CN116925997B - 左氧氟沙星在制备促进细胞增殖中的药物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及左氧氟沙星在制备促进细胞增殖中的药物的用途，包括喹诺酮类药物作为EGFR激活剂促进细胞增殖的方法，具体步骤如下：S1、使用Open‑Babe l、AutoDock、PyMOL三种软件分析EGFR与喹诺酮类药物之间能否结合以及结合力的强弱，实现一种安全有效的组织器官损伤修复策略，且能够有效预防机体损伤修复过程中出现的炎症反应，这为机体损伤的快速修复提供给了一种新方法，为喹诺酮类药物提供了一种新用途并揭示了其作用靶标，创伤、皮肤损伤、体内血管即器官损伤的快速修复是目前临床治疗过程中的难题，本发明发现了喹诺酮类药物可作为一种安全有效的药物促进细胞增殖，有助于机体各种损伤的恢复。
Description
技术领域
本发明涉及细胞增殖技术领域，具体为左氧氟沙星在制备促进细胞增殖中的药物的用途。
背景技术
各类严重创伤(如烧伤)、严重血管损伤、皮肤紫外线损伤及伴随坏疽的糖尿病患者都存在伤口难以愈合及继发感染等问题，目前，在体内及体外研究中多采用各种手段向创面递送生长因子以介导组织修复作用，如利用可注射水凝胶达到缓控释放细胞因子修复创伤、利用微针装载细胞因子及抗菌药对局部创伤进行治疗、利用纳米壳聚糖与凝胶薄膜将EGF持续递送至创面实现皮肤修复及黑色素再生等，利用生长因子促进细胞增殖的最大缺点在于直接递送生长因子的策略成本高、不易控制及生长因子易降解等，因此开发能够促进组织修复的药物迫在眉睫。
利用生长因子促进细胞增殖介导组织修复的最大缺点在于直接递送生长因子的策略成本高、不易控制及生长因子易降解，不利于直接作用于细胞以诱导其增生修复，此外，生长因子及其它促增殖的药物不具有抗感染作用。
本发明的目的在于通过一种安全有效且经济稳定的方法来促进细胞增殖从而介导组织修复，即本发明发现喹诺酮类药物具有促进细胞增殖的作用，且其作用靶标主要是表皮生长因子受体(EGFR)，其能够激活EGFR以驱动下游MAPK信号通路来促进上皮细胞、角质细胞、内皮细胞等增殖。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了左氧氟沙星在制备促进细胞增殖中的药物的用途，具备促进上皮细胞增殖能够有效加快创伤愈合、促进角质细胞增生能修复受损的皮肤、促进内皮细胞增殖能够有效修复血管损伤等优点，解决了直接递送生长因子的策略成本高、不易控制及生长因子易降解，不利于直接作用于细胞以诱导其增生修复的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：左氧氟沙星在制备促进细胞增殖中的药物的用途，包括喹诺酮类药物作为EGFR激活剂促进细胞增殖的方法，具体步骤如下：
S1、使用Open-Babel、AutoDock、PyMOL三种软件分析EGFR与喹诺酮类药物之间能否结合以及结合力的强弱；
S2、在适当条件下体外培养特定类型细胞或组织；
S3、采用特定浓度的喹诺酮类药物处理细胞或组织24-48小时，或在特定的组织器官损伤部位给予特定浓度的喹诺酮类药物；
S4、利用western-blots，流式细胞术检测细胞或组织的增殖情况，评估细胞内的炎症反应。
进一步，所述喹诺酮类药物可为第一代喹诺酮类药物萘啶酸、第二代喹诺酮类药物吡哌酸、第三代及第四代氟喹诺酮类药物、尚处研究阶段的新型喹诺酮类药物等。
进一步，所述特定类型细胞，可为角质细胞、内皮细胞、上皮细胞，也可以是心肌细胞、干细胞等。
进一步，所述特定组织器官，可为受损的皮肤伤口，也可以受损的血管内皮、也可以是气道上皮等。
进一步，所述特定浓度区间为10-100μg/ml。
与现有技术相比，本申请的技术方案具备以下有益效果：
该喹诺酮类药物作为EGFR激活剂促进细胞增殖的用途，实现一种安全有效的组织器官损伤修复策略，且能够有效预防机体损伤修复过程中出现的炎症反应，这为机体损伤的快速修复提供给了一种新方法，为喹诺酮类药物提供了一种新用途并揭示了其作用靶标，创伤、皮肤损伤、体内血管即器官损伤的快速修复是目前临床治疗过程中的难题，本发明发现了喹诺酮类药物可作为一种安全有效的药物促进细胞增殖，有助于机体各种损伤的恢复，除此之外，喹诺酮类药物还能够有效防治机体损伤修复过程中可能出现的细菌感染并减轻炎症反应。
附图说明
图1为本发明促进细胞增殖的方法示意图；
图2为本发明喹诺酮类药物能够促进细胞克隆的形成，能够逆转紫外光导致的细胞损伤示意图；
图3为本发明喹诺酮类药物在10-50μg/ml时能够促进细胞增殖示意图；
图4为本发明喹诺酮类药物能够减少细胞内的活性氧含量，能够逆转紫外光导致的胞内活性氧增加示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-4，本实施例中的左氧氟沙星在制备促进细胞增殖中的药物的用途，包括喹诺酮类药物作为EGFR激活剂促进细胞增殖的方法，具体步骤如下：
S1、使用Open-Babel、AutoDock、PyMOL三种软件分析EGFR与喹诺酮类药物之间能否结合以及结合力的强弱；
S2、在适当条件下体外培养特定类型细胞或组织；
S3、采用特定浓度的喹诺酮类药物处理细胞或组织24-48小时，或在特定的组织器官损伤部位给予特定浓度的喹诺酮类药物；
S4、利用western-blots，流式细胞术检测细胞或组织的增殖情况，评估细胞内的炎症反应。
其中，喹诺酮类药物可为第一代喹诺酮类药物萘啶酸、第二代喹诺酮类药物吡哌酸、第三代及第四代氟喹诺酮类药物、尚处研究阶段的新型喹诺酮类药物等。
其中，特定类型细胞，可为角质细胞、内皮细胞、上皮细胞，也可以是心肌细胞、干细胞等。
其中，特定组织器官，可为受损的皮肤伤口，也可以受损的血管内皮、也可以是气道上皮等。
其中，特定浓度区间为10-100μg/ml。
本实施例中的，可实现一种安全有效的组织器官损伤修复策略，且能够有效预防机体损伤修复过程中出现的炎症反应，这为机体损伤的快速修复提供给了一种新方法，为喹诺酮类药物提供了一种新用途并揭示了其作用靶标，创伤、皮肤损伤、体内血管即器官损伤的快速修复是目前临床治疗过程中的难题，本发明发现了喹诺酮类药物可作为一种安全有效的药物促进细胞增殖，有助于机体各种损伤的恢复，除此之外，喹诺酮类药物还能够有效防治机体损伤修复过程中可能出现的细菌感染并减轻炎症反应。
需要说明的是，利用生长因子促进细胞增殖介导组织修复的最大缺点在于直接递送生长因子的策略成本高、不易控制及生长因子易降解，不利于直接作用于细胞以诱导其增生修复，此外，生长因子及其它促增殖的药物不具有抗感染作用，本发明的目的在于通过一种安全有效且经济稳定的方法来促进细胞增殖从而介导组织修复，即本发明发现喹诺酮类药物具有促进细胞增殖的作用，且其作用靶标主要是表皮生长因子受体(EGFR)，其能够激活EGFR以驱动下游MAPK信号通路来促进上皮细胞、角质细胞、内皮细胞等增殖。
典型案例：
案例一：
A.在直径6cm培养皿中培养角质细胞，待其生长至对数期备用。
B.消化细胞，1200rpm离心5分钟，弃上清，用1ml培养基重悬细胞，将适量细胞种于96孔板，共铺20个孔。
C.将细胞放于37℃，CO2浓度为5％的细胞培养箱中孵育。
D.待96孔板中细胞密度大约为80％时，将细胞分为5组，每组4个孔，分别加入不同浓度的左氧氟沙星(0、5、10、20、50ug/ml)，之后继续放入培养箱中孵育24小时。
E.弃去培养基，用PBS清洗2-3遍，加入CCK8溶液，37℃孵育约20分钟后用酶标仪检测细胞活力。
案例二：
A.在直径6cm培养皿中培养气道上皮细胞，待其生长至对数期备用。
B.消化细胞，1200rpm离心5分钟，弃上清，用1ml培养基重悬细胞，将适量细胞种于24孔板，共铺4个孔。
C.将细胞放于37℃，CO2浓度为5％的细胞培养箱中孵育。
D.待24孔板中细胞密度大约为80％时，将细胞分为4组：对照组(即采用培养基继续孵育)、给药组(在培养基中加入左氧氟沙星使其浓度达到50ug/ml)、给光组(给予200mw紫外光照射6min)、给药给光组(给予50ug/ml的左氧氟沙星处理16小时后使采用200mw紫外光照射6min)，进行相关处理后放入细胞培养箱继续培养。
E.给药24小时后弃去培养基，用PBS清洗2-3遍，消化细胞，离心后用培养基重悬，将4组细胞分别铺入6孔板，每孔约700个细胞，继续放入培养箱中孵育约14天，根据细胞生长情况，每2-3换液1次，14天后弃去培养基，PBS清洗2-3次，加入结晶紫染色30分钟，回收结晶紫并用PBS清洗1-2次，肉眼观察细胞增殖情况。
案例三：
A.在直径6cm培养皿中培养血管内皮细胞，待其生长至对数期备用。
B.消化细胞，1200rpm离心5分钟，弃上清，用1ml培养基重悬细胞，将适量细胞种于24孔板。
C.将细胞放于37℃，CO2浓度为5％的细胞培养箱中孵育。
D.待24孔板中细胞密度大约为80％时，将细胞分为4组：对照组(即采用培养基继续孵育)、给药组(在培养基中加入左氧氟沙星使其浓度达到50ug/ml)、给光组(给予200mw紫外光照射6min)、给药给光组(给予50ug/ml的左氧氟沙星处理16小时后使采用200mw紫外光照射6min)，进行相关处理后放入细胞培养箱继续培养。
E.给药24小时后弃去培养基，用PBS清洗2遍，每孔加入500ul10umol/L的DCFE-DA，37℃孵育20分钟。
F.去除DCFH-DA，用无血清培养基洗涤细胞3次，消化细胞，将细胞收集与对应EP管中。
G.1200rpm，离心5分钟，弃上清，加入PBS重悬。
H.1200rpm，离心5分钟，弃上清，加入PBS重悬，流式细胞仪检测活性氧。
案例四：
A.构建大鼠创面急性损伤模型。
B.利用水凝胶荷载依诺沙星，孵育伤口5天，每隔1天更换一次。纱布包扎伤口。
C.观察伤口的愈合情况，并利用组织学技术显微镜下观察伤口的炎症反应及细胞增殖情况。
综上所述，喹诺酮类药物可作为一种安全有效的药物促进细胞增殖，有助于机体各种损伤的恢复，除此之外，喹诺酮类药物还能够有效防治机体损伤修复过程中可能出现的细菌感染并减轻炎症反应。
上述实施例的有益效果为：可实现一种安全有效的组织器官损伤修复策略，且能够有效预防机体损伤修复过程中出现的炎症反应，这为机体损伤的快速修复提供给了一种新方法，为喹诺酮类药物提供了一种新用途并揭示了其作用靶标，创伤、皮肤损伤、体内血管即器官损伤的快速修复是目前临床治疗过程中的难题，本发明发现了喹诺酮类药物可作为一种安全有效的药物促进细胞增殖，有助于机体各种损伤的恢复，除此之外，喹诺酮类药物还能够有效防治机体损伤修复过程中可能出现的细菌感染并减轻炎症反应。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型。
Claims (1)
1.左氧氟沙星在体外促进细胞增殖的用途，其特征在于：所述细胞为角质细胞或内皮细胞，左氧氟沙星的浓度区间为10-100μg/ml。
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