CN113444719A - 一种核酸释放剂以及核酸释放的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种核酸释放剂以及核酸释放的方法，所述核酸释放剂由以下成分组成：50～300mM的Tris‑HCl、50～200mM的氯化钠、质量/体积比为0.02％～5.6％的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.03％～3％的α‑烯基磺酸钠、质量/体积比为0.01％～2.2％的月桂酰谷氨酸钠、10～100mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为0.03％～6％的蔗糖酯。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种核酸释放剂以及核酸释放的方法。
背景技术
目前，核酸检测由于其灵敏度高、特异性强、操作简便、所需时间短等特点，已广泛应用于临床医学、检验检疫等多个领域，尤其是PCR、等温扩增等核酸扩增技术。然而，核酸扩增技术对于临床或直接获得的标本中的干扰物质较为敏感，会造成检测结果的假阴性，故在核酸扩增前需进行样品核酸提取与纯化。但一直以来，样本中核酸的提取和纯化是整个实验中最耗时，最繁琐的过程，严重影响样本检测的速度以及现场应用。迄今为止，核酸提取方法主要有煮沸法、离心柱法以及磁珠法。煮沸法提取时需要多次换管离心等步聚，样本处理时间长，且仍存在少量抑制扩增物质，对后续扩增会有抑制效应；离心柱法提取效果较好，但步聚繁多，且该过程中存在核酸容易丢失或污染的不足；磁珠法提取步聚简单，回收率高，易于自动化提取，但产品价格十分昂贵，目前应用并不广泛。综上所述，目前的核酸提取方法存在样本需求量大，时间长，提取效果差的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种核酸释放剂，所述核酸释放剂由以下成分组成：50～300mM的Tris-HCl、50～200mM的氯化钠、质量/体积比为0.02％～5.6％的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.03％～3％的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为0.01％～2.2％的月桂酰谷氨酸钠、10～100mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为0.03％～6％的蔗糖酯。
进一步地，所述Tris-HCl溶液的pH值控制在7.5～9.0之间。
进一步地，所述氯化钠的pH值控制在7.5～8.0之间。
一种核酸释放剂的核酸释放方法，包括以下步骤：
S1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂，其中样本和核酸释放剂的体积比为1:20～200。
S2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡5～50min，然后加热孵育，其中孵育的温度为85～96℃，孵育时间为1～20min，继而核酸得到有效释放。
进一步地，所述核酸释放剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解，形成混合物I。
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解，形成混合物II。
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:(0.96～1.05)混合后形成所述核酸释放剂。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明中核酸释放剂，在实际使用中，能快速破坏样本中的蛋白质结构，并能变性、吸附及沉淀样本中的核酸扩增抑制物质，同时能够保护DNA或RNA，具有使用安全，操作简便，制造成本低廉的优点；并且可以直接对口咽拭子、鼻咽拭子、宫颈拭子标本中DNA或RNA进行释放，无需加热，只需一步加样，即可完成核酸的释放和提取。
附图说明
图1为本发明中实施例1～3核酸释放剂提取口腔拭子样本荧光PCR检测扩增图(1：实施例1；2：实施例2；3：实施例3)。
具体实施方式
下面对本发明实施例作具体详细的说明，本实施例在本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
实施例1
一种核酸释放剂以及核酸释放的方法，所述核酸释放剂由以下成分组成：50mM的Tris-HCl、50mM的氯化钠、质量/体积比为0.02％的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.03％的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为0.01％的月桂酰谷氨酸钠、10mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为0.03％的蔗糖酯。
其中，所述Tris-HCl溶液的pH值控制在7.5之间；所述氯化钠的pH值控制在7.5之间。
所述核酸释放剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解，形成混合物I。
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解，形成混合物II。
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:0.96混合后形成所述核酸释放剂。
一种核酸释放剂的核酸释放方法，包括以下步骤：
S1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂，其中样本和核酸释放剂的体积比为1:20。
S2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡5min，然后加热孵育，其中孵育的温度为85℃，孵育时间为1min，继而核酸得到有效释放。
本实施例中所使用的样本为肝炎病毒血液样本。
实施例2
一种核酸释放剂以及核酸释放的方法，所述核酸释放剂由以下成分组成：300mM的Tris-HCl、200mM的氯化钠、质量/体积比为5.6％的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为3％的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为2.2％的月桂酰谷氨酸钠、100mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为6％的蔗糖酯。
其中，所述Tris-HCl溶液的pH值控制在9.0之间；所述氯化钠的pH值控制在8.0之间。
所述核酸释放剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解，形成混合物I。
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解，形成混合物II。
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:1.05混合后形成所述核酸释放剂。
一种核酸释放剂的核酸释放方法，包括以下步骤：
S1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂，其中样本和核酸释放剂的体积比为1:200。
S2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡50min，然后加热孵育，其中孵育的温度为96℃，孵育时间为20min，继而核酸得到有效释放。
本发明所使用的样本为沙眼衣原体血液样本。
实施例3
一种核酸释放剂以及核酸释放的方法，所述核酸释放剂由以下成分组成：200mM的Tris-HCl、100mM的氯化钠、质量/体积比为2.8％的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为1.6％的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为1.3％的月桂酰谷氨酸钠、60mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为2.9％的蔗糖酯。
其中，所述Tris-HCl溶液的pH值控制在8.2之间；所述氯化钠的pH值控制在7.8之间。
所述核酸释放剂的制备方法包括以下步骤：
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解，形成混合物I。
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解，形成混合物II。
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:1混合后形成所述核酸释放剂。
一种核酸释放剂的核酸释放方法，包括以下步骤：
S1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂，其中样本和核酸释放剂的体积比为1:100。
S2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡20min，然后加热孵育，其中孵育的温度为90℃，孵育时间为10min，继而核酸得到有效释放。
本发明中所使用的样本为人乳头病毒血液样本。
Claims (5)
1.一种核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂由以下成分组成：50～300mM的Tris-HCl、50～200mM的氯化钠、质量/体积比为0.02％～5.6％的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.03％～3％的α-烯基磺酸钠、质量/体积比为0.01％～2.2％的月桂酰谷氨酸钠、10～100mM的乙二胺四乙酸二钾、质量/体积比为0.03％～6％的蔗糖酯。
2.根据权利要求1所述的一种核酸释放剂，其特征在于，所述Tris-HCl溶液的pH至控制在7.5～9.0之间。
3.根据权利要求1所述的一种核酸释放剂，其特征在于，所述氯化钠的pH值控制在7.5～8.0之间。
4.根据权利要求1所述的一种核酸释放的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
S1：根据需要将释放核酸的样本类型不同，使用去离子水对样本进行稀释，然后加入本发明中的核酸释放剂，其中样本和核酸释放剂的体积比为1:20～200；
S2：将加入核酸释放剂后涡旋震荡5～50min，然后加热孵育，其中孵育的温度为85～96℃，孵育时间为1～20min，继而核酸得到有效释放。
5.根据权利要求1所述的一种核酸释放剂的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)将Tris-HCl、氯化钠和纯水混合充分后搅拌使其充分溶解，形成混合物I；
(2)将十二烷基磺酸钠(SDS)、α-烯基磺酸钠、月桂酰谷氨酸钠、乙二胺四乙酸二钾、蔗糖酯和纯水混合后搅拌使其充分溶解，形成混合物II；
(3)将混合物I和混合物II按照比例1:(0.96～1.05)混合后形成所述核酸释放剂。
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