CN111803600A - 一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物和制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，涉及中药技术领域，其技术方案要点是，包括如下原料药，柴胡9‑15g、黄芩9‑15g、法半夏10‑15g、炙甘草6‑8g、绞股蓝15‑20g、荷叶10‑15g、生白术10‑15g、山慈菇9‑10g、茯苓10‑20g、丹参9‑10g、土鳖虫6‑10g、薏苡仁15‑30g、泽泻9‑15g枸杞10‑20g、生山楂10‑20g、生首乌10‑15g、决明子10‑20g，绞股蓝、山慈菇清热化痰、解毒散结；法半夏、白术、茯苓、薏苡仁健脾除湿、化痰散结；柴胡、黄芩、丹参、土鳖虫疏肝理气，化瘀通络，泽泻、决明子、荷叶、山楂、枸杞等化浊祛脂，整体有化痰解毒、健脾祛湿，消降浊脂、逐瘀通络功效，防治非酒精性脂肪性肝病。本发明相应公开了一种上述中药组合物的制备方法，其可以被制成丸剂使用，疗效佳、适应性广。

Description

一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物和制备方法

技术领域

本发明涉及中药的技术领域，尤其是涉及一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物和制备方法。

背景技术

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指一种无过量饮酒史、以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征，造成肝脏功能损害的慢性炎性肝脏疾病。

中医学认为非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)多属“肥气”、“癥积”、“痰浊”范畴，其发生发展是由于长期嗜食肥甘厚味，饮酒过度或久卧久坐，体丰痰盈，或七情内伤，调摄失当，或因不慎感受湿热疫毒，使脾失运化，肝失疏泄，以致水谷不能化为精微，聚而为湿为痰，化为湿浊脂毒，阻于肝络，客于肝脏而形成本病。

因此，现代医学所探讨的肝脏、胰腺等代谢功能紊乱，进而引起人体脂质代谢结构失调，与中医学中的“脾虚生痰湿”“痰湿壅积则生浊毒”理论相吻合。现代医学中有使用西药吡格列酮来改善NAFLD，吡格列酮为噻唑烷二酮类抗糖尿病药物，属胰岛素增敏剂。其作用机制是高选择性的激动过氧化物酶小体生长因子活化受体，调整胰岛素控制基因加强周围肌肉、脂肪组织和肝中胰岛素的作用，促使葡萄糖和2-去氧葡萄糖的消耗，从而改善葡萄糖脂质的代谢，有明显的抗高血糖素效应，降低血浆中胰岛素的水平，另外尚有抑制肝脏糖的异生，降低血中甘油酯及抑制胆固醇体内合成和增加脂酸β氧化的作用。

在我国，NAFLD的患病率显著上升，已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，严重威胁着我国人民的生命健康。因此，寻找安全、有效、经济的用于预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病的中药，显得尤为迫切和需要。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，其具有解毒化痰、防治非酒精性脂肪性肝病的效果。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，包括如下原料药，

柴胡，性味苦、微寒，归肝、胆经，有和解表里，疏肝升阳之功效；

黄芩，味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒等功效；

法半夏，燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结；

炙甘草，具有益气滋阴，通阳复脉治疗功效；

绞股蓝，消炎解毒、止咳祛痰、益气健脾，有保肝解毒、降压、降脂功效；

荷叶，性平，味苦，归肝经、脾经、胃经，清暑化湿，升发清阳，凉血止血，属清热药下分类的清热凉血药；

生白术，性温，味甘、苦，归脾经、胃经，健脾、益气、燥湿利水、止汗、安胎，属补虚药下属分类的补气药；

山慈菇，味甘、微辛、性凉，具有清热解毒，消痈散结；

茯苓，性平，味甘、淡，归心经、肺经、脾经、肾经，利水渗湿、健脾宁心，属利水渗湿药下属分类的利水消肿药；

丹参，味苦，微寒，活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈；

土鳖虫，味咸，性寒，归肝经，破血逐瘀；

薏苡仁，性凉，味甘、淡，入脾、肺、肾经，具有利水、健脾、除痹、清热排脓的功效；

泽泻，味甘、淡，性寒，归肾、膀胱经，利水渗湿，泄热，化浊降脂；

枸杞，甘，平，养肝，滋肾，润肺；

生山楂，健脾开胃、消食导滞、活血化淤；

生首乌，性味苦、甘、涩，温，归肝、心、肾经，解毒，消痈；

决明子，味苦、甘、咸，性微寒，入肝、肾、大肠经；润肠通便，降脂明目，治疗便秘及高血脂，高血压。清肝明目，利水通便，有缓泻作用，降血压降血脂。

本发明进一步设置为：包括如下原料药，

本发明进一步设置为：包括如下原料药，

本发明进一步设置为：包括如下原料药，

本发明的另一个目的是提供一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物的制备方法。

为实现上述目的，本申请提供了如下技术方案：

本发明进一步设置为：所述中药组合物的剂型为汤剂、胶囊剂或丸剂中的一种。

本发明进一步设置为：所述中药组合物的剂型为半浓缩型水丸。

本发明进一步设置为：所述中药组合物制成半浓缩型水丸的具体步骤如下，

步骤一、净制：将各中药分别除去泥沙、灰霄、非药用部位，其中山慈菇、决明子、山楂、泽泻、何首乌、丹参用“抢水法”快速洗涤，低温(60℃)干燥，以除去表面浮土和脏物，以符合药用要求，形成“净药材”备用；

步骤二、炮制：将甘草加少量开水稀释后，用文火炒至老黄色，不粘手时，取出放凉，得炙甘草，备用；

步骤三、称取：按照对应质量称取柴胡、黄芩、法半夏、炙甘草、绞股蓝、荷叶、生白术、山慈菇、茯苓、丹参、土鳖虫、泽泻、枸杞、生山楂、生首乌、决明子；

步骤四、将步骤三称取的法半夏、炙甘草、绞股蓝、荷叶、生白术、山慈菇、茯苓、丹参、土鳖虫、枸杞、生山楂、决明子加入药罐，加8倍量水煎煮，待水沸腾时，加入黄芩，煎煮1.5h后，将药液放入浓缩锅中，反复三次，至成稠浸膏时，将泽泻、柴胡、生首乌进行粉碎，粉碎后加入浓缩液中，得到制丸原料液，搅拌均匀后，置电热恒温热风循环烘箱中，设定恒温60℃，干燥24小时后，粉碎成细粉，过100目筛，开始制丸；

步骤五、将薏苡仁粉碎成细粉，最后在制丸原料液中加入薏苡仁作为辅料盖面，依次包衣、烘干、打光、检验、包装制成半浓缩型水丸。

综上所述，本发明的有益技术效果为：

1、本发明的中药组合物由无毒副作用的药材配制而成，作用缓和，不易引起不适，可接受人群广泛；绞股蓝、山慈菇清热化痰、解毒散结；法半夏、白术、茯苓、薏苡仁健脾除湿、化痰散结；柴胡、黄芩、丹参、土鳖虫疏肝理气，化瘀通络，泽泻、决明子、荷叶、山楂、枸杞等化浊祛脂，整体有化痰解毒、健脾祛湿，消降浊脂、逐瘀通络功效，从而防治非酒精性脂肪性肝病；

2、本发明相应公开了中药组合物的制备方法，其配合现代中药制备技术可以被制成汤剂、胶囊剂、丸剂，使用形式多样，可以有不同的选择，增加了本发明中药组合物的适应性。

附图说明

图1是用于展示各组大鼠肝脏组织病理学变化的示意图；

图2是电镜下观察非酒精性脂肪肝细胞超微结构示意图；

图3是各组织中神经酰胺含量峰值示意图；

图4是各组织中神经酰胺浓度示意图；

图5是观察各组脂滴蓄积情况的示意图；

图6是流式细胞术检测HepG2细胞凋亡示意图；

图7是中药组合物治疗肝纤维化潜在靶点韦恩图；

图8是关键靶点PPI网络图；

图9是药物-成分-靶点网络；

图10是GO富集分析BP结果；

图11是GO富集分析MF结果；

图12是GO富集分析CC结果；

图13是KEGG通路分析结果。

图中，A空白组；B模型组；C中药高剂量组；D中药中剂量组；E中药低剂量组；F阳性药物吡格列酮组。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

实施例1

一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，包括如下原料药，

山慈菇为兰科植物杜鹃兰独蒜兰的干燥假鳞茎。

土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖雌虫干燥体。

决明子为豆科植物决明的干燥成熟种子。

山楂为蔷薇科植物山里红或山楂的干燥成熟果实。

薏苡仁为禾本科植物薏苡的干燥成熟种仁。

泽泻为泽泻科植物泽泻干燥块茎。

柴胡为伞形科植物柴胡的干燥根。

黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根。

法半夏为天南星科植物半夏的干燥块茎的炮制加工品。

生首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根。

丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎。

茯苓为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核。

枸杞子为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实。

炙甘草为豆科植物甘草胀果甘草、光果甘草的干燥根及根茎的加工炮制品。

上述中药均购于兰州黄河药材市场。

上述中药组合物不含法定标准中标识有毒性和现代药理学证明有毒性的药材；不存在有“十八反”、“十九畏”的中药配伍禁忌药物；药味用量不超过药品标准规定。

该中药组合物的功效为疏肝理气、化痰祛浊、活血通络、解毒消脂，主要适应于脂肪肝、慢性肝炎和肝纤维化、高脂血症及肥胖患者等病症的慢性疾病。选用剂型要于临床应用一致，符合起效应缓慢，疗效作用应持久等特点；另外，由于土鳖虫有较强的腥臭味，还应符合能掩盖气味的剂型。因此，中药水丸具有在胃肠中崩解缓慢、逐渐释放药物、作用持久的特征，符合以上要求。由于该处方药味较多、剂量较大，患者服药剂量太大的弊端，故可按处方中各药的性质尽可能地选择大部分药物，进行以水为溶媒提取，再浓缩，将不适合提取的药物进行粉碎，加入到浓缩液中，制成丸剂。

综合以上因素，该处方适合的剂型为——半浓缩型水丸。

实施例2

一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，包括如下原料药，

实施例3

一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，包括如下原料药，

实施例4

以实施例1为基础，实施例1中药组合物的制备方法如下：

步骤一、净制：将各中药分别除去泥沙、灰霄、非药用部位，其中山慈菇、决明子、山楂、泽泻、何首乌、丹参用“抢水法”快速洗涤，低温(60℃)干燥，以除去表面浮土和脏物，以符合药用要求，形成“净药材”备用；

步骤二、炮制：将甘草加少量开水稀释后，用文火炒至老黄色，不粘手时，取出放凉，得炙甘草，备用；

步骤三、称取柴胡9g、黄芩9g、法半夏10g、炙甘草6g、绞股蓝15g、荷叶10g、生白术10g、山慈菇9g、茯苓10g、丹参9g、土鳖虫6g、泽泻9g、枸杞10g、生山楂10g、生首乌10g、决明子10g；

步骤四、将步骤三称取的法半夏、炙甘草、绞股蓝、荷叶、生白术、山慈菇、茯苓、丹参、土鳖虫、枸杞、生山楂、决明子加入药罐，加8倍量水煎煮，待水沸腾时，加入黄芩，煎煮1.5h后，将药液放入浓缩锅中，反复三次，至成稠浸膏时，将泽泻、柴胡、生首乌进行粉碎，粉碎后加入浓缩液中，得到制丸原料液，搅拌均匀后，置电热恒温热风循环烘箱中，设定恒温60℃，干燥24小时后，粉碎成细粉，过100目筛，开始制丸；

步骤五、将薏苡仁粉碎成细粉，最后在制丸原料液中加入薏苡仁作为辅料盖面，依次包衣、烘干、打光、检验、包装制成半浓缩型水丸。

实施例5

利用实施例4中制得的半浓缩型水丸，通过Wistar大鼠为模型动物，采用高脂饲料喂养造模。

Wistar大鼠，基础饲料适应性喂养1周后，给予高脂饲料(普通饲料+15％猪板油+2％胆固醇+5％蛋黄粉+0.5％胆酸钠)进行饲养。期间观察大鼠的食欲、体重、行为、状态、毛发及死亡情况,连续12周。实验期间，每周称重一次，观察动物食欲行为、粪便、毛发及动物死亡情况。在12周实验的过程中，各组大鼠生长良好，体重增长。正常喂养组大鼠毛发光亮，行动灵敏，饮食、二便正常。高脂饲料喂养的大鼠前2周食欲旺盛，体重增长较快，随着造模时间延长，大鼠毛发泛黄，行动呆滞，食欲减退，大便偏稀，体重增长变慢，药物干预后，食欲和大便不同程度改善，实验期间未有大鼠死亡情况。至第12周末，处死造模组大鼠，取出肝组织，肉眼观察模型组大鼠，肝脏明显肿大，呈黄色缺血状。与正常喂养大鼠相比较，高脂喂养大鼠体重、肝重均明显增加。

高剂量组、中剂量组、低剂量组中药组合物均以实施例1为基础：

中药高剂量组：按人等效剂量12倍量即0.648g/100g体重；

中药中剂量组：按人等效剂量6倍量即0.324g/100g体重；

中药低剂量组：按人等效剂量3倍量即0.162g/100g体重；

吡格列酮阳性药组：盐酸吡格列酮0.135mg/100g体重。

正常喂养组(空白组)和高脂喂养组(模型组)每日灌胃等容量的生理盐水。各组连续灌胃给药6周，每天1次。灌胃体积为1ml/100g大鼠。

表1中药组合物对大鼠体重的影响

注：与治疗前空白组相比^△△P<0.05；与治疗后空白组比较^△P<0.05；与模型组比较^■P<0.05；与吡格列酮组比较^●P<0.05；与高剂量组比较^◆P<0.05；与治疗前高剂量比较^*P<0.05。

与空白组大鼠相比较，模型组大鼠体重、肝重均明显增加。与模型组大鼠相比，慈菇消脂中药组合物各剂量组均能显著减轻大鼠体重、肝重，慈菇消脂中药高剂量组作用优于吡格列酮阳性对照组。

表2大鼠血清各项指标的检测结果

注：与空白组比较※P﹤0.05※※P﹤0.01；与模型组比较#P﹤0.05##P﹤0.01；与阳性对照组比较^▲P﹤0.05^▲▲P﹤0.01.

与空白组比较，模型组的天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)显著上升(P＜0.01)，治疗组和模型组进行统计分析，存在统计意义(P＜0.05)，说明吡格列酮组和慈菇消脂中药组合物对降低脂肪肝肝脏酶学的降低存在着疗效。与吡格列酮组相比较，慈菇消脂中药组合物高剂量组对肝脏酶学的降低呈现一定优势(P＜0.05)。但吡格列酮组和慈菇消脂中药组合物中剂量组未见统计意义(P＞0.05)。

与空白组比较，模型组血清TC、TG、LDL水平明显增高(P＜0.05)。与模型组相比，治疗组经治疗之后TC、TG、LDL均有不同程度的降低(P＜0.05)。慈菇消脂中药高剂量组在降低TC、TG、LDL优于吡格列酮组作用显著(P＜0.05)。吡格列酮组与慈菇消脂中药中剂量对TC、LDL的影响进行统计分析，不存在统计学差异(P＞0.05)。

参照图1，大鼠肝组织用中性甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察(HE,20x)肝组织学的改变：

空白组的大鼠肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常，中央静脉大而壁薄，肝细胞排列成肝索，在中央静脉周围呈放射状分布，细胞呈多边形；

模型组的大鼠肝细胞中度水肿，肝细胞内可见大小不等、数量不一的脂滴空泡，呈弥漫性脂肪变性，但未见明显的纤维化改变；

各治疗组大鼠肝小叶和肝血窦结构清晰，中药高、中剂量组肝细胞内脂滴空泡明显减少，高剂量组基本消失，中药低剂量组肝小叶中央部分区域肝细胞内仍见数量较多的脂肪空泡；

阳性药物吡格列酮对照组中少量的肝细胞内仍有脂滴空泡。

参照图2，电镜(10000x)下观察肝组织超微结构：处理细胞、切片，观察细胞器和脂滴情况。

空白组肝细胞形态结构正常，膜界限清晰，Disse隙正常，血窦面和胆小管面可见微绒毛伸入腔内，肝细胞连接面可见紧密连接、缝隙连接等，细胞质内可见数量丰富且形态正常的线粒体、内质网、高尔基体复合体、核糖体，以及糖原颗粒、微小脂滴等内含物，细胞核形状规则且居中，核仁明显；

模型组肝细胞肿胀，胞浆中布满众多大大小小的脂滴空泡，核膜皱缩变形，Disse隙扩大且其中部分区域可见微绒毛和胶原纤维增生现象，偶见部分细胞中的内质网扩张，线粒体轻微肿胀、变形；

与模型组相比较，中药高剂量组肝细胞气球样变减轻，肝细胞内只含极少数脂滴，各种细胞器以及细胞内含物都没有出现异常现象，内膜上嵴粒多且排列整齐，Disse隙内未见微绒毛和胶原纤维增生现象；中药中剂量组线粒体边缘较清晰，内膜上嵴粒较多但排列仍不整齐，细胞内脂滴变小减少，Disse隙内胶原纤维显著减少；中药低剂量组肝细胞内仍含较多脂滴，线粒体稍肿胀，核膜略有皱缩，内膜上嵴粒较少且排列仍不整齐，Disse隙内胶原纤维减少；

阳性药物吡格列酮对照组肝细胞内含有少量脂滴，线粒体肿胀不明显，边缘清晰光滑。

实施例6

以实施例5为基础，由于神经酰胺对NAFLD的形成和发展具有重要的调节作用，采用高效薄层色谱法检测各组大鼠肝脏组织中神经酰胺含量：

参照图3与图4，与空白组的神经酰胺C2含量相比，模型组大鼠经高脂高胆固醇饲料饲喂诱导后，模型组肝组织中神经酰胺C2含量显著升高；

参照图3与图4，与模型组相比，给药干预6周后，慈菇消脂中药组合物中剂量组和高剂量组大鼠肝组织神经酰胺C2含量均显著降低(P＜0.05)，而慈菇消脂中药组合物低剂量组神经酰胺C2含量无显著变化(P＞0.05)。慈菇消脂中药组合物通过干预可透过细胞膜的神经酰胺诱导非酒精性脂肪性肝病脂凋亡信号通路而发挥抗脂肪肝作用。

实施例7

以实施例1为基础，研究中药组合物对NAFLD细胞模型肝细胞凋亡的神经酰胺信号通路的干预作用。

建立非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型：用含10﹪胎牛血清高糖MEM培养液，37℃、5﹪二氧化碳、95﹪氧气、100﹪湿度的培养箱中培养。细胞培养1～1.5天换液一次。2～3天细胞即可传代。传代时，弃去培养板中的培养液，轻轻加入PBS洗2遍。之后加入1.0ml含0.01﹪EDTA和0.25﹪胰蛋白酶的消化液，使消化液覆盖所有细胞表面，室温放置约30-40秒后，将培养板放在倒置显微镜下进行观察，当发现细胞变圆，细胞间隙增宽后，立即加入2.0ml细胞培养液终止消化。吸取板内培养液，反复轻轻吹打板底细胞，直至细胞被全部吹下，收集细胞及培液于离心管中，1500r/min离心5分钟。弃上清，加入5ml细胞培养液，用吸管吹打使之形成单细胞悬液，取一滴细胞悬液用细胞计数板在显微镜下计数，调整细胞浓度为10000/ml，接种于细胞培养板，放置在37℃、5﹪二氧化碳、95﹪氧气、100％湿度的孵箱中培养。取对数生长期的细胞用于实验。

油红O染色观察脂滴蓄积情况，油红O作为一种强染脂剂，能够指示细胞中脂质的含量，本实施例中分别用游离脂肪酸(FFA)浓度为250uM，500uM，1000uM(按棕榈酸：油酸为1：2的摩尔比)，刺激时间分别为12h，18h，24h。用MTT比色法测定细胞增殖情况(以吸光度OD值表示)，了解游离脂肪酸对细胞增殖的影响情况。

参照图5，结果显示FFA作用的各实验组，随着FFA浓度的加大及作用时间的延长，可见细胞胞浆内被染成红色的颗粒状脂滴逐渐增多，并呈越来越明显的“印戒”状形态。以FFA 500uM作用24小时作用最明显。说明FFA混合物可诱导HepG2细胞发生脂性凋亡。

实施例8

以实施例5为基础，制备中药组合物的含药血清。将20只大鼠随机分为2组，分别为中药组和空白组。给药剂量按下面公式换算：给药剂量＝临床常用量×动物等效面积系数×5，制备中药组合物药液浓度为0.225g/ml，空白组给予等剂量生理盐水灌胃。大鼠每100g体重灌2ml药液或生理盐水，每日给药2次，早晚各一次，连续给药1周，于末次给药后1h心脏取血，采用一次性非抗凝真空采血管收集全血，无菌操作。采集的全血于4℃静置2h后，低温离心机离心，3500rpm/min，离心15min，分离血清，分离的血清同组混合，经56℃恒温灭活30min处理后，在超净台上用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，-20℃保存备用。将收集到的中药组合物含药血清和空白血清，配制成含药血清浓度分别为2﹪、4﹪、6﹪的培养液各10ml备用，各组培养液终浓度为10﹪，如表3所示。

表3

收集各实验组培养基，用PBS清洗细胞两次，使用不含EDTA的胰酶消化细胞，1,000×r/min离心5分钟分别收集贴壁细胞和培养基上清液中的飘浮细胞，PBS清洗细胞两遍，分别加入400μl结合液重悬细胞。用300目滤网过滤细胞悬液。分别加入5μl Annexin V-FITC，2-8℃避光静置15分钟。再加入10μl碘化丙啶(propidium)，2-8℃避光静置5分钟。马上用流式细胞仪进行检测。

参照图6，与正常喂养组比较，模型组细胞凋亡率显著增加(P＜0.01)；与模型组比较，中药低、中、高剂量组细胞凋亡率及盐酸吡格列酮组细胞凋亡率均显著下降(P＜0.05)。说明FFA混合物可诱导HepG2细胞发生脂性凋亡，而中药的含药血清不同剂量对HepG2细胞脂性凋亡均有抑制作用。

全自动生化仪检测各组细胞中ALT、AST、TG、FFA含量，见表4。

与正常喂养空白组比较，模型组细胞中ALT、AST、TG、FFA含量显著增加(P﹤0.05)；与模型组比较，中药高剂量组及阳性对照组ALT、AST、TG、FFA含量显著减低(P﹤0.05)，中药中剂量组除对FFA无显著降低作用外(P＞0.05)，其余各项指标均显著降低(P﹤0.05)，中药低剂量组除对ALT和FFA无显著降低作用外(P＞0.05)，AST、TG均显著降低(P﹤0.05)。实验结果说明，慈姑消脂中药组合物具有降脂、保肝作用，且呈剂量相关性。

表4细胞中各项指标的检测结果

注：与空白组比较※P﹤0.05，※※P﹤0.01；与模型组比较#P﹤0.05，##P﹤0.01；与阳性对照组比较^▲P﹤0.05，^▲▲P﹤0.01.

本发明的慈菇消脂中药组合物由无毒副作用的药材配制而成，作用缓和，不易引起不适，可接受人群广泛；绞股蓝、山慈菇清热化痰、解毒散结；法半夏、白术、茯苓、薏苡仁健脾除湿、化痰散结；柴胡、黄芩、丹参、土鳖虫疏肝理气，化瘀通络，泽泻、决明子、荷叶、山楂、枸杞等化浊祛脂，整体有化痰解毒、健脾祛湿，消降浊脂、逐瘀通络功效，从而防治非酒精性脂肪性肝病。

相比较于西药吡格列酮，防治效果佳。能明显减轻NAFLD大鼠肝组织脂肪变性程度，降低血脂，改善炎症反应；减轻大鼠体重、肝重，改善大鼠肝组织病理变化，且可透过细胞膜的神经酰胺诱导非酒精性脂肪性肝病脂凋亡信号通路而发挥抗脂肪肝作用。

实施例9

英国药理学家Hopkins于2007年提出“网络药理学”概念。网络药理学以系统生物学和生物信息学为基础，构建“疾病-药物-基因-靶点”多级网络，分析网络中药物与节点间的作用关系，本实施例采用网络药理学的方法从成分、靶点、蛋白-蛋白互作关系、信号通路及生物过程等方面来预测中药组合物治疗肝纤维化的作用机制。

(1)中药组合物中化学成分的收集和筛选，以OB≥30％且DL≥0.18为标准，借助TCMSP数据库，筛选出中药中的活性成分，结果如下表；

表5中药组合物中部分活性成分的基本信息

(2)预测中药组合物治疗肝纤维化的潜在作用靶点，借助GeneCards及PharmGK数据库检索肝纤维化的靶点，共得到5259个靶点。运用Omicshare平台绘制韦恩图，将中药组合物活性成分对应的靶点与肝纤维化的靶点进行映射取交集，共得到214个交叉靶点，即为中药组合物治疗肝纤维化的潜在作用靶点，结果如图7；

(3)PPI网络构建与分析，将中药组合物治疗肝纤维化的42个关键靶点导入到Cytoscape3.7.2软件中，得到蛋白质相互作用网络。网络中共包含42个节点，721条边。图中圆的半径越大，说明其相关性越好，结果如图8。

(4)药物-成分-靶点网络的构建与分析，借助Cytoscape3.7.2软件构建药物-成分-靶点相互作用网络，见图9。该网络由367个节点和1008条边组成。网络中八边形代表慈菇消脂丸中的药物，菱形代表活性成分，矩形代表关键靶点，每条边则代表成分与靶点之间的作用关系。根据节点度值等特性对核心节点进行筛选，结果呈现出槲皮素、山奈酚、木犀草素、豆甾醇、汉黄芩素、柚皮素等活性成分在整个网络中发挥着关键作用，是中药组合物治疗肝纤维化的核心成分。槲皮素具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等药理作用；山奈酚具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗病毒等多种药理作用；木犀草素具有消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗肝纤维化等多种药理活性；豆甾醇具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用；汉黄芩素具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性；柚皮素具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗癌、解痉和利胆等作用。

(5)GO富集分析及KEGG通路分析，将中药组合物治疗肝纤维化的41个关键靶点基因(其中LDLR基因未查询到官方名称，未参与通路分析)官方名称输入到OmicShare平台中，共得到GO富集条目4848个，其中包括生物过程(Biologicalprocesses，BP)4124个、细胞功能(Molecularfunction，MF)392种和细胞组分(Cellcomposition，CC)332类。根据P值选择前10条的GO及KEGG通路分析结果，见表6，GO条目选择排名前20的数据进行柱状图的绘制，见图10-12。KEGG筛选得到20条信号通路进行分析，见图13。

表6 GO及KEGG前十条通路分析结果

肝纤维化是肝脏组织受到损伤后的自愈反应，若肝脏受到损伤时未能及时得到缓解和修复，最终将发展为不可逆的肝硬化。本实施例运用网络药理学方法筛选出中药组合物中所包含活性成分279个，抗肝纤维化的关键靶点42个，说明中药组合物治疗肝纤维化具有多成分、多靶点的特点。

中药组合物治疗肝纤维化的PPI网络结果分析中，共有42个靶点蛋白，通过网络拓扑分析发现HIF1A、TP53、SERPINE1、CCND1、EGFR等靶点是慈菇消脂丸治疗肝纤维化的关键靶点。HIF1A可刺激纤维化基因与炎症基因表达，启动脂肪组织纤维化进程；TP53能调节细胞周期和避免细胞癌变发生；EGFR可调节细胞的增殖、分化、迁移与存活等多种生物学过程。

综上所述，本实施例借助网络药理学的方法说明中药组合物治疗肝纤维化是多成分、多靶点、多途径相互作用的结果，可为中药组合物的作用机制提供一定的理论依据。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (7)

1.一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，其特征在于：包括如下原料药，

2.根据权利要求1所述的一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，其特征在于：包括如下原料药，

3.根据权利要求1所述的一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，其特征在于：包括如下原料药，

4.根据权利要求1所述的一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物，其特征在于：包括如下原料药，

5.如权利要求1-4任一项所述的防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述中药组合物的剂型为汤剂、胶囊剂或丸剂中的一种。

6.根据权利要求5所述的一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述中药组合物的剂型为半浓缩型水丸。

7.根据权利要求6所述的一种防治非酒精性脂肪性肝病的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述中药组合物制成半浓缩型水丸的具体步骤如下，

步骤一、净制：将各中药分别除去泥沙、灰霄、非药用部位，其中山慈菇、决明子、山楂、泽泻、何首乌、丹参用“抢水法”快速洗涤，低温(60℃)干燥，以除去表面浮土和脏物，以符合药用要求，形成“净药材”备用；

步骤二、炮制：将甘草加少量开水稀释后，用文火炒至老黄色，不粘手时，取出放凉，得炙甘草，备用；

步骤三、称取：按照对应质量称取柴胡、黄芩、法半夏、炙甘草、绞股蓝、荷叶、生白术、山慈菇、茯苓、丹参、土鳖虫、泽泻、枸杞、生山楂、生首乌、决明子；

步骤四、将步骤三称取的法半夏、炙甘草、绞股蓝、荷叶、生白术、山慈菇、茯苓、丹参、土鳖虫、枸杞、生山楂、决明子加入药罐，加8倍量水煎煮，待水沸腾时，加入黄芩，煎煮1.5h后，将药液放入浓缩锅中，反复三次，至成稠浸膏时，将泽泻、柴胡、生首乌进行粉碎，粉碎后加入浓缩液中，得到制丸原料液，搅拌均匀后，置电热恒温热风循环烘箱中，设定恒温60℃，干燥24小时后，粉碎成细粉，过100目筛，开始制丸；

步骤五、将薏苡仁粉碎成细粉，最后在制丸原料液中加入薏苡仁作为辅料盖面，依次包衣、烘干、打光、检验、包装制成半浓缩型水丸。

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