CN113461744A - 一种磺达肝癸钠中间体的纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药化工领域，具体涉及一种磺达肝癸钠中间体的纯化方法。发明人采用紫外检测，中高压正相色谱制备纯化式Ι中间体，通过改进流动相，筛选正相填料，有效有效拆分α、β‑异头物，提高式Ι中间体的收率和纯度，并降低溶剂消耗，可实现公斤级中间体的高效生产。
Description
技术领域
本发明属于医药化工领域，具体涉及一种磺达肝癸钠中间体的纯化方法。
背景技术
式Ι磺达肝癸钠中间体
血管被包含血细胞和血纤维蛋白的凝块部分或者完全堵塞，形成血管血栓，已成为继急性冠脉综合征与脑卒中之后的第三大心血管疾病。动脉血栓主要是由于血小板活化并导致心脏病发作、心绞痛或者中风。而静脉凝血因子级联反应造成的血栓会引起炎症和肺栓塞。肝素类药物是一类强有效的抗凝血剂，能够阻止凝血因子的作用，从而达到阻止血栓的形成。
完整肝素(UFH)是这一类药物中最早使用的抗凝血剂，是一个非常复杂的混合物。在临床使用中发现有较大的副作用。低分子肝素(LMWH)与UFH相比，单位活性更高，因此相同使用量可以更少，产生的副作用也更小。低分子量肝素(LMWH)的研制使得抗血栓形成治疗的效果得到大幅度的提高。
磺达肝癸钠是人工合成的肝素类药物，主要用于预防静脉血栓栓塞。磺达肝癸钠是由化学合成获得的结构确定的单一化合物，具有确定的分子量，是低分子量肝素的活性部位肝素抗凝特征戊糖片段的类似物，能可逆的与抗凝血酶(AT)结合，使AT抑制Xa的活性增大300倍，从而有效的抑制了凝血级联反应。磺达肝癸钠的结构复杂，合成路线长，合成难度大，生产成本高。而造成其成本高的一个重要的原因就是中间体的制备纯化收率偏低。式Ι所示为α、β-异头物为磺达肝癸钠合成过程的重要中间体，其高效制备纯化将为进一步合成提供重要的高质量原料，但是，现有技术纯化过程中α、β-异头物一起在峰值时收集，收集峰较宽，夹杂过多的杂质，造成纯度不高。
现有技术未给出高效制备纯化磺达肝癸钠中间体的方法，如何降低生产成本和为磺达肝癸钠合成提供高质量的中间体原料，是非常必要和急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种磺达肝癸钠重要中间体的制备纯化方法，该中间体为α、β-异头物混合物。现有技术普遍采用常压无定形硅胶柱层析，辅以TLC检测，进行中间体制备纯化，收率低，纯度低，溶剂消耗量大，时间周期长。发明人实验研究发现，磺达肝癸钠中间体具有紫外多波段吸收，为开发高效制备纯化方法提供了重要条件。发明人采用紫外检测，中高压正相色谱制备纯化式Ι磺达肝癸钠中间体，通过改进流动相，筛选正相填料，实现中间体α、β-异头物的分离，避免杂质夹杂；再将分别收集的α-异头物和β-异头物混合即得磺达肝癸钠重要中间体，有效提高式Ι中间体的收率和纯度，并降低溶剂消耗，可实现公斤级中间体的高效生产。
本发明所提供的式Ι中间体的制备方法包括如下步骤：
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：两种有机溶剂按一定比例混合；用混合溶剂溶解磺达肝癸钠中间体粗品，得溶解液；
(2)高压正相柱层析：设置检测波长，将溶解液液体进样高压正相层析柱，运行洗脱程序，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
(3)合格接收液干燥：分别收集的磺达肝癸钠中间体α、β-异头物接收液，干燥除去溶剂即得；
所述磺达肝癸钠中间体结构如下
步骤(1)中所述两种有机溶剂为：其中一种为异丙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷的一种；另一种有机溶剂为石油醚、正己烷、庚烷中的一种。
优选地，步骤(1)中有机溶剂为正己烷：异丙醇＝3.4～5.6:1，石油醚：乙酸乙酯＝2.8～4.3:1，庚烷：二氯甲烷＝1.2～2.0:1，以上均为体积之比。
步骤(2)中设置波长范围是210-230nm或265-290nm；优选地，波长设置为275-280nm；更优选地，波长设置为277nm。
所述步骤(2)中，正相色谱所用球形填料为裸硅胶、二醇基、氨基型、酰胺型或两性离子型硅胶；优选地，正相填料为裸硅胶、二醇基硅胶，填料粒径为10～100μm，孔径为
更优选地，填料粒径为10～30μm，孔径为
所述步骤(2)中色谱流动相包含流动相A和流动相B。所述流动相A和流动相B分别为有机溶剂和相同的调节剂组成。流动相A中的有机溶剂选自正己烷、石油醚、庚烷中的一种；流动相B中的有机溶剂选自异丙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷中的一种。
所述调节剂为酸或碱中的一种，所述的酸为甲酸、磷酸、盐酸、乙酸、高氯酸中的一种或两种混合物，优选甲酸；酸调节剂在相应有机溶剂的添加比例为体积比0.00～0.02％。
所述碱为三乙胺、2，6-二甲基吡啶中的一种；碱调节剂在相应有机溶剂的添加比例为体积比0.00～0.05％。
步骤(2)中所述的洗脱程序，洗脱时间60min，其中，流动相A具体的体积占比：初始时刻为60～90％，40min达到10％，40～50min维持10％，51min达到60～90％，51～60min维持60～90％。
优选地，洗脱程序如下：
最优选地，流动相使用石油醚：乙酸乙酯体系，洗脱梯度为：
所述步骤(3)中干燥过程中，可旋蒸浓缩，浓缩温度为30～40℃；也可以冻干等常规方法干燥除去溶剂。
在进行反相高效制备液相分离前，可通过液质联用、对照品定位或其它本技术领域常用的方法确定高效制备液相色谱中α、β-异头物分别的出峰时间和峰形。如现有技术中，为应对不同色谱条件，目标色谱峰的出峰时间和峰形不同，在初次制备时可对制备色谱的色谱峰进行逐一接收分离组分，通过高效液相色谱分析检测，得到目标产物的出峰时间和峰形。
本发明未指明温度的条件均为室温条件下完成。
本发明的技术优势在于：
(1)使用正相色谱填料为球形硅胶，填料粒径和孔径均一，装柱柱效高，处理效率提高。
(2)制备过程使用动态轴向压缩柱系统，纯化工艺便于优化和程序化，可在线监测纯化效果，工艺重复性和稳定性高，不但是实现了中间体和其他杂质分离，还实现中间体α、β-异头物的分离，避免杂质夹杂；再将分别收集的α-异头物和β-异头物混合即得磺达肝癸钠重要中间体，与其他纯化方法相比，大大提高纯化效果、纯度和收率。
(3)本发明方法填料可多次使用，批次生产使用溶剂量降低，生产时间缩短。
采用本发明的技术方案，可获得式Ι磺达肝癸钠中间体α、β-异头物的分离纯化，其中中间体α-异头物纯度达到99.56％，β-异头物纯度达到99.12％，总收率(α、β之和/粗品)达到80％以上。
附图说明
图1是实施例8磺达肝癸钠中间体α-异头物液相分析图谱；
图2是实施例8磺达肝癸钠中间体β-异头物液相分析图谱；
图3是实施例3分离纯化效果液相图谱；
图4是实施例5分离纯化效果液相图谱；
图5是实施例8分离纯化效果液相图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明，以下实施例只是本发明的一部分，而不是全部实施例体现，不应以此限定本发明的保护范围，这对于本发明所属的技术领域的普通技术人员而言是显而易见的。
HPLC检测，色谱条件如下：
色谱仪器：Agilent高效液相色谱仪1260(美国安捷伦科技)
色谱柱：Lichrospher─NH2─5μm,4.6×250mm
流动相：ACN─H2O＝9─1，10mmol/L─KH2PO4，用磷酸调pH3.5
洗脱梯度：等度洗脱
检测器：Agilent G1362A紫外检测器
波长：210nm
流速：1.0mL/min
柱温：30℃
本发明所使用的磺达肝癸钠中间体粗品为现有技术制备得到；其它所使用的原料，如无特殊说明，均为本领域常用原料，或市售合格产品。
本发明实施例，在初次制备时通过对制备色谱的色谱峰进行逐一接收分离组分，通过高效液相色谱分析检测，得到目标产物的出峰时间和峰形。也可用其他方法确定出峰时间和峰形，并不影响本发明的创造性。
实施例1磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将10.20g磺达肝癸钠中间体粗品，使用石油醚：乙酸乙酯＝4:1(V石油醚/V乙酸乙酯)混合液500mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用石油醚(A)和乙酸乙酯(B)，并分别在A和B相中均添加0.02％冰乙酸(V冰乙酸/V(A)＝0.02％；V冰乙酸/V(B)＝0.02％)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择15μm，
裸硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长277nm，将步骤(1)配制的溶解液液体进样，每针进样100mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：合格接收液35℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物7.03g，有关物质检测99.33％和中间体β异头物1.73g，有关物质检测99.05％，样品纯化总收率85.9％。
实施例2磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将10.50g磺达肝癸钠中间体粗品，使用石油醚：乙酸乙酯＝4:1(V石油醚/V乙酸乙酯)混合液500mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用石油醚(A)和乙酸乙酯(B)，并分别在A和B相中均添加0.02％冰乙酸(V冰乙酸/V(A)＝0.02％；V冰乙酸/V(B)＝0.02％)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择10μm，
裸硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长275nm，将溶解液液体进样，每针进样100mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：合格接收液35℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物7.23g，有关物质检测99.41％和中间体β异头物1.84g，有关物质检测99.08％，样品纯化总收率86.4％。
实施例3磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将10.70g磺达肝癸钠中间体粗品，使用石油醚：乙酸乙酯＝4:1(V石油醚/V乙酸乙酯)混合液500mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用石油醚(A)和乙酸乙酯(B)，并分别在A和B相中均添加0.02％冰乙酸(V冰乙酸/V(A)＝0.02％；V冰乙酸/V(B)＝0.02％)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择15μm，
二醇基硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长277nm，将溶解液液体进样，每针进样90mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：合格接收液35℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物7.11g，有关物质检测99.33％和中间体β异头物1.79g，有关物质检测99.03％，样品纯化总收率83.2％。
实施例4磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将10.00g磺达肝癸钠中间体粗品，使用石油醚：乙酸乙酯＝4:1(V石油醚/V乙酸乙酯)混合液500mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用石油醚(A)和乙酸乙酯(B)，并分别在A和B相中均添加0.02％冰乙酸(V冰乙酸/V(A)＝0.02％；V冰乙酸/V(B)＝0.02％)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择30μm，
裸硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长277nm，将溶解液液体进样，每针进样60mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：合格接收液30℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物6.54g，有关物质检测99.01％和中间体β异头物1.72g，有关物质检测98.78％，样品纯化总收率82.6％。
实施例5磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将11.20g磺达肝癸钠中间体粗品，使用石油醚：乙酸乙酯＝4:1(V石油醚/V乙酸乙酯)混合液500mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用石油醚(A)和乙酸乙酯(B)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择15μm，
裸硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长280nm，将溶解液液体进样，每针进样80mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：合格接收液35℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物7.03g，有关物质检测98.71％和中间体β异头物1.98g，有关物质检测98.13％，样品纯化总收率80.4％。
实施例6磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将10.60g磺达肝癸钠中间体粗品，使用正己烷：异丙醇＝4.5:1(V正己烷/V异丙醇)混合液500mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用正己烷(A)和异丙醇(B)，并分别在A和B相中均添加0.02％冰乙酸(V冰乙酸/V(A)＝0.02％；V冰乙酸/V(B)＝0.02％)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择15μm，
裸硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长230nm，将溶解液液体进样，每针进样100mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：合格接收液35℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物7.33g，有关物质检测99.41％和中间体β异头物1.81g，有关物质检测99.09％，样品纯化总收率86.2％。
实施例7磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将12.60g磺达肝癸钠中间体粗品，使用正己烷：异丙醇＝4.5:1(V正己烷/V异丙醇)混合液600mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用正己烷(A)和异丙醇(B)，并分别在A和B相中均添加0.045％三乙胺(V三乙胺/V(A)＝0.045％；V三乙胺/V(B)＝0.045％)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择15μm，
裸硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长230nm，将溶解液液体进样，每针进样100mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：高效液相色谱检测磺达肝癸钠中间体α、β-异头物，将合格接收液35℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物8.81g，有关物质检测99.49％和中间体β异头物2.15g，有关物质检测99.10％，样品纯化总收率87.0％。
实施例8磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将20.70g磺达肝癸钠中间体粗品，使用石油醚：乙酸乙酯＝4:1(V石油醚/V乙酸乙酯)混合液1000mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用石油醚(A)和乙酸乙酯(B)，并分别在A和B相中均添加0.045％三乙胺(V三乙胺/V(A)＝0.045％；V三乙胺/V(B)＝0.045％)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择10μm，
裸硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长277nm，将溶解液液体进样，每针进样100mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：高效液相色谱检测磺达肝癸钠中间体α、β-异头物，将合格接收液35℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物14.73g，有关物质检测99.56％和中间体β异头物3.59g，有关物质检测99.12％，样品纯化总收率88.5％。
实施例9磺达肝癸钠中间体的制备纯化
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：将20.10g磺达肝癸钠中间体粗品，使用庚烷：二氯甲烷＝2:1(V庚烷/V二氯甲烷)混合液1200mL溶解，有机滤膜过滤，得澄清溶解液；
(2)高压正相柱层析：1、洗脱液配制：洗脱液使用庚烷(A)和二氯甲烷(B)，并分别在A和B相中均添加0.03％三乙胺(V三乙胺/V(A)＝0.03％；V三乙胺/V(B)＝0.03％)，作为高压正向柱层析洗脱流动相；2、正相填料选择10μm，
裸硅胶；3、使用动态轴向压缩柱DAC50，设置检测波长277nm，将溶解液液体进样，每针进样80mL，运行洗脱梯度如下表，通过高效液相色谱分析检测，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
梯度洗脱程序
(3)合格接收液旋蒸浓缩至干：高效液相色谱检测磺达肝癸钠中间体α、β-异头物，将合格接收液35℃旋蒸浓缩至干。纯化获得磺达肝癸钠中间体α异头物13.97g，有关物质检测99.51％和中间体β异头物3.47g，有关物质检测99.10％，样品纯化总收率86.8％。
Claims (10)
1.一种磺达肝癸钠中间体的纯化方法，其特征在于，按照以下步骤进行：
(1)磺达肝癸钠中间体粗品溶解：两种有机溶剂按比例混合；用混合溶剂溶解磺达肝癸钠中间体粗品，得溶解液；
(2)高压正相柱层析：设置检测波长，将溶解液液体进样高压正相层析柱，运行洗脱程序，分别接收磺达肝癸钠中间体α、β-异头物色谱峰；
(3)合格接收液干燥：分别收集的磺达肝癸钠中间体α、β-异头物接收液，干燥即得；
所述磺达肝癸钠中间体结构如下
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述两种有机溶剂，其中一种为异丙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷的一种；另一种有机溶剂为石油醚、正己烷、庚烷中的一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中使用的正相色谱填料为球形硅胶填料，粒径为10～100μm，孔径为
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述球形硅胶填料为裸硅胶、二醇基、氨基型、酰胺型或两性离子型硅胶。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中设置波长的范围是210～230nm或265～290nm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中层析柱其色谱流动相包含流动相A和流动相B，所述流动相A和流动相B分别为有机溶剂和相同的调节剂组成；流动相A中的有机溶剂选自正己烷、石油醚、庚烷中的一种；流动相B中的有机溶剂选自异丙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷中的一种。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述调节剂为酸或碱中的一种，所述的酸为甲酸、磷酸、盐酸、乙酸、高氯酸中的一种或两种混合物；酸调节剂在相应有机溶剂的添加比例为体积比0.00～0.02％。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述碱为三乙胺、2，6-二甲基吡啶中的一种；碱调节剂在相应有机溶剂的添加比例为体积比0.00～0.05％。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的洗脱程序，洗脱梯度为：洗脱时间60min，其中，流动相A具体的体积占比：初始时刻流动相A为60～90％，40min达到10％，40～50min维持10％，51min达到60～90％，51～60min维持60～90％。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中干燥过程中，可旋蒸浓缩干燥，浓缩温度为30～40℃。
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