CN113476611B - 一种具有修复皮肤作用的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种具有修复皮肤作用的组合物，它是以绿原酸和抗生素为活性成分，加入药学上可接受的辅料制备而成的制剂。本发明组合物能明显促进成纤维细胞增殖，抑制细菌，特别是金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。经实验证明，绿原酸与氨苄西林的组合物在创伤的修复治疗中可以发挥协同作用，促进创伤的愈合，预防感染，在临床上有很好的应用价值。

Description

一种具有修复皮肤作用的组合物
技术领域
本发明具体涉及一种具有修复皮肤作用的组合物。
背景技术
各种损伤因素所导致的急慢性创伤是临床最常见的疾患之一。创伤治疗的目的是清创后采用有效手段促进创面尽快愈合，恢复受损组织的功能，防止细菌感染。研究表明，创面修复是皮肤受损组织通过十分复杂但又有序的自我修复机制使整个创面恢复原貌的过程。目前创伤修复的机制仍未完全明了，在现有的治疗水平下，皮肤创伤仍旧无法达到完美愈合，各种药物的用药时间、剂量及安全性等问题仍需动物实验及临床验证。因此，关于皮肤创伤修复的机制及治疗，仍有很大的研究前景。
成纤维细胞作为主要的修复细胞参与了创伤愈合的全过程，在其中起到了十分重要作用，它不仅可以分泌细胞外基质，还可以合成和分泌多种细胞因子来调节创伤修复。成纤维细胞在创伤及组织修复中的数量及功能状念是决定和影响创面修复进程和预后的关键因素，而其数量由其增殖和凋亡的平衡状态决定。研究表明.慢性创面修复时，其局部的主要变化就是创面组织生成障碍和局部商蛋自酶活性状，奈所致的股原沉积不足。因此，成纤维细胞的增殖发生障碍及胶原合成和降解失衡，是直接影响创面愈合的重要原因。病原菌是引起创面感染的主要原因，包括大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌等革兰氏阴性菌，以及金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌。当创伤表面的细菌超过一定数量时，伤口修复便会延迟。选用合适的抑菌药物如抗生素在临床上对创伤组织中的细菌感染性具有良好的治疗功效，但过量使用会产生耐药性。
绿原酸又名咖啡鞣酸(Chlorogenic acid，简称CHA)，是广泛存在于金银花、杜仲科植物杜仲的叶、葵花籽、茵陈和蓝盆花等植物中的一种有机酸，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、降糖、降脂、降血压和免疫调节等多种药理作用。陈婷，绿原酸抗人皮肤成纤维细胞衰老的研究[D],汕头：汕头大学，2014 报道了绿原酸具有促进成纤维细胞增殖的作用，从而用于抗皮肤衰老。
目前，还未见绿原酸能用于修复皮肤的报道，更未有绿原酸与抗生素联合用于创伤修复的相关报道。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种修复皮肤的联合用药物，它含有用于同时或者分别给药的绿原酸和抗生素，以及药学上可接受的载体。
进一步地，所述绿原酸与抗生素的质量比为1：0.1～0.5，优选1：0.3～0.5，更优选1：0.4。
进一步地，所述抗生素为青霉素、氨苄西林、羧苄西林、四环素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、杆菌苔、多黏菌素、头孢菌素、左氧氟沙星任意一种或多种，优选氨苄西林。
本发明还提供了一种具有皮肤修复作用的组合物，它是以绿原酸和抗生素为活性成分，加入药学上可接受的辅料制备而成的外用制剂。
进一步地，所述绿原酸与抗生素的质量比为1：0.1～0.5，优选1：0.3～0.5，更优选1：0.4。
更进一步地，所述抗生素为青霉素、氨苄西林、羧苄西林、四环素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、杆菌苔、多黏菌素、头孢菌素、左氧氟沙星任意一种或多种，优选氨苄西林。
更进一步地，所述外用制剂为颗粒剂、散剂、丸剂或溶液剂，优选散剂。
本发明还提供了一种前述组合物的制备方法，它包括如下步骤：
按配比称取绿原酸和抗生素，混匀，加入药学上常用的辅料或辅助性成分，即得。
本发明还提供了绿原酸和抗生素在制备修复皮肤和/或口腔创面的联合用药物中的用途。
进一步地，所述药物是抑制金黄色葡萄球菌和/或铜绿假单胞菌的药物。
进一步地，所述药物是促进成纤维细胞增殖的药物。
更进一步地，所述绿原酸与抗生素的质量比为1：0.1～0.5，优选1：0.3～0.5，更优选1：0.4；所述抗生素为青霉素、氨苄西林、羧苄西林、四环素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、杆菌苔、多黏菌素、头孢菌素、左氧氟沙星任意一种或多种，优选氨苄西林。
本发明组合物能明显促进成纤维细胞增殖，抑制细菌，特别是金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。经实验证明，绿原酸与氨苄西林的组合物在创伤的修复治疗中可以发挥协同作用，促进创伤的愈合，预防感染，在临床上有很好的应用价值。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为各试验组对NIH-3T3细胞增殖的能力。
图2为各试验组对大鼠皮肤伤口的愈合情况。
图3为大鼠皮肤创伤后第3、7、14天各组HE染色图(200×) (A阴性对照组B绿原酸原料药组C1:0.4组合物组D1:0.5组合物组 E阳性药物组)。
图4为各试验组对大鼠拔牙伤口的愈合情况。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得，其中由本发明组合物制成的粉剂的制备工艺成熟，参照现有技术常规方法即可制成。
实施例1本发明药物组合物外用粉末制剂处方
绿原酸1000g、氨苄西林300g。
制备方法：按处方无菌称取绿原酸和氨苄西林，混合均匀，过150目筛，无菌分装成散剂。
实施例2本发明药物组合物外用粉末制剂处方
绿原酸1000g、氨苄西林400g。
制备方法：按处方无菌称取绿原酸和氨苄西林，混合均匀，过150目筛，无菌分装成散剂。
实施例3本发明药物组合物外用粉末制剂处方
绿原酸1000g、氨苄西林500g。
制备方法：按处方无菌称取绿原酸和氨苄西林，混合均匀，过150目筛，无菌分装成散剂。
实施例4本发明药物组合物外用粉末制剂处方
绿原酸1000g、氨苄西林300g、粘附剂250g、吸收促进剂250g。
制备方法：按处方无菌称取绿原酸、氨苄西林、粘附剂和吸收促进剂，混合均匀后，过150目筛，无菌分装成散剂。
实施例5本发明药物组合物外用粉末制剂处方
绿原酸1000g、氨苄西林400g、粘附剂250g、吸收促进剂250g。
制备方法：按处方无菌称取绿原酸、氨苄西林、粘附剂和吸收促进剂，混合均匀后，过150目筛，无菌分装成散剂。
实施例6本发明药物组合物外用粉末制剂处方
绿原酸1000g、氨苄西林500g、粘附剂250g、吸收促进剂250g。
制备方法：按处方无菌称取绿原酸、氨苄西林、粘附剂和吸收促进剂，混合均匀后，过150目筛，无菌分装成散剂。
实施例4～6中的粘附剂选自卡波姆、壳聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠中任意一种或几种；吸收促进剂选自卵磷脂、β- 环糊精、胆酸钠中任意一种或几种。
以下通过具体试验例证明本发明的有益效果：
实验例1本发明组合物体外抑菌实验考察
1.材料
1.1受试药物
受试药物1：绿原酸原料药，由四川九章生物科技有限公司生产；
受试药物2：氨苄西林原料药，购自南京百慕达生物科技有限公司；
受试药物3：绿原酸与氨苄西林组合物(1:0.1)；
受试药物4：绿原酸与氨苄西林组合物(1:0.3)；
受试药物5：绿原酸与氨苄西林组合物(1:0.4)；
受试药物6：绿原酸与氨苄西林组合物(1:0.5)。
1.2细菌菌株
金黄色葡萄球菌ATCC25923，由南方医科大学珠江医院检验科微生物研究所提供；
铜绿假单胞菌ATCC27853，由南方医科大学珠江医院检验科微生物研究所提供。
1.3培养基
鲜血琼脂培养基：购自郑州博赛生物技术有限公司；
LB肉汤培养基：购自北京奥博星生物技术责任有限公司。
2.试验方法
2.1金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌液的制备
分别取50μl冻存的金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌于5ml的LB培养基中进行复苏，在37℃恒温摇床里面培养12h，分别标记J1和T1。再分别从J1和T1中取出50μl复苏的细菌加入到5ml的新鲜的LB培养基中进行扩大培养，标记为J2和T2，在37℃恒温摇床里面培养4h。取出用比浊法测定菌液浓度，使用时将菌液用生理盐水将浓度稀释到3×105CFU/ml，作为抑菌实验浓度。
2.2受试药物分组
根据受试药物的种类分为6组，分别为受试药物1～6组；各组药物用灭菌双蒸去离子水溶解，使终浓度均为1mg/ml。
2.3体外抑菌
2.3.1微量肉汤稀释法
(1)最小抑菌浓度(MIC)的测定
采用试管液体二倍稀释法，测定各组对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)，并将其过程重复3次。
取灭菌带塞的试管15支，向第1支试管中加入液体培养基0.9ml，其余各个试管中均加入0.5ml，再向第一支试管中加入药液0.1m1，充分混匀，取0.5ml加入第2支试管中，依次类推，至第13支试管时吸出0.5m1，滴到营养琼脂平板上，供无菌检查；然后，向1-14支试管中加入稀释好的菌液 0.5m1，盖上棉塞。
第14支试管为培养物对照(接种相同数量的菌液，不加抗菌药)，第15 支试管为培养基对照(不接种菌液，不加抗菌药)。将上述15支试管及营养琼脂平板放入37℃恒温箱培养18h～24h后观察结果。
当对照培养物发生浑浊时，以未发生浑浊变化的试管对应的药物最低浓度判为该药的MIC。
(2)最小杀菌浓度(MBC)的测定
在最小抑菌浓度测定试验中，将完全清晰无细菌生长试管中的液体分别接种于不含抗菌药物的营养琼脂平板，37℃培养24h，菌落数不超过5个最低药物浓度为MBC，相同过程重复3次。
2.3.2杯碟法
取直径为90mm，高16～17mm的平底双碟，经高压灭菌后，在无菌操作下分别注入已熔化的2％琼脂培养基20ml，均匀摊布碟底，放置水平台，待凝固后再分别加入已培养的菌种4～5ml，然后在每一平底双碟中置入内径为 6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，外径7.8±0.1mm牛津杯3只，将各供试药液分别滴入各组牛津杯内，以杯满(不能溢出杯外)为准，置37℃隔水式电热恒温箱中培养24小时，用游标卡尺测量抑菌环直径。
2.3.2抑菌强度判定标准
按《抗生素药品检验》和《中药制用经验录》的判定作用标准。即抑菌环直径在8.00mm或以下为不敏感(一)；抑菌环直径在8.10～13.00mm为低度敏感(+)；抑菌环直径在13.10～19.00mm为中度敏感(++)；抑菌环直径在 19.10～25.00mm为高度敏感(+++)。
3.试验结果3.1微量肉汤稀释法
各试验组对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的MIC和MBC见表1所示，绿原酸原料药组与1:0.1的组合物组对两种菌株均低度敏感；氨苄西林原料药组与1:0.3～0.5的组合物组与绿原酸原料药组相比p＜0.05抑菌杀菌效果显著，有统计学意义；其中，绿原酸：氨苄西林为1:0.4时抑菌杀菌效果最佳，与氨苄西林原料组比较p＜0.05。
表1各试验组微量肉汤法稀释结果(单位μg/ml，n＝3)
Figure BDA0003220604970000061
注：*与绿原酸原料组比较p＜0.05，#与氨苄西林原料组比较p＜0.05。
因此，绿原酸：氨苄西林为1:0.3～0.5的药物组合物对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌有较强抑菌杀菌效果，其中以绿原酸：氨苄西林＝1:0.4效果最佳。
3.2杯碟法
各试验组对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌实验结果见表2 所示，绿原酸原料药组与1:0.1的组合物组对两种菌株均低度敏感；氨苄西林原料药组与1:0.3～0.5的组合物组抑菌效果显著，与绿原酸原料药组相比p＜0.05，有统计学意义；其中，绿原酸：氨苄西林为1:0.4 时抑菌效果最佳，与氨苄西林原料组比较p＜0.05。
表2各试验组杯蝶法结果
Figure BDA0003220604970000071
注：*与绿原酸原料组比较p＜0.05，#与氨苄西林原料组比较p＜0.05
因此，1:0.3～0.5的绿原酸、氨苄西林药物组合物对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌有较强的抑制作用，其中以绿原酸：氨苄西林＝1:0.4效果最佳。
4.结论
绿原酸单体与绿原酸：氨苄西林为1:0.1的组合物组有较弱的抑制金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的作用，氨苄西林单体与绿原酸：氨苄西林为 1:0.3～0.5的组合物组抑菌效果显著；绿原酸：氨苄西林为1:0.4时抑菌效果最佳。
实验例2本发明组合物体外对成纤维细胞活性的影响
1.材料
1.1受试药物
受试药物1：绿原酸原料药，由四川九章生物科技有限公司生产；
受试药物2：氨苄西林原料药，购自南京百慕达生物科技有限公司；
受试药物3：绿原酸与氨苄西林组合物(1:0.1)；
受试药物4：绿原酸与氨苄西林组合物(1:0.3)；
受试药物5：绿原酸与氨苄西林组合物(1:0.4)；
受试药物6：绿原酸与氨苄西林组合物(1:0.5)；
阳性药物：EGF创伤敷料，购自广西福莱明生物制药有限公司。
1.2细胞株
人正常成纤维细胞NIH-3T3，由南方医科大学珠江医院研究所提供。
2.试验方法
2.1NIH-3T3细胞的培养
冻存的NIH-3T3细胞首先要经过复苏，复苏方法是从液氮罐中取出冷冻管后迅速放入38℃水浴中，并不时摇动，在1min内使其完全融化，然后在无菌下取出细胞。在1000rpm速度下离心5～10min，弃去上层液，加入适量细胞营养液后接种于培养瓶中，接种浓度1×106/mL，置CO2培养箱 37℃，5％CO2静置培养，次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。培养瓶底部均匀长满单层NIH-3T3细胞时即可传代。NIH-3T3细胞在培养瓶底部长成均匀单层后，更换细胞维持液继续培养，在一周内细胞状态良好。细胞传代培养至3代后开始种板。
2.2细胞增殖的检测
将细胞消化、离心，制成细胞悬液，用培养液稀释成3×103个/ml密度，将NIH-3T3以每孔100μl接种在96孔培养板内，在5％CO2，37℃恒温培养箱中培养24h后，加入含不同浓度药物的培养液。每一种药物10个复孔，继续培养24h，48h，72h后采用MTT比色法观察细胞活性。
实验分为空白对照组(只加入无血清DMEM)、各受试药物组、阳性药物组(EGF创伤敷料)，各受试药物组均用无血清DMEM稀释成浓度为 100μg/ml，阳性药物组用无血清DMEM稀释成含EGF 25U/ml的溶液。
在每个时间段，将板孔内加入20μlMTT，在5％CO2 37℃恒温培养箱中继续培养4h后，在镜下看是否己形成丝状或圆形结晶，加入100μl DMSO，轻轻振荡10min后，待紫色结晶全部溶解后，用酶标仪在570nm波长下，测MTT分色吸光值(OD值反应细胞情况)。增殖率按照下面公式计算：增殖率＝(实验孔OD值-对照孔OD值)/对照孔OD值×100％。
3试验结果
各试验组对NIH-3T3细胞增殖的能力见表3和图1，氨苄西林原料药组对NIH-3T3细胞无增殖作用；绿原酸原料药组和组合物1:0.1对NIH-3T3细胞增殖作用不明显；组合物1:0.3～0.5和阳性对照组对NIH-3T3细胞增殖显著，与空白对照组比较p＜0.05，有统计学意义；绿原酸：氨苄西林为1:0.4 时对NIH-3T3细胞增殖作用效果最佳。
表3各试验组对NIH-3T3细胞增殖的能力
Figure BDA0003220604970000081
Figure BDA0003220604970000091
注：*与空白对照组比较p＜0.05
因此，1:0.3～0.5的绿原酸、氨苄西林药物组合物对NIH-3T3细胞有增殖作用，其中以绿原酸：氨苄西林＝1:0.4效果最佳。
4.结论
氨苄西林单体对NIH-3T3细胞无增殖作用，绿原酸单体与绿原酸：氨苄西林为1:0.1的组合物组对NIH-3T3细胞有较弱的增殖作用；绿原酸：氨苄西林为1:0.3～0.5对NIH-3T3细胞增殖效果显著；绿原酸：氨苄西林为1:0.4 时效果最佳。
实施例3本发明组合物对大鼠皮肤创伤修复的治疗效果
1.材料
1.1受试药物
受试药物1：绿原酸原料药，由四川九章生物科技有限公司生产；
受试药物2：氨苄西林原料药，购自南京百慕达生物科技有限公司；
受试药物3：皮肤散剂，配方比为：绿原酸：氨苄西林：羟丙基纤维素：卵磷脂＝1：0.1：0.25：0.25；
受试药物4：皮肤散剂，配方比为：绿原酸：氨苄西林：羟丙基纤维素：卵磷脂＝1：0.3：0.25：0.25；
受试药物5：皮肤散剂，配方比为：绿原酸：氨苄西林：羟丙基纤维素：卵磷脂＝1：0.4：0.25：0.25；
受试药物6：皮肤散剂，配方比为：绿原酸：氨苄西林：羟丙基纤维素：卵磷脂＝1：0.5：0.25：0.25；
阳性药物：EGF创伤敷料，购自广西福莱明生物制药有限公司。
皮肤散剂按处方称取绿原酸、氨苄西林、羟丙基纤维素、卵磷脂，混合均匀后，分装成散剂。
1.2实验动物
SD大鼠48只，体重180～220g，雌雄各半，由四川省人民医院实验动物研究所提供。
2试验方法
2.1试验分组
将48只大鼠随机分为8组，每组6只，分别为阴性对照组、受试药物组 1～6、阳性药物组。
2.2实验动物肿瘤模型的建立
将所有SD大鼠适应性喂养1周，实验前1d脱毛，称重；用3.6％水合氯醛腹腔注射麻醉(剂量：1ml/kg)，固定大鼠于手术台上，常规消毒；在距脊柱0.5cm处，用刀将1.5cm×1.5cm范围内的皮肤切除，但不伤及脊柱旁肌肉上的脂肪及筋膜，简单包扎后待后续处理。
2.3给药方法
在大鼠创伤部位分别均匀敷以各试验组药物，每天敷一次，每次用量 100mg，敷后用纱布包裹，分笼进行常规饲养，空白组不作处理。给药14天，观察并记录各组止血时间。
2.4创面愈合率的计算
分别在3、7、14d用半透明硫酸纸覆盖于创口表面，沿创口外缘划线，用正交坐标纸测量创口面积，计算愈合率(愈合率＝愈合面积/创面初始面积× 100％)。
2.5HE染色
本试验采用的愈合标准为：以肉芽组织填满创腔并完全被上皮覆盖，创面平整，创面痂皮脱落不见肉芽面，表面苍白不出血视为愈合。
各组分别在治疗后第3、7、14天时间点上抽取5只大鼠，取距创缘约 0.5cm的新鲜全层皮肤标本，放入中性甲醛固定液中固定12h后酒精脱水，透明，石蜡包埋制成5μm厚度的连续切片后常规HE染色，观察。
3试验结果
3.1止血和创面愈合效果
各试验组对大鼠皮肤伤口的愈合情况见表4和图2，氨苄西林原料药对大鼠创面止血和愈合效果不明显；绿原酸原料药和1:0.1组合物组对大鼠创面有一定的止血和愈合效果；1:0.3～0.5组合物和阳性药物组对大鼠创面止血和愈合效果显著，与阴性对照组相比p＜0.05，有统计学意义，其中，1:0.4 的组合物与阳性药物组相比p＜0.05，效果最佳。
表4各试验组对大鼠皮肤伤口的愈合情况(X±SD，n＝8)
Figure BDA0003220604970000111
注：*与空白对照组比较p＜0.05，#与阳性药物组比较p＜0.05
3.2HE染色观察
各试验组的HE染色切片见图3，治疗后第3天，阴性对照组、氨苄西林原料药组新生血管、汗腺细胞和导管较少见，绿原酸原料药组和1:0.1组合物组未见明显的新生血管，可见少量毛囊、汗腺细胞和导管形成，1:0.3～0.5 组合物和阳性药物组可见新生毛细血管，较多汗腺细胞和毛囊增生，表皮较厚；治疗后第7天，阴性对照组、氨苄西林原料药组毛囊和导管增多，绿原酸原料药组和1:0.1组合物可见较多毛囊、汗腺细胞和导管，新生血管形成，1:0.3～0.5组合物和阳性药物组可见大量密集汗腺细胞，导管内径增大，新生血管形成和上皮增厚明显；治疗后第14天，阴性对照组、氨苄西林原料药组导管和汗腺细胞增生明显，新生血管形成，绿原酸原料药组和1:0.1组合物较多汗腺细胞和导管增生，1:0.3～0.5组合物和阳性药物组肉芽组织形成明显，毛囊、汗腺细胞和导管大量增生，排列整齐，表皮增生完整，其中以1:0.4 的组合物效果显著。
4.结论
氨苄西林单体对大鼠创面止血和愈合效果不明显，绿原酸单体与绿原酸：氨苄西林为1:0.1的组合物组对大鼠有一定的创面止血和愈合作用；绿原酸：氨苄西林为1:0.3～0.5对大鼠创面止血和愈合效果显著；绿原酸：氨苄西林为1:0.4时效果最佳。
实施例4本发明组合物对拔牙创面愈合的效果
1.材料
1.1受试药物
受试药物1：绿原酸原料药，自行生产；
受试药物2：氨苄西林原料药，购自南京百慕达生物科技有限公司；
受试药物3：皮肤散剂，配方比为：绿原酸：氨苄西林：羟丙基纤维素：卵磷脂＝1：0.1：0.25：0.25；
受试药物4：皮肤散剂，配方比为：绿原酸：氨苄西林：羟丙基纤维素：卵磷脂＝1：0.3：0.25：0.25；
受试药物5：皮肤散剂，配方比为：绿原酸：氨苄西林：羟丙基纤维素：卵磷脂＝1：0.4：0.25：0.25；
受试药物6：皮肤散剂，配方比为：绿原酸：氨苄西林：羟丙基纤维素：卵磷脂＝1：0.5：0.25：0.25；
阳性药物：EGF创伤敷料，购自广西福莱明生物制药有限公司。
皮肤散剂按处方称取绿原酸、氨苄西林、羟丙基纤维素、卵磷脂，混合均匀后，分装成散剂。
1.2实验动物
7周龄健康Wistar大鼠42只，雌雄各半，体重220～230g，由天津医科大学动物实验中心提供。
2试验方法
2.1试验分组
将42只大鼠随机分为7组，每组6只，分别为受试药物组1～6、阳性药物组。阴性对照组为每只大鼠的异侧拔牙创。
2.2实验动物肿瘤模型的建立
以15g/L戊巴比妥液按25～30mg/kg行腹腔内麻醉后，固定大鼠头部，张口消毒，再用特制的牙挺分别挺松每只大鼠左右侧上颌第一磨牙后，用小号止血钳取出，形成拔牙创自身对照动物模型。
2.3拔牙创处理
每只大鼠右侧上颌磨牙拔牙创为实验组，在大鼠创伤部位分别均匀敷以各试验组药物，每天敷一次，每次用量30mg，连续给药15天，分笼进行常规饲养，左侧同拔牙创为阴性对照组，不做任何处理。记录各组止血时间。
2.4创口面积的测定
各组分别于拔牙后3、5、7、10、13、15d，用游标卡尺仔细测量动物的创口面积，并肉眼观察两组软组织的愈合情况。
3试验结果
3.1止血和创面愈合效果
动物拔牙后，左侧阴性对照组和氨苄西林组拔牙创口内血液约在15分钟形成血凝块将创口封闭；绿原酸原料药组和1:0.1组合物组的拔牙创凝血时间约有12分钟；1:0.3～0.5组合物组和阳性药物组拔牙创凝血时间明显缩短，其中以1:0.4效果最佳，仅需5分钟。
各试验组对大鼠拔牙的创面愈合情况见表5和图4，拔牙后3d，各组创口均缩小，但1:0.3～0.5组合物和阳性药物组缩小相对明显；拔牙后5、7、 10d，实验组较对照组动物创口明显缩小(P<0.05)；拔牙后8d，1:0.4组合物组创口基本被新生上皮组织完全覆盖，其他组动物创口被新生上皮组织部分覆盖；拔牙后10d，1:0.4组合物组拔牙创口表面完全恢复正常；拔牙后 12d，1:0.3组合物组创口愈合，拔牙后13d；1:0.5组合物组和对照组创口愈合；拔牙后15d，绿原酸原料药组和1:0.1组合物组创口愈合，空白对照组动物仍残留创面。
表5各试验组对大鼠拔牙的创面愈合情况(X±SD，n＝8)
Figure BDA0003220604970000131
Figure BDA0003220604970000141
注：阴性对照组以42只大鼠计算。
*与空白对照组比较p＜0.05，#与阳性药物组比较p＜0.05。
4.结论
氨苄西林单体对大鼠拔牙创面止血和愈合效果不明显，绿原酸单体与绿原酸：氨苄西林为1:0.1的组合物组对大鼠拔牙有一定的创面止血和愈合作用；绿原酸：氨苄西林为1:0.3～0.5对大鼠拔牙创面止血和愈合效果显著；绿原酸：氨苄西林为1:0.4时效果最佳。
综上，绿原酸与抗生素的组合物在创伤的修复治疗中可以发挥协同作用，促进创伤的愈合，预防感染，在临床上有很好的应用价值。

Claims (3)

1.绿原酸和抗生素在制备修复皮肤和/或口腔创面的联合用药物中的用途；所述绿原酸与抗生素的质量比为1：0.4；所述抗生素为氨苄西林。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是抑制金黄色葡萄球菌和/或铜绿假单胞菌的药物。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是促进成纤维细胞增殖的药物。
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