CN104146959A - 冬凌草甲素缓释脂质体及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物制剂领域，涉及一种冬凌草甲素缓释脂质体及其制备方法。具体地，所述脂质体以PEG修饰的脂质体作为药物载体，以冬凌草甲素为活性成分，另外还包含抗氧剂、局部止痛剂、pH值调节剂、赋形剂。本发明制备的脂质体粒径在50-150nm之间，制备过程简单快捷，制备周期短，载药量高，一方面可以使药物富集于肝、脾、肺和骨髓等组织器官的，起到靶向杀灭癌细胞的作用，另一方面可以延长药物在靶向器官的作用时间，减少给药剂量，从而提高生物利用度和降低毒性。
Description
技术领域：
本发明属于药物制剂领域，涉及一种冬凌草甲素缓释脂质体及其制备方法。
背景技术：
冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米亚的干燥全草，具有清热解毒、消炎止痛、抗肿瘤之功效，用于治疗咽喉肿痛、扁桃体炎，对食管癌、肝癌、肺癌等多种癌症患者有缓解症状并延长生存时间的作用。冬凌草甲素是从冬凌草中提取出来的一种二萜类化合物，占冬凌草有效成分的90％以上，是其抗肿瘤的主要活性成分，对多种癌细胞具有很强的抑制杀灭作用。
冬凌草甲素水溶性差，目前市场上主要采用有机溶剂加表面活性物质增加冬凌草甲素的溶解度，静脉滴注易引起血管炎、疼痛等不良反应，而口服制剂仅有冬凌草甲素粗提取物片剂，药物含量少，生物利用度低。因此，研发新的给药剂型是提高冬凌草甲素利用度的有效途径。
脂质体生物学定义：当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分子层结构的封闭囊泡，称为脂质体。脂质体是一种人工膜，直径25～10000nm不等，具有类细胞结构，进入体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中蓄积，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性，而通过亲水聚乙二醇化学修饰脂质体表面可以延长脂质体在体内的滞留时间，从而进一步延长药物的作用时间，提高生物利用度。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种冬凌草甲素缓释脂质体及其制备方法，克服冬凌草甲素现有应用的缺点。具体地，是以PEG修饰的脂质体作为药物载体，以冬凌草甲素为活性成分，另外加入抗氧剂、局部止痛剂、pH值调节剂、赋形剂，制备而成。本发明制备的脂质体粒径在50-150nm之间，制备过程简单快捷，制备周期短，载药量高。通过此法制备的冬凌草甲素脂质体，通过鼻腔、肌肉或静脉注射给到人体，一方面可以是药物富集于肝、脾、肺和骨髓等组织器官的，起到靶向杀灭癌细胞的作用，另一方面可以延长药物在靶向器官的作用时间，减少给药剂量，从而提高生物利用度和降低毒性。
本发明制备冬凌草甲素缓释脂质体，以PEG修饰的脂质体由PEG-磷脂类和胆固醇组成，其比例为1:1-5:1，PEG-磷脂类选自PEG-二棕榈酰磷脂酰胆碱(PEG-DPPC)、PEG-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)、PEG-二硬脂酰磷脂酰胆碱(PEG-DSPC)其中的一种或多种的混合物。抗氧剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠。局部止痛剂选自苯甲醇、盐酸普鲁卡因、利多卡因、三氯叔丁醇其中的一种或其混合物。赋形剂选自甘露醇、山梨醇、葡萄糖、乳糖其中的一种或其混合物。pH值调节剂选自盐酸缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、枸橼酸缓冲液等，调节pH为5.0至6.5之间。
本发明制备冬凌草甲素缓释脂质体，其制备方法采用反相蒸发法：第一步，首先将主药溶于水，得内水相，pH调节剂调节pH值5.0-6.5；另将磷脂类、胆固醇溶于有机溶剂中，得油相；将油相在110-200w功率范围下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系；
第二步，将上述乳液在32-40℃下于旋转蒸发仪上以45-55r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护，当有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸30-50min，再加入抗氧剂、局部止痛剂、赋形剂和pH调节剂，调节pH值5.0-6.5，冷冻干燥，即得产品，粒径在50-150nm之间，粒径均匀。
其有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、二氧六环或四氢呋喃，优选二氯甲烷。
附图说明：
图1为各实施例的脂质体中冬凌草甲素的释放量-时间曲线图。
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
具体实施方式：
实施例1
称取10g冬凌草甲素溶于蒸馏水，得内水相；称取100gPEG-二棕榈酰磷脂酰胆碱、70g胆固醇溶于二氯甲烷中，得油相；将油相在100w功率范围下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系；将上述乳液在38℃下于旋转蒸发仪上以46r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护，当有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸35min，得含药脂质体，粒径为75-110nm，包封率为95.6％，依次加入焦亚硫酸钠0.2g、苯甲醇2g、葡萄糖10g和适量盐酸缓冲液，调节pH值为5.0，冷冻干燥，即得冬凌草甲素缓释脂质体。
通过测定所制备的脂质体进行释放度，对其缓释效果及临床用药安全性进行了考察。
体外释放度的测定 按中国药典2010年版释放度测定方法进行。取上述冬凌草甲素脂质体，加水溶解，制成30ml溶液。取6ml冬凌草甲素溶液置于事先在蒸馏水中浸泡24h的透析袋中，放入250mL的溶出杯中，以0.5％的吐温-80水溶液作为释放介质，温度控制在(37±1)℃，转速为100r/min，设计取样时间为2、4、8、12、24h，之后每天取样一次。每次取样5ml，同时补充同体积的释放介质。释放液经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液20μL进液相色谱仪，测定峰面积，代入标准曲线计算浓度，得出每阶段释药量。其色谱条件为：色谱柱:LichrosPherC18柱(4.6mmi.d×250mm,5um)；柱温40℃；检测波长238nm；流动相为甲醇-水(60/40，V/V)。结果见表1-1。
表1-1冬凌草甲素缓释脂质体重冬凌草甲素的累积释放度
体外释药规律的研究 为说明冬凌草甲素缓释脂质体中冬凌草甲素的释放规律，分别采用各种数学方程对释放曲线进行拟合，结果见表1-2。由表1-2可看出：药物体外缓释时间可达15天，释放几乎完全，Mt/M∞t的相关性良好，整个释放过程较符合Higuchi方程。
表1-2冬凌草甲素缓释脂质体体外释放的非线性拟合
实施例2
称取10g冬凌草甲素溶于蒸馏水，得内水相；称取75gPEG-二棕榈酰磷脂酰乙酰胺、25g胆固醇溶于二氯甲烷中，得油相；将油相在100w功率范围下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系；将上述乳液在38℃下于旋转蒸发仪上以46r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护，当有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸35min，得含药脂质体，粒径为70-100nm，包封率为94.7％，依次加入亚硫酸氢钠0.1g、盐酸普鲁卡因1g、乳糖10g和适量磷酸缓冲液，调节pH值为5.5，冷冻干燥，即得冬凌草甲素缓释脂质体。
通过测定所制备的脂质体进行释放度，对其缓释效果及临床用药安全性进行了考察。
体外释放度的测定 按中国药典2010年版释放度测定方法进行。取上述冬凌草甲素脂质体，加水溶解，制成30ml溶液。取6ml冬凌草甲素溶液置于事先在蒸馏水中浸泡24h的透析袋中，放入250mL的溶出杯中，以0.5％的吐温-80水溶液作为释放介质，温度控制在(37±1)℃，转速为100r/min，设计取样时间为2、4、8、12、24h，之后每天取样一次。每次取样5ml，同时补充同体积的释放介质。释放液经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液20μL进液相色谱仪，测定峰面积，代入标准曲线计算浓度，得出每阶段释药量。其色谱条件为：色谱柱:LichrosPherC18柱(4.6mmi.d×250mm,5um)；柱温40℃；检测波长238nm；流动相为甲醇-水(60/40，V/V)。结果见表2-1。
表2-1冬凌草甲素缓释脂质体重冬凌草甲素的累积释放度
体外释药规律的研究 为说明冬凌草甲素缓释脂质体中冬凌草甲素的释放规律，分别采用各种数学方程对释放曲线进行拟合，结果见表2-2。由表2-2可看出：药物体外缓释时间可达18天，释放几乎完全，Mt/M∞t的相关性良好，整个释放过程较符合Higuchi方程。
表2-2冬凌草甲素缓释脂质体体外释放的非线性拟合
实施例3
称取10g冬凌草甲素溶于蒸馏水，得内水相；称取60gPEG-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、20g胆固醇溶于二氯甲烷中，得油相；将油相在100w功率范围下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系；将上述乳液在38℃下于旋转蒸发仪上以46r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护，当有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸35min，得含药脂质体，粒径为90-110nm，包封率为94.2％，依次加入焦亚硫酸钠0.1g、利多卡因0.5g、甘露醇10g和适量醋酸缓冲液，调节pH值为6.0，冷冻干燥，即得冬凌草甲素缓释脂质体。
通过测定所制备的脂质体进行释放度，对其缓释效果及临床用药安全性进行了考察。
体外释放度的测定 按中国药典2010年版释放度测定方法进行。取上述冬凌草甲素脂质体，加水溶解，制成30ml溶液。取6ml冬凌草甲素溶液置于事先在蒸馏水中浸泡24h的透析袋中，放入250mL的溶出杯中，以0.5％的吐温-80水溶液作为释放介质，温度控制在(37±1)℃，转速为100r/min，设计取样时间为2、4、8、12、24h，之后每天取样一次。每次取样5ml，同时补充同体积的释放介质。释放液经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液20μL进液相色谱仪，测定峰面积，代入标准曲线计算浓度，得出每阶段释药量。其色谱条件为：色谱柱:LichrosPherC18柱(4.6mmi.d×250mm,5um)；柱温40℃；检测波长238nm；流动相为甲醇-水(60/40，V/V)。结果见表3-1。
表3-1冬凌草甲素缓释脂质体重冬凌草甲素的累积释放度
体外释药规律的研究 为说明冬凌草甲素缓释脂质体中冬凌草甲素的释放规律，分别采用各种数学方程对释放曲线进行拟合，结果见表3-2。由表3-2可看出：药物体外缓释时间可达12天，释放几乎完全，Mt/M∞t的相关性良好，整个释放过程较符合Higuchi方程。
表3-2冬凌草甲素缓释脂质体体外释放的非线性拟合
实施例4
称取10g冬凌草甲素溶于蒸馏水，得内水相；称取40gPEG-二硬脂酸磷脂酰胆碱、15g胆固醇溶于二氯甲烷中，得油相；将油相在100w功率范围下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系；将上述乳液在38℃下于旋转蒸发仪上以46r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护，当有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸35min，得含药脂质体，粒径为85-100nm，粒径均匀，包封率为93.8％，依次加入亚硫酸氢钠0.05g、三氯叔丁醇0.5g、山梨醇5g和适量枸橼酸缓冲液，调节pH值为6.5，冷冻干燥，即得冬凌草甲素缓释脂质体。
通过测定所制备的脂质体进行释放度，对其缓释效果及临床用药安全性进行了考察。
体外释放度的测定 按中国药典2010年版释放度测定方法进行。取上述冬凌草甲素脂质体，加水溶解，制成30ml溶液。取6ml冬凌草甲素溶液置于事先在蒸馏水中浸泡24h的透析袋中，放入250mL的溶出杯中，以0.5％的吐温-80水溶液作为释放介质，温度控制在(37±1)℃，转速为100r/min，设计取样时间为2、4、8、12、24h，之后每天取样一次。每次取样5ml，同时补充同体积的释放介质。释放液经0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液20μL进液相色谱仪，测定峰面积，代入标准曲线计算浓度，得出每阶段释药量。其色谱条件为：色谱柱:LichrosPherC18柱(4.6mmi.d×250mm,5um)；柱温40℃；检测波长238nm；流动相为甲醇-水(60/40，V/V)。结果见表4-1。
表4-1冬凌草甲素缓释脂质体重冬凌草甲素的累积释放度
体外释药规律的研究 为说明冬凌草甲素缓释脂质体中冬凌草甲素的释放规律，分别采用各种数学方程对释放曲线进行拟合，结果见表4-2。由表4-2可看出：药物体外缓释时间可达15天，释放几乎完全，Mt/M∞t的相关性良好，整个释放过程较符合Higuchi方程。
表4-2冬凌草甲素缓释脂质体体外释放的非线性拟合
Claims (8)
1.一种冬凌草甲素缓释脂质体，其特征在于以PEG修饰的脂质体作为药物载体，冬凌草甲素为活性成分，以及抗氧剂、局部止痛剂、赋形剂，pH值调节剂组成，其中活性成分占总量的0.1％-20％，PEG修饰的脂质体占总量的70％-90％，抗氧剂占总重量的0.005％-0.2％，局部止痛剂占总量的0.1％-1％，赋形剂占总量的0.1％-10％，pH调节剂调节pH值5.0-6.5。
2.根据权利要求1所述制剂，其特征在于以PEG修饰的脂质体由PEG-磷脂类和胆固醇组成，其比例为1:1-5:1，PEG-磷脂类选自PEG-二棕榈酰磷脂酰胆碱(PEG-DPPC)、PEG-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)、PEG-二硬脂酰磷脂酰胆碱(PEG-DSPC)其中的一种或多种的混合物。
3.权利要求1所述制剂，其抗氧剂选自亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸、硫代硫酸钠其中的一种或其混合物，优选亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠。
4.权利要求1所述制剂，其局部止痛剂选自苯甲醇、盐酸普鲁卡因、利多卡因、三氯叔丁醇其中的一种或其混合物。
5.权利要求1所述制剂，其赋形剂选自甘露醇、乳糖、山梨醇、葡萄糖其中的一种或其混合物。
6.权利要求1所述制剂，其pH值调节剂选自盐酸缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、枸橼酸缓冲液等，调节pH为5.0至6.5之间。
7.权利要求1所述制剂，其制备方法采用反相蒸发法：第一步，首先将多肽药物活性成分溶于水，得内水相；另将磷脂类、胆固醇溶于有机溶剂中，得油相；将油相在110-200w功率范围下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系；
第二步，将上述乳液在32-40℃下于旋转蒸发仪上以45-55r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护，当有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸30-50min，再加入抗氧剂、局部止痛剂、赋形剂和pH调节剂，调节pH值5.0-6.5；冷冻干燥，即得冬凌草甲素脂质体。
8.根据权利要求7所述制剂，其特征在于有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、二氧六环或四氢呋喃，优选二氯甲烷。
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