CN101601648A - 多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开一种多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂的制备方法。该多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳剂基本上由有效治疗量的多烯紫杉醇、磷脂、液态油、表面活性剂、胆固醇、胆固醇衍生物或/和类似胆固醇衍生物、附加剂与注射用水组成。本发明提供的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳剂载药量高、制剂稳定性好；制备方法简便易行，易于实现产业化。

Description

多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及药物磷脂复合物的注射用亚微乳制剂，确切的说是多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳制剂及其制备方法。

背景技术

多烯紫杉醇(docetaxel)是近年开发的新一代紫杉烷类抗肿瘤药物。该产品为法国安万特公司开发的一个半合成紫杉醇衍生物，属于微管解聚抑制剂，作用于微管/微管蛋白系统，通过促进微管双聚体装配成微管，且通过阻止多聚化过程而使微管稳定，诱导癌细胞发生G2期和M期阻滞和凋亡抑制肿瘤组织的生长。多烯紫杉醇对多种实体瘤具有较强的抗肿瘤活性，对乳腺癌、非小细胞肺癌等癌症均有明显疗效。

多烯紫杉醇难溶于水，即使配制成注射液，在临床应用中的毒副作用也较大，容易引起较多的并发症，如过敏反应、骨髓抑制、神经毒性、心血管毒性、脱发等等，同时药物的体内代谢迅速，需长期使用。目前对其结构改造以减少不良反应的尝试尚无大的进展。

目前多烯紫杉醇主要是以聚氧乙烯氢化蓖麻油和乙醇等配制而成注射液，注射后对人体有毒副作用，特别是在使用多烯紫杉醇注射液前，必须先服用抗过敏药物或注射抗过敏药物来帮助缓解由于多烯紫杉醇注射液的使用而产生的严重过敏等毒副作用，常常给病人带来痛苦，直接影响了该药的使用。

提高难溶性药物的溶解度和生物利用度一直是药剂学研究的一个热点。常用的方法有：潜溶剂，增溶剂，环糊精包合，制成固体分散体及其联合应用等，但普遍存在载药量低、制备工艺复杂及稳定性差等问题，而且这些附加剂的加入都有可能会影响药物的吸收和生理活性，增加制剂的毒性和刺激性等。

随着新的药物传递系统的不断发展，通过一些特殊的传递方法与策略，可以部分解决药物存在的问题，载体输送系统如：微乳，脂质体，纳米粒等的研究已成为药物新剂型研究中非常活跃的领域，并在选择吸收和靶向给药等方面取得了显著的成就。然而，以上给药系统应用于多烯紫杉醇都存在一些不足之处，主要是载药量低。

意大利学者Bombardelli等人在研究脂质体的时候偶然发现：天然黄酮类化合物对磷脂有特殊的亲和力，二者可结合形成磷脂复合物，并表现出与母体药物显著不同的生物学特性和药理活性。理化性质的改变：一般脂溶性明显增强，熔点、吸收系数、光谱特征等会明显变化。药理活性增强：磷脂复合物的活性一般比母体药物更强。

注射用亚微乳粒径在100-1000nm之间，外观不透明，呈浑浊或乳状，具有一定的靶向性，具有减毒增效的作用，并且制备工艺简单、质量可控，适合产业化等优点。

综上所述，目前还没有可用于临床的、无刺激性的、稳定的、高载药量的多烯紫杉醇制剂。采用现代药剂学手段，稳定性好，载药量高，副作用少、且能适于工业化生产的多烯紫杉醇制剂将为肿瘤的临床治疗提供一个很好的选择，产生良好的社会和经济效益。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种克服上述缺点的载药量高、制备方法简单、疗效好、副作用少的多烯紫杉醇磷脂复合物的亚微乳制剂，供临床上使用。本发明的另一个目的在于提供多烯紫杉醇磷脂复合物。本发明的又一个目的是提供一种制备本发明的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳剂的制备方法。

本发明通过将多烯紫杉醇与磷脂制备成磷脂复合物，显著增加了药物的脂溶性，然后再用液态油和其他附加剂将其进一步制备成药学上可以接受的注射给药的亚微乳制剂。

本发明先将多烯紫杉醇与磷脂制备成磷脂复合物。多烯紫杉醇与磷脂的极性基团部分发生了较强的相互作用，将其极性基团掩盖，形成一个亲脂性的表面，使复合物表现出较强的脂溶性，能更好的溶解在液态油中，只需很少的表面活性剂即可制备成亚微乳制剂，显著提高了亚微乳的载药量，降低了辅料用量。

本发明以亚微乳作为多烯紫杉醇磷脂复合物的载体。亚微乳是近年来发展较快的一种新型给药载体。本发明提供亚微乳的粒径小于200nm，具有一下优点：(1)适用于口服、静脉注射、局部给药等多种给药形式；(2)生理相容性好；(3)提高药物生物利用度，而且具有缓释和靶向作用；(4)目前亚微乳制剂以为临床上接受，适于工业生产；(5)载药量高，有临床使用意义。

本发明提供了一种多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳制剂，其基本上由治疗有效量的多烯紫杉醇、磷脂、液态油、乳化剂、附加剂和注射用水组成。其中，亚微乳的粒径范围分布在50-500nm，平均粒径为50-200nm。

具体而言，在上述技术方案中，本发明提供的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳含有以下成分：

多烯紫杉醇            0.1-5％

磷脂                  1.0-3％

液态油                5-30％

其它乳化剂            0-3％

助乳化剂              0-10％

附加剂                0-3％

注射用水              余量。

所述液态油选自天然植物油，如大豆油、花生油、红花油、橄榄油；链长在C₈-C₁₀之间的中等链长脂肪酸甘油酯(medium-chain glyceride，MCT)；油酸；亚油酸；肉豆蔻酸异丙酯；维生素E；维生素A；维生素酯类；及其任意组合。优选的是大豆油、链长在C₈-C₁₀之间的中等链长脂肪酸甘油酯或维生素E。

所述其它乳化剂包括脂溶性乳化剂和水溶性乳化剂，所述脂溶性乳化剂选自胆固醇及其衍生物；脂肪酸山梨坦类，如Span 60、Span 80；所述水溶性乳化剂选自聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类，如Poloxamer系列；聚山梨酯类，如Tween 60、Tween 80；聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪醇醚类及其任意组合。

所述磷脂，包括天然来源的磷脂与合成来源的磷脂，所述天然来源的磷脂为从植物或动物中通过物理加工方法提取出来的磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、丝氨酸磷脂等；所述合成来源的磷脂为通过半合成或合成方法制得的磷脂，如氢化磷脂、多烯磷脂酰胆碱、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其结构修饰物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。

本发明提供的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳中所述附加剂可起到增加制剂稳定性、调节渗透压、抗氧化等作用，主要包括渗透压调节剂、界面膜稳定剂、防腐剂、抗氧剂、金属离子络合剂等。渗透压调节剂选自丙三醇、丙二醇、甘露醇及其任意组合；界面膜稳定剂选自油酸、油酸钠及其任意组合；金属离子络合剂选自EDTA、乙二按四乙酸二钠盐、钙盐及其任意组合；防腐剂选自苯扎溴胺、苯扎氯胺、对羟基苯甲酸酯类、山梨酸及其任意组合；抗氧剂选自维生素C、维生素E及其任意组合。优选的是，该附加剂为丙三醇、甘露醇、油酸、维生素E及其任意组合。

本发明还提供了一种本发明的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)制备磷脂复合物：将处方量的多烯紫杉醇和磷脂溶于有机溶剂中，然后在一定温度下反应一定时间，优选温度为水浴15-50℃，反应时间为0.5-4h，形成磷脂复合物；

(2)制备油相：将注射用油、乳化剂、抗氧剂等加入磷脂复合物溶液中，搅拌混匀，旋转蒸发除去有机溶剂，并加热至50-80℃，构成油相；

(3)制备水相：将乳化剂、助乳化剂、等渗调节剂等加入注射用水中，搅拌混匀，并加热至50-80℃，构成水相；

(4)制备初乳：在恒温50-80℃并不断搅拌的条件下，将油相缓缓注入到水相中，调节pH值4-9，定容，再经匀质机匀质，制得初乳；

(5)终乳的制备：将制得的初乳进行超声处理、过高压均质机或微射流仪，将溶液反复匀化，即得。

本发明提供的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳剂具有以下优点：

1、按照本发明制备的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳，具有载药量高、稳定性好等优点，载药量高达50mg/mL。

2、本发明制备的多西紫杉醇磷脂复合物亚微乳可用生理盐水或葡萄糖注射液进行稀释或分散，用于静脉注射给药，按照本发明制备的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳粒度小(平均粒度小于200nm)，分布较窄，且药物包封率高，有助于提高安全性。

3、与多烯紫杉醇注射液相比，本发明的制剂能有效降低毒性和过敏性，显著提高了多烯紫杉醇的疗效和病人的顺应性。

4、与多烯紫杉醇注射液相比，本发明的制剂具有一定的缓释和靶向作用，采用透析法测定药物的体外释放度，结果显示本发明的制剂表现出明显的缓释特点。

附图说明

图1.DCT磷脂复合物亚微乳剂的粒度分布图。

图2.DCT磷脂复合物和DCT与磷脂物理混合物的DSC扫描图。

A----磷脂与DCT的物理混合物  B----DCT磷脂复合物

具体实施方式

下面再以实施例对本发明加以进一步的说明，同时结合实施例中附图加以说明，但本发明的保护范围不局限于此。

实施例1

多烯紫杉醇                100mg

注射用大豆卵磷脂          1.2g

无水乙醇                  5mL

注射用大豆油              5.0g

注射用水                  加至100mL

方法：

1.将多烯紫杉醇与磷脂溶于无水乙醇中，常温下搅拌2h进行复合，制备多系紫杉醇磷脂复合物。

2.油相得制备：复合完成后加入注射用大豆油搅拌混匀，减压旋转蒸干有机溶剂，作为油相，并加热至70℃保温备用。

3.水相的制备：取适量注射用水中，加热至70℃作为水相。

4.恒温70℃将水相滴入油相，高速搅拌成初乳，然后调节pH值4-9，定容至100mL，然后将初乳过高压均质机或微射流仪即得。以COULTERLS230粒径分析仪测得平径粒度为143nm，SD＝24nm，见附图1。

实施例2

多烯紫杉醇            500mg

氢化磷脂              1.5g

乙醚                  10mL

V_E                    0.1g

MCT                   10.0g

胆固醇硫酸钠          1g

吐温80                0.1g

丙三醇                2.25g

注射用水              加至100mL

其中，复合时间为1h，其它步骤同实施例1，即得本发明的多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳。

实施例3

多烯紫杉醇            1.0g

大豆磷脂                3.0g

二氯甲烷                10mL

胆固醇                  0.3g

注射用大豆油            20.0g

泊洛沙姆188             1g

丙三醇                  2.25g

注射用水                加至100mL

其它步骤同实施例1，即得本发明的多系紫杉醇磷脂复合物亚微乳。

实施例4

表1列举了几种多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳的处方及冻干针剂和注射剂的规格(以DCT计)，但所用处方组成、各辅料配比及制剂规格不限于下表所列浓度。制备方法与工艺同实施例1-3。

表1DCT磷脂复合物亚微乳处方

制剂规格(以DCT计)	复合溶剂及复合时间	磷脂	其它乳化剂及助乳化剂	液态油	冻干保护剂	附加剂
							1mg/mL	甲醇，2h	大豆磷脂(1％)	-	MCT(5％)	-	-
2mg/mL	乙醚，0.5h	蛋黄磷脂(2％)DPPG(0.8％)	吐温-80(0.1％)	大豆油(10％)	-	甘油(2.25％)
							5mg/mL	丙酮，4h	大豆磷脂(3％)	胆固醇(0.2％)	蓖麻油(15％)	蔗糖/甘露醇(6％)	-
8mg/mL	四氢呋喃，2h	氢化磷脂(2.5％)	F-68(1.5％)	MCT(10％)	蔗糖(5％)	甘油(2.25％)
							10mg/L	乙腈，1h	大豆磷脂(2.5％)PEG-DSPE(0.2％)	胆固醇硫酸钠(0.4％)	MCT(20％)	海藻糖(5％)	-
5mg/mL	环氧六烷，2h	PEG-DPPC(0.1％)大豆磷脂(2.0％)	胆固醇硫酸钠/胆固醇磺酸钾(0.5％)	大豆油(15％)	-	VE(0.1％)/甘油(2.25％)
							10mg/L	异丙醇，2h	DMPG(0.8％)蛋黄磷脂(2％)	胆固醇(1.0％)	亚油酸(10％)	乳糖/海藻糖(6％)	-
50mg/mL	氯仿，3h	DPPE/氢化磷脂(3.0％)	吐温-80(1.0％)	肉豆蔻酸异丙酯	-	油酸(0.4％)

(30％)

实施例5

采用实施例3的制剂进行刺激性试验、溶血性试验和过敏性试验，结果显示，多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳对家兔耳静脉血管未见明显刺激作用，未引起红细胞的溶血反应，且未引起豚鼠过敏反应，符合静脉注射的标准。

采用实施例3的制剂进行药动学研究，结果表明，与普通注射液相比，多烯紫杉醇磷脂复合物亚微乳体内平均滞留时间延长2倍，AUC(0-∞)提高约3倍。

Claims (9)

1、多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂，其特征在于：由有效治疗量的多烯紫杉醇、磷脂、液态油、乳化剂、助乳化剂、附加剂与注射用水组成，重量/体积百分比组成如下：

多烯紫杉醇                        0.1-1％

磷脂                              1.0-3％

液态油                            5-30％

其它乳化剂                        0-3％

助乳化剂                          0-10％

附加剂                            0-3％

注射用水                          余量。

2、根据权利要求1所述的多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂，其特征在于：乳化剂包括脂溶性乳化剂和水溶性乳化剂，所述脂溶性乳化剂选自胆固醇及其衍生物；脂肪酸山梨坦类；所述水溶性乳化剂选自聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物类；聚山梨酯类；聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪醇醚类及其任意组合。

3、根据权利要求1所述的多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂，其特征在于：所述磷脂，包括天然来源的磷脂与合成来源的磷脂，所述天然来源的磷脂为从植物或动物中通过物理加工方法提取出来的磷脂；所述合成来源的磷脂为通过半合成或合成方法制得的磷脂。

4、根据权利要求3所述的多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂，其特征在于：所述的天然来源的磷脂优选大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、丝氨酸磷脂；所述合成来源的磷脂优选氢化磷脂、多烯磷脂酰胆碱、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其结构修饰物如PEG化衍生物PEG2000-DSPE。

5、根据权利要求1所述的多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂，其特征在于：液态油选自天然植物油、链长在C₈-C₁₀之间的中等链长脂肪酸甘油酯、油酸、亚油酸、肉豆蔻酸异丙酯、维生素E、维生素A、维生素酯类及其任意组合。

6、根据权利要求1所述的多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂，其特征在于：附加剂选自渗透压调节剂、界面膜稳定剂、金属离子络合剂、防腐剂、抗氧剂、pH调节剂。

7、根据权利要求5所述的多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂，其特征在于：等渗调节剂包括葡萄糖、甘油、氯化钠、山梨醇和木糖醇中的一种或几种的任意组合；pH调节剂选自盐酸、磷酸或其碱金属盐、枸橼酸或其碱金属盐、草酸或其碱金属盐、冰醋酸或其碱金属盐、甘氨酸或其盐、氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或几种的任意组合；抗氧剂选自维生素E、乙二胺四乙酸及其衍生物、甲磺酸去铁胺、盐酸半胱氨酸、维生素C、亚硫酸盐类中的一种或几种的任意组合。

8、一种如权利要求1所述的多烯紫杉醇磷脂复合物静脉注射用亚微乳剂的制备方法，其特征在于：制备方法包括以下步骤：

(1)制备磷脂复合物：将处方量的多烯紫杉醇和磷脂溶于有机溶剂中，然后在一定温度下反应一定时间，优选温度为水浴15-50℃，反应时间为0.5-4h，形成磷脂复合物；

(2)制备油相：将注射用油、乳化剂、抗氧剂等加入磷脂复合物溶液中，搅拌混匀，旋转蒸发除去有机溶剂，并加热至50-80℃，构成油相；

(3)制备水相：将乳化剂、助乳化剂、等渗调节剂等加入注射用水中，搅拌混匀，并加热至50-80℃，构成水相；

(4)制备初乳：在恒温50-80℃并不断搅拌的条件下，将油相缓缓注入到水相中，调节pH值4-9，定容，再经匀质机匀质，制得初乳；

(5)终乳的制备：将制得的初乳进行超声处理、过高压均质机或微射流仪，将溶液反复匀化，即得。

9、根据权利要求8所述的方法，其特征在于：有机溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氢呋喃、环氧六烷、乙醚、异丙醇或其任意组合。

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