上料至外循环进行浓缩，将药液浓缩至人工检测相对密度在1.27～1.37(40～70℃，参考值)之间后停止浓缩。

5.干燥、粗粉碎

启动真空带式干燥机，待加热板温度达到设定值时，再启动加料泵，将浓缩液涂布于履带上，经三段加热干燥，一段冷却降温后粉碎成颗粒，收集后称重。

6.细粉碎

先开启多功能粉碎机，获得浸膏粉，再开启激振送料机，称重，扎紧袋口，盖紧桶盖。

7.陈皮油提取操作方法

按照处方量称取陈皮6份进行投料。投料完毕后关闭闸门。打开蒸汽加热提取，并加热至保温温度，时刻注意锅内沸腾程度，及时调节蒸汽压力。将油水分离器与陈皮油专用不锈钢密闭容器连接，根据油水分离器内出油情况开启油水分离器出油至密闭容器阀门收集陈皮油。

8.药用大黄粉碎

按照处方量称取药用大黄1份粉碎成细粉。

9.制粒

取前述的提取浸膏粉、药用大黄粉，与硫酸钙0.5份、蔗糖0.5份、聚维酮K30 0.5份用流化床干燥制粒，最后喷入陈皮油，获得混合物I。

10.整粒、总混

将制粒完成后的混合物I颗粒与碳酸氢钠0.5份整粒后投入总混罐内，再加入硬脂酸镁，混合60分钟，混合频率6rpm，完成混合，获得混合物II。

11.压片

将整粒、总混完成后的混合物II颗粒用菲特高速压片机进行压片操作，素片经压制后，通过筛片机将素片表面多余的粉料筛除，再经Tablex-Pro金属检测机检测合格后装桶。

12.包衣(薄膜衣)

包衣剂浆液的配制后，即包衣，获得本发明所述的肝损伤的治疗药物。

实施例2三种基原大黄的肝损伤的治疗药物对ANIT所致胆汁淤积型大鼠的肝损伤的作用

1实验材料

1.1动物

Wistar大鼠(220±20)g，清洁级，雄性，60只，购自上海必凯实验动物有限责任公司，动物合格证号：SCXK(沪)2008-0016。大饲养温度(22±1)℃，相对湿度(65±5)％，照明时间每天12h。所有实验操作严格遵守上海中医药大学动物伦理委员会相关规定。

1.2药材

三种不同基原大黄药材由上海和黄药业有限公司提供，经北京大学医科部蔡少青教授鉴定，确认分别为药用大黄、唐古特大黄和掌叶大黄。

利用实施1的制备方法，制备肝损伤的治疗药物1、肝损伤的治疗药物2、肝损伤的治疗药物3，三种药物唯一区别在于，大黄的种类不同，分别为药用大黄、唐古特大黄和掌叶大黄。

1.3试剂

ALT试剂盒，AST试剂盒，GGT试剂盒，TBIL试剂盒，DBIL试剂盒，TBA试剂盒(世诺临床诊断制品有限公司，日本)；ALP试剂盒(上海荣盛)；α-naphthylisothiocyanate(ANIT；Sigma,N5242)；其他试剂均为国产分析纯。

1.4主要仪器

酶标仪(Power Wave XS；Bio-Tek Instruments,USA)；Eppendorf 5415R低温高速离心机(Eppendorf,Germany)；日立HITACHI 7080全自动生化分析仪(日立，Japan)；SANYO制冰机(SANYO Electric Co.,Ltd.,Japan)；Millipore纯水仪(Millipore,Bedford,MA,USA)。

2实验方法

2.1实验处理方法

Wistar大鼠60只，每组10只，随机分为正常对照组(健康大鼠)，模型组，阳性对照组(熊去氧胆酸，UDCA)，肝损伤的治疗药物组，其中，肝损伤的治疗药物组包括药用大黄肝损伤的治疗药物组(YHDT)，唐古特大黄肝损伤的治疗药物组(THDT)，掌叶大黄肝损伤的治疗药物组(ZHDT)(即，YHDT组给予肝损伤的治疗药物1、THDT组给予肝损伤的治疗药物2，ZHDT组给予肝损伤的治疗药物3)。UDCA阳性对照组给药100mg/kg，肝损伤的治疗药物组3g/kg灌胃给药，所有药物均用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶解至所需浓度。各组大鼠按10ml/kg剂量灌胃(ig)给药，1次/d，连续7d。正常组和模型组灌胃给予相同体积的0.5％CMC-Na溶液。第7次给药12h后，除正常对照组给予相同体积的大豆油溶液外，其余各组均按60mg/kg剂量灌胃给予ANIT大豆油溶液(5ml/kg)，进行造模。造模12h，36h后继续给药两次。动物处理前禁食不禁水12h。所有动物在给予ANIT 48h后(即末次给药12h后)，经乌拉坦(1g/kg)麻醉腹主动脉取血，供测定血清生化指标。取左叶肝脏置10％甲醛溶液中固定备用，其余部分保存于–80℃冰箱。

2.2体重测定

每天定点灌胃给药前测定体重。

2.3血清生化指标测定

大鼠经乌拉坦(1g/kg)麻醉腹主动脉取血，血液室温静置3h，3500rpm/15min/4℃离心，取上层血清，全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)活力，血清总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)含量。按试剂盒所述方法测定并计算血清碱性磷酸酶(ALP)活力。

2.4肝组织病理观察

切取相同部位(肝大叶)的部分肝组织进行病理学检查，用10％甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，常规HE染色，光学显微下观察病理变化。

2.5统计学处理

采用SPSS 16.0统计软件进行数据分析，所有数据以平均值±标准误差(x±s)表示，多组数据比较采用One-Way ANOVA，P<0.05表示差异有统计学意义。

3实验结果

3.1三种基原大黄肝损伤的治疗药物对ANIT所致胆汁淤积大鼠体重的影响

如图1所示，药用大黄肝损伤的治疗药物组和唐古特大黄肝损伤的治疗药物组3g/kg给药后大鼠体重变化与正常对照组、模型组均无显著性差异(P﹥0.05)，掌叶大黄肝损伤的治疗药物组3g/kg给药4d后与正常对照组、模型组均有显著性差异(P<0.05)，给药9d后与正常组也有显著性差异(P<0.05)。结合大鼠的外形观察，以上结果表明，药用大黄肝损伤的治疗药物组与唐古特大黄肝损伤的治疗药物组3g/kg剂量灌胃大鼠时无明显的致泻作用，同时对ANIT所致胆汁淤积也不会造成体重的变化；而掌叶大黄肝损伤的治疗药物组3g/kg剂量灌胃大鼠有一定的致泻作用，但由于自身恢复能力可使致泻作用降低，而对ANIT所致胆汁淤积体重也有显著性变化。

3.2三种基原大黄的肝损伤的治疗药物对ANIT所致胆汁淤积大鼠血清生化指标的影响

目前ALT与AST是最常用的肝功能指标。如表1所示，ANIT所致胆汁淤积型大鼠血清中ALT和AST水平与正常对照组相比显著上升(P<0.001)，表明ANIT在60mg/kg处理48小时后诱导了大鼠肝毒性。UDCA、药用大黄肝损伤的治疗药物组、唐古特大黄肝损伤的治疗药物组、掌叶大黄肝损伤的治疗药物组连续给药9d对ANIT所致胆汁淤积型大鼠血清中ALT和AST水平均有显著降低作用(P<0.001)。以上结果表明，UDCA、药用大黄肝损伤的治疗药物组、唐古特大黄组肝损伤的治疗药物组、掌叶大黄肝损伤的治疗药物组所致胆汁淤积型大鼠的肝损伤具有保护作用。

GGT异常率与肝组织病变的程度显著相关，故此谷氨酰转肽酶也是反映肝细胞损害程度的指标。如表1所示，ANIT所致胆汁淤积型大鼠血清中GGT与正常对照组相比显著上升(P<0.001)。发现UDCA对大鼠血清中GGT水平与模型组相比有下降趋势，药用大黄肝损伤的治疗药物组对大鼠血清中GGT水平与模型组相比显著下降(P<0.05)；但唐古特大黄肝损伤的治疗药物组、掌叶大黄肝损伤的治疗药物组大鼠血清中GGT水平与模型组相比几乎没有下降。

血清ALP、TBIL、DBIL和TBA水平是胆汁淤积的评价指标，当胆汁淤积型疾病发生时，血清ALP、TBIL、DBIL和TBA水平显著上升。如表2所示，ANIT所致胆汁淤积型大鼠血清中ALP、TBA、TBIL、DBIL与正常对照组相比显著上升(P<0.001或P<0.01)，表明ANIT在60mg/kg处理48h后造成了大鼠肝内毛细胆管的损伤，诱导了其胆汁淤积的发生。UDCA、药用大黄肝损伤的治疗药物组和唐古特大黄肝损伤的治疗药物组3g/kg剂量连续给药9d对ANIT所致胆汁淤积大鼠血清中的ALP水平有显著降低作用(P<0.001)，而掌叶大黄肝损伤的治疗药物组ALP水平无显著降低作用(P>0.05)。UDCA和药用大黄肝损伤的治疗药物组3g/kg剂量连续给药9d对ANIT所致胆汁淤积大鼠血清中的TBA、TBIL和DBIL水平有显著降低作用(P<0.01)；唐古特大黄肝损伤和掌叶大黄肝损伤的治疗药物组对TBA、TBIL和DBIL均无显著降低作用。以上结果表明不同基原大黄肝损伤的治疗药物对ANIT所致胆汁淤积大鼠具有一定的逆转作用，且不同基原大黄肝损伤的治疗药物的逆转程度不同，药用大黄的肝损伤的治疗药物要优于其他两种大黄的肝损伤的治疗药物。

表1不同基原大黄肝损伤的治疗药物连续给药9d对ANIT所致胆汁淤积大鼠血清生化指标ALT、AST、GGT和ALP的影响

Group	ALT(U/L)	AST(U/L)	GGT(U/L)	ALP(U/L)
					Vehicle	55.50±2.66	121.67±28.17	0.33±0.52	527.33±44.95
ANIT	878.17±69.17***	1090.00±120.79***	4.00±0.00***	1415.83±235.09***
					UDCA+ANIT	387.83±140.73<sup>###</sup>	575.67±136.57<sup>###</sup>	1.83±0.75	735.83±224.38<sup>###</sup>
YHDT+ANIT	448.67±101.33<sup>###</sup>	597.83±158.94<sup>###</sup>	1.13±0.53<sup>#</sup>	870.33±126.01<sup>###</sup>
					THDT+ANIT	431.33±123.30<sup>###</sup>	576.83±127.53<sup>###</sup>	3.00±1.10	966.17±155.60<sup>###</sup>
ZHDT+ANIT	503.67±172.83<sup>###</sup>	712.67±125.27<sup>###</sup>	3.50±1.38	1268.67±123.26

注：与正常组比较，***P<0.001；与模型组比较，^###P<0.001，^#P<0.05

表2不同基原大黄肝损伤的治疗药物连续给药9d对ANIT所致胆汁淤积大鼠血清生化指标TBA、TBIL和DBIL的影响

Group	TBA(μmol//L)	TBIL(μmol//L)	DBIL(μmol//L)
				Vehicle	12.72±1.89	0.43±0.03	0.02±0.04
ANIT	391.25±32.24***	32.33±7.62**	25.38±5.63**
				UDCA+ANIT	81.58±63.08<sup>###</sup>	3.13±4.39<sup>##</sup>	2.05±3.59<sup>##</sup>
YHDT+ANIT	104.65±68.93<sup>##</sup>	2.68±1.38<sup>##</sup>	1.50±1.04<sup>##</sup>
				THDT+ANIT	315.08±79.82	23.29±2.28	16.02±1.87
ZHDT+ANIT	339.17±34.88	24.55±3.15	17.38±2.72

注：与正常组比较，***P<0.001，**P<0.01；与模型组比较，^###P<0.001，^##P<0.01，^#P<0.05

3.3三种基原大黄肝损伤的治疗药物对ANIT所致胆汁淤积大鼠肝脏病理切片的影响

如图2所示，光镜下观察可见，正常对照组肝组织中肝细胞大小、形状均无异常，肝小叶完整，肝细胞排列整齐，未见肝实质细胞病变，肝细胞索由中央静脉向四周呈放射状排列(图2A)；模型组肝小叶轮廓不清，汇管区有大量炎性细胞浸润。肝细胞肿大，胞质疏松。毛细胆管结构破坏或丢失。可见明显点状或灶性坏死(图2B)。经UDCA 100mg/kg，肝损伤的治疗药物3g/kg保护性给药后与模型组相比汇管区炎性细胞浸润减轻。肝细胞坏死减少,肝细胞肿大，胞质疏松，呈气球样变及嗜酸样变的情况明显改善(图2C、D、E、F)，但药用大黄肝损伤的治疗药物组肝细胞坏死减少较多，中央静脉和汇管区结构更正常。

4讨论

ANIT不仅可造成实验动物肝内胆汁淤积，也可引起肝细胞损伤，ANIT对动物肝毒性的致病机制在病理生理学上的表现很像人类的药物性肝炎，在给药约24h内，会引起较重的胆汁淤积，并伴随门静脉周围肝实质细胞损伤，组织学检查可见肝小叶的门静脉周围区域有明显的炎性细胞浸润，现被广泛应用于肝内胆汁淤积模型的复制。

本发明筛选的7个血清学指标分别为ALT、AST、GGT、ALP、TBIL、DBIL和TBA。ALT与AST主要分布在肝脏的肝细胞内，肝细胞受损后，会释放ALT和AST入血，血清中ALT和AST就会升高，其升高的程度与肝细胞受损的程度相一致，因此是目前最常用的肝功能指标。GGT主要存在肝细胞膜和微粒体上，血清中GGT主要来自肝胆系统。GGT在肝脏中广泛分布于肝细胞的毛细胆管一侧和整个胆管系统，因此当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中GGT增高。GGT对于肝胆疾病的诊断缺乏特异性，血清水平升高不仅提示肝胆疾病，也见于肝脏以外的疾病，但是GGT的活性和肝病变程度有良好的一致性。GGT异常率与肝组织病变的程度显著相关，故此GGT也是反映肝细胞损害程度的指标，本发明发现药用大黄肝损伤的治疗药物对血清中GGT的水平具有降低作用。血清ALP、TBIL、DBIL和TBA水平是胆汁淤积的评价指标，当胆汁淤积型疾病发生时，血清ALP、TBIL、DBIL和TBA水平显著上升。ALP广泛分布于骨、肝、肠等组织中，临床上主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎的检查。TBA是由肝脏合成并分解代谢，从而维持人体胆汁酸的相对稳定，它的调控是肝脏的一个主要功能。当肝细胞发生病变或患胆管疾病时可引起胆汁的代谢障碍，使进入血中的胆汁酸含量显著升高，血清TBA升高与肝细胞损伤程度成正比，因而血清TBA水平是反映肝实质损伤的一项重要指标，且TBA测定比传统肝功能指标任何一项都敏感。总胆红素(TBIL)包括直接胆红素(DBIL)和间接胆红素(IBIL)。在肝内经过葡萄糖醛酸化的叫做直接胆红素，未在肝内经过葡萄糖醛酸化的叫做间接胆红素。临床上主要用于诊断肝脏疾病和胆道梗阻。当发生胆汁淤积时，DBIL和IBIL均会升高，但主要以DBIL升高为主。通过实验，我们发现药用大黄肝损伤的治疗药物组ALT、AST、ALP、TBA、TBIL和DBIL对ANIT所致胆汁淤积大鼠血清中的水平有显著降低作用，而唐古特大黄肝损伤的治疗药物组对ALT、AST、ALP具有显著降低作用。而掌叶大黄肝损伤的治疗药物组只对ALT、AST显著降低作用。病理切片结果显示，三种基原大黄肝损伤的治疗药物对ANIT所致胆汁淤积大鼠具有一定的逆转作用，但药用大黄肝损伤的治疗药物的逆转更加显著。另外体重上来看，掌叶大黄肝损伤的治疗药物组3g/kg剂量灌胃大鼠有一定的致泻作用，但由于自身恢复能力致泻作用可恢复，与正常组和模型组相比，其他两种大黄肝损伤的治疗药物在致泻方面均没有显著性差异。

以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。

Claims (10)

1.一种治疗肝损伤的中药组合物，包括下列组分：药用大黄、虎杖、青皮、郁金、山楂、白茅根、陈皮。

2.根据权利要求1所述的治疗肝损伤的中药组合物，其特征在于，所述肝损伤为胆汁淤积型肝损伤。

3.根据权利要求1所述的治疗肝损伤的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物包括下列重量份的组分：药用大黄1-10份、虎杖15-150份、青皮6-60份、郁金9-90份、山楂15-150份、白茅根9-90份、陈皮6-60份。

4.一种治疗肝损伤的中药提取物，为以权利要求1至3中任一项所述中药组合物为原料提取有效成分制得。

5.根据权利要求1至3任一项所述中药组合物或权利要求4所述中药提取物的用途，为用于制备肝损伤治疗药物。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：

a.所述肝损伤治疗药物为胆汁淤积型肝损伤治疗药物；

b.所述肝损伤治疗药物还包括一种或多种常规的药学上可接受的辅料。

7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述肝损伤治疗药物至少具有以下功用之一：

1)降低血清中谷氨酰转肽酶水平；

2)降低血清中TBA、TBIL和DBIL水平的一种或多种。

8.根据权利要求1至3任一项所述中药组合物或权利要求4所述中药提取物的用途，为制备具有以下任一种或多种作用的药物：

1)降低血清中谷氨酰转肽酶水平；

2)降低血清中TBA、TBIL和DBIL水平的一种或多种。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物还包括一种或多种常规的药学上可接受的辅料。

10.一种肝损伤的治疗药物，包括治疗有效量的如权利要求4所述的中药提取物及一种或多种常规的药学上可接受的辅料。

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