CN113444719A - 一种核酸释放剂以及核酸释放的方法 - Google Patents

一种核酸释放剂以及核酸释放的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种核酸释放剂以及核酸释放的方法,所述核酸释放剂由以下成分组成:50~300mM的Tris‑HCl、50~200mM的氯化钠、质量/体积比为0.02%~5.6%的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.03%~3%的α‑烯基磺酸钠、质量/体积比为0.01%~2.2%的月桂酰谷氨酸钠、10~100mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为0.03%~6%的蔗糖酯。

Description

一种核酸释放剂以及核酸释放的方法
技术领域
本发明属于分子生物学领域,具体涉及一种核酸释放剂以及核酸释放的方法。
背景技术
目前,核酸检测由于其灵敏度高、特异性强、操作简便、所需时间短等特点,已广泛应用于临床医学、检验检疫等多个领域,尤其是PCR、等温扩增等核酸扩增技术。然而,核酸扩增技术对于临床或直接获得的标本中的干扰物质较为敏感,会造成检测结果的假阴性,故在核酸扩增前需进行样品核酸提取与纯化。但一直以来,样本中核酸的提取和纯化是整个实验中最耗时,最繁琐的过程,严重影响样本检测的速度以及现场应用。迄今为止,核酸提取方法主要有煮沸法、离心柱法以及磁珠法。煮沸法提取时需要多次换管离心等步聚,样本处理时间长,且仍存在少量抑制扩增物质,对后续扩增会有抑制效应;离心柱法提取效果较好,但步聚繁多,且该过程中存在核酸容易丢失或污染的不足;磁珠法提取步聚简单,回收率高,易于自动化提取,但产品价格十分昂贵,目前应用并不广泛。综上所述,目前的核酸提取方法存在样本需求量大,时间长,提取效果差的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种核酸释放剂,所述核酸释放剂由以下成分组成:50~300mM的Tris-HCl、50~200mM的氯化钠、质量/体积比为0.02%~5.6%的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.03%~3%的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为0.01%~2.2%的月桂酰谷氨酸钠、10~100mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为0.03%~6%的蔗糖酯。
进一步地,所述Tris-HCl溶液的pH值控制在7.5~9.0之间。
进一步地,所述氯化钠的pH值控制在7.5~8.0之间。
一种核酸释放剂的核酸释放方法,包括以下步骤:
S1:根据需要将释放核酸的样本类型不同,使用去离子水对样本进行稀释,然后加入本发明中的核酸释放剂,其中样本和核酸释放剂的体积比为1:20~200。
S2:将加入核酸释放剂后涡旋震荡5~50min,然后加热孵育,其中孵育的温度为85~96℃,孵育时间为1~20min,继而核酸得到有效释放。
进一步地,所述核酸释放剂的制备方法包括以下步骤:
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解,形成混合物I。
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解,形成混合物II。
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:(0.96~1.05)混合后形成所述核酸释放剂。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明中核酸释放剂,在实际使用中,能快速破坏样本中的蛋白质结构,并能变性、吸附及沉淀样本中的核酸扩增抑制物质,同时能够保护DNA或RNA,具有使用安全,操作简便,制造成本低廉的优点;并且可以直接对口咽拭子、鼻咽拭子、宫颈拭子标本中DNA或RNA进行释放,无需加热,只需一步加样,即可完成核酸的释放和提取。
附图说明
图1为本发明中实施例1~3核酸释放剂提取口腔拭子样本荧光PCR检测扩增图(1:实施例1;2:实施例2;3:实施例3)。
具体实施方式
下面对本发明实施例作具体详细的说明,本实施例在本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
实施例1
一种核酸释放剂以及核酸释放的方法,所述核酸释放剂由以下成分组成:50mM的Tris-HCl、50mM的氯化钠、质量/体积比为0.02%的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.03%的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为0.01%的月桂酰谷氨酸钠、10mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为0.03%的蔗糖酯。
其中,所述Tris-HCl溶液的pH值控制在7.5之间;所述氯化钠的pH值控制在7.5之间。
所述核酸释放剂的制备方法包括以下步骤:
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解,形成混合物I。
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解,形成混合物II。
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:0.96混合后形成所述核酸释放剂。
一种核酸释放剂的核酸释放方法,包括以下步骤:
S1:根据需要将释放核酸的样本类型不同,使用去离子水对样本进行稀释,然后加入本发明中的核酸释放剂,其中样本和核酸释放剂的体积比为1:20。
S2:将加入核酸释放剂后涡旋震荡5min,然后加热孵育,其中孵育的温度为85℃,孵育时间为1min,继而核酸得到有效释放。
本实施例中所使用的样本为肝炎病毒血液样本。
实施例2
一种核酸释放剂以及核酸释放的方法,所述核酸释放剂由以下成分组成:300mM的Tris-HCl、200mM的氯化钠、质量/体积比为5.6%的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为3%的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为2.2%的月桂酰谷氨酸钠、100mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为6%的蔗糖酯。
其中,所述Tris-HCl溶液的pH值控制在9.0之间;所述氯化钠的pH值控制在8.0之间。
所述核酸释放剂的制备方法包括以下步骤:
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解,形成混合物I。
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解,形成混合物II。
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:1.05混合后形成所述核酸释放剂。
一种核酸释放剂的核酸释放方法,包括以下步骤:
S1:根据需要将释放核酸的样本类型不同,使用去离子水对样本进行稀释,然后加入本发明中的核酸释放剂,其中样本和核酸释放剂的体积比为1:200。
S2:将加入核酸释放剂后涡旋震荡50min,然后加热孵育,其中孵育的温度为96℃,孵育时间为20min,继而核酸得到有效释放。
本发明所使用的样本为沙眼衣原体血液样本。
实施例3
一种核酸释放剂以及核酸释放的方法,所述核酸释放剂由以下成分组成:200mM的Tris-HCl、100mM的氯化钠、质量/体积比为2.8%的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为1.6%的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为1.3%的月桂酰谷氨酸钠、60mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为2.9%的蔗糖酯。
其中,所述Tris-HCl溶液的pH值控制在8.2之间;所述氯化钠的pH值控制在7.8之间。
所述核酸释放剂的制备方法包括以下步骤:
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解,形成混合物I。
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解,形成混合物II。
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:1混合后形成所述核酸释放剂。
一种核酸释放剂的核酸释放方法,包括以下步骤:
S1:根据需要将释放核酸的样本类型不同,使用去离子水对样本进行稀释,然后加入本发明中的核酸释放剂,其中样本和核酸释放剂的体积比为1:100。
S2:将加入核酸释放剂后涡旋震荡20min,然后加热孵育,其中孵育的温度为90℃,孵育时间为10min,继而核酸得到有效释放。
本发明中所使用的样本为人乳头病毒血液样本。

Claims (5)

1.一种核酸释放剂,其特征在于,所述核酸释放剂由以下成分组成:50~300mM的Tris-HCl、50~200mM的氯化钠、质量/体积比为0.02%~5.6%的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.03%~3%的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为0.01%~2.2%的月桂酰谷氨酸钠、10~100mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为0.03%~6%的蔗糖酯。
2.根据权利要求1所述的一种核酸释放剂,其特征在于,所述Tris-HCl溶液的pH至控制在7.5~9.0之间。
3.根据权利要求1所述的一种核酸释放剂,其特征在于,所述氯化钠的pH值控制在7.5~8.0之间。
4.根据权利要求1所述的一种核酸释放的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
S1:根据需要将释放核酸的样本类型不同,使用去离子水对样本进行稀释,然后加入本发明中的核酸释放剂,其中样本和核酸释放剂的体积比为1:20~200;
S2:将加入核酸释放剂后涡旋震荡5~50min,然后加热孵育,其中孵育的温度为85~96℃,孵育时间为1~20min,继而核酸得到有效释放。
5.根据权利要求1所述的一种核酸释放剂的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解,形成混合物I;
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解,形成混合物II;
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:(0.96~1.05)混合后形成所述核酸释放剂。
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