CN113521008A - 一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法 - Google Patents

一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物材料与医药制剂领域，涉及一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法。步骤为：将卵磷脂、胆固醇和黄芪甲苷溶解于无水乙醇中，混匀后得到脂质体悬浮液，将脂质体悬浮液通过蠕动泵导入超纯水中，50℃下水化0.5‑1h，在减压下旋转蒸发除去无水乙醇，得到黄芪甲苷脂质体溶液，然后置于冰水浴中超声得到黄芪甲苷纳米脂质体溶液，采用滤膜孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤器过滤取滤液，然后置于4℃冰箱保存。本发明采用乙醇注入法制备黄芪甲苷纳米脂质体，方法简便快捷易操作，通过将黄芪甲苷制备成脂质体，可以提高黄芪甲苷的生物利用率，脂质体具有在体内无毒、安全可靠的优点，保证了黄芪甲苷纳米脂质体的安全性，且在常温环境下储藏一个月以上仍稳定。

Description

一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法
技术领域
本发明属于生物材料与医药制剂技术领域，涉及一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法。
背景技术
黄芪属豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，具有补气固表、利尿脱毒、排脓、敛疮生肌之功效。现代医学证明黄芪具有调节免疫、抗高血糖、抗炎症、抗氧化和抗肿瘤等作用。黄芪中含有大量功能各异的活性物质，如类黄酮、皂苷、多糖、氨基酸等，皂苷类化合物是黄芪属植物中最重要的一种活性成分，其中黄芪甲苷(AstragalosideⅣ，AS-Ⅳ)是最主要的单体活性成分，其分子式为C41H68O14，具有抗菌抗炎、抗肿瘤和增强免疫等功效。
然而，由于黄芪甲苷相对分子质量较高，口服生物利用率极低，很难发挥药效，近年来对黄芪甲苷剂型的研究均集中在注射方向。又由于黄芪甲苷在水中的溶解度较小不能满足注射剂的配制要求，因此寻找一种安全有效的、患者乐于接受的黄芪甲苷的给药方式显得尤为必要。
1965年Bangham等首次提出脂质体这一概念，脂质体是一种将药物包封于类脂双分子层形成的脂膜中所制成的超微球状载体制剂，可以包封亲水性药物和亲脂性药物，粒径通常从几十纳米到上千纳米不等。具有生物相容性好，能够增加药物的疗效，减少药物的治疗剂量和降低药物毒性等优势，可以作为各类治疗药物的传递载体。
黄芪甲苷具有的难溶解性的特点影响了其疗效，而制成黄芪甲苷纳米脂质体后，药物包裹在双分子层内，可以增加药物的溶解度，延长黄芪甲苷在体内的循环时间，提高对肿瘤细胞的靶向性，从而提高其抗肿瘤作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：为了解决上述背景技术中存在的问题，提供一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，从而克服黄芪甲苷应用的现有技术中存在的口服利用率低的问题。
本发明是通过以下技术手段来实现的：
一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法包括如下步骤：
(1)将卵磷脂与黄芪甲苷活性物质的质量之比为20：1—100：1，卵磷脂与亲脂性添加剂的质量之比为2：1—10：1的三种物质溶解于无水乙醇中，混匀后得到脂质体悬浮液。
(2)将超纯水预热至40-50℃后，将步骤(1)所获得的脂质体悬浮液通过蠕动泵导入超纯水中，然后置于50℃下水化0.5-1h，在温度为25℃，转速为85-90r/min条件下，-0.01MPa旋转蒸发5-10min，除去无水乙醇，得到黄芪甲苷脂质体溶液。
(3)将步骤(2)所获得的黄芪甲苷脂质体溶液置于冰水浴中于100W探头超声5-10min，其中探头工作10s，间隙5s，得到黄芪甲苷纳米脂质体溶液。
(4)将步骤(3)所获得的黄芪甲苷纳米脂质体溶液采用滤膜孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤器过滤取滤液，然后置于4℃冰箱保存。
本方案所述的黄芪甲苷纳米脂质体，其特征是所述的磷脂，包含蛋黄卵磷脂和大豆卵磷脂。
本方案所述的黄芪甲苷纳米脂质体，所述的黄芪甲苷纳米脂质体，其特征是所述的黄芪甲苷活性成分为黄芪甲苷的纯度在98％以上。
本方案所述的黄芪甲苷纳米脂质体，所述的黄芪甲苷纳米脂质体，其特征是所述的亲脂性添加剂为胆固醇。
本发明所述的黄芪甲苷纳米脂质体的包封率可以采用下述方法进行测定：
取2mL制备好的黄芪甲苷纳米脂质体，置于Millipore超滤离心管(截留分子量10,000)内，3000r·min-1下离心30min，收集滤液，以流动相稀释到适当浓度，过0.22μm滤膜过滤后采用高效液相色谱法测定分离洗脱后游离药物的含量，计算包封率。
包封率＝[包封药物浓度/(游离药物浓度+包封药物浓度)]×100％
本发明的积极效果在于：
1、本发明的一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法中黄芪甲苷纳米脂质体的膜材主要成分与生物膜相似，具有在体内无毒、无免疫原性、安全可靠的优点，该脂质体可以提高黄芪甲苷的溶解性，解决生物利用率低的问题，增强黄芪甲苷的药理作用。
2、脂质体制剂可以延缓或控制药物的释放，降低黄芪甲苷的消除速率并延长黄芪甲苷的作用时间，增加黄芪甲苷的体内外稳定性。
3、本发明的脂质体，显著改善了黄芪甲苷的溶出速度，稳定性好。本发现的脂质体制备工艺简单，制成脂质体后可以进一步加工厂气雾剂、喷雾剂等多种剂型。
具体实施方式
通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1
(1)将蛋黄卵磷脂和胆固醇按照3：1的质量比、蛋黄卵磷脂和黄芪甲苷按照30：1的质量比溶解于无水乙醇中，混匀后得到脂质体悬浮液。
(2)将超纯水预热至40-50℃后，将步骤(1)所获得的脂质体悬浮液通过蠕动泵导入超纯水中，然后置于50℃下水化0.5-1h，在温度为25℃，转速为85-90r/min条件下，-0.01MPa旋转蒸发5-10min，除去无水乙醇，得到黄芪甲苷脂质体溶液。
(3)将步骤(2)所获得的黄芪甲苷脂质体溶液置于冰水浴中于100W探头超声5-10min，其中探头工作10s，间隙5s，得到黄芪甲苷纳米脂质体溶液。
(4)将步骤(3)所获得的黄芪甲苷纳米脂质体溶液采用滤膜孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤器过滤取滤液，然后置于4℃冰箱保存，测定包封率为48.2％。
实施例2
(1)将蛋黄卵磷脂和胆固醇按照3.5：1的质量比、蛋黄卵磷脂和黄芪甲苷按照35：1的质量比溶解于无水乙醇中，混匀后得到脂质体悬浮液。
(2)将超纯水预热至40-50℃后，将步骤(1)所获得的脂质体悬浮液通过蠕动泵导入超纯水中，然后置于50℃下水化0.5-1h，在温度为25℃，转速为85-90r/min条件下，-0.01MPa旋转蒸发5-10min，除去无水乙醇，得到黄芪甲苷脂质体溶液。
(3)将步骤(2)所获得的黄芪甲苷脂质体溶液置于冰水浴中于100W探头超声5-10min，其中探头工作10s，间隙5s，得到黄芪甲苷纳米脂质体溶液。
(4)将步骤(3)所获得的黄芪甲苷纳米脂质体溶液采用滤膜孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤器过滤取滤液，然后置于4℃冰箱保存，测定包封率为56.9％。
实施例3
(1)将蛋黄卵磷脂和胆固醇按照4：1的质量比、蛋黄卵磷脂和黄芪甲苷按照40：1的质量比溶解于无水乙醇中，混匀后得到脂质体悬浮液。
(2)将超纯水预热至40-50℃后，将步骤(1)所获得的脂质体悬浮液通过蠕动泵导入超纯水中，然后置于50℃下水化0.5-1h，在温度为25℃，转速为85-90r/min条件下，-0.01MPa旋转蒸发5-10min，除去无水乙醇，得到黄芪甲苷脂质体溶液。
(3)将步骤(2)所获得的黄芪甲苷脂质体溶液置于冰水浴中于100W探头超声5-10min，其中探头工作10s，间隙5s，得到黄芪甲苷纳米脂质体溶液。
(4)将步骤(3)所获得的黄芪甲苷纳米脂质体溶液采用滤膜孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤器过滤取滤液，然后置于4℃冰箱保存，测定包封率为67.3％。
实施例4
(1)将蛋黄卵磷脂和胆固醇按照5：1的质量比、蛋黄卵磷脂和黄芪甲苷按照50：1的质量比溶解于无水乙醇中，混匀后得到脂质体悬浮液。
(2)将超纯水预热至40-50℃后，将步骤(1)所获得的脂质体悬浮液通过蠕动泵导入超纯水中，然后置于50℃下水化0.5-1h，在温度为25℃，转速为85-90r/min条件下，-0.01MPa旋转蒸发5-10min，除去无水乙醇，得到黄芪甲苷脂质体溶液。
(3)将步骤(2)所获得的黄芪甲苷脂质体溶液置于冰水浴中于100W探头超声5-10min，其中探头工作10s，间隙5s，得到黄芪甲苷纳米脂质体溶液。
(4)将步骤(3)所获得的黄芪甲苷纳米脂质体溶液采用滤膜孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤器过滤取滤液，然后置于4℃冰箱保存，测定包封率为71.2％。
实施例5
(1)将蛋黄卵磷脂和胆固醇按照4：1的质量比、蛋黄卵磷脂和黄芪甲苷按照50：1的质量比溶解于无水乙醇中，混匀后得到脂质体悬浮液。
(2)将超纯水预热至40-50℃后，将步骤(1)所获得的脂质体悬浮液通过蠕动泵导入超纯水中，然后置于50℃下水化0.5-1h，在温度为25℃，转速为85-90r/min条件下，-0.01MPa旋转蒸发5-10min，除去无水乙醇，得到黄芪甲苷脂质体溶液。
(3)将步骤(2)所获得的黄芪甲苷脂质体溶液置于冰水浴中于100W探头超声5-10min，其中探头工作10s，间隙5s，得到黄芪甲苷纳米脂质体溶液。
(4)将步骤(3)所获得的黄芪甲苷纳米脂质体溶液采用滤膜孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤器过滤取滤液，然后置于4℃冰箱保存，测定包封率为70.1％。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
结论：
本发明采用乙醇注入法制备黄芪甲苷纳米脂质体，方法简便快捷易操作，通过将黄芪甲苷制备成脂质体，可以提高黄芪甲苷的生物利用率，可以使它更好地发挥作用。脂质体的膜材主要成分与生物膜相似，具有在体内无毒、无免疫原性、安全可靠的优点，保证了黄芪甲苷纳米脂质体的安全性，且在常温环境下储藏一个月以上仍稳定。该方法简便成本低且安全无毒无污染，有良好的市场前景。

Claims (8)

1.一种黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于包括脂质体载体，黄芪甲苷活性成分和亲脂性添加剂组成，包括如下步骤：
(1)将卵磷脂与黄芪甲苷活性物质的质量之比为20：1—100：1，卵磷脂与亲脂性添加剂的质量之比为2：1—10：1的三种物质溶解于无水乙醇中，混匀后得到脂质体悬浮液；
(2)将超纯水预热至40-50℃后，将步骤(1)所获得的脂质体悬浮液通过蠕动泵导入超纯水中，然后置于50℃下水化0.5-1h，在温度为25℃，转速为85-90r/min条件下，-0.01MPa旋转蒸发5-10min，除去无水乙醇，得到黄芪甲苷脂质体溶液；
(3)将步骤(2)所获得的黄芪甲苷脂质体溶液置于冰水浴中于100W探头超声5-10min，其中探头工作10s，间隙5s，得到黄芪甲苷纳米脂质体溶液；
(4)将步骤(3)所获得的黄芪甲苷纳米脂质体溶液采用滤膜孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤器过滤取滤液，然后置于4℃冰箱保存。
2.如权利要求1所述的黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的磷脂，包含蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂或氢化蛋黄卵磷脂。
3.如权利要求1所述的黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的黄芪甲苷活性成分为黄芪甲苷的纯度在98％以上。
4.如权利要求1所述的黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于所述的亲脂性添加剂，包含胆固醇、硬脂酸或生育酚。
5.如权利要求1所述的黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于包封率采用下述方法进行测定：
取2mL制备好的黄芪甲苷纳米脂质体，置于Millipore超滤离心管(截留分子量10,000)内，3000r/min下离心30min，收集滤液，以流动相稀释到适当浓度，过0.22μm滤膜过滤后采用高效液相色谱法测定分离洗脱后游离药物的含量，计算包封率；
包封率＝[包封药物浓度/(游离药物浓度+包封药物浓度)]×100％。
6.如权利要求1所述的黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于(2)中所述的超纯水预热温度为40-50℃，所述的水化条件为50℃下水化0.5-1h。
7.如权利要求1所述的黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于(2)中所述的旋转蒸发的条件为为25℃，转速为85-90r/min条件下，-0.01MPa旋转蒸发5-10min。
8.如权利要求1所述的黄芪甲苷纳米脂质体的制备方法，其特征在于(3)中所述的超声条件为100W探头超声5-10min，其中探头工作10s，间隙5s。
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