CN113484527A - 一种基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，该方法包括：使用标准被测成分浓度的定标样本与凝血试剂反应，根据标准定标样本提供的参考时间得出对应的凝固曲线及凝固检测比例点，再使用不同被测成分浓度的定标样本进行多次实验，根据标准凝固曲线及凝固检测比例点，检测得到不同被测成分浓度定标样本对应的凝固时间，根据被测成分浓度的对数和该成分与凝血试剂反应凝固时间的对数呈线性关系，计算得到定标曲线。本发明基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法具有灵活准确、适用性强的优点。

Description

一种基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法
技术领域
本发明涉及凝血检测技术领域，特别涉及一种基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法。
背景技术
光学凝固法是目前常用的凝血检测方法，光学凝固法运用了光的散射原理，在试杯两侧呈90度设置光源和接收器，探测试杯内液体的吸光度变化。试杯内反应物凝固时散射角发生变化，因此吸光度与反应物凝固呈度具有相关性。光信号被接收并转换成电信号，再进行放大处理和计算。
光学凝固法根据被测成分和试剂反应的凝固呈度确定凝固时间，该反应过程在凝血分析仪中呈现S形凝固反应曲线，具有起点、凝固点、终点三个特征点。光学凝固法检测的凝血项目通常有凝血酶原时间PT、凝血酶时间TT、活化部分凝血活酶时间APTT、纤维蛋白原浓度FIB。PT、TT、APTT使用凝固时间作为指标，FIB使用浓度作为指标，为临床诊断提供参考依据。
其中，纤维蛋白原(FIB)的浓度与凝固时间具有相关性。但普通、单一的计算方法，其相关性较差，难以做出准确有效的定标。因此，所设计的方法必须具有更强的适应性，并对于不同被测成分浓度样本保持定标的有效性和准确性。
发明内容
本发明要解决的技术问题的是提供一种灵活准确、适用性强的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法。
为了解决上述问题，本发明提供了一种基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其包括：
使用标准被测成分浓度的定标样本与凝血试剂反应，根据标准定标样本提供的参考时间得出对应的凝固曲线及凝固检测比例点；再使用不同被测成分浓度的定标样本进行多次实验，根据标准凝固曲线及凝固检测比例点，检测得到不同被测成分浓度的定标样本对应的凝固时间；根据被测成分浓度的对数和该成分与凝血试剂反应的凝固时间的对数呈线性关系，计算得到定标曲线。
作为本发明的进一步改进，采用多点定标，对不同定标点使用不同被测成分浓度的定标样本，并对同一定标点进行多次实验取平均值，作为该定标点的凝固时间。
作为本发明的进一步改进，凝固检测比例点的计算方法如下：
根据标准定标样本的实验得出的反应曲线具有反应起点(ti，di)和终点(te，de)，根据定标样本提供的参考时间tr，可在反应曲线上确定对应参考时间点的信号值dr，得出凝固检测比例点＝(dr-di)/(de-di)。
作为本发明的进一步改进，不同被测成分浓度定标样本的凝固时间的计算方法如下：
使用不同测成分浓度定标样与凝血试剂反应，得出不同被测成分浓度定标样本反应曲线的反应起点(ti，di)和终点(te，de)，根据凝固检测比例点计算信号值d0＝凝固检测比例点*(de-di)+di，根据d0，可在反应曲线上确定对应的凝固时间t0。
作为本发明的进一步改进，被测成分浓度与凝血试剂的反应起点判定方法如下：
实验开始后，连续采集多个吸光度数据并计算平均值davg，当此后采集的吸光度数据di≥davg+Δd时，判定反应开始；其中，Δd为设定值。
作为本发明的进一步改进，在试杯中加入反应物，待液体静止后，连续采集15个被测成分吸光度数据并计算平均值davg。
作为本发明的进一步改进，Δd＝0.32V。
作为本发明的进一步改进，当满足以下两个条件中至少一个时，判定被测成分浓度与凝血试剂的反应终了，得出反应终点；
一、连续采集三个被测成分吸光度数据d1、d2、d3，计算(d3-d2)和(d2-d1)同时小于稳定范围值时；其中，所述稳定范围值为设定值；
二、连续采集三个被测成分吸光度数据d1、d2、d3，设N＝采集数据的次数-1，连续两个数据之间的斜率为K1和K2，则：K1＝(d2-d1)/N，K2＝(d3-d2)/N，计算K2/K1，当连续4次采集数据d1、d2、d3均满足K2/K1≤1时。
作为本发明的进一步改进，被测成分浓度和凝固时间具有以下关系：
Lg(被测成分浓度g/L)＝K*Lg(凝固时间s)+b。
作为本发明的进一步改进，所述定标样本为定值血浆或校准品，所述被测成分为纤维蛋白原(FIB)。
本发明的有益效果：
本发明基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法具有灵活准确、适用性强的优点。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。
附图说明
图1是本发明优选实施例中浓度-凝固时间直线拟合结果图；
图2是本发明优选实施例中浓度-凝固时间二次多项式拟合结果图；
图3是本发明优选实施例中浓度-凝固时间双对数拟合结果图；
图4是本发明优选实施例中光学凝固法反应曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
本发明优选实施例公开了一种基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，该方法包括：
使用标准被测成分浓度的定标样本与凝血试剂反应，根据标准定标样本提供的参考时间得出对应的凝固曲线及凝固检测比例点；再使用不同被测成分浓度的定标样本进行多次实验，根据标准凝固曲线及凝固检测比例点，检测得到不同被测成分浓度的定标样本对应的凝固时间；根据被测成分浓度的对数和该成分与凝血试剂反应的凝固时间的对数呈线性关系，计算得到定标曲线。
在本实施例中，被测成分浓度与凝血试剂的反应起点判定方法如下：
实验开始后，连续采集多个被测成分吸光度数据并计算平均值davg，当此后采集的吸光度数据di≥davg+Δd时，判定反应开始；其中，Δd为设定值。取点(ti，di)为反应起点。
可选的，在试杯中加入反应物，待液体静止后，连续采集15个被测成分吸光度数据并计算平均值davg。在其中一实施例中，Δd＝0.32V，Δd与采集数据的稳定性和分辨率有关，可以根据需要进行设置。
在本实施例中，当满足以下两个条件中至少一个时，判定被测成分浓度与凝血试剂的反应终了，得出反应终点；
一、连续采集三个被测成分吸光度数据d1、d2、d3，计算(d3-d2)和(d2-d1)同时小于稳定范围值时；其中，所述稳定范围值为设定值；
二、连续采集三个被测成分吸光度数据d1、d2、d3，设N＝采集数据的次数-1，连续两个数据之间的斜率为K1和K2，则：K1＝(d2-d1)/N，K2＝(d3-d2)/N，计算K2/K1，当连续4次采集数据d1、d2、d3均满足K2/K1≤1时。取判定反应终了后采集的第一个数据(te，de)为反应终点。
由以上条件可得反应起点(ti，di)和终点(te，de)，根据定标所用定值血浆或校准品提供的参考时间tr，可在反应曲线上确定对应参考时间点的信号值dr，则：
凝固检测比例点＝(dr-di)/(de-di)
使用不同浓度的定标样本作为样本，按照与以上相同的步骤和条件进行实验，得到每次反应的起点(ti，di)和终点(te，de)，并计算凝固检测比例点的信号值：
d0＝凝固检测比例点*(de-di)+di
根据d0，可在反应曲线上确定对应的凝固时间t0。
可选的，采用多点定标，对不同定标点使用不同浓度的定标样本，并对同一定标点进行多次实验取平均值，作为该定标点的凝固时间。
在其中一实施例中，所述被测成分为纤维蛋白原，血浆中纤维蛋白原浓度(FIB)的对数与凝固时间的对数呈线性关系，使用不同浓度的定值血浆进行多次实验，得出对应的凝固时间，其中浓度与凝固时间具有以下关系：
Lg(FIB浓度g/L)＝K*Lg(FIB凝固时间s)+b
即浓度的对数和凝固时间的对数具有线性关系，通过实验取得不同浓度样本的凝固时间，可求出K和b。
定标时，为确保定标的准确性和有效性，使用多点定标，不同定标点使用不同FIB浓度的定值血浆作为样本，每点做多次实验取平均值，确定FIB浓度与凝固时间之间的计算关系。
按照以上方法得出的线性关系即所需定标，在进行病人血浆实验时，使用该定标，根据被测血浆的凝固时间，求出对应的FIB浓度。
可选的，所述定标样本为定值血浆或校准品。
本发明中判定反应起点和终点的算法具有准确、适用性强的特点。
判定反应起点时，在试杯中加入反应物并等待液体静止后，连续采集15个数据取平均数，有效避免了最后一步加入反应物时液体吸光度产生波动对起始点判定的影响。
判定反应终点时，从“稳定范围”和反应曲线的斜率(反应速率)两个方面进行判断，有效地避免了以下两种情况而导致终点判断不准确：
一、反应速率持续降低，但连续几个采集数据有波动，大于设定的“稳定范围”；
二、反应速率变化慢而稳定，但连续几个采集数据差值已小于设定的“稳定范围”；
而“稳定范围”是用户设定值，可根据不同厂家试剂的反应曲线特征而修改。
运用纤维蛋白原浓度的对数与凝固时间的对数具有线性关系进行定标，具有以下优点：
方便计算，将Y＝lg(FIB浓度g/l)、X＝lg(FIB凝固时间s)代入，可得Y＝kX+b的线性关系，将计算转变为直线拟合；
将计算转变为直线拟合后，相比其他定标算法(如：浓度-凝固时间的直线拟合、曲线拟合),具有更好的线性关系，线性拟合R值更趋近1。用以下实验数据为例：
FIB浓度g/l 9 5.4 4.5 2.7 2.25
Lg(浓度g/l) 0.954 0.732 0.653 0.431 0.352
实测凝固时间(s) 6.5 8.5 9.6 12.5 14.0
Lg(凝固时间s) 0.813 0.929 0.984 1.097 1.146
其中，样本为美德太平洋定值校准品，FIB浓度2.7g/l，参考时间12.4s；
检验步骤：生理盐水135ul与15ul样本混匀注入比色杯，加入75ul试剂后开始采集数据；
设备：江苏鸿恩H1204，设备编号120420200002；
图1为采用直线拟合结果图；图2为二次多项式拟合结果图；图3为双对数拟合结果图。可以看出，本发明中的双对数拟合向较于直线拟合和二次多项式拟合具有更好的线性关系，线性拟合R值更趋近1。
以上实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (10)

1.一种基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，包括：
使用标准被测成分浓度的定标样本与凝血试剂反应，根据标准定标样本提供的参考时间得出对应的凝固曲线及凝固检测比例点；再使用不同被测成分浓度的定标样本进行多次实验，根据标准凝固曲线及凝固检测比例点，检测得到不同被测成分浓度的定标样本对应的凝固时间；根据被测成分浓度的对数和该成分与凝血试剂反应的凝固时间的对数呈线性关系，计算得到定标曲线。
2.如权利要求1所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，采用多点定标，对不同定标点使用不同被测成分浓度的定标样本，并对同一定标点进行多次实验取平均值，作为该定标点的凝固时间。
3.如权利要求1所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，凝固检测比例点的计算方法如下：
根据标准定标样本的实验得出的反应曲线具有反应起点(ti，di)和终点(te，de)，根据定标样本提供的参考时间tr，可在反应曲线上确定对应参考时间点的信号值dr，得出：凝固检测比例点＝(dr-di)/(de-di)。
4.如权利要求1所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，不同被测成分浓度定标样本的凝固时间的计算方法如下：
使用不同被测成分浓度定标样与凝血试剂反应，得出不同被测成分浓度定标样本反应曲线的反应起点(ti，di)和终点(te，de)，根据凝固检测比例点计算信号值d0＝凝固检测比例点*(de-di)+di，根据d0，可在凝固反应曲线上确定对应的凝固时间t0。
5.如权利要求4所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，被测成分与凝血试剂的反应起点判定方法如下：
实验开始后，连续采集多个被测成分吸光度数据并计算平均值davg，当此后采集的吸光度数据di≥davg+Δd时，判定反应开始；其中，Δd为设定值。
6.如权利要求5所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，在试杯中加入反应物，待液体静止后，连续采集15个吸光度数据并计算平均值davg。
7.如权利要求5所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，Δd＝0.32V。
8.如权利要求4所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，当满足以下两个条件中至少一个时，判定被测成分与凝血试剂的反应终了，得出反应终点；
一、连续采集三个被测成分吸光度数据d1、d2、d3，计算(d3-d2)和(d2-d1)同时小于稳定范围值时；其中，所述稳定范围值为设定值；
二、连续采集三个被测成分吸光度数据d1、d2、d3，设N＝采集数据的次数-1，连续两个数据之间的斜率为K1和K2，则：K1＝(d2-d1)/N，K2＝(d3-d2)/N，计算K2/K1，当连续4次采集数据d1、d2、d3均满足K2/K1≤1时。
9.如权利要求1所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，被测成分浓度和凝固时间具有以下关系：
Lg(被测成分浓度g/L)＝K*Lg(凝固时间s)+b。
10.如权利要求1所述的基于凝血分析仪用试剂的双对数定标方法，其特征在于，所述定标样本为定值血浆或校准品，所述被测成分为纤维蛋白原(FIB)。
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