CN113484244A - 一种基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，该方法包括：根据吸光度差值与定标样本浓度呈正比，使用不同被测成分浓度的定标样本进行多次实验，计算不同被测成分浓度的血浆样本的吸光度差值，针对不同被测成分浓度的定标样本分别采用两点法和速率法计算吸光度差值，并分别得到两条定标曲线。本发明基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法针对不同浓度被测成分样本，结合实际临床运用情况和实验经验积累的基础上，使用两条不同的定标曲线，并采用两种定标方法，使得该定标方法更加灵活准确、适用性强。
Description
技术领域
本发明涉及凝血检测技术领域，特别涉及一种基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法。
背景技术
免疫比浊法是目前常用的凝血检测方法，专门用于检测有乳胶凝集作用造成液体浊度变化的反应。
检验原理是：样本和鼠抗人单克隆抗体乳胶颗粒在试杯内反应形成抗原抗体复合物颗粒产生浊度变化。在试杯两侧呈90度设置光源和接收器，能探测到试杯内液体的吸光度变化。而吸光度与液体浊度具有相关性，此光信号的变化被接收并转换成电信号，再进行放大处理和计算。
对于目前市场上存在的凝血分析仪和凝血试剂，免疫比浊法的实验原理和方法已经成熟并广泛使用。但是，对于不同的凝血分析仪或凝血试剂厂商，数据的采集方法、计算方法和定标方法都是特有的。同样的方法和实验条件，对于不同品牌的凝血分析仪或凝血试剂就可能不适用。并且，目前市场上存在的凝血分析仪和凝血试剂，在定标中仅采用单一的方法(包括单一的参数或计算方法)，并不能准确表达不同被测样本的成分或浓度的反应曲线特征。因此，所设计的方法必须具有更强的适应性，并对于不同被测成分浓度样本保持定标的有效性和准确性。
发明内容
本发明要解决的技术问题的是提供一种灵活准确、适用性强的基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法。
为了解决上述问题，本发明提供了一种基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，其包括：
根据吸光度差值与定标样本浓度呈正比，使用不同被测成分浓度的定标样本进行多次实验，测量不同被测成分浓度的血浆样本的吸光度差值，针对不同被测成分浓度的定标样本分别采用两点法和速率法计算吸光度差值，并分别得到两条定标曲线。
作为本发明的进一步改进，采用多点定标，对每个定标点使用同被测成分浓度定标样本进行多次实验，筛选有效数据取平均值，作为该定标点的吸光度差值。
作为本发明的进一步改进，对被测成分浓度范围在临床常见病人血浆被测成分浓度范围内的定标样本采用两点法计算吸光度差值；对被测成分浓度范围高于临床常见病人血浆浓度范围的定标样本采用速率法计算吸光度差值。
作为本发明的进一步改进，被测成分浓度范围设定的依据为：被测成分的正常范围和反应曲线特征。
作为本发明的进一步改进，在利用定标曲线对病人血浆样本进行检测时，对预估被测成分浓度范围在临床常见病人血浆被测成分浓度范围内的病人血浆样本，优先采用两点法计算吸光度差值，若检测出被测成分浓度范围高于临床常见病人血浆被测成分浓度范围上限，采用速率法进行复检。
作为本发明的进一步改进，在利用定标曲线对病人血浆样本进行检测时，对预估被测成分浓度范围高于临床常见病人血浆被测成分浓度范围内的病人血浆样本，优先采用速率法计算吸光度差值，若检测出浓度范围低于临床常见病人血浆浓度范围上限，采用两点法进行复检。
作为本发明的进一步改进，所述定标样本为定值血浆或校准品。
作为本发明的进一步改进，所述被测成分为D-Dimer、FDP、PLG、PS中的一种。
本发明的有益效果：
本发明基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法针对不同浓度被测成分样本，结合实际临床运用情况和实验经验积累的基础上，使用两条不同的定标曲线，并采用两种定标方法，使得该定标方法更加灵活准确、适用性强。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。
附图说明
图1(a)是本发明优选实施例中两点法测得的吸光度差值图；图1(b)是本发明优选实施例中速率法测得的吸光度差值图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
本发明优选实施例公开了一种基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，该方法包括：
根据吸光度差值与定标样本浓度呈正比，使用不同浓度的定标样本进行多次实验，计算不同浓度的血浆样本的吸光度差值，针对不同浓度的定标样本分别采用两点法和速率法计算吸光度差值，并分别得到两条定标曲线；其中，所述浓度为被测成分浓度。
如图1所示，1(a)和1(b)分别为两点法和速率法测得的吸光度差值图，其中，两点法如下：
样本和试剂反应结束后，液体浊度趋于稳定。因此，在“ΔD0-时间(s)”反应曲线图中可确定反应开始前的初始点信号D03，和反应稳定后的结束点信号D04，则ΔD0＝D04-D03；
速率法如下：
样本和试剂反应前端吸光度速率较快，但在反应开始后的某一时间段内，反应速率趋于稳定，在“ΔD0-时间(s)”反应曲线图中选取速率较稳定的时间段t1～t2，采集信号值D01、D02，则在选取时间段内的平均反应速率为dD0＝(D02-D01)/(t2-t1)；
无论采用哪一种方法，吸光度差值ΔD0(dD0)与样本被测成分浓度呈正比，使用不同浓度的定值血浆进行多次实验，得出不同浓度样本的吸光度差值，被测成分浓度与吸光度差值具有以下关系：
ΔD0＝K*(浓度)+b或dD0＝K*(浓度)+b
在本实施例中，为确保准确性和有效性，采用多点定标，对每个定标点使用相同被测成分浓度定标样本进行多次实验，筛选有效数据取平均值，作为该定标点的吸光度差值，再根据多个定标点对应的吸光度差值，计算出K和b。在进行病人血浆实验时，使用定标计算得出的K、b值，根据被测血浆的吸光度差值，求出对应的被测成分浓度。
在本实施例中，对被测成分浓度在临床常见病人血浆被测成分浓度范围内的定标样本采用两点法测量吸光度差值；对被测成分浓度高于临床常见病人血浆浓度范围的定标样本采用速率法测量吸光度差值。
需要注意的是，通过对不同被测成分浓度样本的定标实验和病人血浆检测发现，在同样实验条件下，定标K值可能会随被测成分浓度的变化而变化。例如D-Dimer定标时，K值会随样本被测成分浓度的增大而逐渐减小。正常人D-Dimer浓度为0～500ug/l，通常医院检测时，也很少超过2000ug/l。因此需要根据应用需求，确定定标中被测成分浓度范围的临界值。
结合以上特点，以上海太阳试剂D-Dimer为例，我们针对的高浓度和低浓度样本，制定了两种定标方法，采用两条定标曲线。
采用两点法定标时，计算定标样本与试剂反应后75-300s时间段内的吸光度差值。可选的，具体的计算时间段可根据需要进行调整。
采用速率法定标时，计算定标样本与试剂反应后5-50s时间段内的吸光度差值。可选的，具体的计算时间段可根据需要进行调整。
在利用定标曲线对病人血浆样本进行检测时，对预估浓度范围在临床常见病人血浆浓度范围内的病人血浆样本，优先采用两点法计算吸光度差值，若检测出浓度范围高于临床常见病人血浆浓度范围上限，采用速率法进行复检。
可选的，所述定标样本为定值血浆或校准品。所述被测成分为D-Dimer、FDP、PLG、PS中的一种。
在以上D-Dimer定标中使用的参数，如：浓度、时间，是根据所用试剂和定值血浆样本浓度确定的，建立在大量实验和临床经验积累的基础上选取。使用不同的试剂或更改实验条件时参数将改变。
确定吸光度差值的方法，两点法和速率法的优缺点如下：
两点法能够准确完整反应整个反应过程。但对于缓慢的反应或高浓度的样本，需要很长时间才能出结果；
当被测成分浓度很高时，可能反应还未结束，采集信号就超出上限；
速率法由于仅采用反应速率稳定的一个时间段，无需等待反应完全结束，检测速度快，且可以避免信号超出上限的问题，但速率法需要观察反应曲线的特征积累经验，选取能准确代表其反应速率的时间段，定标完成之后也需要反复验证确认时间段选取的有效性和准确性。
以D-Dimer为例，针对D-Dimer定标K值会随浓度的变化而变化的特点，针对高、低两种浓度使用不同计算方法、制定不同的定标曲线的办法，结合了两种方法的优点，规避了缺点，且更加真实地表达了反应曲线的特征，确保了定标的有效性和准确性。
以上实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
Claims (7)
1.一种基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，其特征在于，包括：
根据吸光度差值与定标样本浓度呈正比，使用不同被测成分浓度的定标样本进行多次实验，测量不同被测成分浓度的血浆样本的吸光度差值，针对不同被测成分浓度的定标样本分别采用两点法和速率法计算吸光度差值，并分别得到两条定标曲线。
2.如权利要求1所述的基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，其特征在于，采用多点定标，对每个定标点使用同被测成分浓度定标样本进行多次实验，筛选有效数据取平均值，作为该定标点的吸光度差值。
3.如权利要求1所述的基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，其特征在于，对被测成分浓度范围在临床常见病人血浆被测成分浓度范围内的定标样本采用两点法计算吸光度差值；对被测成分浓度范围高于临床常见病人血浆浓度范围的定标样本采用速率法计算吸光度差值。
4.如权利要求3所述的基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，其特征在于，被测成分浓度范围设定的依据为：被测成分的正常范围和反应曲线特征。
5.如权利要求3所述的基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，其特征在于，在利用定标曲线对病人血浆样本进行检测时，对预估被测成分浓度范围在临床常见病人血浆被测成分浓度范围内的病人血浆样本，优先采用两点法计算吸光度差值，若检测出被测成分浓度范围高于临床常见病人血浆被测成分浓度范围上限，采用速率法进行复检。
6.如权利要求1所述的基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，其特征在于，所述定标样本为定值血浆或校准品。
7.如权利要求1所述的基于免疫比浊法的凝血分析仪试剂定标方法，其特征在于，所述被测成分为D-Dimer、FDP、PLG、PS中的一种。
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